NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路在小鼠主动脉夹层形成中的作用

目的探讨NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路在小鼠主动脉夹层形成中的作用及机制。方法50只3周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量10~13 g)按随机抽样法分为对照组(n=10,无干预)、β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)组[n=20,饮水中加入1 g/(kg·d)BAPN]、BAPN+MCC950组[n=20,饮水中加入1 g/(kg·d)BAPN、腹腔注射NLRP3抑制剂MCC95020 mg/(kg·d)]。记录各组小鼠饮水量、体质量、主动脉夹层发生率、夹层相关病死率。采用HE染色观察主动脉壁炎症浸润;弹力纤维(elastic Van Gieson,EVG)染色观察主动脉壁弹力纤维断裂。采用免疫荧光检测NLRP3、IL-1β、α-SMA、OPN的平均荧光强度。采用Western blot检测NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、α-SMA、OPN表达水平。结果对照组无主动脉夹层发生及死亡,BAPN组主动脉夹层发生率为80%,夹层相关病死率为35%,且主动脉血管壁弹力纤维断裂、明显炎症浸润。与对照组比较,BAPN组中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达增加,收缩型蛋白α-SMA减少而合成型蛋白OPN增加(P<0.05)。而给予NLRP3特异性抑制剂MCC950后,主动脉夹层发生率下降(80%vs 35%,P=0.004),夹层相关病死率下降(35%vs 15%,P=0.144),血管壁弹力纤维断裂、炎症浸润减少;与BAPN组比较,BAPN+MCC950组NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β蛋白表达降低,收缩型蛋白α-SMA表达增加而合成型蛋白OPN表达降低(P<0.05)。结论小鼠主动脉夹层的发生与NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症小体通路活化有关,而NLRP3抑制剂MCC950能减少主动脉夹层发生,具有血管保护作用。

miR-155敲除小鼠乳腺癌肺转移模型的外周免疫细胞分型分析

目的:以miR-155基因敲除(miR155^(-/-))小鼠为对象,比较其与C57BL/6J野生型(WT)小鼠乳腺癌肺转移模型的外周血免疫细胞分型。方法:生物信息学分析miR-155在乳腺癌组织和外周血清中的表达水平及与预后的关系;采用尾静脉注射方式建立小鼠乳腺癌肺转移模型,流式细胞术对外周血免疫细胞进行分型分析;通过病理检查观察肺组织肿瘤转移情况。结果:miR-155^(-/-)小鼠T细胞和单核细胞百分比较WT小鼠显著降低(P<0.05),髓源性抑制细胞(MDSCs)百分比显著升高(P<0.01),其中单核细胞亚群(M-MDSC)显著减少(P<0.05),粒细胞亚群(G-MDSC)显著增多(P<0.05);在乳腺癌肺转移模型中,miR155^(-/-)小鼠的T淋巴细胞较WT小鼠明显增多(P<0.05),NK细胞明显减少(P<0.05),中性粒细胞明显减少(P<0.001),T细胞中Th细胞明显减少(P<0.05),M-MDSCs显著减少(P<0.01),而G-MDSCs显著增多(P<0.01)。结论:miR-155基因缺失导致外周免疫细胞分型的显著差异,使小鼠更易发生乳腺癌肺转移。

基于多肽-泊洛沙胺纳米颗粒载体的呼吸道黏膜 mRNA疫苗研究

目的设计并制备mRNA-多肽-泊洛沙胺纳米颗粒(mRNA peptidepolymerternary complex,mRNA-PPTC),考察其理化特性、体外和体内呼吸道组织相关细胞递送效率、免疫后小鼠特异性抗体诱导能力。方法通过体外转录分别制备编码萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase,F-luc)、增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)和新冠病毒受体结合域蛋白(receptorbinding domain,RBD)的mRNA,利用动态光散射法检测mRNA-PPTC的粒径、多分散系数、Zeta电位。通过透射电镜观察纳米颗粒形态。将F-lucmRNA-PPTC及对照组制剂分别转染至人支气管上皮细胞(16 human bronchial epithelial cell,16HBE)、鼠源树突状细胞(dendritic cell2.4,DC2.4)、鼠源巨噬细胞(mouse leukemia cells of monocyte macrophage,RAW264.7),检测荧光素酶报告基因转染效率和细胞活性;将EGFPmRNA-PPTC及对照组制剂转染至16HBE细胞,使用荧光显微镜观察EGFP表达情况。利用活体成像技术考察F-lucmRNA-PPTC在小鼠呼吸道的转染效率。选用编码RBD蛋白的mRNA作为疫苗抗原模型,通过酶联免疫吸附实验检测免疫后小鼠血清中抗原特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中抗原特异性分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)水平。结果成功制备粒径约100nm近球形且均一稳定的弱阳离子mRNA-PPTC纳米颗粒;mRNA-PPTC能有效转染16HBE、DC2.4、RAW264.7细胞,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),并且细胞毒性较低;mRNA-PPTC通过滴鼻免疫后,在小鼠鼻部和肺组织中检测到F-luc报告基因的有效表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);在初免后第28天的小鼠血清和BALF样品中,能分别检测到高效价的RBD抗原特异性IgG和sIgA,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论mRNA-PPTC纳米颗粒有良好的体外mRNA递送能力且细胞毒性较低;滴鼻给药后在小鼠上下呼吸道均能高效表达目的基因;小鼠滴鼻免疫后能产生高水平的抗原特异性血清IgG和支气管肺泡灌洗液sIgA。

乳腺癌铁死亡相关lncRNA预后模型构建和功能探索

目的:乳腺癌(BRCA)占女性恶性肿瘤榜首。铁死亡是铁依赖性程序性细胞死亡的一种形式,近年来成为肿瘤治疗的新策略。本研究旨在构建乳腺铁死亡相关lncRNA预后模型并进行功能探索。方法:从UCSC XENA数据库获取TCGABRCA的RNA-seq数据,获得BRCA组织中差异表达铁死亡相关基因,筛选BRCA组织中异常表达的lncRNAs。通过Spearman相关性分析筛选获得铁死亡相关lncRNAs,结合TCGA-BRCA临床数据进行单因素及多因素回归分析构建铁死亡相关lncRNAs预后风险模型。对高、低风险组进行GO和KEGG通路富集,探讨风险差异;通过ssGSEA分析高低风险组之间免疫活性的差异。最后,基于ceRNA假说构建铁死亡相关lncRNAs预后模型异常调控的lncRNA miRNA-mRNA网络。结果:通过单因素及多因素回归分析,最终获得5个铁死亡相关lncRNA预后模型,ROC曲线结果表明模型预测性能良好。GO富集分析和KEGG通路富集分析提示PI3K-Akt等信号通路存在差异;ssGSEA显示高低风险组免疫细胞及免疫相关途径存在差异。结论:lncRNA AC002546.1在BRCA的发生和发展中可能发挥重要作用,可用于BRCA的临床预后预测。

补体C3结构与功能研究进展

补体系统是一个具有复杂而精密调控机制的生物反应体系,是固有免疫与适应性免疫之间的重要枢纽,其组成成分包括固有成分、多种调节因子和补体受体等30余种[1]：①固有成分包括：经典激活途径的C1、C2、C4,凝集素途径的甘露糖结合凝集素、相关丝氨酸蛋白酶等,旁路激活途径的调控蛋白B因子、D因子等,以及三条激活途径枢纽C3,共同末端通路C5、C6、C7、C8和C9;②多种调节因子包括：备解素、H因子、I因子等血浆可溶性因子和腹膜蛋白等细胞膜结合蛋白;③补体受体包括：CR1 ～CR5、C3aR、fH受体等.补体成分中含量最为丰富的补体第三组分（The third complement component,C3）是1912年Ritg利用蛇毒处理血清时发现,是补体系统的核心,功能上,它成为三条补体激活途径（即经典途径、旁路途径、甘露聚糖结合凝集素途径）的启动汇合点,引起补体系统的级联反应,与各相关因子发生相互作用,同时还是C3b依赖的阳性反馈环路的基础.被激活的C3裂解为同样具有重要生物学活性的片段：C3a、C3b、iC3a、C3d等[2].

人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列 ,构建真核重组表达载体pcDNA3 hIL 2 4 ,进行双酶切和PCR鉴定 ,以质粒pcDNA3 hIL 2 4转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,用RT PCR检测mRNA表达 ,并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果 :成功获得 6 2 1bp的人IL 2 4基因 ,测序正确 ,经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确 ,以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS 7细胞可表达hIL 2 4 ,且所表达的人IL 2 4具有较强的诱导A5 4 9肺腺癌细胞凋亡的作用。结论 :人IL 2 4基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功 ,为研究人IL 2

红花多糖诱导SMMC-7721细胞增殖阻滞的实验研究

目的:通过研究红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的影响,进一步探讨SPS抗肿瘤作用的分子机制。方法:应用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPS对细胞周期和ROS的影响。结论:SPS可以抑制SMMC-7721细胞的增殖,最佳剂量为0.64 mg/ml;细胞增殖阻滞于G2/M期;细胞内ROS的产生随SPS浓度增高而增多,与对照组相比具有统计学意义(P<0.001)。SPS可能通过诱导ROS的产生而使细胞增殖阻滞,进而起到抗肿瘤的作用。

CXCR4和VEGF-C在结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系

目的探讨趋化因子受体(CXCR4)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系。方法选择65例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测CXCR4和VEGF-C在人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果CXCR4在结肠癌组织中的阳性表达率为43.1%,其中淋巴结转移组表达率为57.9%,无淋巴结转移组表达率为22.2%,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)。VEGF-C在结肠癌组织中的阳性表达率为50.2%,其中淋巴结转移组表达率为68.4%,无淋巴结转移组表达率为25.9%,二者差异非常显著(P<0.01)。而且,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P<0.05)。结肠癌CXCR4和VEGF-C的表达水平与肿瘤细胞淋巴结转移密切相关,而与病人的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度及肿瘤浸润深度等无相关性(P>0.05)。结论CXCR4和VEGF-C的表达可作为评估结肠癌病人淋巴道转移的一个观测指标。

丙型肝炎病毒慢性感染与IL-8、IP-10、Mig表达相关性研究

目的探讨HCV慢性感染与CXC趋化因子mRNA表达水平的相互关系。方法以Real-tim e PCR法动态检测慢性丙肝患者IFN-α联合利巴韦林治疗前、治疗3、6个月后IL-8、IP-10、M ig mRNA的表达水平。以趋化因子与GAP-DH比值为趋化因子的最终相对表达量。结果慢性丙肝患者HCV-RNA平均水平2.09×106拷贝/m l,IL-8、IP-10、M igmRNA表达水平分别为(1.243 7±0.071 2)、(0.682 8±0.073 8)、(0.668 3±0.075 4),与正常对照相比,差异有显著性(P<0.01)。IFN-α治疗3个月后HCV-RNA平均水平6.70×103拷贝/m l,IL-8、IP-10、M ig mRNA表达水平分别为(1.089 1±0.094 6)、(0.551 2±0.090 2)、(0.560 2±0.096 0),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.001)。IFN-α治疗6个月后HCV-RNA平均水平3.86×102拷贝/m l,IL-8、IP-10、M ig mRNA表达水平分别为(1.012 2±0.058 6)、(0.439 5±0.091 3)、(0.420 5±0.084 4),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01)。HCV 1b和HCV 2 a型患者各趋化因子表达水平相似,差异无显著性(P>0.05)。结论慢性丙肝患者PBMC内IL-8、IP-10、M ig mRNA表达升高,其表达水平与体内HCV-RNA复制水平有关,但与HCV基因型无关。IFN-α能显著抑制HCV复制,间接下调IL-8、IP-10、M ig mRNA表达水平。IFN-α这种综合作用效果,对降低患者体内炎性反应,控制病情发展十分有利。

痛风性关节炎患者NLRP3炎性体基因转录剪接体mRNA表达与临床检测指标的相关分析

目的探讨痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain,leucine rich repeat and pyrin domain containing,NLRP3)炎性体基因及其转录剪接体的改变与GA患者临床实验指标的关系。方法用半定量聚合酶链反应RT-PCR检测44例急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者、52例非急性痛风性关节炎(non-acute gouty arthritis,NAGA)患者和50名健康体检(healthy control,HC)者PBMCs中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白[PYRIN-PAAD-DAPIN domain(PYD)and a C-terminal caspase recruitment domain(CARD),PYCARD]、半胱天冬酶1(caspase 1,CASP1)基因及其转录剪接体mRNA表达水平;检测AGA、NAGA患者与HC血常规、肝肾功能、血脂指标,比较上述3组指标的差异并分析NLRP3炎性体各基因及其转录剪接体mRNA表达与各指标的相关性。结果 NAGA组NLRP3 mRNA表达量显著低于HC组与AGA组(P<0.05),AGA组、NAGA组NLRP3-2、3、4 mRNA表达量均显著高于HC组(P<0.05);AGA组、NAGA组PYCARD、PYCARD-1、PYCARD-2 mRNA表达量均显著高于HC组(P<0.05);AGA组CASP1 mRNA表达量显著高于HC组与NAGA组(P<0.05),AGA组CASP1-6 mRNA表达量显著低于HC组(P<0.05),NAGA组CASP1-7 mRNA表达量显著低于HC组(P<0.05),AGA组CASP1-gamma mRNA表达量显著高于HC组与NAGA组(P<0.05)。AGA组、NAGA组血常规、肝肾功能、血脂指标与HC组比较差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示NLRP3炎性体部分基因及其转录剪接体mRNA表达与AGA组、NAGA组部分临床实验指标具有相关性(P<0.05),与HC组临床实验指标均未见相关性(P>0.05)。结论 NLRP3炎性体基因转录剪接体mRNA在GA患者中表达异常,提示在GA患者的炎症反应中NLRP3炎性体基因转录剪接体可能发挥重要的调控作用;GA患者临床实验指标与HC组比较存在差异,且NLRP3炎性体部分基因及其转录剪接体与GA患者部分临床实验指标具有相关性。

动脉粥样硬化斑块组织中几种基因的表达（免疫组织化学和原位杂交）

应用免疫组织化学和原位杂交方法，检测人和家兔实验性动脉粥样硬化（ＡＳ）时内皮素（ＥＴ）及其Ａ型受体、血管紧张素Ｈ一Ａ型受体（ＡⅡＡ－Ｒ）、一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）和ｐ５３抑癌基因表达的变化，发现在ＡＳ斑块中ＥＴ及其Ａ型受体、ＡⅡＡ－Ｒ基因表达增加，ＮＯＳ基因表达减少，并有突变型ｐ５３基因表达增加。提示ＥＴ和ＡⅡ以及ＮＯＳ基因表达的改变可能参与ＡＳ时血管平滑肌细胞增殖过程；ｐ５３抑癌基因突变也可能与之有关。

雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞雄激素受体表达的抑制作用研究

目的 观测雄激素受体 (AR)反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响。方法 将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP ,PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在 ,RT PCR检测AR反义RNA表达和ARmRNA水平 ,Westernblot检测AR蛋白表达水平。结果 PCR在LNCaPas AR基因组DNA中扩增出了AR目的片段 ,表明AR目的片段整合到了细胞基因组。RT PCR证实LNCaPas AR有AR反义RNA表达 ,且其ARmRNA水平较LNCaP和空载体转染的LNCaPNeo显著下调 (P <0 .0 5 ) ,Westernblot证实LNCaPas AR细胞AR蛋白含量显著下降 (P <0 .0 5 )。

伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株的制备

目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基因的缺损性同源性核苷酸片段。将此片段胶回收后并导入自杀质粒pG-MB151的BamHI位点,将阳性质粒用电转化导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为phoP基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的phoP基因缺失297个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。

HLA-Cw在广东汉族人群中的分布频率及其意义的初步分析

目的 :检测HLA Cw在广东汉族人群的分布频率 ,初步分析该人群中KIR与HLA Cw之间识别方式的特点及意义。方法 :骨髓移植供者 12 2例 ,ACD抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果 :广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 371) >Cw 0 7(0 2 15 9) >Cw 0 1(0 175 2 ) >Cw 0 8(0 112 9) >Cw 0 4 (0 0 5 0 5 ) >Cw 14、15(0 0 4 19) >Cw 12 (0 0 376 ) >Cw 0 6 (0 0 333) >Cw 0 5 (0 0 0 82 ) >Cw 16 (0 0 0 4 1)。第一组Cw 0 2 ,0 4 ,0 5 ,0 6识别KIR分子中2DL 2DSI;第二组Cw 0 1,0 3,0 7,0 8识别KIR分子中 2DL2 2DL3;2DS2 2DS3。两组分布频率相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :广东汉族人群HLA Cw 0 1,0 3,0 7,0 8出现频率较高 ,其与KIR的识别方式均属第二组。

GGC54GAC MBL突变体的构建

目的 :在人甘露聚糖结合凝集素 (MBL)基因中引入GGC5 4GAC点突变。方法 :设计上下游引物和诱变引物 ,以汉族人野生型MBLcDNA为模板 ,采用megaprimer PCR技术进行定点突变 ,将PCR产物克隆至pGEM T载体 ,酶切和测序分析。结果 :以上游引物和诱变引物进行第一轮PCR ,获得一约 180bp的DNA片段 ,以此片段和下游引物行第二轮PCR扩增 ,得到一长约 780bp的产物 ;将其克隆至pGEM T载体 ,酶切发现第 5 4位密码中的BanI酶切位点已被破坏 ,与计算机酶切图谱分析结果一致 ;序列分析表明 ,除第 5 4位密码变为GAC外 ,余与野生型MBLcDNA完全相同。结论 :构建成功了GGC5 4GACMBL突变体 。

粘附分子CD44、CD44V3、CD44V6及PCNA在人骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨骨肉瘤组织中CD44、CD44V3、CD44V6及PCNA的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对 40例骨肉瘤、15例骨软骨瘤中CD44、CD44V3、CD44V6及PCNA的表达情况进行检测 ,并结合临床资料分析其与肿瘤恶性程度和预后的关系。结果 ①骨肉瘤中CD44、CD44V3、CD44V6阳性表达率明显高于骨软骨瘤。②骨肉瘤中CD44V6阳性表达率明显高于CD44、CD44V3。③骨肉瘤组织中CD44V6的表达与临床病理类型无关 ,与预后无关。④CD44及CD44V6的表达与PCNA的关系密切 ,尤以CD44V6更能反映肿瘤的恶性程度。结论 CD44V6可作为骨肿瘤恶性表型的标志 。

高迁移率族蛋白B1及其信号分子作用研究进展

HMGBl是HMGB亚家族成员之一。早期研究显示，HMGBl是一种DNA结合蛋白，通过与多种转录因子、复制蛋白、甾体受体及RAGl重组酶作用，参与DNA重组、修复、基因转录调控，细胞复制和分化成熟等多种生命活动[1]。随着研究的深入，人们对HMGBl有了丰富的认识，包括其基因和分子结构、蛋白的合成和分泌、翻译后修饰、作用的靶细胞表面受体和胞内的信号传递通路、靶细胞活化后释放的炎症介质和由此导致的相关疾病、以及靶向治疗的方法等。

79例广东汉族人群HLA-Cw及其KIR分析

目的:了解HLA-Cw与相应刺激性KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)和抑制性KIR在广东汉族人群中的分布。方法:对79例广东汉族骨髓移植供者,以DNA技术检测HLA-Cw和KIR表型。根据对KIR识别的特异性,将HLA-Cw分为HLA-Cwlys、HLA-Cwasn,分析个体HLA-Cw与相应刺激性或抑制性KIR的识别情况。结果:本组人群中,HLA-Cwlys、HLA-Cwasn的频率分别为26.6%、97.5%。表达KIR2DL1而无相应配体者62.0%,表达2DS1而无相应配体者15.1%。27.8%表达HLA-Cwasn而不表达相应KIR。25.3%、55.6%有抑制性HLA-Cwlys或HLA-Cwasn配体受体对,1.3%和14.0%的个体单独表达刺激性HLA-Cwlys或HLA-Cwasn配体受体对。15.1%的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cwlys。结论:在广东汉族人群中,存在KIR表型与自身HLA表型分离现象。抑制性HLA-Cw-KIR配对表达高于刺激性配对,约1/5单独表达刺激性HLA-Cw-KIR配对。

中国人群MHC—Ⅱ类抗原DR4基因体外扩增定型分析及其与类风湿关节炎相关性的研究

本工作拟建立一种 HLA 基因组 DNA 定型方法,采用聚合酶链反应技术对所要分析的 HLA—Ⅱ DR4基因进行体外扩增,并配合等位基因特异性寡核苷酸探针对扩增产物进行分析,以确定个体是否带有该型等位基因.我们用该方法对上海地区52例正常人及32例类风湿关节炎病人 DR4基因进行了分析,结果显示正常人 DR4基因携带者为17.3%,而类风湿关节炎病人高达43.8%(RR=3.7,P<0.01),DR4阳性的病人多为重症活动者(X^2=11.7,P<0.005).此外,我们将该方法与血清学定型方法进行了比较.

人VEGFcDNA的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

利用ＰＣＲ技术从人胎肝扩增并克隆人ＶＥＧＦ（血管内皮生长因子）的ｃＤＮＡ，构建其天然蛋白高效表达载体ｐＫＰＬ－３ｂ－ＶＥＧＦ，利用这一载体在大肠杆菌中获得人ＶＥＧＦ蛋白的高效表达，表达产物占细菌总蛋白的３０％以上。