2020—2021年湖南省某医院分离自重症监护室的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征分析

目的研究2020—2021年湖南省某三甲医院重症监护室(ICU)分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的科室分布、药敏特征、碳青霉烯酶耐药基因、毒力基因、荚膜血清型以及ST分型,为CRKP感染的临床治疗提供科学依据。方法收集2020年1月至2021年12月郴州市第一人民医院8个ICU分离的75株CRKP菌株,应用MALDI-TOF质谱仪和VITEK-2 Compact药敏分析仪分别进行菌种鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯灭活试验检测碳青霉烯酶表型,用wzi基因测序法进行荚膜血清型测定,运用Sanger测序对碳青霉烯类耐药基因和毒力基因进行分析,采用多位点序列分型(MLST)检测ST分型。结果75株CRKP菌株主要分布在老年内科ICU(28.0%)和脑外科ICU(20.0%);CRKP对替加环素和头孢他啶-阿维巴坦的耐药率分别为6.7%(5/75)和16.0%(12/75),对碳青霉烯类、头孢菌素、β内酰胺类-β内酰胺酶抑制剂复方制剂和左氧氟沙星耐药率高(>96.0%);61株(81.3%)携带bla_(KPC-2)耐药基因,11株(14.7%)携带bla_(NDM-1)基因,1株(1.3%)携带bla_(NDM-5)基因,2株(2.7%)携带bla_(OXA-48)基因;ST分型前三位的主要为ST11型(54.7%,41/75)、ST1883(13.3%,10/75)、ST307(6.7%,5/75),所有ST11型和ST1883型CRKP均携带bla_(KPC-2);主要流行的荚膜血清型为KL64(38.7%,29/75)和KL47(25.3%,19/75);主要携带的毒力基因是rmpA2(48.0%,36/75)、iroN(38.7%,23/75)和iucA(37.3%,15/75)。结论该院ICU的CRKP菌株细菌耐药程度高,以ST11-KL64型和ST11-KL47型为主,大多数菌株携带bla_(KPC-2)基因和毒力基因。应该加强监测CRKP分子流行病学分析和酶型检测,从而指导临床CRKP感染的个体化和精准化治疗。

36株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药表型和基因型特征分析

目的分析广西百色市某三级甲等医院2020—2022年分离自临床的36株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及耐药机制,为医院感染防控和指导临床治疗提供依据。方法使用微量肉汤稀释法及纸片扩散法检测分离的36株CRKP对临床常用抗生素及头孢他啶/阿维巴坦的耐药性,同时使用聚合酶链式反应检测常见耐药基因携带情况,并使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测菌株携带的碳青霉烯酶种类。结果36株CRKP对除头孢他啶/阿维巴坦之外的所有β内酰胺类药物和氟喹诺酮类药物耐药率均超过90%,对头孢他啶/阿维巴坦耐药率为33.3%,对阿米卡星的耐药率为63.9%,对磺胺类药物复方新诺明耐药率为61.1%。bla KPC携带率为63.89%,bla NDM携带率为19.44%,bla TEM携带率为75.00%,bla CTX-m携带率为16.67%,bla SHV携带率为91.67%,bla Ampc携带率为5.56%,未检出携带bla OXA-48的菌株。表型检测显示有34株菌产碳青霉烯酶,其中23株单产A类酶,10株单产B类酶,1株同时产A类酶和B类酶。结论通过对常见CRKP耐药性及基因表型进行调查可以为临床抗生素的合理应用和感染的防控提供科学依据。

高产乙醇肺炎克雷伯菌的危害及感染应对策略

高产乙醇肺炎克雷伯菌(HiAlc Kpn)能够在患者肠道内产生大量内源性乙醇,是非酒精性脂肪肝(NAFLD)的新病因,严重危害着人类健康。抗生素治疗是应对细菌感染的主要方式,然而肺炎克雷伯菌的耐药问题日益严重,且抗生素往往破坏人体肠道菌群的平衡。噬菌体疗法有望在不破坏健康肠道菌群的基础上,通过靶向杀伤HiAlc Kpn治疗NAFLD。同时,应积极寻找影响HiAlc Kpn产乙醇能力的目标靶点,为开发“抗毒力药物”提供理论基础。本文主要阐述HiAlc Kpn的危害性并提出治疗HiAlc Kpn感染的一些应对策略。

三株致肝脓肿高毒力肺炎克雷伯菌的生物学特性及基因特征分析

目的了解引起化脓性肝脓肿(pyogenic liver abscess,PLA)的高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKp)的耐药机制、毒力特征及致病作用,同时为该细菌临床抗感染治疗提供相关数据。方法收集3株在西安交通大学第一附属医院不同科室肝脓肿患者肝脏脓肿液中分离出的肺炎克雷伯菌,用拉丝试验确定其高毒表型;VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验;全基因组测序技术确定其荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因与耐药基因等分子特征;建立小鼠感染模型进行致病性试验。结果分离菌株黏性较大,黏液丝牵拉长度>5 mm,均为高黏液表型;除146007为多重耐药菌外,其余2株菌的抗生素敏感性较高;其全基因组序列测定显示,分离菌株均为高毒力型,携带毒素质粒rmpADC/rmpA2,铁摄取系统、菌毛及分泌系统等多种毒力因子,3株分离株均为rmpA/rmpA2合并iucA/iutA阳性,可判定为hvKp;检测到多种耐药基因,如β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV和blaCTX-M等;分离菌株对小鼠有较强致病性,剖检死亡小鼠可见其各器官均有不同程度病变。结论本文分离出的3株hvKp携带多种耐药基因与毒力基因且致病性较强,提示实验室和临床应及时识别并采取必要的处置策略,防止hvKp进一步扩散。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类的高度耐药性及其耐药机制

目的了解碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)对喹诺酮类的耐药性及其耐药机制,包括可移动喹诺酮类耐药(TMQR)基因分布。方法对2019年我国7所医院临床分离的CRKP菌株采用肉汤微量稀释法进行抗菌药物敏感性试验。采用Illumina HiseqX测序平台进行基因组测序,并分析CRKP携带的毒力基因、MLST分型、染色体喹诺酮类耐药决定区(QRDR)的变异情况,以及TMQR基因分布。结果481株CRKP对左氧氟沙星和环丙沙星不敏感率分别为98.4%和99.2%,ST11型和ST15型为优势克隆。303株携带毒力基因的CRKP(CV-CRKP)中,ST11型和ST15型菌株分别为92.1%和5.0%。178株不携带毒力基因的CRKP(non-CV-CRKP)中,ST11型和ST15型菌株分别为53.4%和34.3%。全部ST11和ST15型菌株对喹诺酮类耐药并伴有gyrA和parC基因变异,对喹诺酮类敏感菌株均为非ST11和非ST15型菌株。可移动元件介导的喹诺酮耐药基因中,qnrS1(294株,61.1%)、qnrB4(48株,10.0%)及aac(6)-Ib-cr(90株,18.7%)的检出率高,其他基因的检出较低,包括有qnrB1(4株)、qnrB2(2株)、qnrD1(2株)、qnrB6(1株)。其中,qnrB4主要分布在左氧氟沙星高度耐药(MIC≥8 mg/L)菌株中。aac(6)-Ib-cr主要分布在环丙沙星耐药(MIC>8 mg/L)菌株中。结论临床分离的CRKP菌株对喹诺酮类耐药率高。喹诺酮类耐药的CRKP菌株中QRDR变异率高,TMQR基因携带率高。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对头孢他啶/阿维巴坦耐药机制的研究

目的探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学特点,揭示其对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)的耐药机制。方法收集2021年1月—2023年9月徐州医科大学附属医院临床首次分离的CZA耐药CRKP,采用基因扩增法和胶体金法检测blaKPC、blaNDM、blaOXA、blaVIM和blaIMP五种碳青霉烯酶基因携带情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(KPC-KP)相对拷贝数以及表达量,采用全基因测序方法分析KPC突变株的突变位点,以分析CRKP流行特征及对CZA的耐药机制。结果共分离73株对CZA耐药的CRKP,其中37株(50.68%)为KPC+NDM联产菌株,33株(45.21%)为单产NDM的菌株(单产NDM-523株,单产NDM-110株),3株单产KPC的菌株。发现菌株KP-2842为ST11型KPC-33突变株;菌株KP-2127和KP-2189为产KPC-2菌株,与肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705相比,其blaKPC拷贝量分别上调1.04~3.86倍,而表达量分别增加6.66~12.93倍;胶体金法与PCR结合双向测序方法两者结果一致性良好,同时可以覆盖联产酶及KPC-33突变体的检测。结论该院CRKP对CZA耐药机制主要由金属酶NDM介导,其中NDM、KPC联产是本地区CRKP的主要特点,部分菌株对CZA耐药可能由blaKPC-2高拷贝和高表达导致,并在江苏地区的ST11型CRKP中首次发现了KPC-33突变体。

12株桑源克雷伯菌属细菌耐药性、毒力基因及分子分型分析

目的为了解不同来源的人类条件病原体的特征和耐药机制,预防环境病原体和医院病原体交叉感染,对桑树中分离的克雷伯菌进行耐药性、毒力基因、分子分型特点的探究。方法从广东和广西两地采集桑树和桑树根际土壤样本,其中共分离得到12株克雷伯菌,对其采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株耐药性表征;采用PCR技术对6类9个抗生素相关耐药基因和毒力基因进行检测;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进行遗传分析。结果12株桑源克雷伯菌检测到bla_(SHV)、tet(D)、tet(A)和aadA14种耐药基因,其中携带氨基糖苷类相关基因aadA1的有5株(41.67%);12株桑源克雷伯菌均对氨基糖苷类抗生素红霉素和链霉素表现出耐药,对6种以上抗生素耐药的菌株有6株(50%),对7种抗生素耐药的菌株有2株(16.67%);8株(66.67%)携带脂多糖相关的wabG毒力基因;MLST分析显示12株桑源克雷伯菌划分为3大类,包括产酸克雷伯菌复合体(Klebsiella oxytoca species complex,KoSC)、肺炎克雷伯菌复合体(K.pneumoniae species complex,KpSC)以及产气克雷伯菌(K.aerogenes);可分成7个序列型(sequence typing,ST),ST260为优势序列型,有5株(41.67%)。结论12株桑源克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素耐药情况严峻,氨基糖苷类aadA1耐药基因检出率最高;ST260是主要的序列型,菌株之间存在遗传多样性,为环境中桑树来源的克雷伯菌病原体致病机制提供理论依据。

FNR影响高产乙醇肺炎克雷伯菌产乙醇能力及转录组分析

目的探究fnr基因缺失对高产乙醇肺炎克雷伯菌产乙醇能力的影响,并对野生型菌株与Δfnr缺失菌株进行转录组测序分析。方法以高产乙醇肺炎克雷伯菌株TH1为背景,利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建fnr基因的缺失菌株。PCR扩增并克隆fnr基因于pGEM-Teasy表达载体获得回补质粒,导入Δfnr缺失菌株得到回补株,并将pGEM-Teasy空质粒导入野生株及缺失株作为空载对照。通过顶空法检测基因fnr缺失对高产乙醇肺炎克雷伯菌株乙醇产量的影响。并对野生型菌株和Δfnr缺失菌株进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果通过PCR技术明确fnr基因缺失与回补菌株构建成功。乙醇含量测定结果显示基因fnr缺失后,高产乙醇肺炎克雷伯菌株的乙醇产量显著降低,且回补菌株的乙醇产量显著升高。转录组测序结果表明基因fnr缺失后561个基因表达上调,610个基因表达下调。KEGG富集分析结果表明,上调基因主要富集在包括氨基酸代谢、嘧啶代谢、三羧酸循环等通路,下调基因中富集到了包括氧化磷酸化、丙酮酸代谢、双组份系统、磷酸转移酶系统(PTS)、生物被膜形成、糖酵解/糖异生等通路。结论fnr基因的缺失显著降低了高产乙醇肺炎克雷伯菌株的乙醇产量,且全局性调控因子FNR能够正向促进糖酵解通路,抑制三羧酸循环通路。

高产乙醇肺炎克雷伯adhE缺失菌株构建及对其产乙醇能力的影响

目的探究基因adhE缺失对高产乙醇肺炎克雷伯菌株生长能力,乙醇脱氢酶活性及产乙醇能力的影响。方法以高产乙醇肺炎克雷伯菌株TH1为背景,利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建基因adhE的缺失菌株。通过PCR扩增获取基因adhE片段并构建于pGEM-Teasy表达载体获得回补质粒,导入ΔadhE缺失菌株得到回补菌株,并将pGEM-Teasy空质粒导入高产乙醇肺炎克雷伯野生菌株及ΔadhE缺失菌株作为空载对照。在液体LB培养基中测定各菌株的生长曲线,使用试剂盒检测各菌株的乙醇脱氢酶活性并通过顶空法检测各菌株的乙醇产量。结果使用PCR技术明确ΔadhE缺失菌株与相关回补菌株构建成功。基因adhE缺失后,厌氧条件下高产乙醇肺炎克雷伯菌株的生长速度显著降低,而回补菌株的生长速度显著升高(P<0.05)。同时,相比于野生型菌株,ΔadhE缺失菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量显著降低,而回补菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量恢复到了野生型菌株的水平(P<0.05)。结论基因adhE的缺失减缓了高产乙醇肺炎克雷伯菌株厌氧条件下的生长速度,同时显著降低了高产乙醇肺炎克雷伯菌株的产乙醇能力。

一株多重耐药准肺炎克雷伯菌的基因组和耐药基因分析

目的本研究旨在了解新生儿粪便分离的多重耐药准肺炎克雷伯菌的基因组和耐药相关基因特征。方法使用E-test抗生素敏感性检测和全基因组测序技术和生物信息分析方法。结果该菌株对阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、头孢哌酮、美罗培南等临床常用抗生素耐药。全基因组测序提示该菌株携带两个质粒,与以往报道的IncFⅡ型和IncX3型质粒高度相似。并且,两个质粒携带重要的耐药基因,分别为bla TEM-1D、bla CTX-M-15、bla NDM-1和bla SHV-12。同时染色体DNA上也携带一些重要耐药相关基因,如bla OKP-B-2等。这些耐药基因能够解释我们检测到的耐药表型的发生,并说明这些耐药性可能随着质粒具有一定的传播风险。结论准肺炎克雷伯菌不同于肺炎克雷伯菌,其耐药特性和基因组具有一定特征。并且,由于新生儿可携带,且具有多重耐药性,应该受到进一步的广泛关注。

临床分离肺炎克雷伯菌的分布特点及其耐药性探究

目的 分析临床分离肺炎克雷伯菌的标本类型与临床科室分布情况以及耐药性。方法 采集2021年1月至2022年12月本院患者送检标本中所分离的309株肺炎克雷伯菌进行研究,应用全自动微生物分析仪进行鉴定,采用纸片扩散法进行药敏试验,统计标本来源与科室分布情况,以及肺炎克雷伯菌对不同类型病原菌的耐药性,计算耐药率。结果 309株肺炎克雷伯菌标本主要分离自痰液标本和分泌物标本以及中段尿液标本、血液标本,分别占比53.07%、7.11%、31.71%、4.20%。肺炎克雷伯菌标本在ICU的分布较多,占比25.24%,其次为呼吸内科,占比20.06%,另外,在神经外科的分布也较多,占比8.73%。除此之外,在综合内科、神经内科、泌尿外科的分布也相对较多,占比分别为8.09%、4.53%、4.85%。经耐药性分析,在所分离出的309株肺炎克雷伯菌中,对部分抗菌药物具有较高的耐药性。其中耐药性最高的为氨曲南和氨苄西林/舒巴坦,耐药率均达到33.65%,其次为环丙沙星和左氧氟沙星,耐药率分别达到29.12%和28.80%,另外,对复方新诺明的耐药性也相对较强,耐药率达到27.83%。对阿米卡星与亚胺培南的耐药性则相对较低,耐药率分别为19.41%和20.06%。结论 临床分离的肺炎克雷伯菌主要来自于痰液标本和中段尿液标本、分泌物标本以及血培养标本,相关科室主要涉及到ICU、呼吸内科、神经外科,耐药性较高的抗菌药物主要为氨曲南、氨苄西林/舒巴坦等。

ARIMA时间序列模型在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌检出率预测中的应用

目的:探讨ARIMA时间序列模型在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染检出率预测中的应用。方法:选取2018年1月—2022年12月我院微生物室检出的菌株数,应用SPSS20.0建立ARIMA时间序列模型,利用该模型对2022年1—12月CRKP检出率进行验证,评价预测价值。结果:对2018年1月—2022年12月微生物室每季度CRKP检出率建模、拟合,建立最优模型ARIMA(1,1,1),模型拟合值与实际值较吻合,此模型对CRKP检出率实际值与预测值吻合程度较高,平均相对误差值为4.79%,预测值与实际值的时序图基本保持一致。结论:采用ARIMA模型可有效拟合、预测CRKP检出率趋势,连续5年CRKP检出率呈不断下降的趋势,CRKP的防控取得了一定的效果,但防控形势依然严峻。

T6SS阳性CRKP临床感染特征及毒力基因分析

目的分析T6SS阳性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)临床感染特征,以及其耐药、毒力基因检出率和生物膜形成能力,为临床防控CRKP感染提供参考数据。方法收集2019年1月—2022年12月安徽某三甲医院临床分离的CRKP菌株及患者资料,PCR法检测T6SS基因、毒力基因、耐药基因和分子分型,96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。结果共纳入160株CRKP。标本来源以痰(46.9%)和血(26.3%)为主。CRKP菌株呈现多重耐药表型,以携带bla KPC(80.6%)为主,其次为bla NDM(17.5%)。根据是否携带T6SS将CRKP分为T6SS阳性组(129株,80.6%)和T6SS阴性组(31株,19.4%)。T6SS阳性组患者患慢性肺部疾病和心脏疾病比例高于T6SS阴性组(P<0.05),且预后较阴性组差(P<0.05)。T6SS阳性组中,iuc A、mrk D、rmp A2、peg 344、wab G、fim H检出率均高于T6SS阴性组(均P<0.05)。CRKP中以ST11型(68.8%)为主,其中K64-ST11型占比70.9%,K47-ST11型占比25.5%。T6SS阳性组ST11型和K64-ST11型CRKP占比均高于T6SS阴性组(均P<0.05)。T6SS阳性组CRKP生物膜形成能力强于T6SS阴性组(P<0.001)。两组除bla OXA-48基因外,在携带其他碳青霉烯类耐药基因和抗菌药物耐药率方面差异无统计学意义。结论该地区CRKP呈现多重耐药,CRKP菌株T6SS检出率高,T6SS阳性CRKP毒力基因检出率更高,且生物膜形成能力更强。

神经外科ICU耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染疑似暴发调查与控制

目的调查神经外科重症监护病房(ICU)耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)医院感染暴发原因,查找传染源及传播途径,为有效控制多重耐药菌医院感染提供依据。方法对某院2023年7月28日-8月2日神经外科ICU 3例CRKP感染患者进行流行病学调查,按照环境卫生监测方法采集标本,查找病房环境中的CRKP,分析CRKP菌株耐药性及携带的耐药基因,采用肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)及多位点序列分析(MLST)分析患者与环境监测分离CRKP菌株的同源性。结果共有3例CRKP医院感染,罹患率为3.85%(3/78),与2022年同期及2023年5-6月罹患率相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。环境卫生学监测显示,1床呼吸机接口、治疗台和9床被服检出CRKP,检出率为4.84%(3/62);15份医务人员手标本和3份神经外科ICU空气监测标本均未检出CRKP;环境卫生监测检出3株CRKP;其耐药性、耐药基因及同源性与患者临床标本分离的CRKP一致。在采取集中隔离,严格进行病房环境清洁和消毒,严格执行侵入性器械消毒和管理,加强医护人员分组诊疗,工作服消毒,以及手卫生等一系列针对性措施后,此次事件得到有效控制。结论此次事件可判定为一起疑似CRKP医院感染暴发事件,推测侵入性器械消毒管理不到位、患者住院环境消毒不彻底、医护人员未分组诊疗及手卫生不到位是本次疑似医院感染暴发的主要原因。早期识别感染暴发,调查传染源及传播途径,以及及时采取针对性措施是控制感染暴发的关键。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制和治疗策略研究进展

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)在临床分离株中检出率日益增加,并且耐药机制复杂,产碳青霉烯酶是CRKP主要的耐药机制。目前临床治疗CRKP感染以抗生素为主,随着传统抗生素有效性下降,细菌耐药率上升,治疗难度加大,病死率高,CRKP感染已成为全球重大公共卫生问题之一,国内外研究及指南均推荐以碳青霉烯类、替加环素或多黏菌素为基础的联合方案治疗。新开发的广谱β-内酰胺类抗生素/强效β-内酰胺酶抑制剂复方制剂包括头孢他啶/阿维巴坦、氨曲南/阿维巴坦、美罗培南/韦博巴坦以及亚胺培南/雷利巴坦等,对CRKP感染更有效,副作用和毒性更小,但新型抗生素研发周期长,且CRKP又易获得多重耐药性。因此,一些抗生素替代策略如抗菌肽、候选疫苗、噬菌体疗法和宿主免疫学等正在被广泛研究和开发。该文综述了CRKP的耐药机制及治疗策略研究进展,旨在为临床治疗和控制CRKP感染带来新思路,有助于开发新型抗生素。

产酸克雷伯菌核心基因组多位点序列分型方案

目的对产酸克雷伯菌进行核心基因组多位点序列分型(cgMLST)并探索产酸克雷伯菌克隆群(clonal groups,CGs)在国家或地区层面上的遗传多样性。方法chewBBACA被用作GbG(gene-by-gene)分析的生物信息学管道,从整个物种的基因组序列中进行集群识别,以构建和验证产酸克雷伯菌的cgMLST方案。公开获得的21个完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的创建,386个不完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的验证。结果建立了一个针对3356个核心基因的cgMLST(简称3356-cgMLST)方案。提出的3356-cgMLST方案实现了针对98%以上(400/407)的产酸克雷伯菌分离株基因组序列的分型。根据提出的3356-cgMLST方案,最终纳入分型的400株产酸克雷伯菌基因组序列中共确定了130个CGs。基于3356-cgMLST方案获得的CGs分布情况可以看出产酸克雷伯菌呈现出明显的多国家多地区传播现象。结论本研究为产酸克雷伯菌提供一个公开的3356-cgMLST方案,并揭示产酸克雷伯菌基因组序列呈现高度的遗传多样性,CG26为优势克隆群。

肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定

目的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定。方法以18株临床分离肺炎克雷伯菌为宿主菌,采用双层平板法从水样中分离肺炎克雷伯菌噬菌体并进行纯化,透射电镜观察噬菌体形态,提取噬菌体DNA及蛋白并测定其生理生化特性。结果成功分离到1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体,并命名为KP-ZS5,pH稳定性实验表明KP-ZS5不耐强酸(pH≤3);限制性片段酶切多样性(RFLP)分析表明,KP-ZS5基因组中存在3个BglⅡ酶切位点,预计总基因组大小为20000~30000 bp;裂解谱实验表明,KP-ZS5可以感染33%(6/18)的临床肺炎克雷伯菌株;SDS-PAGE结果显示,在KP-ZS5外壳蛋白由3种蛋白组成,外壳蛋白分子量为35~48 kDa。结论成功分离出1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体KP-ZS5,该噬菌体具有较广的宿主范围和pH值耐受性,外壳蛋白组成简单,仅含3种分子量为35~48 KDa的组分,具有在临床治疗肺炎克雷伯菌感染的潜力。

同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因肺炎克雷伯菌的研究

目的探讨某医院儿科分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的机制和菌株的同源性。方法2021年6月~2021年12月在某医院儿科住院患儿中分离出8株对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌。细菌的鉴定和药敏采用VITEK 2系统。基于Illumina和Nanopore测序平台获得菌株的基因组和质粒序列,然后用软件分析菌株的生物学信息。Xba I酶切脉冲场凝胶电泳(PFGE)、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和质粒的液相接合试验分别检测菌株的同源性和携带的质粒。结果这8株肺炎克雷伯菌都携带blaNDM-1和blaKPC-2及其他的耐药基因,与呈现的多重耐药表型相符合。依据Tenover规则,这8株菌的PFGE属于相同的克隆群,且多位点序列都属于ST11型。S1-PFGE和测序结果都显示QD1株携带三个质粒,分别命名为P1(携带blaNDM-1)、P2和P3(携带blaKPC-2)。另外,液相接合显示QD1株携带的P1质粒(携带blaNDM-1)可水平传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论研究表明这些菌株对碳青霉烯类的耐药是因为携带了blaNDM-1和blaKPC-2基因。经检索,同时携带blaNDM-1和blaKPC-2基因的ST11型肺炎克雷伯菌在儿科患者中的暴发流行为国内外首次报道。

耐药肺炎克雷伯杆菌肺炎中医证素及证候特点探析

目的探讨耐药肺炎克雷伯杆菌肺炎的中医证素及证候分布特点,为中医辨证用药提供依据。方法收集200例肺炎克雷伯杆菌肺炎住院患者病原学、中医证候特征等临床资料信息,应用SPSS 25.0软件进行统计分析,研究耐药肺炎克雷伯杆菌肺炎患者中医证素及证候特点。结果证素分布上,多重耐药肺炎克雷伯杆菌肺炎患者主要证素为肺与痰。与非产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)肺炎克雷伯杆菌肺炎患者相比,产ESBLs肺炎克雷伯杆菌肺炎患者病位证素心神、经络与病性证素闭、气不固的出现频率相对较高,两组差异有统计学意义(P<0.05)。与碳青霉烯类抗生素敏感的肺炎克雷伯杆菌肺炎患者相比,耐碳青霉烯肺炎克雷伯杆菌肺炎患者证素心神、闭的出现频率较高,两组差异有统计学意义(P<0.05)。证候表现上,产ESBLs肺炎克雷伯杆菌肺炎与耐碳青霉烯肺炎克雷伯杆菌肺炎以咳嗽、吐痰、痰黏难咯、舌黯红、苔黄腻、脉细滑为主。结论证素心神、闭与产ESBLs肺炎克雷伯杆菌肺炎和耐碳青霉烯肺炎克雷伯杆菌肺炎相关性较高。高龄老年群体更容易罹患耐药肺炎克雷伯杆菌肺炎,其证候表现进一步印证老年肺炎正气亏虚、热毒炽盛、痰瘀互结之基本病机特点。

ICU多重耐药肺炎克雷伯菌易感因素分析及耐药表型与基因关系研究

目的 分析重症监护室(intensive care unit, ICU)多重耐药肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)的易感因素及耐药表型与基因关系,为临床制定综合防治措施提供依据。方法 选取2021年1月—2023年1月收治于岳池县人民医院ICU病房的180例KP感染患者作为研究对象,根据药物敏感性试验结果分为多重耐药组(n=80)和非多重耐药组(n=100),比较2组耐药表型及易感因素。用多因素Logistic回归分析影响ICU多重耐药KP易感因素,并建立列线图模型,分析KP基因组特征及相关的毒力因子。结果 多重耐药组中鉴定出的显著高表达的基因是决定O-抗原脂多糖血清型的血清抗性因子基因,决定多糖胶囊(K抗原)类型的是免疫逃避因子、胶囊合成调节、外排泵表达和肠杆菌素,这些基因与KP的感染方式及院内感染密切相关。多重耐药组的ICU住院时间、机械通气方式、机械通气时间、使用碳青霉烯类史、碳青霉烯类使用时间、输血史、使用肠外营养史、吸痰史、使用血管导管史均高于非多重耐药组(P均<0.05)。ICU住院时间≥19 d、机械通气≥7 d、使用有创机械通气、使用碳青霉烯类史、碳青霉烯类使用时间≥7 d、吸痰史是影响患者ICU多重耐药KP易感的独立危险因素。基于危险因素建立的列线图模型结果提示存在上述危险因素的患者ICU多重耐药KP易感的风险较高。模型内部验证结果显示,验证前后的校正曲线与理想曲线拟合良好。多重耐药组的KP基因测序结果显示,最丰富的质粒复制子类型是Col和Inc家族。结论 ICU中多重耐药KP感染与长时间住院、机械通气、使用碳青霉烯类史、吸痰史、特定基因表达和质粒复制子类型等因素密切相关,这些因素共同增加了患者感染风险。