均匀设计在ELISA分析方法条件优化实验中的应用

以对硫磷为对象,通过与常规方法相比较,对均匀设计法在ELISA分析方法条件优化实验中应用的适用性进行了研究。采用常规方法对对硫磷ELISA分析方法条件优化的结果为:甲醇体积分数为5%,离子强度0.50mol/L和pH7.40,此时建立的ELISA方法IC50值为89.17ng/mL,IC20值为12.49ng/mL。而采用均匀设计法对对硫磷ELISA分析方法条件进行优化,并对实验结果进行多元二项式统计回归,预测了最佳条件组合的取值,并进行了ELISA实验验证,结果表明:当甲醇体积分数为10%、离子强度为2.00mol/L、pH为5.00时,建立的ELISA方法的IC50值为9.96ng/mL,IC20值为1.21ng/mL。将两种方法应用于5种性质不同的环境土壤中对硫磷的检测,结果表明,采用均匀设计法进行ELISA分析方法条件优化实验快速简便,能够筛选得到最优条件组合,建立的ELISA方法具有更好的广谱性,能够更广泛地应用于基质差异较大的同类样品检测。

肺支原体肺炎患儿血清中辅助性T细胞亚群表达细胞因子的变化及其临床意义

目的分析肺炎支原体(MP)肺炎(MPP)患儿血清中辅助性T细胞亚群表达细胞因子的变化及临床意义。方法选择江门市人民医院2012年1月～2013年1月收治的小儿MPP病例38例(MPP组),另选择非MP患儿28例为非MP组,健康体检儿童30例为对照组。采用ELISA法检测患儿血清中不同辅助性T细胞亚群相关的细胞因子(INF-γ、IL-4及IL-17)水平,并与对照组进行对比分析。结果经ELISA法检测MPP组患儿血清INF-γ为(60.93±17.88)ng/L,IL-4为(67.67±14.69)ng/L、IL-17为(72.64±33.80)ng/L,与对照组和非MP组比较,差异有高度统计学意义(P<0.01);MPP组IL-4/IFN-γ比值为1.21±0.55,与对照组比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论 MP肺炎患儿血清中辅助性T细胞亚群以及细胞因子均存在一定程度的异常,临床上检查该类患者辅助性T细胞亚群以及细胞因子的表达情况有助于检测患儿病情进展以及治的效果,有效改善患儿预后,具有十分重要的临床应用价值。

江苏汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其特异性配体HLA分析

目的:分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其特异性配体HLAⅠ类分子在江苏地区汉族人群的分布特点。方法:分别利用real-time PCR法和PCR-SSP方法对173例无血缘关系的江苏汉族健康人群进行KIR和HLA-Cw,HLA-Bw4分型,并分析KIR/HLA配对组合的类型和数量。结果:江苏汉族人群中,>92%的个体同时表达四种抑制性KIR(iKIR)(2DL1,2DL2/3,3DL1,3DL2)。2DL2/HLA-C1,2DL3/HLA-C1,2DL1/HLA-C2,3DL1/Bw4的频率分别依次分别为0.243,0.971,0.457,0.590;2DS1/HLA-C2,2DS2/HLA-C1的频率为0.162,0.231。54.3%的个体只表达2DL1而不表达相应的配体HLA-C2,32.9%的个体只表达3DL1而缺乏配体HLA-Bw4,另有5.8%的个体只表达HLA-Bw4而不表达3DL1。27.7%的个体同时表达3种iKIR/HLA,26%的个体同时表达两种iKIR/HLA,25.4%的个体只遗传一个iKIR/HLA配对,未发现3种iKIR/HLA同时缺失的个体。结论:在江苏汉族人群中,存在KIR与HLA表型分离现象,抑制性KIR/HLA配对表达高于刺激性KIR/HLA配对,约1/4个体只表达单个iKIR/HLA配对。

微流控芯片用于甲胎蛋白化学发光免疫分析的研究

目的：建立一种可用于免疫分析的微流控芯片系统。方法：采用激光直接加工法制备微流控芯片，建立基于超顺磁珠的化学发光微流控免疫分析系统，用于甲胎蛋白（AFP）的测定。结果：芯片系统可在20min内完成AFP的分析，所需要的标本量和试剂量为5μl，线性范围为1～800ng／ml，批内变异系数（CV）平均为6，3％，批间CV平均为7．8％，回收率为94．3％。结论：微流控芯片系统是一种快速、耗费小、可重复使用的AFP测定方法。

免疫透射比浊法对ASO及RF试剂的应用性能评价

目的对德赛诊断系统(DiaSys)公司生产的抗链球菌溶血素O(ASO)和类风湿因子(RF)液体双试剂进行应用性能评价。方法采用免疫透射比浊法在全自动生化分析仪中定量测定ASO及RF,分析各自的精密度、线性、准确度、平均干扰值及试剂的稳定性,并与罗氏诊断试剂比较。结果免疫透射比浊法在全自动生化分析仪中定量测定血清ASO和RF都有良好的精密度(批内、批间变异系数均小于5%);定量检测具有满意的线性响应(ASO r=0.995,RF r=0.987),线性验证显示ASO(25-288 IU/ml)、RF(1.4-296.9 IU/ml)中线性良好。DiaSys公司生产的ASO、RF试剂与罗氏诊断同类试剂相关性较好,相关系数r2分别为0.95和0.94;当样品中胆红素≤684μmol/L、血红蛋白浓度≤5 g/L、甘油三酯浓度≤22.6 mmol/L时,ASO和RF结果未受到干扰;试剂保存时间长。结论 DiaSys公司生产的免疫透射比浊法定量测定ASO和RF试剂应用性能良好,评估合格。

长航对人体外周血细胞因子表达水平的影响

目的探讨执行海上编队长航任务对舰员外周血细胞因子表达水平的影响。方法采用多抗体芯片化学发光法定量比较海上任务人员(实验组)和岸基人员(对照组)外周血120种细胞因子的表达差异。结果与岸基人员相比,执行海上长航任务舰员外周血34.17%(41/120)人体细胞因子表达水平改变,其中13种细胞因子表达升高,涉及Janus激酶-信号转导及转录活化因子、有丝分裂原活化蛋白激酶等细胞信号通路,参与细胞趋化、免疫调节(尤其是细胞免疫调节)、炎症反应和细胞凋亡等重要生物学过程。结论执行海上编队长航任务124 d,部分舰员外周血多种细胞因子表达水平改变,提示海上综合作业环境在一定程度上影响长远航任务人员机体免疫功能。

丙型肝炎病毒抗体化学发光检测方法的建立

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatits C virus,HCV）引起肠道外传播的一类传染病,输血及血液制品引起传播是本病的主要途径。目前,国内抗HCV检测主要是ELISA和进口的全自动化学发光法。进口的全自动化学发光检测,由于配套的全自动分析仪和试剂价格昂贵,限制了其在临床上的应用。本研究研制了一种更为便宜、更易操作的HCV抗体化学发光试剂盒。

妊娠高血压综合征患者血清TNF-α测定及其意义

妊娠高血压综合征（妊高症）足严重威胁母婴安全的疾病，迄今为止其发病机制尚未完全阐明，近年来研究表明血管内皮细胞激活、功能障碍和结构损伤是妊高症发病的一个重要环节。妊高症孕妇体内TNF—α对于血管内皮细胞有损伤作用，所以TNF－α为妊高症孕妇血中起致病作用的毒性因子之一。为此，笔者对妊高症患者血浆中TNF－α水平测定，以进一步探讨其在妊高症的发病机制中的作用。

乙型肝炎病毒表面抗原检测敏感度和标准化问题

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一个全球性公共卫生问题。HBV表面抗原（HBsAg）是目前诊断急性和慢性HBV感染的最重要血清学标志物。但是HBsAg阴性并非意味着没有HBV感染，检测误差主要由病毒、宿主或者检测试剂盒造成。提高检测方法的敏感度有助于降低满检率，建立标准化检测可以发挥HBsAg定量检测在临床中的价值。同时结合HBVDNA和HBV核心抗体（HBcAb）可以提高HBV感染的检测率，保障临床输血和器官移植安全。

人腹膜间皮细胞的体外培养

目的:建立简便有效的人腹膜间皮细胞(HPMC)的体外培养方法。方法:采用0.2%胰蛋白酶-0.02%EDTANa2消化人大网膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养。用形态学、免疫组化(SP法)鉴定细胞。结果:分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状。免疫组化鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子、白细胞CD45抗原阴性,证实培养的细胞的确是HPMC。结论:胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离HPMC的方法。

miRNA表达与免疫细胞因子相关性在原发性肝癌早期诊断和预后中的作用

目的:检测miR-146a、miR-224、miR-34c、miR-200a、miR-148b、miR-375六种miRNAs在原发性肝癌中的表达变化及其与HBs Ag、抗-HBs、HBe Ag、抗-HBe、抗-HBc和IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等炎症因子表达的相关性,以验证循环miRNA是否可作为理想的血源性新型生物标志物用于原发性肝癌的早期检测。方法:收集肝炎、肝硬化患者及健康对照组静脉血,并收集原发性肝癌患者癌组织和癌旁组织。提取总RNA后通过实时定量PCR检测并比较各组miRNA的相对表达水平,同时检测miRNA表达水平变化与血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA19-9、CA125表达的关系;并检测miRNAs表达水平变化与HBs Ag、抗-HBs、HBe Ag、抗-HBe、抗-HBc和炎症因子IL-12、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α表达相关性。结果:相对于健康组,miR-34c、miR-224、miR-146a在PHC组血清和组织中表达显著上调;miR-200a、miR-148b、miR-375在PHC组血清和组织中表达显著下调,差异具有统计学意义。HBs Ag与血清miR-375和miR-146a存在回归关系,miR-375随HBs Ag表达水平升高而降低,而miR-146a随HBs Ag表达升高而升高。IFN-γ与miR-146a存在回归关系,miR-146a随IFN-γ表达水平降低而升高,miR-375和miR-146a诊断能力大于CA19-9和AFP。结论:miR-146a、miR-224、miR-34c、miR-200a、miR-148b、miR-375在原发性肝癌血清和组织中存在表达差异,其中miR-375和miR-146a诊断能力优于AFP和CA19-9,血清miR-375和miR-146a可能成为新的肝癌早期诊断标志。

ELISA法梅毒抗体检测在早期梅毒诊断中的应用价值

目的观察酶联免疫吸附试验(ELISA)法梅毒抗体检测在早期梅毒诊断中的应用价值。方法选择2014年12月至2016年12月禹州市人民医院收治的162例进行梅毒血清学试验的疑似梅毒患者作为研究对象,采取ELISA法梅毒抗体检测,检测阳性者再进行甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)确证,观察ELISA法诊断梅毒的特异度、灵敏度。结果 162例疑似梅毒患者中经临床综合分析确诊为梅毒患者84例,应用ELISA法检查出阳性86例,其中78例经TRUST确证为阳性,假阳性8例,检测灵敏度为92.86%(78/84),检测特异度为90.70%(78/86)。结论酶联免疫吸附试验法梅毒抗体检测在早期梅毒诊断中应用价值较高,且适合大批量样本筛查。

胶体金法检测浆膜腔积液中癌胚抗原的临床应用及评价

目的:探讨胶体金法检测浆膜腔积液中癌胚抗原(CEA)对癌性浆膜腔积液的诊断价值。方法:用胶体金法对79例良性浆膜腔积液和34例癌性浆膜腔积液中CEA进行定性检测。结果:检测结果与临床(经病理或细胞学证实)的最后诊断比较,该法的敏感性、特异性和准确度分别为79.41%,87.34%和84.96%。结论:胶体金法浆膜腔积液癌胚抗原检测,可用于浆膜腔积液良恶性的鉴别。该法简单、快捷、准确度较高,尤其适合于基层医院开展。

用单克隆抗体检测微量乙醛—蛋白结合物

用乙醛和小鼠血清白蛋白的结合物免疫BALB/C小鼠.采用高效融合程序制备出只与乙醛反应的单克隆抗体.这种单克隆抗体能够检测1×10^(-3)微摩尔的乙醛,在鉴定酒精摄入量及其对人体有害程度的研究中具有一定意义.

某医学院学生弓形虫感染血清流行病学研究

目的了解某医学院在校大学生弓形虫感染情况及影响因素。方法运用ELISA法检测入校新生和三年级以上学生血清弓形虫IgG抗体,并进行相关问卷调查。结果弓形虫感染总阳性率为5.58%,新生(8.14%)感染率高于老生(3.56%),差异有统计学意义。职业家庭学生感染率(10.21%)高于非职业家庭学生(3.84%),差异有统计学意义。接触动物、禽类等的程度不同,弓形虫感染率有差异。结论医学生中存在弓形虫感染,卫生、饮食和家庭职业环境对弓形虫感染有影响。需要加强医学生弓形虫病的流行和预防知识教育。

ELISA法与TRUST法梅毒血清学试验的比较

〔目的〕根据对比结果,找出1种较为理想的实验方法进行梅毒筛查,防上漏检、误检,提高检测的准确度。〔方法〕采用酶联免疫吸附试验(ELISA)与甲苯胺红卡片试验不加热血清反应(TRUST)对14608名出入境人员及82名梅毒病人进行梅毒血清学检测,对ELISA法和TRUST法检测出的阳性样品均用梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。〔结果〕14608名出入境人员梅毒筛查,ELISA试验与TPPA试验完全符合,TRUST试验有11例不符合;82名梅毒病人检测,TRUST试验有1例不符合,ILISA试验完全符合。〔结论〕EIISA法筛查梅毒具有灵敏度高、特异性好、自动化程度高、易于大批量检测等优点,适合于对出入境人员进行梅毒检测。

慢性肾炎急性感染期PCT与IL-6和TNF-α的变化及对器官功能的影响

目的 研究慢性肾炎患者急性感染期降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化及对器官功能的影响。方法 选取2015年8月-2017年6月43例慢性肾炎急性感染期患者为感染组,45例慢性肾炎患者为未感染组、22例健康体检人员为对照组。收集入组时三组研究对象和慢性肾炎患者治疗24h、治疗48h和治疗72h后,白细胞计数(WBC)、血清降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平和APACHEⅡ评分情况,分析炎症指标与患者肝功能、肾功能和肺功能的相关性。结果 入组时三组研究对象WBC计数、PCT、IL-6、TNF-α水平和APACHEⅡ评分,感染组高于未感染组、对照组,未感染组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗24h、48h,血清WBC计数、PCT、IL-6、TNF-α水平和APACHEⅡ评分,感染组高于未感染组(P<0.05);PCT、IL-6、TNF-α评价急性感染病情敏感度、特异性、阳性预测值均高于WBC计数;当炎症因子水平PCT≥11.1ng/ml、IL-6≥287.20ng/L和TNF-α≥248.00pg/ml患者肝功能、肾功能和肺功能较差。结论 慢性肾炎急性感染期患者血清PCT、IL-6、TNF-α水平进一步升高,加重肺、肝、肾功能负担,造成器官不同程度损伤,致病情恶化;加强血清PCT、IL-6、TNF-α水平动态监测,利于评价病情、指导临床、改善预后,值得推广应用。

酶联免疫吸附试验结果不确定度的动态评定

目的采用方程模型对酶联免疫吸附试验的不确定度进行动态评定,使其更具科学性、合理性和复现性。方法依据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》,引入数学模型对ELISA法检测梅毒螺旋体抗体结果的不确定度进行评定。通过重复测定不同浓度样品获得检测数据,利用SPSS17.0统计软件对数据做拟合优度检验,确定拟合度最好的方程模型。结果评价影响检测结果的不确定度分量,对各个分量进行分析和量化,获得测量结果的不确定度,并作出科学表述。分析认为样本的不确定度在所有不确定度分量中占有绝对比重,三次方程模型是评定样本不确定度的最佳模型。结论样本的不确定度分量作为不确定度评定的重要分量,在绝大多数ELISA的不确定度评定中被忽略。不确定度的动态评定能有效解决ELISA试验中不确定度动态变化的问题。