格特隐球菌致脑膜炎及肺炎1例

隐球菌病多由新型隐球菌引起,格特隐球菌引起的隐球菌病较为少见,国内报道格特隐球菌主要感染免疫功能正常人群并以中枢神经感染为主,肺部感染较为少见[1],而国外报道多以肺部为主[2],但由格特隐球菌同时引起肺部和中枢神经系统的感染均较为少见。同时,隐球菌病因临床表现和影像学检查缺乏特异性,体外培养生长缓慢,易被其他快生长菌覆盖,难于检出,诊断存在一定困难,极易漏检,或误诊为结核、肿瘤等其他疾病而延误治疗[3-6]。本文报道1例由格特隐球菌引起肺炎及脑膜炎病例的临床特点及其实验室鉴定,为该病的诊治提供经验。

新型隐球菌泰坦细胞形成机制与功能研究进展

新型隐球菌和格特隐球菌是能感染人类的一类致病真菌。宿主肺部吸入环境中的隐球菌孢子或者干燥的酵母样细胞引起感染[1]。在免疫正常的人体中,隐球菌细胞可保持较长时间的潜伏状态,而在免疫受损的情况下,隐球菌可以形成肺部感染,进而播散到中枢神经系统,引起致命的脑膜炎[2]。在免疫功能不全的感染患者中,大部分病例由新型隐球菌感染引起。

东亚地区新生隐球菌菌种复合体种群的遗传多样性特征及其意义

近年来,新生隐球菌菌种复合体已被世界卫生组织列为病原真菌名录首位,其引发的侵袭性隐球菌病在全球的发病率呈现上升趋势,且菌株基因型与毒力等表型相关。该文系统回顾了来自东亚地区的新生隐球菌菌种复合体种群的群体遗传多样性研究的相关研究,对分离自东亚地区的新生隐球菌菌种复合体临床与环境分离菌株种群的基因型、交配型、群体扩张特征、耐药趋势等多个方面进行综述,为揭示新生隐球菌菌种复合体在我国等东亚国家的种群进化、扩张模式、耐药趋势等群体遗传学特征的研究提供一定的科学基础。

表皮调节素EREG在新生隐球菌穿越血脑屏障机制中的作用研究

目的测定新生隐球菌侵染血脑屏障过程中表皮调节素EREG(epiregulin)的表达量,探讨EREG在隐球菌穿越血脑屏障过程中的作用。方法利用新生隐球菌与Transwell小室构建体外血脑屏障模型,以PBS(phosphate buffered solution)为对照组,按照新生隐球菌感染时间分为感染3 h、6 h、12 h三组,通过检测不同感染时间Transwell上室单细胞跨膜电阻及下室菌悬液涂布来判断新生隐球菌对血脑屏障的黏附及穿透能力的改变,并应用western-blot检测该过程中血管内皮细胞EREG的表达量。结果随着感染时间延长,新生隐球菌对血管内皮细胞的感染程度加剧,穿透血脑屏障的数量增多,血管内皮细胞EREG的表达水平显著增加。结论新生隐球菌穿越血脑屏障的能力与EREG的表达水平有密切的关系。

格特隐球菌肺炎合并脑膜炎1例

对人类致病的隐球菌主要是新型隐球菌和格特隐球菌,其中新型隐球菌感染要远高于格特隐球菌。格特隐球菌存在VGⅠ、VGⅡ、VGⅢ和VGⅣ四种类型,我国的患者主要感染的VGⅠ型,这例病例为格特隐球菌VGⅢ型感染,实属罕见。本病例因头痛入院,行颅脑增强核磁及胸部CT后,考虑为肺癌合并脑转移,后通过脑脊液检查确诊为格特隐球菌VGⅢ型感染,经抗真菌治疗后病情好转。通过本病例总结了以下经验教训:病原学培养或者病理是诊断隐球菌感染的金标准,不能单纯依靠影像学诊断或排除隐球菌。并且涂片镜检和荚膜抗原、普通培养不能很好地区分新型隐球菌和格特隐球菌,新一代高通量测序(NGS)是区分这两种不同类型的隐球菌的比较可靠的方法之一。

新型隐球菌感染诊断的现有实验室技术与进展

新型隐球菌感染是艾滋病的一种严重的机会性感染,准确、快速地检测新型隐球菌感染对于指导临床早期诊断和及时干预至关重要。本文综述了新型隐球菌感染的现有实验室检测方法和新兴发展检测技术,为早期、快速、高效地诊断新型隐球菌感染提供参考。

基因编辑技术在新生隐球菌研究中的进展

新生隐球菌(Cryptococcus neoformans,C.neoformans)是一种广泛分布于土壤、鸽粪等自然环境中的机会性致病酵母菌,在易感患者中可引起危及生命的脑膜脑炎,病死率和致残率高[1]。全球每年约有近25万例新生隐球菌感染病例,其中约18.1万人死亡[2]。近20年来,我国的隐球菌病的发病率呈上升趋势[3],但是隐球菌病的治疗药物种类有限。

新生隐球菌的胞外蛋白水解酶及丝氨酸蛋白酶活性检测

目的:测定不同孵育条件、来源和血清型的新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶及丝氨酸蛋白酶的活性。方法:30℃和37℃下用含有偶氮白蛋白的琼脂培养板培养不同来源及血清型的36株新生隐球菌菌株,测量其产生的廓清晕环的大小,计算CH值[菌落半径/(菌落半径+廓清晕环半径)]来比较其胞外蛋白水解酶及丝氨酸蛋白酶的活性强弱;用丝氨酸蛋白酶的特异性抑制剂观察两种酶活性改变;酶谱法观察菌株浓缩上清液中胞外蛋白水解酶活性和相对分子质量。结果:36株菌株在30℃和37℃培养条件下它们的平均CH值分别为0.558±0.170和0.575±0.169,两者间无显著差异;血清A(n=13)、B(n=13)、D/AD(n=6)型菌株各自的平均CH值分别为0.564±0.144、0.515±0.078和0.482±0.072,各组间无显著差异;临床分离株(n=23)、环境分离株(n=9)和荚膜缺陷株(n=4)各自的平均CH值分别为0.570±0.177、0.513±0.069和0.942±0.075(P<0.05)。对照组(不含抑肽酶)和抑肽酶不同浓度组(1.2、1.6 mU)的平均CH值分别为0.459±0.188,0.975±0.287、0.733±0.252(P<0.01)。菌株浓缩液中含有复杂的胞外蛋白酶类成分。结论:新生隐球菌胞外蛋白水解酶及丝氨酸蛋白酶的活性在30℃、37℃下无显著差异;在临床分离株中比环境分离株和荚膜缺陷株强;在不同血清型菌株间无显著差别;可被丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制。

新生隐球菌的磷脂酶活力检测

目的 :评价不同孵育条件、来源和血清型的新生隐球菌分泌磷脂酶的活力情况。方法 :分别在 30℃和 37℃下用蛋黄平板法培养不同来源的 4 0株新生隐球菌菌株 ,测量其产生沉淀圈的大小 ,计算 PZ值来比较其磷脂酶活力的不同。 结果 :4 0株菌中有 39株能在其菌落周围产生明显沉淀圈 ,PZ值在 30℃和 37℃培养条件下分别为 (0 .5 2 9± 0 .12 1)和 (0 .5 2 3± 0 .14 3) ,两者差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;在 37℃培养条件下 ,血清 A、B、AD和 D型菌株的 PZ值分别为 (0 .5 4 1± 0 .116 )、(0 .5 18± 0 .0 36 )和 (0 .4 72± 0 .0 5 1) ,3组间差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;临床株和环境株 PZ值分别为 (0 .5 0 1± 0 .0 4 9)和 (0 .5 6 5± 0 .131) ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论 :温度对新生隐球菌磷脂酶活力没有影响 ;不同来源的新生隐球菌菌株的磷脂酶活力差异较大 ,其中临床分离株比环境分离株磷脂酶活力强 ;而不同血清型菌株的磷脂酶活力无差别。

肺隐球酵母菌病临床特征研究

目的分析由新型隐球酵母引起的肺隐球酵母菌病的临床特点的变化，以提高对该病的认识及诊治水平。方法对住院确诊肺隐球酵母菌病病例的临床特点进行了回顾性分析。结果1999-2006年住院确诊肺隐球酵母菌病9例，其中男性5例（56％），女性4例（44％）；平均年龄44岁（20～69岁），其中〉60岁3例（33％），〈60岁6例（67％），其中3例（33％）患者有免疫功能低下，5例（56％）患者无合并其他疾病史，9例患者中6例（67％）有l临床症状、3例（33％）无临床症状，而体检发现肺部阴影；影像学为双肺弥散病变，或单侧多发或单发病变，22％合并双侧胸腔积液，33％患者伴有空洞形成，其中6例患者进行了血清新型隐球酵母菌抗原测定均为阳性；9例患者均经氟康唑治疗后好转或痊愈。结论肺隐球酵母菌病在临床并不常见，多发生于青壮年，免疫功能低下或免疫功能正常者均可发生；临床表现无特异性，血清抗原检测有助诊断，早期肺活检病理检查是确诊的关键。

肺部曲霉菌属感染的临床与耐药性研究

目的检测6种常用抗真菌药物对曲霉菌属的体外抗菌活性,探讨肺部曲霉菌属感染的相关因素与预后。方法采用Etest法测定伊曲康唑、酮康唑、5-氟胞嘧啶、卡泊芬净、两性霉素B和氟康唑对18株曲霉的最低抑菌浓度(MIC);用回顾性调查的方法对肺部曲霉菌属感染患者进行分析。结果卡泊芬净、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌属的MIC90分别为0.25、1.0、2.0μg/ml,酮康唑、5-氟胞嘧啶和氟康唑的MIC90分别≥32、32、256μg/ml;卡泊芬净对各种曲霉菌属的抑菌效果均较好;伊曲康唑对烟曲霉、黄曲霉的体外抗菌活性高于两性霉素B,两性霉素B对黑曲霉的体外抗菌活性高于伊曲康唑;大多肺部曲霉菌属感染患者有高龄、基础疾病等。结论高龄、基础疾病、广谱抗菌药物使用是曲霉菌属感染的主要原因,肺部曲霉菌属感染病死率高;伊曲康唑、卡泊芬净和两性霉素B对曲霉菌属的体外抑菌效果较好,但不同药物对不同种类曲霉菌属抗菌活性不同,实验室将曲菌鉴定到种并进行体外抗真菌药敏感试验对临床具有重要的指导意义。

抑肽酶对新生隐球菌毒力的影响

目的:比较不同浓度抑肽酶对新生隐球菌胞外蛋白水解酶活性及其丝氨酸蛋白酶活力的影响,进一步探讨新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶在致病过程中所起的作用和意义。方法:在30℃下,用蛋白琼脂培养基培养并检测菌株产生廓清晕环(CH)大小,用CH值比较胞外蛋白水解酶活性的变化;建立小鼠感染模型,用菌落形成单位(CFU)和阿新蓝染色比较菌株毒力的变化。结果:体外实验中,抑肽酶1.2mU和1.6mU浓度组与对照组的CH值比较,差异有显著性(P<0.01),体内实验中,实验组脑组织匀浆培养产生的CFU多于对照组;实验组脑组织内观察到新生隐球菌。结论:抑肽酶有抑制隐球菌分泌胞外蛋白水解酶和丝氨酸蛋白酶的作用,有望成为潜在的预防和治疗真菌感染的药物。

细胞芯片检测新生隐球菌菌株丝氨酸蛋白酶的表达

目的:利用细胞芯片技术检测新生隐球菌菌株中丝氨酸蛋白酶的表达,初步探讨丝氨酸蛋白酶在新生隐球菌致病过程中的作用。方法:不同来源和血清型的新生隐球菌菌株36株,应用组织芯片构建仪制备菌株芯片,利用菌株细胞芯片和免疫组化技术对菌株中丝氨酸蛋白酶的表达情况进行检测。结果:丝氨酸蛋白酶在所有菌株细胞中强阳性表达率为67.0%(25/36),强阳性表达率在血清A型、血清B型、血清D/AD型分别为46.2%(6/13)、92.3%(12/13)、66.7%(4/6),在环境分离株、临床分离株及荚膜缺陷株中分别为55.6%(5/9)、82.6%(19/23)、25%(1/4)。不同血清型及不同来源菌株中,以血清B型、临床分离株中的丝氨酸蛋白酶阳性表达率高(P<0.05)。结论:菌株细胞芯片是检测致病性真菌样本成分的新技术;致病力强的新生隐球菌临床分离株中的丝氨酸蛋白酶表达最高,提示丝氨酸蛋白酶在临床菌株致病过程中起到主要作用。

新生隐球菌临床分离株热休克反应的差别及其临床意义

目的：检测新生隐球菌中的热休克蛋白70（Hsp70）在不同的温度条件下表达量的差别，以探讨Hsp70在新生隐球菌致病中的作用。方法：采用鼠抗人、猪、狗等的Hsp70抗体通过Western印迹法检测6株临床分离株及1株CZYD2标准株新生隐球菌的 Hsp70，根据实验信号强弱定性判断在不同刺激条件下的 Hsp70产量。结果：在42℃×30min热应激及37℃×48h持续体外培养下新生隐球菌Hsp70产量较30℃培养下为高。结论：结合较难治愈病例分离株的Hsp70表达量高、热休克反应强的情况，推测Hsp70可能是新生隐球菌致病的一个因素。

新生隐球菌生态学研究

目的:研究中国环境中新生隐球菌变种的生态学特点。方法:采集10个城市(3组)鸽粪标本620份和江西贵溪地区澳洲赤桉标本819份;采用咖啡酯玉米山梨醇琼脂(CACA)培养基分离新生隐球菌,并对菌株进行CGB培养,酚氧化酶、尿素酶、血清型、交配型试验和形态学观察。结果:①不同纬度地区鸽群的新生隐球菌标本阳性率为G1[40°～50°北纬(N)]13%,G2(30°～40°N)50%,G3(20°～30°N)29%,G2显著高于G1(P<0.01);3组鸽群阳性率基本相同(P>0.05),平均为81%。②环境分离358株全部37℃生长、酚氧化酶阳性、CGB培养阴性;1株尿素酶阴性;其中101株均为α交配型和A血清型,提示全部为grubii变种;发现环境分离菌株荚膜变异并与其他真菌的自然黏附现象。③从江西贵溪生长的澳洲赤桉未分离到新生隐球菌格特变种。结论:中国环境中以grubii变种为主的新生隐球菌的生态学特点与其所在的地区纬度明显相关;由澳洲赤桉分离新生隐球菌格特变种的研究仍然需要继续进行。

皮肤转移癌27例临床病理分析

目的：总结皮肤转移癌的临床及组织病理特点，加深对皮肤转移癌的认识。方法：回顾性分析北京大学第一医院于2006-2012年问诊治的27例皮肤转移癌患者的临床表现、组织病理学特点及肿瘤来源和预后转归。结果：27例患者中男12例，女15例，男女比例为1：1．25。平均发病年龄为60岁（24～91岁）。27例皮肤转移癌患者皮损为单发者9例（33．33％），多发者18例（66．67％）。皮损部位分布依次为：胸部、腹部、外阴、头皮、背部、肩胛及四肢。皮肤组织病理检查：27例皮肤转移癌患者中转移性腺癌20例（74．07％），转移性鳞癌3例（11．11％），转移性黏液样癌3例（11．11％）及转移性黑素瘤1例（3．71％）。16例随访病例中4例死亡，均为伴有其他脏器转移者，余12例继续放、化疗治疗。结论：近年来随着肿瘤发病率的升高，皮肤转移癌亦随之增多，提高对皮肤转移癌的认识，有助于及早明确诊断和治疗。延长患者生存期。

北京昌平区鸽粪中新生隐球菌的分离鉴定及其血清型、配型分析

目的了解鸽粪中新生隐球菌的携带率及其血清型、配型。方法在北京昌平区收集家养鸽粪便标本,利用沙包培养基、尿素培养基、多巴培养基和CGB培养基对鸽粪中的新生隐球菌进行分离鉴定。PCR扩增ITS基因进行分子生物学鉴定,并通过特异性引物PCR扩增,分析其血清型和配型。结果 143份鸽粪标本中共分离得到6株新生隐球菌,分离阳性率为4.87%,其血清型均为A型,其中3株为α配型,3株为a配型。结论在北京昌平区家养鸽携带新生隐球菌的阳性率为4.87%,其血清型均为A型。

16SrRNA和secA1基因构建临床诺卡菌的系统发育树比较

目的:比较16S rRNA和secA1基因构建诺卡菌分属Nocardia wallacei、Nocardia farcinica、Nocardia cyriacigeorgica及Nocardia otitidiscaviarum4个种系统发育树的多样性。方法:将8株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸出液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况;提取细菌DNA,采用聚合酶链式反应扩增其16S rRNA和secA1基因序列并测序,所获序列与NCBI数据库进行BLAST比对,鉴定其菌种名;选取本研究鉴定的4个属共有的40个有效发表种及本研究分离的8株诺卡菌菌株的种,通过邻接法、最大似然法分别构建16S rRNA和secA1基因序列的系统发育树并比较。结果:本研究所收集的诺卡菌分属Nocardia wallacei、Nocardia farcinica、Nocardia cyriacigeorgica及Nocardia otitidiscaviarum 4个种,且Nocardia wallacei、Nocardia farcinica及Nocardia cyriacigeorgica基于secA1基因构建的系统发育树较16S rRNA在种内菌株亲缘关系的分化差异程度高及分类多样性多(P<0.05),而Nocardia otitidiscaviarum的分化程度和分类多样性在16S rRNA和secA1基因构建的系统发育树间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:secA1基因用于诺卡菌种群的系统发育分析和分子进化的研究,较16S rRNA具有高度分辨率的优势。

伊曲康唑与氟胞嘧啶体外联合抗新生隐球菌临床分离株的实验研究

目的:评价新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑与氟胞嘧啶联合用药的敏感性及两种药物之间相互作用的方式。方法:采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的棋盘微量稀释法,检测了20株新生隐球菌临床分离株对伊曲康唑、氟胞嘧啶及两药联合用药的体外药物敏感性,同时对两种药物的作用方式进行了判定。结果:联合用药时显著减少了每一药物MIC值的几何均数,25%受试菌株表现为协同作用方式,60%的受试菌株表现为相加作用方式,15%受试菌株表现为无关作用方式,未观察到拮抗作用。测定不同浓度下单一药物和联合用药的一株菌的菌落形成单位,联合用药较氟胞嘧啶单独用药菌落形成单位有减少现象。结论:伊曲康唑与氟胞嘧啶联合应用较两种药物单独应用的体外抗新生隐球菌的活性高。