安徽省部分地区山羊蓝氏贾第鞭毛虫流行病学调查及基因型分析

为了解安徽省山羊蓝氏贾第鞭毛虫的流行及基因型,本研究对安徽省六安、阜阳、宿州、池州、芜湖、滁州和亳州的506份山羊粪样采用卢戈氏碘液染色镜检法进行鉴定,对鉴定出的蓝氏贾第鞭毛虫阳性粪样,进行基于磷酸丙糖异构酶(TPI)和谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的巢式PCR扩增,并对阳性产物进行测序,序列用Clustal X 1.81和Mega 5.05软件进行比对分析。镜检结果显示,共检出32份蓝氏贾第鞭毛虫阳性粪样,总感染率为6.3%。巢式PCR扩增结果显示,32份阳性粪样中,TPI基因扩增阳性23份,GDH基因扩增阳性16份,产物大小分别为530 bp和450 bp。序列分析表明,分离的虫株均为反刍动物特有的聚集体E,但基因亚型存在地区性分布差异,未发现具有人兽共患潜力的A型或B型。

犬贾第虫携病毒株体外纯培养的建立

目的培养一携带犬贾第虫病毒的犬贾第虫(Giardiacanis)细胞株。方法用蔗糖密度梯度离心-G1耐酸漏斗过滤法纯化犬贾第虫包囊,经口接种5日龄长爪沙鼠(Merionesunguiculata),8d后于其十二指肠无菌收集犬贾第虫滋养体,置改良的TYI-S-33培养基中培养,待滋养体在培养管壁上形成细胞单层后进行传代。同时进行冻存和复苏实验,以及纯度、稳定性、细胞生物学特性、微生物污染等4项指标检测。滋养体经液氮冻融3次后3000×g离心15min,取上清,用磷钨酸负染,透射电镜观察病毒粒子。结果犬贾第虫滋养体接种14d后虫体逐渐适应了培养环境,在培养管壁上形成细胞单层,经上述4项指标检测,证明形成了稳定的犬贾第虫细胞株。电镜观察,见滋养体内有外观球形呈20面体结构、直径约为36nm的病毒样粒子。结论建立了携带GCV的犬贾第虫细胞株的体外纯培养。

甲硝唑对体外蓝氏贾第鞭毛虫形态结构的损伤

用含甲硝唑500μg/ml(12hLC50)的改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。分别用光镜和电镜观察药物作用后2、4、8及12h虫体的形态变化。光镜观察显示:虫体变圆,从培养管壁脱落,鞭毛摆动迟缓或停止,细胞质出现空泡。电镜观察显示:虫体胀大、变圆、细胞质内核糖体溶解,出现大量空泡;核呈锯齿状异形。证实甲硝唑对体外培养的贾第虫滋养体的形态结构有明显的损伤作用。

犬贾第虫病毒转染载体介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内的表达

目的构建犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体。方法根据GCV基因组(DQ238861)的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,将绿色荧光蛋白(GFP)基因替换GCV基因部分编码区,构建GCV基因与GFP基因的嵌合体,并置T7启动子之下。用T7 RNA聚合酶体外转录后经电穿孔转染犬贾第虫滋养体,并用荧光显微镜检测GFP表达情况,间接ELISA测定转染后GFP的表达量。结果构建了犬贾第虫病毒重组质粒pGCV634/GFP/GCV2174,经SacⅠ和NotⅠ双酶切得到约2.0和3.5 kb两条带,与预计值相符。由其介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内得到了高效表达,其表达量在转染后第1天达高峰(A490=1.8);以后随时间的延长而逐渐下降,14 d后绿色荧光信号基本消失。结论成功构建了犬贾第虫病毒转染载体,为贾第虫细胞基因表达调控的研究提供了方法。

蛇床子素体外对蓝氏贾第鞭毛虫超微结构的影响

用含1.345 mg/ml(24 h IC50)蛇床子素的改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,采用扫描和透射电镜观察蛇床子素作用后24 h虫体超微结构的变化。结果显示,经蛇床子素作用后,鞭毛虫滋养体表面凹凸不平,腹吸盘和中体附近表面有明显的病变,主要表现为腹吸盘表面细胞膜破裂,细胞内容物外溢、稀疏,出现板层样结构,空泡化严重,细胞核畸形,边缘锯齿状,核内染色质边集,吸盘微管部分结构崩解。

蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因克隆、表达与免疫反应性的鉴定

目的对蓝氏贾第鞭毛虫的α8-贾第素(α8-giardin)基因进行克隆和表达,并检测其免疫反应性。方法利用PCR方法获得α8-贾第素基因开放阅读框(ORF)片段,经双酶切将其连入原核表达载体p ET-30a(+),构建重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin。经PCR和酶切鉴定后,将该载体转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),筛选出阳性菌落并诱导其表达。经亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测重组蛋白。结果自蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA扩增得到约930 bp的α8-贾第素基因片段。经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin构建成功。SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,α8-贾第素重组蛋白以非可溶性形式存在于包涵体中,相对分子质量(Mr)约为36 000,可被抗His标签抗体和兔抗贾第虫血清识别。结论克隆蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因,纯化的重组α8-贾第素蛋白具有免疫反应性。

蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2(Sir2)基因的克隆、表达与纯化

目的获取蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(Sir2)基因序列及其重组蛋白。方法以蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,PCR扩增GlSir2基因编码序列,将所得片段连接至pMD-19T质粒。转化大肠埃希菌(E.coli)JM109,挑取阳性克隆进行测序。将GlSir2基因插入原核表达载体pET28b,构建表达载体pET28b-GlSir2,转化E.coli BL21(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。收集重组表达产物,用8 mol/L尿素溶解包涵体并收集上清,镍离子亲和层析进行纯化。将纯化产物透析复性,蛋白质印迹(Western blotting)进行免疫学鉴定。结果获得了蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株GlSir2基因编码序列,该序列包含一个1 680 bp的开放阅读框架,可编码559个氨基酸,预测其蛋白的相对分子质量(Mr)约为62 800。构建表达载体pET28b-GlSir2,经IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式表达。溶解包涵体并经纯化后的目的蛋白纯度达80%以上,经透析复性后获得可溶蛋白。Western blotting分析显示,该重组蛋白可被His标签抗体识别。结论克隆了蓝氏贾第鞭毛虫GlSir2基因编码序列,并获得重组表达,重组蛋白可被His标签抗体识别。

蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。

犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究

目的检测犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对犬贾第虫滋养体核仁功能性蛋白KRR1基因体外转录体切割效率。方法将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶(ribozyme,R酶)插入犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)转染载体中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体:短反义序列,上游及下游均为21个碱基,形成重组质粒KRzS;长反义序列,上游为288个碱基,下游为507个碱基,形成重组质粒KRzL。另设两种阴性对照,即重组质粒TRzL(即R酶两端含虫体反义磷酸丙糖异构酶基因,上游为324个碱基,下游为380个碱基)和重组质粒PKR(即犬贾第虫病毒转染载体中仅有KRR1基因的反义片段而无R酶功能区)。应用荧光实时定量RT-PCR法检测嵌合型锤头状核酶体外对KRR1基因mRNA切割活性。结果KRzS、KRzL转录体对KRR1基因体外转录RNA切割效率分别达到74.0%和81.1%。而PKR对KRR1 mRNA反转录的影响较小,RT-PCR效率仅降低12.0%。TRzL对KRR1 mRNA反转录几乎无影响。结论犬贾第虫病毒介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体能进行有效切割,为以后的体内锤头状核酶对KRR1基因表达抑制试验提供依据。

蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因的mRNA具有高效、特异的切割作用。

特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制

目的应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制。方法用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养体(B组)和正常培养滋养体(C组)为对照。转染后24、48、72和96h收集各组虫体,计算滋养体浓度,绘制虫体生长曲线。提取虫体总RNA,分别采用RT-PCR和实时PCR方法检测转染后各组各时间段(24、48、72和96h)核酶mRNA和丙酮酸激酶mRNA相对含量的变化,用紫外分光光度法检测丙酮酸激酶活性。结果虫体生长曲线显示,转染96h,A组虫体的生长受到明显抑制。RT-PCR检测结果表明,A组在转染后24h即可在贾第虫滋养体细胞内检测到核酶RNA,其水平可持续至转染后96h。A组在电击转染后24和48h,丙酮酸激酶mRNA的表达量分别下降至C组的5%(5.00±0.17)和8%(8.00±0.19),相应的酶活性下降至C组的32%(32.00±0.64)和38%(38.00±0.65)。结论特异性锤头状核酶显著抑制了蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达。

蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建

目的构建可快速标记蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)基因的重组载体。方法采用重叠PCR法将新霉素(Neo)基因置于gdh启动子调控下,并插入pGEM-5zf载体,获得带有Neo筛选标记的重组载体pGL gdh-Neo;并将基因合成所得3′末端带有3×HA标签的多克隆位点区克隆至重组载体pGL gdh-Neo,构建可快速标记贾第虫基因的重组载体pGLMCS-3HA-gdh-Neo。以该载体标记贾第虫H2A基因验证其可用性。PCR扩增组蛋白H2A基因序列,用EcoRⅠ和SpeⅠ双酶切后克隆至重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo多克隆位点区。重组质粒线性化后转染虫体,并对G418筛选所获得的H2A贾第虫重组株进行基因组PCR、蛋白质印迹(Western blotting)和免疫荧光分析。结果构建了带有多克隆位点区和3×HA标签的可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo,其长度为4 260 bp;H2A重组质粒稳定转染至贾第虫滋养体并正确整合至其基因组,可表达相对分子质量(Mr)为16 900的H2A(含3×HA标签)。结论构建了可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo。

蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因的克隆与序列测定(英文)

目的克隆并测定中国人源蓝氏贾第鞭毛虫滋养体SUCH/89/BTMRI/2(C2)的表面变异抗原基因序列。方法提取蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增表面变异抗原基因片段。将PCR产物连接到pMD19-T载体, 并转化至大肠埃希菌JM109中进行序列测定。通过NTI9.0软件对该基因的核苷酸和氨基酸序列进行分析,同时与基因库中已发表的蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因进行同源序列比对。结果中国人源蓝氏贾第鞭毛虫基因全长为2142bp,编码1条长为713个氨基酸残基的多肽链,含有一个简单的开放阅读框 (ORF)。这一推测的多肽链序列富含半胱氨酸(11.8 mol%),且以CXXC模基序重复出现29次、GGCY四肽模基序出现1次及NXS重复3次在N端连接糖基化位点中。此外,这条多肽链还富含苏氨酸 (10.2 mol%) 、甘氨酸(12.1mol%)和丙氨酸(10.1 mol%)。同其他已确定的表面变异抗原(VSPs)一样,中国人源蓝氏贾第鞭毛虫 SUCH/89/BTMRI/2 (C2) 株的表面变异抗原也含有高度保守的疏水性 C 末端。该表面变异抗原基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同GenBank中Gillin发表的TSA417序列的同源性均高达 99%。结论中国人源蓝氏贾第鞭毛虫滋养体表达的表面变异抗原基因具有与已鉴定的蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因同样的特性。

蓝氏贾第鞭毛虫基因表达调控的研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫是一种重要的致病性寄生虫,人体感染后主要引起腹泻和营养不良等症状。作为一种源真核生物,其基因表达调控机制可能与其他真核生物有较大的区别。本文从蓝氏贾第虫鞭毛虫启动子、转录因子、转录后调节、翻译起始和表观遗传学等方面,对贾第虫基因表达调控的研究进展进行综述。

蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备并鉴定蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫,Giardia lamblia)单克隆抗体(m Ab)。方法以贾第虫滋养体抗原免疫2只8周龄雌性BALB/c小鼠,利用细胞融合技术建立抗贾第虫抗原杂交瘤细胞株并制备mAb。制备贾第虫滋养体可溶性抗原(STA)和排泄-分泌抗原(ESP),采用免疫球蛋白及亚型检测试剂盒鉴定mAb的类型及亚型。蛋白质印迹(Western blotting)鉴定mAb对贾第虫滋养体STA和ESP的识别。采用ELISA检测mAb与贾第虫滋养体抗原反应性,并检测与其他寄生虫抗原的交叉反应。结果获得12株分泌贾第虫单克隆抗体细胞株(BB3、CE5、CC10、EG4、GC7、CC1、EF6、DB8、BG10、GH7、HC7和EB2),均为IgG1亚型。其中EB2能识别贾第虫滋养体STA和ESP中相对分子质量分别为175 000和191 000的蛋白条带,与大肠埃希菌(Escherichia coli)、猪蛔虫(Ascaris suum)、人芽囊原虫(Blastocystis hominis)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)虫卵、日本血吸虫成虫和卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)成虫抗原等均无交叉反应。结论制备的贾第虫特异性m Ab为Ig G1亚型。

蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素特异性优势抗原表位肽的抗原性分析

目的 筛选蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫，Giardia lamblia）α-8贾第素（α-8 giardin）的优势抗原表位肽，并分析其抗原性。 方法 采用DNAstar、Biosun软件及CLUSTAL W软件进行生物信息学分析，筛选出贾第虫α-8 giardin的3个优势抗原表位肽，即G1（7～17 aa）、G2（30～40 aa）和 G3（296～306 aa）；3个抗原表位肽分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联后（KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3）免疫雌性青紫蓝家兔（每组2只），分别行背部皮下多点（8～10点）免疫注射，首次免疫各偶联蛋白0.5 mg/只（每点100 μl）。分别于首次免疫后14、21、28 d进行加强免疫（各偶联蛋白0.2 mg/只），于每次免疫前进行兔耳缘静脉采血，末次加强免疫后7 d颈动脉取血（各50 ml）。用间接ELISA检测3种（KLH-G1、KLH-G2和KLH-G3）免疫抗血清中IgG抗体效价；蛋白质印迹（Western blotting）分析3种免疫抗血清与重组蛋白rGiardin的抗原性。 结果 利用生物信息学相关软件筛选出的贾第虫α-8 giardin 3个候选抗原表位肽分别与KLH偶联后获得3个偶联蛋白（KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3），经纯化后蛋白浓度分别为0.66、0.95和0.25 mg/ml。分别于加强免疫家兔后7 d，ELISA检测结果显示，3种（KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3）免疫抗血清的抗体效价分别为1∶12800，1∶51200，1∶51200；SDS-PAGE分析结果显示，经纯化后的3种抗血清均在相对分子质量（Mr）约36 000处出现特异性的清晰条带，无其它杂带。Western blotting分析结果显示，3种抗血清均可特异性识别重组蛋白rGiardin。 结论 筛选出的贾第虫α-8 giardin 3个优势抗原表位肽与KLH偶联后免疫家兔，可诱导产生特异性IgG抗体；3种免疫抗血清中的特异性IgG抗体均可识别重组蛋白rGiardin；3个贾第虫α-8 giardin抗原表位肽均有较好的抗原性。

蓝氏贾第鞭毛虫感染1例

患者，男，20岁，农民。新疆阿图什市阿湖乡人。腹泻症状持续5年，每天腹泻2～3次，伴消化不良，消瘦，在当地治疗无效.

蓝氏贾第鞭毛虫核苷二磷酸激酶基因的克隆与表达

以蓝氏贾第鞭毛虫中国C2株基因组DNA为模板,PCR扩增蓝氏贾第鞭虫核苷二磷酸激酶(Gl NDPK)基因编码序列,连接至p ET28a质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)JM109,挑取阳性克隆进行鉴定与测序。将p ET28a-Gl NDPK转化至E.coli BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况。用8 mol/L尿素溶解包涵体并收集上清,镍离子亲和层析进行纯化,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果显示,PCR扩增获得了长度约1 200 bp的蓝氏贾第鞭毛虫中国C2株Gl NDPK基因编码序列。构建的重组质粒p ET28a-Gl NDPK经PCR鉴定、单酶切鉴定和测序,结果均与预期相符。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体的形式表达,相对分子质量(Mr)约为40 000,与预期结果大致一致。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被His标签抗体识别。提示获得了蓝氏贾第鞭毛虫中国C2株Gl NDPK基因编码序列及其重组表达蛋白。

基于LAMP微流控芯片检测蓝氏贾第鞭毛虫方法的建立

选择蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)磷酸丙糖异构酶(TPI)基因作为靶基因设计引物,以包含TPI基因序列的人工合成质粒为模板,建立基于介导等温扩增(LAMP)微流控芯片的贾第虫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行评价。结果显示,建立的贾第虫LAMP微流控芯片检测方法可在30 min内完成核酸的扩增,检测敏感性可达4.0×10拷贝/μl和0.01 ng核酸/μl。隐孢子虫、旋毛虫、艾美耳球虫、戊肝病毒和粪肠球菌核酸均不能扩增,对贾第虫具有良好的特异性。以不同稀释浓度重组质粒为模板进行稳定性和重复性实验,结果显示核酸浓度与反应时间具有良好的相关性,对阳性粪样的检测结果显示扩增信号。建立了基于LAMP微流控芯片的贾第虫核酸检测方法,该方法操作简单、特异性强。

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体体外诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

目的通过定性和定量分析蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)滋养体对中性粒细胞胞外诱捕网的诱导能力。方法采用中性粒细胞分离试剂盒提取健康人血中的中性粒细胞,与等数量贾第虫滋养体(均为4×10^(5))加入2 ml M199培养基中分别培养30、60、120、180、240 min,收集各时间段的培养上清,使用PicoGreen染色法定量检测上清双链DNA(dsDNA)的浓度,ELISA检测上清中髓过氧化物酶(MPO)的含量;另取中性粒细胞与贾第虫滋养体(均为4×10^(5)/ml)各200μl为实验组,加至24孔板中,37℃混合培养4 h后,用蓝色荧光标记DNA、绿色荧光标记瓜氨酸化组蛋白H3、红色荧光标记MPO,激光共聚焦显微镜下观察中性粒细胞胞外诱捕网的形成情况;阳性对照组为100 nmol/L佛波酯处理的中性粒细胞,阴性对照组为未处理的中性粒细胞。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,数据用独立样本t检验进行比较。结果分离获得的健康人血中性粒细胞纯度达75%以上,镜下可观察到核呈杆状或分叶状的中性粒细胞。PicoGreen染色法检测结果显示,中性粒细胞和贾第虫滋养体等数量混合30、60、120、180、240 min后,上清中dsDNA吸光度(A530值)分别为7.30±1.12、11.15±1.10、21.69±2.71、26.35±2.26、29.29±3.27,均高于阴性对照组的3.79±0.48,且dsDNA浓度随着培养时间的延长而升高(P<0.05)。ELISA检测结果显示,阴性对照组、实验组和阳性对照组上清中MPO含量的A530值分别为0.2094±0.0182、0.6115±0.0607、0.7217±0.0879,实验组的MPO含量高于阴性对照组(P<0.05)。激光共聚焦显微镜下观察到实验组的中性粒细胞和贾第虫滋养体之间有红色和绿色网状荧光物质存在,其中含有大量组蛋白和MPO。结论贾第虫滋养体在体外具有刺激中性粒细胞释放胞外诱捕网的能力。