2012—2023年梧州市水产品和水体中O1/O139群霍乱弧菌监测结果分析

目的了解O1/O139群霍乱弧菌在梧州市水产品和水体中的污染状况,为防控工作提供科学依据。方法2012—2023年每年5—10月,对梧州市各农贸市场和超市的水产品和养殖池水随机采样,并定点采集易受污染的池塘水、江河水。对采集的样本进行霍乱弧菌分离培养、生化鉴定、血清学分型和毒力基因检测。结果2012—2023年梧州市共监测水产品和水体4844份,共检出O1/O139群霍乱弧菌53份,总检出率为1.09%。其中水产品监测3020份,检出率为1.42%(43/3020),水体监测1824份,检出率为0.55%(10/1824),水产品和水体检出率差异有统计学意义(χ^(2)=8.056,P<0.05)。不同月份的水产品霍乱弧菌检出率差异有统计学意义(χ^(2)=16.053,P<0.05),其中9月的检出率较高(3.54%,12/339),7月的检出率较低(0.68%,4/588)。不同类型水产品和水体的霍乱弧菌检出率差异均有统计学意义(χ^(2)=82.308、15.752,P均<0.05);水产品中蛙类检出率较高(10.27%,23/224),水体中养殖池水检出率较高(2.43%,7/288)。检出的53株菌株中,O1群小川型22株,O1群稻叶型24株,O139群7株;霍乱毒素(cholera toxin,CT)毒力基因均为阴性。结论梧州市水产品和水体均存在霍乱弧菌污染,应进一步加强监测工作力度,及时掌握霍乱弧菌的污染状况,严防霍乱疫情发生。

霍乱O_(139)菌致重型霍乱二例

2009年1月15日～17日，通海县四街镇某村村民在村内举办丧宴，共有585人参加，进餐后多人出现腹泻，其中2例病情加重，送入我科，经玉溪市疾抗中心检测，初步判断为霍乱O139感染，经省疾抗中心检测复核，确诊为霍乱139感染，经流行病学调查，585人中有26人曾于2008年11月到过霍乱流行严重的疫区旅游，其中1人在举办丧宴时全程帮厨。随后对535人采集粪便进行检测，发现20例病例和27名病原携带者。此次疫情发生具有突然性，系新中国成立以来，当地首次发生过的霍乱疫情。现将2例重型病例报道如下。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性研究

目的 应用随机扩增多态DNA(RAPD)技术 ,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)进行基因多态性研究。方法 对我院临床分离的 39株MRSA进行随机引物PCR扩增 ,扩增产物进行电泳和聚类分析。结果 39株MRSA经电泳得到 1～ 9条片段 ,经聚类分析可分为 8个型 ,位于我院东侧的 1、2和 6号楼的科室主要流行Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ型 ,其中神经外科主要流行Ⅰ型 ,呼吸内科流行Ⅵ型 ;而位于我院西侧的 3、4、5号楼的科室主要流行Ⅲ、Ⅳ和Ⅷ型 ,其中综合 2科流行Ⅷ型。结论 通过RAPD分型研究 ,了解了我院MRSA基因型流行的特性 。

四川省2005年霍乱分子流行病学特征

目的:分析四川省2005年霍乱弧菌分子特征,以及霍乱暴发疫情分离的菌株与菌株之间,疫情分离的菌株与海、水产品监测分离的霍乱弧菌之间的遗传相关性,查找霍乱传染来源,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法:利用聚合酶链反应(PCR)检测O139群霍乱弧菌特异性编码脂多糖基因(LPS)和霍乱毒力基因(ctxAB);脉冲场凝胶电泳对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果:所试16株霍乱弧菌14株LPS阳性,为O139群霍乱弧菌;另2株为O1群稻叶型霍乱弧菌。2株稻叶型霍乱弧菌和1株O139群霍乱弧菌ctxAB阴性,其余13株菌均具有ctxAB,为产毒株。对16株菌以NotⅠ酶切后PFGE可分为5个型别。O139群霍乱弧菌优势流行株与从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌PFGE型别一致,且同为产毒株。结论:甲鱼等海、水产品被O139群霍乱弧菌污染情况严重,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源,被污染的甲鱼可能是本年度食源性霍乱暴发的主要传染来源之一,海、水产品的监测是近期霍乱防控的重点。

13起O139型霍乱疫情分析

目的探讨O139霍乱流行特征,为制定预防控制措施提供依据。方法对所有聚餐人员及其接触者进行个案调查,以肛拭和环境采样培养分离霍乱弧菌,按国家标准诊断病人和带菌者,并采取控制措施。结果13起疫情暴露者3107人,感染率为12.49%,罹患率为2.90%,带菌率为9.59%;暴发疫情12起;各起疫情均与聚餐有关,均有食用虾或甲鱼史,4起疫情从虾或甲鱼中检出O139霍乱弧菌,2起疫情从餐具或剩余食品中检出O139霍乱弧菌;病人主要表现为无痛性腹泻,水样便,中重度病例占47.73%。结论甲鱼或虾携带O139霍乱弧菌,加强饮食卫生管理是预防O139霍乱食源性传播的关键。

多重PCR检测霍乱弧菌的毒素相关基因

目的探索建立一种快速、敏感地检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1/非O139群的毒素相关基因的方法。方法针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)、霍乱弧菌毒素共调菌毛A基因(tcpA)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)分别设计引物,建立多基因PCR方法;通过一次扩增反应之产物经琼脂糖凝胶电泳,可检测出菌株的毒素相关基因的携带情况。结果阳性对照菌株MO45(霍乱弧菌O139群)检出5种毒素相关基因,结果符合设计要求;其他不同来源的霍乱弧菌(O1群、O139群、非O1/非O139群)检出1～5种不等的毒素相关基因;根据毒素相关基因携带情况,可将菌株分为5个基因型,并可区分为产毒株和非产毒株;多重PCR敏感度可达102cfu/ml。结论该方法快速、特异、敏感,具有较大的应用价值。

PCR快速测定法在检测海河水体非01群霍乱弧菌中的应用

目的合成一对霍乱弧菌外膜蛋白引物 ,采用PCR技术对海河水系非01群霍乱弧菌感染状况进行了检测。方法在海河水系5处水点采集水样102份 ,以PCR技术和常规分离培养进行了比较 ,以非01群霍乱弧菌Vbo35型、志贺痢疾、伤寒、大肠杆菌作为PCR扩增时的阴、阳性对照。结果102份水样PCR检测总阳性率为52% ,扩增片段588bp,与常规分离培养比较 ,符合率为100%。结论霍乱弧菌外膜蛋白引物快速检测海河水系非01群霍乱弧菌敏感性高 ,特异性强 ,可提高检测速度4～5倍 。

市售甲鱼带菌引发霍乱疫情病原学研究

[目的]弄清O139群霍乱弧菌在我市引起突发公共卫生事件的原因及传播来源,找到防控措施。[方法]用碱性胨水对所采样品进行增菌,四号琼脂平板作病原菌分离,Cpi20E作生化学鉴定,O139诊断血清作菌群诊断,同时用PCR作菌株毒力测定,引物是CtxA,用KB法作药物敏感试验。[结果]我市O139群霍乱疫情共作样本215件,检出42株病原性弧菌,并从相关食物链甲鱼中检出3株,生化鉴定率为99.9%,从病人及甲鱼中检出的O139群霍乱弧菌生化反应一致,毒力基因相同。对青霉素等数10种抗生素耐药、先锋类及复哌酸敏感。[结论]我市O139群霍乱疫情由外地输入甲鱼带染所致,病人及甲鱼中检出O139群霍乱弧菌具有同源性。

霍乱弧菌毒力强弱及菌株同源性的快速检测

目的建立一套快速检测霍乱弧菌毒力强弱及不同菌株同源性的实验方法。方法设计4对引物进行多重PCR检测菌株毒力基因特征;采用随机扩增多态性DNA(RAPD)结合SPSS软件分析不同菌株的同源性。结果通过多重PCR同时检测菌株CtxA、TcpA、Ace、Zot4种主要的毒力基因,并快速判定其毒力强弱;RAPD产生的指纹图谱条带清晰、数目较多、片段大小分布均匀,结合SPSS软件分析可判断菌株间的同源性关系。结论多重PCR和RAPD结合SPSS软件分析可在4h内完成对霍乱弧菌毒力强弱及不同菌株间同源性的检测,有助于在疫情处理中判断病菌来源和及时采取适当的处理措施。

2005年衡阳市霍乱疫情流行病学调查分析

目的分析2005年衡阳市霍乱流行状况,了解霍乱流行规律。方法现场流行病学调查和霍乱内、外环境监测结果分析。结果农村地区聚餐及不良卫生习惯和市场甲鱼被霍乱弧菌污染是引起霍乱暴发的主要原因。结论加强疫情监测,有针对性采取控制措施,能有效控制霍乱疫情的发生。

TaqMan荧光定量PCR技术快速检测霍乱弧菌方法的建立

目的:建立特异、灵敏、快速的TaqM an荧光定量PCR方法用于快速检测霍乱弧菌。方法:根据GenBank上的霍乱毒素(cholera toxin,CT)基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqM an探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,与副溶血性弧菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应;检测灵敏度达10 cfu/m l;反应体系具有很高的稳定性;整个操作过程仅需2 h。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适用于霍乱弧菌的日常监测和爆发疫情的应急诊断。

霍乱在岭南的流行及其与旱灾的关系(1820～1911年)

通过对１８２０至１９１１年岭南地区霍乱流行情况及流行背景等调查考证和统计分析，认为１８２０年霍乱从缅甸、泰国经海路首先传入广州和潮汕地区，主要流行于沿海地区，尤以珠江口和潮汕地区为甚，其流行常发生在旱灾背景下。

脉冲场凝胶电泳分子分型追溯霍乱传染源研究

目的了解湖南省2005年霍乱疫情分离菌株与常规监测的外环境和水产品中霍乱弧菌分离株之间的遗传相关性,追溯传染源,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法采用PCR检测霍乱菌毒力基因,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株的分子分型。结果所有菌株均具有CT基因,20株菌的PFGE为1个型。结论20株霍乱弧菌均是产毒株,具有致病性;湖南省从甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与同期流行的O139群霍乱弧菌分型的带型一致,分子流行病学分析提示甲鱼可能是湖南省近年霍乱疫情主要传染来源之一。

重庆市2002年霍乱流行特征分析

目的分析重庆市2002年霍乱疫情流行特点及规律,为制定防制措施提供依据。方法对确诊的霍乱患者及其密切接触者进行个案调查,采肛拭和(或)大便取样,进行霍乱弧菌培养分离和鉴定。结果全市发生霍乱疫情23起,确诊病例173例,死亡5例,带菌者101人。霍乱感染率、发病率、死亡率和病死率分别为0.884/10万、0.558/10万、0.016/10万、2.89%。病例相对集中在渝西地区,6～8月为发病高峰,以农民发病为主。食物因素引起的病例数显著高于其它传播因素(U=6.62,P<0.01)。优势流行菌型为埃尔托霍乱弧菌稻叶1d菌型,同时首次出现霍乱弧菌O139群。结论重庆市霍乱传播方式以食源性传播为主,流行株发生改变,应制定针对性强的综合防制措施,控制和减少疫情的发生和流行。

湖南省20世纪九十年代霍乱流行病学分析

目的 分析湖南省90年代霍乱流行状况和特征。方法 应用描述流行病学方法对资料进行分析。结果 1993～1999年湖南省霍乱发病率在0.03/10万～1.96/10万之间,病死率为1.73％,流行高峰期为7～9月,京广铁路沿线和湘南地区为高危区,湘西、怀化、永州等山区为主要流行区,年龄以青壮年为主,农民占绝大多数,流行形式以暴发为主,传播途径主要是借水传播。结论 我省属霍乱传入性地区,在防治对策上应以保证提供安全饮用水为主,其次是加强腹泻病门诊监测以及早发现疫情、控制暴发次数与规模,同时要特别加强边远山区的霍乱防治。

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的 分析革兰阴性杆菌中超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。 方法 采用双纸片协同法筛选ES BLs菌 ,用纸片扩散法检测其药敏结果 ,分别用TEM、SHV和CTX -M通用引物进行PCR扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 大部分产ESBLs菌对头孢噻肟耐药 ,而对头孢他啶敏感 ,少部分对两者都耐药 ,这些菌株前者以CTX-M引物的PCR扩增结果 ,主要为CTX -M - 3,还检出CTX -M - 12、CTX -M - 14 ;后者以SHV引物的PCR扩增结果 ,主要为SHV - 12 ,还检出SHV - 4 0、SHV - 33和SHV - 5型。TEM引物扩增结果全部为TEM - 1型广谱酶。结论 革兰阴性杆菌中ESBLs主要是CTX -M - 3型 ,6 2 9%的菌同时存在 2～ 3种酶。

脉冲场凝胶电泳分型方法追溯霍乱传染源

目的 了解四川省 2 0 0 4年霍乱疫情分离菌株与常规监测的外环境和水产品中霍乱弧菌分离株之间的遗传相关性 ,追溯传染源 ,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法 O139群霍乱弧菌编码脂多糖 (LPS)特异性基因引物聚合酶链反应 (PCR)复核菌株 ,霍乱毒素 (CT)基因引物PCR检测霍乱毒力基因 ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)进行菌株的分子分型。结果 2 5株受试菌株LPS基因 2对引物PCR结果均为阳性。所有 6株河水中分离的菌株均为CT基因阴性 ,其余均具有CT基因。 2 4株菌PFGE可分为 13个型。结论 LPS基因PCR检测结果从分子水平证实受试菌株均为O139群霍乱弧菌。河水中分离的 6株菌是非产毒株 ,其余菌株均具有致病性。环境水分离的O139群非产毒株之间以及产毒株与非产毒株之间遗传相关性较远。产毒株之间具有较高的同源性。四川省从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌与同期流行的O139群霍乱弧菌分型的带型一致 ,在国内首次以分子流行病学分析提示甲鱼可能是四川省近年霍乱疫情主要传染来源之一。

广西沿海及沿边地区霍乱疫源监测

目的分析广西沿海及沿边地区的霍乱疫源监测资料，为霍乱监控关口前移提供依据。方法2004～2006年间在沿海及沿边地区建立了包括15个市（县）在内的监测网络，开展腹泻病人粪便、重点人群粪便、水体、食品和其它外环境等标本的检索，收集监测数据，对检出菌株进行复核、噬菌体生物分型及毒力基因检测。结果2004～2006年期间未报告人间霍乱疫情。15个监测点检索腹泻病人粪便116815份、重点人群粪便72327份、水体7632份、食品12739份及其它外环境标本2510份，从1113份水产品标本中检出9株霍乱弧菌（检出率0．81％），海产品及水体未检出阳性。9株霍乱弧菌除1株为0139血清群外，其余8株均为01群埃尔托霍乱弧菌，其中稻叶型占75．00％：9株菌均为非流行株或非产毒株，8株01群埃尔托型霍乱弧菌中24K占75．00％、30K占25．00％。结论水产品是广西霍乱监控的重点，提示应加强对水产品的检索，并教育群众不生食或半生食水产品。

湖南省2005年霍乱监测分析

目的掌握湖南省霍乱流行规律和霍乱弧茵在环境水体及食品的污染情况,为指导今后的霍乱防治工作提供依据。方法运用主动监测、被动监测、专项调查、现场流行病学调查等多种方法对湖南省的腹泻病人、环境水体、水产品、食品、霍乱疫情等进行监测。结果2005年湖南省腹泻病人检索阳性率为0．02％,全部为O_(139)群；外环境和食品监测阳性率为0．04％,18份阳性标本中主要为水体8份,水产品8份；全年共发生霍乱疫情13起,其中11起与聚餐有关,共报告病例43例,带茵者29例,均为O_(139)群；所检测其中20株O_(139)霍乱弧茵均为产毒株；从病人、带菌者、甲鱼中分离的O_(139)霍乱菌株高度同源。结论开展霍乱疫源监测是早期发现疫情、及时掌握疫情动态的重要措施,今后应加强对甲鱼等海水产品的霍乱弧菌污染状况监测和加强对农村集体聚餐的卫生指导和管理,以及加大外环境的检索力度和加强各种水体的消毒措施,防止疫情通过水体扩散。