曼氏裂头蚴可溶性抗原DIGFA法快速检测特异性抗体的潜在诊断价值

目的探索曼氏裂头蚴可溶性抗原金标免疫渗滤法快速检测曼氏裂头蚴特异性抗体的免疫诊断价值。方法从自然感染的青蛙中分离出曼氏裂头蚴,经口感染小鼠;于感染后第7周剖杀小鼠,收集鼠血清和虫体并计数。以曼氏裂头蚴可溶性抗原(PSA)为探针建立PSA-DIGFA,分别检测曼氏裂头蚴感染小鼠、健康小鼠、健康人群及其他寄生虫感染者血清中特异性抗体,并与常规ELISA法进行平行检测和比较。结果DIGFA法检测感染小鼠血清中特异性抗体的敏感性为100%(49/49)、特异性为100%(30/30),与ELISA法检测结果相同;不同虫荷数感染鼠间抗体水平差异无显著性(P>0.05),感染鼠与正常鼠之间抗体水平差异有显著性(P<0.01)。PSA-DIGFA检测健康人群血清100人份均为阴性,检测囊虫、包虫、旋毛虫、肺吸虫、华支睾吸虫病病人血清的阳性率分别为42.5%(17/40)、10.0%(2/20)、20.0%(5/25),80.0%(8/10)、8.0%(2/25)。结论用曼氏裂头蚴粗抗原检测感染动物血清中特异性抗体具有较好的敏感性和特异性,但与其他蠕虫感染存在较高的交叉反应。不同虫荷数感染鼠均产生较高水平抗体,组间差异无显著性。DIGFA法与ELISA法检测的敏感性和特异性相同,但前者更为简便、快速,无需特殊仪器设备,可单份检测,适合寄生虫病的临床检验和流行病学调查。若能进一步纯化检测用抗原,减少与其他蠕虫间的交叉反应,有潜在的应用价值。

2004-2007年广州市售蛙类曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染调查

目的了解广州市肉菜市场虎纹蛙感染裂头蚴的情况。方法将从广州肉菜市场购买的虎纹蛙剥皮后,检查和分离寄生于蛙肌肉中的裂头蚴,同时记录虫体寄生部位和虫数。结果从2004-2007年共检查蛙1279只。其中阳性850只,阳性率为66.46;共检出裂头蚴2773条,平均感染度为3.26。2004年感染率与其它年份比较差异均有统计学意义;在春节和秋季间蛙裂头蚴的感染率亦均存在显著差异。结论广州肉菜市场销售的虎纹蛙存在较为严重的裂头蚴感染,且蛙的感染情况在不同年份和不同季节间存在变化。

金标渗滤法快速检测曼氏裂头蚴病患者血清IgG

目的探索简易、快速的人曼氏裂头蚴病血清学免疫诊断方法。方法将曼氏裂头蚴可溶性抗原点样于硝酸纤维素膜上,以胶体金-SPA为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测病人血清中曼氏裂头蚴特异性IgG抗体。结果曼氏裂头蚴病病人血清阳性检出率为92.0%(23/25),健康人群血清假阳性率为2.0%(2/100);与囊虫病、肺吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、旋毛虫病病人血清的交叉反应率分别为40.0%(16/40)、52.0%(13/25)、13.3%(4/30)、8.0%(2/25)、6.7%(2/30),未发现与广州管圆线虫病、结核病病人血清有交叉反应;与ELISA平行检测74人份血清,两种方法检测结果的一致性有极显著性意义(К=0.871,P<0.001)。结论金标渗滤法检测曼氏裂头蚴病病人血清中特异性IgG,不仅简易、快速而且检出率高,但与肺吸虫病、囊虫病病人血清存在较高的交叉反应,需根据病人饮食史等流行病学资料进行鉴别诊断。

曼氏迭宫绦虫裂头蚴超微结构的观察

取黑斑蛙肌肉内的曼氏迭宫绦虫裂头蚴,分别切取新鲜头颈部片段5～7个,经漂洗、固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色处理后,透射电镜观察裂头蚴的超微结构。可见裂头蚴的体壁由皮层和实质区组成。微毛位于皮层的外表面,呈尖棘状。基质区内有许多形态各异的颗粒状分泌小体、囊泡、内质网和线粒体,其中线粒体多位于近基膜处。实质区有表层肌、皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞和排泄系统等分布,并可见皮层细胞形成的胞质连接小管通过基膜伸向基质区。

杭州市1例裂头蚴病例与蛙体内裂头蚴感染情况调查

杭州市淳安县发现首例曼氏裂头蚴病例。对病人居住地及对照组共485只青蛙体内裂头蚴的感染情况进行调查,阳性169只,阳性率34.84%;病人居住地蛙体感染率(45.63%)明显高于对照组(15.90%)。

贵阳市农贸市场青蛙裂头蚴感染调查及104例临床病例分析

目的:了解贵阳市综合农贸市场青蛙自然感染曼氏裂头蚴的情况及临床裂头蚴感染病例特点及感染方式。方法:收集4 432只青蛙,解剖检查和镜下鉴定曼氏裂头蚴,对2000年以来国内报道的裂头蚴病例进行回顾性分析。结果:市场出售青蛙裂头蚴的自然感染率为18.69%(836/4 472);2000年以来,国内文献报道的104例裂头蚴病例中,脑脊髓裂头蚴病的发病率最高,占40.38%(42/104),其次是皮下裂头蚴病、眼裂头蚴病、口腔颌面部裂头蚴病及内脏裂头蚴病,分别占35.58%、14.42%、8.65%及0.96%。在104例病人中,因生吃或半生吃蛙、蛇肉等导致感染者占34.62%(36/104);因局部用蛙、蛇肉敷帖疮疖感染者占19.23%(20/104);因饮用生水感染者占25.00%(26/104);感染原因不明者占21.15%(22/104)。结论:人体裂头蚴病不仅与青蛙曼氏裂头蚴的感染率有关,还与人们的生活方式、饮食和卫生习惯等因素相关。

猬迭宫绦虫幼虫一个含重复序列的cDNA的分子克隆

目的：研究猬迭宫绦虫幼虫－裂头蚴的某些蛋白抗原的基因结构。方法：用鼠抗猬迭宫绦虫裂头蚴多克隆抗体筛选裂头蚴ｃＤＮＡ文库，筛选出的阳性克隆经亚克隆，测序后，用微机分析其一级结构。并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交实验检测与ｃＤＮＡ杂交的ｍＲＮＡ长度。结果：从ｃＤＮＡ文库中筛选出一个长度为１０８４ｂｐ的克隆，此克隆的开放读码框为８２８ｂｐ，编码２７６个氨基酸。开放读码框内有一个由１２３个核苷酸组成的重复单位，此重复单位在开放读码框内重复５次。重复单位编码的４１个氨基酸内疏水性氨基酸占５３．７％。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示在１．１ｋｂ处有一个很强的杂交带，１．７ｋｂ处有一个弱的杂交带。１．１ｋｂ处的杂交带与ｃＤＮＡ克隆的长度几乎相等。结论：裂头蚴在宿主体内移行或停留时，这些含重复序列的抗原性多肽可能作为逃避抗原，使裂头蚴在体内逃避免疫系统的杀伤作用。

贵州省黑斑蛙体内裂头蚴扫描电镜观察

自野生黑斑蛙体内检获的裂头蚴,选择5条完整、活动度好的虫体,用戊二醛-锇酸双重固定,经乙醇梯度脱水、真空冷冻干燥、喷金后,用扫描电镜观察并拍照。结果发现,虫体前后两端略膨大,不分节,但表面有不规则环形皱褶;体前端无吸槽,顶端中央有一横向凹陷,凹陷周围体壁呈唇状突起;体后端形态类似前端,但中央为一裂隙,裂隙较前端的凹陷浅、窄;体表的质膜内陷形成大小不等的凹窝和沟纹;整个虫体体表密布尖棘状长短不一的微毛。

曼氏裂头蚴蛋白分解酶的糖链研究

目的 研究曼氏裂头蚴蛋白分解酶结合糖链的构成。方法 用 SDS- PAGE分离蛋白 ,经酸处理、提取 Fr 和Fr ;用 Western- blot分离出蛋白分解酶 ,分子质量为 2 3ku;用糖定性检测和 9种 HRP-植物血凝素进行结合糖链鉴定。 结果 2 3ku蛋白酶与 Con A、L CA、WGA、PHA- E4、UEA- 1呈现明显反应。 结论 证明此酶至少由α-甘露糖 (α-Man)、α-葡萄糖 (α- Glc)、N-乙酰葡萄糖胺 (Glc NAc) 2 、岩藻糖 (α- Fuc)、寡糖 (Oligosaccharide)构成的糖链。

黑斑蛙体内裂头蚴组织结构观察

目的:观察黑斑蛙体内裂头蚴的正常组织结构。方法:裂头蚴检获于野生黑斑蛙,将裂头蚴制成常规的组织切片后行HE染色,镜下观察其组织结构,并采集图像。结果:裂头蚴呈白色,长带形,头尾两端有轻度膨大;虫体不分节,但有不规则横皱褶,虫体的顶端中央有一孔向内凹陷成隧道状,并向后延长一定距离后形成盲端;组织结构为实体,无体腔,有特征性体壁,体壁由皮层和皮下层组成;微毛位于皮层的外表面,遍布整个虫体;皮下层以网状纤维样间质为基质,起支架作用,内有环形和纵行的肌纤维、组织细胞、排泄管和圆形或椭圆形的石灰小体。结论:裂头蚴组织结构的观察为裂头蚴病的病原学诊断及其他裂头蚴的相关研究奠定了基础。

用虫种特异性线粒体基因序列鉴定2例疑似曼氏裂头蚴感染无虫病理标本

目的探讨采用线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(CO1)基因特异性序列鉴定临床无虫病理标本中裂头蚴感染的可靠性。方法应用免疫曼氏裂头蚴的兔血清检测病理切片中裂头蚴的抗原,有2例呈阳性,疑似裂头蚴感染的无虫病例,按照DNA提取试剂盒说明书提取核酸,用曼氏裂头蚴线粒体CO1基因特异性序列的两对引物作扩增。结果经PCR 2次扩增后得到目的序列,电泳条带出现在预期的位置。2例病理标本扩增的核苷酸序列与已知基因片断序列比对,引物F650/R800扩增条带符合率分别为100%和97%,引物F965/R1120扩增条带符合率均为100%。结论用裂头蚴线粒体CO1特异性基因引物作重复PCR扩增,对鉴定无虫病理标本曼氏裂头蚴感染有诊断意义。

学科融合信息在医学教育中的应用:以寄生虫抗肿瘤为例

学科融合是指在承认学科差异的基础上不断打破学科界限，促进学科间相互渗透、交叉的活动。学科融合既是学科发展的趋势，也是产生创新性成果的重要途径。作为医学教育者，如何拓展学生的知识面、教育并督促学生掌握多学科知识，以适应现代医学发展的需要，是我们必须深入思考的问题。

不同理化因素对曼氏裂头蚴感染性的影响

目的观察不同理化因素对曼氏裂头蚴感染性的影响。方法取含有裂头蚴的黑斑蛙肉(约1 cm3),分别经不同温度(-20℃、4℃、37℃和56℃)或不同乙醇浓度(20%、30%、40%、50%和60%)处理1、2或3 h,或经生姜汁、食用醋(总酸浓度4.5%,pH 3.05)或食用酱油(含19.3%NaCl)浸泡3、6、12或24 h,同时均设20℃生理盐水对照组。每种条件分别处理含30条裂头蚴的蛙肉,喂饲10只昆明小鼠(3条/只)。另将含20条裂头蚴的蛙肉机械匀浆处理3 min后平均喂饲10只小鼠。所有处理组喂饲1周后剖杀,计数阳性感染鼠数和小鼠体内的裂头蚴数。结果裂头蚴于-20℃处理2 h,无小鼠感染;56℃处理2 h或3 h后,所有小鼠均被感染,分别检获裂头蚴18和13条,具有感染性的裂头蚴所占比例分别为60%和43%,与对照组(均为90%,27/30)之间差异均有统计学意义(P<0.05)。裂头蚴于60%乙醇中浸泡2 h,无小鼠感染;60%乙醇中浸泡1 h,或者50%乙醇中浸泡2 h或3 h后,所有小鼠均被感染,分别检获裂头蚴18、17和15条,具有感染性的裂头蚴所占比例分别为60%、57%和50%,均显著低于对照组(均为93%,28/30)(P<0.05)。裂头蚴于食用醋中浸泡24 h,或食用酱油中浸泡6 h后,无小鼠感染。裂头蚴经生姜汁浸泡24 h后的感染性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。含裂头蚴的蛙肉匀浆后感染小鼠,其中5只小鼠被感染,检获6条裂头蚴。结论 -20℃或60%乙醇处理2 h,食用酱油中浸泡6 h,或食用醋中浸泡24 h,均可使1 cm3蛙肉中的裂头蚴对小鼠的感染性完全丧失。

雷丸及吡喹酮对猬迭宫绦虫裂头蚴感染性及超微结构的影响

目的了解雷丸及吡喹酮对猬迭宫绦虫裂头蚴感染性及超微结构的影响。方法从黑斑蛙体内检获裂头蚴,用20、40和80 mg/ml雷丸粉末混悬培养液以及20、80和320μg/ml吡喹酮培养液分别体外培养裂头蚴4、12和24 h,单纯培养液培养4、12和24 h为感染对照组。168只昆明小鼠均分为21组（每组8只）,每组小鼠经口感染相应条件培养后的裂头蚴各5条/鼠。感染后1周剖杀各组小鼠,计数每鼠裂头蚴检出数,并计算每组小鼠的减虫率。扫描电镜和透射电镜分别观察不同培养处理后的裂头蚴超微结构变化。结果小鼠感染经40和80 mg/ml雷丸粉末混悬液分别培养4、12和24 h的裂头蚴1周后,每组小鼠裂头蚴平均检出数分别为1.6、1.0和0.3条,0.3、0和0条,均显著低于对照组（4.1、3.5和3.3条）（P〈0.05）,且两组间差异有统计学意义（P〈0.05）;减虫率分别为60.0%、71.4%和90.1%,92.7%、100%和100%,且两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。小鼠感染经320μg/ml吡喹酮溶液分别培养4、12和24 h的裂头蚴1周后,每组小鼠裂头蚴平均检出数分别为1.9、1.3和0.4条,与对照组间差异均有统计学意义（P〈0.05）;减虫率分别为53.7%、62.9%和87.9%,显著高于20μg/ml吡喹酮处理组的14.6%、2.9%和6.1%以及80μg/ml吡喹酮处理组的24.4%、17.1%和24.2%（P〈0.05）。扫描电镜和透射电镜观察可见,经40 mg/ml雷丸粉末混悬液培养4 h以及320μg/ml吡喹酮溶液培养4和12 h后,裂头蚴虫体出现轻度挛缩;经40 mg/ml雷丸粉末混悬液培养12和24 h,虫体微毛凝集、融合或脱落,质膜破裂,石灰小体释出,皮质组织受损;经80 mg/ml雷丸粉末混悬液培养4-12 h,虫体损害逐渐加重,至24 h,裂头蚴组织结构严重受损,无法辨清;经320μg/ml吡喹酮溶液培养24 h,虫体前端挛缩明显,质膜水肿、泡状隆起,石灰小体形态改变,糖原颗粒耗损,分泌颗粒增加及焰细胞核质浓缩。经20 mg/ml雷丸粉末混悬液、20和80μg/ml吡喹酮溶液培养4、12和24 h的裂头蚴虫体与对照组相比,超微结构无明显改变。结论随着吡喹酮和雷丸体外培养浓度的增加以及时间的延长,裂头蚴对小鼠的感染性逐渐降低,并引起虫体广泛的组织结构损伤;雷丸的作用较吡喹酮明显。

曼氏裂头蚴病例及其诊治

The authors diagnosed and treated a rare case of sparganosis mansoni.The length of the sparganum mansoni extracted in operation is rare too.

曼氏迭宫绦虫裂头蚴体外培养系统的建立和实验观察

目的探讨曼氏迭宫绦虫裂头蚴稳定的体外培养介质。方法从野生黑斑蛙体内获取裂头蚴虫体,置于生理盐水、牛肉汤培养液及PRMI 1640培养并观察虫体存活情况。结果在三种不同的培养液中,裂头蚴在生理盐水中存活时间最短,在PRMI 1640中存活时间最长,且虫体活动力也显著高于生理盐水和牛肉汤培养液(P<0.05)。结论 PRMI 1640是曼氏迭宫绦虫裂头蚴在这三种不同培养液中最稳定的体外培养介质。