MTHFR、MTRR基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的研究进展

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)是一种可引起全身多系统功能紊乱的睡眠障碍性疾病,严重时可致死;同型半胱氨酸(Hcy)是一种含硫氨基酸,血浆Hcy水平与心血管疾病、高血压、炎症、癌症、代谢等密切相关;大量研究表明OSAHS可引起Hcy水平变化,Hcy与叶酸代谢的关键酶基因MTHFR、MTRR的研究可能为OSAHS与Hcy之间的相关性及可能的机制提供理论依据。系统地回顾国内外相关文献,主要就OSAHS对Hcy影响及MTHFR、MTRR作用和可能机制的研究现状作一综述,为将来OSAHS的研究提供进一步的理论根据。

RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。

荷丹片对APOE^(-/-)小鼠炎症因子及氧化应激因子的影响

目的探讨荷丹片对载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠炎症因子、氧化应激因子的影响及对动脉粥样硬化(AS)的干预作用及机制。方法将50只APOE-/-小鼠随机均分为对照组、模型组、荷丹片低剂量组、荷丹片高剂量组及辛伐他汀组。对照组给予普通饲料,其余组给予高胆固醇饲料造模。同时用药组灌胃相应剂量药物,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。造模12周后测定血清白细胞介素(IL)-1、IL-10、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;RT-PCR测主动脉肿瘤坏死因子(TNF)-αm RNA表达。结果模型组较对照组IL-1、MDA、TNF-αm RNA升高,IL-10、SOD降低(P<0.01);荷丹片低剂量组、荷丹片高剂量组、辛伐他汀组较模型组IL-1、MDA、TNF-αm RNA降低,IL-10、SOD升高(P<0.01)。结论荷丹片可通过抗炎、抗氧化应激作用干预AS的发生、发展。

RNA干扰在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤是威胁人类健康的一大杀手,目前所采取的手术、放化疗等治疗措施效果并不理想。本文介绍了RNA干扰(RNAi)的相关作用机制及其在肿瘤治疗中的应用,并叙述了RNAi用于治疗时的递送方式、引起的脱靶效应和免疫反应,提示RNAi用于治疗时存在的一些问题,通过进一步的研究,基于RNAi的肿瘤治疗有望成为一种肿瘤治疗新方法。

人ID4基因启动子及上游顺式表达调控元件的克隆及特征分析

目的克隆人ID4基因启动子及上游顺式调控元件,并对其结构及调控元件的特征进行生物信息学分析。方法从NCBI人类基因组数据库中截取ID4基因转录起始位点上游5′侧翼区约2242bp及下游5′非翻译区212bp的基因组序列。利用TESS和Genomax等在线分析软件进行启动子及上游调控元件的特征分析。设计PCR引物,采用分段扩增法,获得长度分别为1811bp和650bp的两条产物片段,分别插入pGEM-T载体,转化至Top10感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆。先后应用KpnⅠ/NheⅠ、KpnⅠ/EcoRⅠ对获得的两个pGEM-T重组载体及pGL3Basic荧光素酶报告载体进行双酶切,T4DNA连接酶连接,转化至Top10感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆,最后测序鉴定。结果获得长度为2461bp的ID4基因启动子DNA序列,经测序证实与人类基因组序列一致。ID4基因具有Ⅱ型启动子特征,有2个非常显著的上游元件(TATA盒和GC盒),GC含量占总碱基含量的65.9%。在转录起始位点上游-1000bp与下游212bp之间分别存在多个可能具有正向和负向调控作用的顺式元件。结论成功克隆了人ID4基因启动子及其顺式调控元件,并证明ID4基因具有典型的Ⅱ型启动子结构。筛选出3个最有可能对ID4表达起调控作用的顺式元件,分别为糖皮质激素受体、单磷酸腺苷(cAMP)结合蛋白受体及雌激素受体。

RNA干扰作用于HIV-1vpr基因的筛选实验研究

目的筛选鉴定针对Hl V-1vpr基因的小干扰RNA(siRNA)片段。方法根据siRNA设计要求合成siRNA56、siRNA160和siRNA185寡核苷酸片段,分别转染至含HIV-1vpr质粒的HEK 293T细胞,并进行总RNA提取,采用Real-time PCR和Western blotting分别从核酸和蛋白水平对HIV-1vpr基因表达水平进行验证。结果siRNAs成功转染含HIV-1vpr质粒的HEK 293T细胞,降低了HIV-1vpr基因的表达水平,其中在RNA水平siRNA160组干扰抑制作用最强,抑制率为89%;在蛋白水平siRNA56组干扰抑制作用最强,抑制率为96%。结论 3个基因片段的siRNA均可以下调HIV-1vpr的表达水平,但存在差异性,为探索HIV/AIDS基因治疗的可行性和高效性提供了可靠的实验依据。

DNA polβ基因对乳癌细胞MCF-7增殖及侵袭影响

目的探究RNA干扰技术沉默DNA聚合酶β(DNA polβ)基因对人乳癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法构建3种DNA polβ-siRNA质粒,转染人乳癌细胞(MCF-7),选择最优DNA polβ-siRNA质粒进行后续实验。应用荧光定量PCR和Western blot检测质粒转染效率;噻唑蓝(MTT)方法检测DNA polβ-siRNA对细胞增殖能力的影响;Transwell检测敲降DNA polβ基因对MCF-7细胞侵袭能力的影响。结果DNA polβ-siRNA不仅能够抑制MCF-7细胞中DNA polβ的表达,而且还能抑制MCF-7细胞的增殖(F=5.8、8.6,P<0.05)和侵袭能力(F=5.2,P<0.05)。结论DNA polβ-siRNA可有效抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭。

死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究

目的观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)蛋白C-末端多肽(DCTP)对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用,探讨DCTP抑制DAPK功能的机制。方法采用PCR法扩增DCTP核酸片段,定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1(-),将重组质粒[pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1(-)-DCTP]转染至SH-SY5Y细胞中,筛选稳定细胞株。分析pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位。建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞。用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性,用Westernblotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK(p-DAPK)水平的变化。结果谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性,40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%。流式细胞仪检测结果显示,40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%,而正常培养细胞分别为0.08%和0%。谷氨酸诱导细胞凋亡时,p-DAPK表达下降。荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质。用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1(-)-DCTP和pcDNA3.1(-)质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞,流式细胞仪检测结果显示,前者凋亡率为43.7%,而后者凋亡率为62.2%。Westernblotting检测结果显示,在谷氨酸诱导下,与转染pIRES2-EGFP质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞相比,转染pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化。结论 DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质。DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因MTHFR多态性与唐氏综合征风险的相关性研究

目的研究叶酸代谢相关基因-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性与唐氏综合征高危风险之间的关系。方法采用化学发光法对150例受试孕中期女性血清中甲胎蛋白(AFP)、人类绒毛膜性腺激素(β-HCG)和游离雌三醇(uE3)进行检测,并评估胎儿患唐氏综合征的风险;通过聚合酶链反应(PCR)对所有受试者MTHFR的C677T和A1298C位点进行检测,分析患唐氏综合征高、低危风险2组间MTHFR C677T和A1298C的分布频率及等位基因频率的差异,并构建唐氏综合征低风险的优势单体型。结果唐氏综合征的高、低危组中,MTHFR C677T和A1298C不同基因型和等位基因频率,差异有统计学意义(P<0.05)。高危组中孕妇血清β-HCG的含量高于低危组,而AFP和uE3的含量小于低危组,差异有统计学意义(P<0.05)。单体型分析发现“C-C”型是唐氏综合征低风险的优势单体型,而“C-C”或“T-C”单体型则具有较高的风险,OR值分别为4.177和4.207。结论叶酸代谢酶-亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR C677T和A1298C的基因多态性可能与唐氏高危风险具有一定相关性,携带有“C-C”或“T-C”单体型孕妇可能增大唐氏综合征产前筛查阳性的风险。

超声靶向破坏微泡介导基因传输在心血管疾病中的研究进展

随着分子生物学技术的不断发展,基因治疗在心血管疾病中的应用日益广泛,但无论是基因的直接注入还是以质粒和腺病毒作为载体均存在转染率低及安全性方面的问题。已有研究证实超声靶向破坏微泡可实现基因在心肌组织的靶向释放,提高转染率,增强治疗效果。本文就超声靶向破坏微泡介导基因传输在心血管疾病中的研究进展做一综述。

FAM20A条件性基因敲除小鼠牙龈增生的组织测量学分析

目的分析Fam20A条件性基因敲除对小鼠牙龈组织形态的影响。方法k14-Cre;Fam20Aflox/flox条件性基因敲除小鼠及同窝正常小鼠各20只,分别于出生后4、6、8、12周随机处死每组中的5只;体视显微镜下观察下颌磨牙区牙龈的大体形态;常规法获得下颌第一磨牙近远中向中点部位的颊舌向石蜡切片,行HE染色,光学显微镜下分别测量颊侧牙龈总面积、牙龈上皮面积和牙龈结缔组织面积;析因设计的方差分析和费舍尔最小显著性差异确定显著性水平。结果基因敲除小鼠牙龈增生,颊侧牙龈总面积、牙龈上皮面积和牙龈结缔组织面积均大于对照组(P<0.05)。结论敲除小鼠牙龈上皮组织内的Fam20A基因后,导致牙龈组织增生,牙龈组织增生涉及牙龈上皮组织和结缔组织。

Survivin在膀胱癌中的研究进展

Survivin基因是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有高度的组织分布特异性和强大的抗凋亡功能。膀胱癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤,具有易复发的特点。本文综述了两者之间的内在联系,以寻找具有早期诊断、判定预后价值的肿瘤标记物,采取及时合理的治疗方法,提高膀胱癌患者的总体生存率。

灵猫方及其单味药醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原和乙型肝炎e抗原表达的影响

目的研究灵猫方及其单味药(牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿、猫爪草、生黄芪)醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达的影响。方法制备灵猫方及其7种单味药的醇提物,分别配制成50、100、200、400μg/mL4个浓度,作用于HepG2.2.15细胞72h,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测药物的细胞毒性;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg水平。结果灵猫方醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05)。牡丹皮醇提物、青皮醇提物、胡黄连醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05)。猫人参醇提物、淫羊藿醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05)。结论灵猫方醇提取物及组分的牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿醇提取物能抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达。

急性髓系白血病治疗药物的药物基因组学研究进展

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是成人最常见的急性白血病,具有恶性程度高、预后差的特点。阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)联合蒽环类药物化疗是目前治疗AML最主要的手段,诱导治疗后仍有20%~40%的患者不能达到完全缓解,多数患者会发生原发或获得性耐药。国内外学者已在AML治疗药物的药物基因组学方面开展了系列研究,涉及药物代谢、转运和作用靶点基因的遗传变异与AML化疗疗效和预后,并在机制上进行了探讨。随着基因测序技术的发展及其应用,临床研究发现FLT3、TP53、PMLRARα等基因的体细胞突变与AML的发生和预后密切相关,针对PML-RARα融合基因的靶向药物三氧化二砷已广泛应用于M3型AML的治疗并取得了理想的疗效,以FLT3为靶点的AML靶向治疗药物的研发如火如荼,其中米哚妥林和gilteritinib已被美国FDA批准为FLT3突变阳性AML患者的治疗药物。从药物代谢与转运、作用靶点相关的遗传变异、体细胞突变3个方面对AML治疗药物的药物基因组学研究进展进行综述,以期为AML个体化治疗提供更多依据。