IL-10表达对小鼠脾脏CD4+T细胞亚群相关细胞因子的影响

目的研究应用T细胞特异性慢病毒过表达白细胞介素10(IL-10)或siRNA片段抑制IL-10后对小鼠脾脏CD4+T细胞亚群的影响。方法磁珠分选试剂分离小鼠初始CD4+T细胞,通过IL-10过表达特异性慢病毒侵染CD4+T细胞,应用qRT-PCR检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3在CD4+T细胞中的分泌比率。应用siRNA干扰片段抑制IL-10,应用qRT-PCR检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-γ、IL-4、IL-17A、Foxp3在CD4+T细胞中的分泌比率。结果过表达IL-10后,IFN-γ、IL-4、IL-17A mRNA水平明显下降(P<0.05),Foxp3 mRNA表达明显上升(P<0.05);IFN-γ、IL-4、IL-17A分泌量均明显降低(P<0.05),Foxp3分泌量明显增高(P<0.05)。IL-10抑制后,IFN-γ和IL-17A mRNA表达明显上升(P<0.05);IFN-γ和IL-17A分泌量均明显升高(P<0.05)。结论过表达IL-10后抑制Th1、Th2、Th17亚群中的IFN-γ、IL-4、IL-17A的表达,对Treg细胞Foxp3的分泌具有促进作用。IL-10抑制能明显促进IFN-γ、IL-17A的表达。

旋毛虫成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1的克隆与表达

目的 克隆和表达旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫编码 3 1kDa抗原的结构基因 (TspE1)。 方法 大鼠感染旋毛虫后第 17天收集成囊前期幼虫 ,提取虫体的总RNA。通过RT PCR特异性扩增目的基因 ,构建重组质粒pUC18 Ts HN3 ,将重组质粒 pUC18 Ts HN3中的目的基因亚克隆入原核表达载体pGEMEX 1,构建重组子 pGEMEX 1 Ts HN3 ,经IPTG诱导 ,在E .coliJM 10 9(DE3 )中表达。对表达产物进行SDS PAGE分析和Westernblotting鉴定。 结果 SDS PAGE显示目的基因在大肠杆菌中获得高效表达 ,重组蛋白的分子量为 3 1kDa ,以诱导 4h时表达量最多。薄层凝胶光密度扫描分析结果显示 ,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的 2 6%。Westernblotting证实 ,融合蛋白条带能被感染旋毛虫的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别。 结论 旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1克隆和原核表达成功。

一起人体旋毛虫病群体感染调查及临床分析

本文报告西藏林芝地区10人集体食生或半生的猪肉后感染旋毛虫情况调查及患者临床特征。10人中有9例患旋毛虫病,其中2例因误诊、误治死亡。3例嗜酸粒细胞升高,3例血清旋毛虫抗体IgG阳性,3例腓肠肌活检检出旋毛虫肌幼虫。7例经阿苯达唑驱虫治疗,痊愈出院。另1例无任何症状,观察并口服阿苯达唑以作预防。

口服三苯双脒不同疗程抗小鼠旋毛虫成囊期幼虫的效果观察

目的比较以不同疗程口服300mg/（kg.d）三苯双脒抗小鼠横纹肌中旋毛虫成囊期幼虫的效果。方法 40只8周龄BALB/c小鼠被随机均分为5组,每只小鼠口饲感染旋毛虫成囊期幼虫50条。感染后第29d,分别以不同疗程（连续给药2、4、6、8 d）口服三苯双脒300mg/（kg.d）治疗,对照组不治疗。记录小鼠健康状况。停药后第7d,颈椎脱臼处死小鼠。肌肉压片法观察小鼠膈肌、咬肌、胸肌、腓肠肌中成囊期幼虫存活情况,计数总虫数、活虫数和死虫数。另取40只8周龄BALB/c小鼠,随机均分为5组,分别用不同疗程治疗后的小鼠膈肌成囊期幼虫50条口饲感染,感染后第29d,肌肉压片法计数膈肌中成囊期幼虫。结果实验期间,各组小鼠健康状况良好,未见药物不良反应。随着疗程的增加,4个部位肌肉中幼虫总虫荷和活虫数均呈下降趋势,而死虫数呈上升趋势。与对照组相比,2 d及2 d以上疗程组膈肌、咬肌和腓肠肌中成囊期幼虫总虫数和存活虫数均显著减少（P〈0.05、P〈0.01）,6 d疗程组和8 d疗程组胸肌总虫数显著减少（P〈0.05、P〈0.01）。随着疗程的增加,膈肌、咬肌、胸肌和腓肠肌的幼虫死亡率呈上升趋势,其中6 d疗程组分别为96.16%、98.06、99.13%和98.56%（P〈0.01）,8 d疗程组为99.62%~100%（P〈0.01）。疗效验证性感染表明,6 d（37.5%）和8 d（12.5%）的感染率显著低于对照组（100%）和2 d（100%）疗程组（P〈0.01）。2 d及以上疗程组小鼠平均虫荷和平均减虫率均显著低于对照组（P〈0.01）。结论口服TBD 300mg/（kg.d）,连续给药6 d或8 d,无不良药物反应,可有效杀死肌肉中的成囊期幼虫,为适宜疗程。

旋毛虫病患者血清细胞因子和一氧化氮水平检测

目的 检测旋毛虫病患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 1β(IL - 1β)和一氧化氮 (NO)水平。方法 分别收集 2 0例旋毛虫病患者和健康志愿者血清 ,用试剂盒分别检测血清 TNF-α、IL - 1β和 NO水平。结果 旋毛虫病患者血清 TNF-α和 NO水平显著升高 ,IL - 1β水平轻微升高。结论 TNF-α和 NO可能在宿主杀伤旋毛虫。

免疫层析试纸条诊断旋毛虫病的研究

目的建立一种能诊断人体旋毛虫病及动物旋毛虫感染的快速血清学方法。方法以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备免疫层析试纸条(immunochromatographic strip),对旋毛虫病及其它寄生虫病患者血清、旋毛虫及其它寄生虫感染的动物血清进行检测。结果试纸条检测旋毛虫病患者与旋毛虫感染的小鼠、大鼠、兔、猪血清的阳性率分别为100%(20/20)、97.87%(92/94)、100%(5/5)、100%(5/5)及100%(25/25),15min内肉眼可观察结果;其它寄生虫病(并殖吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、囊虫病及包虫病等)患者及正常人血清、其它寄生虫感染动物及正常动物血清均为阴性。试纸条和ELISA对100条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率分别为91.3%(21/23)和95.7%(22/23)(χ2=0.36,P>0.05),两种方法对200～500条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率均为100%(71/71)。试纸条对乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠血清检测的阳性率亦均为100%。试纸条在4℃可保存13个月,检测结果在室温可保存3个月。结论该试纸条可用于人体旋毛虫病和动物旋毛虫感染的快速血清学诊断,也可用于其它种旋毛虫感染的血清流行病学调查。

旋毛虫病的诊断与治疗

旋毛虫病无特异性的症状和体征,临床诊断较困难,所以流行病学资料非常重要,患者常有食生或半生肉类史,在该病暴发时期,同批患者往往能追溯到聚餐史。在肠道期可出现腹痛、腹泻伴全身不适等症状。发热、眼睑或面部水肿、肌肉疼痛是急性期的主要表现,重症患者可并发心肌炎、肺炎及脑炎等。多数患者感染后2～5周外周血中嗜酸粒细胞增多。应用肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原和合成的泰威糖(tyvelose,3,6-双脱氧己糖)抗原ELISA检测旋毛虫抗体IgG,具有较高的特异性和敏感性,是初步诊断旋毛虫感染的首选血清学方法,ELISA阳性者需经蛋白质印迹分析确认。旋毛虫病的确诊主要依靠肌肉活检发现旋毛虫幼虫。阿苯达唑是治疗旋毛虫病的首选药物,剂量为20～30mg/(kg·d),分2次口服,疗程5～7d。糖皮质激素可延长旋毛虫感染的肠道期和增加肌肉虫荷,一般仅用于重症患者且需与阿苯达唑联合应用。

旋毛虫ES抗原基因的克隆和序列分析

目的 完成旋毛虫ES抗原 (Excretory -secretoryAntigen)中 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因的克隆和测序 ,并与已发表的该两种基因的相关序列比较、分析。方法 通过RT -PCR ,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异性片段 ,利用TA克隆将PCR产物克隆入 pUC -T载体中并进行测序及同源性比较。 结果 RT -PCR扩增得到 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,序列分析表明 ,其核苷酸序列与已发表的 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原的同源性均为 99%。结论 成功提取了旋毛虫幼虫的总RNA ,并用PT -PCR方法克隆了 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,这为两基因的表达及在医学、兽医学中应用研究奠定了基础。

IL-2对感染不同株旋毛虫小鼠的免疫调节作用

目的： 探讨细胞因子在旋毛虫感染免疫中的调节作用。方法： 采用间接ＥＬＩＳＡ 和生殖力指数测定等方法对ＩＬ－２ 作用下感染旋毛虫小鼠的ＩｇＧ抗体水平及寄生虫感染力进行连续观察。结果： 不同剂量ＩＬ－２对不同地理株感染小鼠产生的影响存在较大差异： 对于黑龙江株猪型旋毛虫感染小鼠， ＩＬ－２ 注射具有明显抗虫效果； 而对于美国株猪型旋毛虫感染的小鼠， ＩＬ－２ 对成虫繁殖力无显著影响， 但大剂量ＩＬ－２ （每鼠２ ０００ Ｕ／次） 使新生幼虫的感染力降低。结论： ＩＬ－２ 对黑龙江株猪型旋毛虫感染力有明显抑制作用。

实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的研究

目的观察小鼠感染旋毛虫后不同时间肉汁中抗体水平的变化及其与血清抗体水平的相关性。方法将288只昆明小鼠随机分成3组(每组96只):轻度(A组)、中度(B组)及重度(C组)感染组,每鼠分别经口感染100、300、500条旋毛虫幼虫,感染后各组每周或隔周随机剖杀8只小鼠,收集血清和肉汁,用旋毛虫肌幼虫排泄物分泌抗原(ES抗原)ELISA检测血清及肉汁中抗体水平;另取30只小鼠,每鼠感染500条旋毛虫幼虫,感染后6周剖杀,制备肉样,用ELISA检测4℃及-20℃保存不同时间后的肉汁中抗体动态水平。结果轻度、中度和重度感染组小鼠分别在感染后4、3和3周开始从肉汁中检出抗体,抗体阳性率分别为87.5%、50%和87.5%;3组小鼠的肉汁抗体阳性率均随感染后时间的延长而逐渐升高,分别在感染后6、4和4周达100%,抗体水平均在感染后8周达高峰,吸光度(A490值)分别为0.43、0.49及0.52,之后肉汁中抗体水平稍有下降,但感染后第18周抗体阳性率仍均为100%,A490值分别为0.35、0.41及0.46。3组小鼠感染后不同时间肉汁与血清抗体水平均具有相关性(r100=0.940,r300=0.970,r500=0.983,P<0.05)。感染旋毛虫小鼠肉样在4℃保存7d和1d的抗体水平A490值均为0.53(F=0.250,P>0.05)。在-20℃保存8周和1周的肉汁抗体水平A490值分别是0.46和0.50,保存8周的肉汁抗体水平与1周的相比无明显下降(F=2.273,P>0.05);虽然保存10周的肉汁A490值已降至0.43,与保存1周的相比差异有统计学意义(F=15.675,P<0.05),但抗体阳性率仍为100%并持续至实验结束时(保存20周)。结论动物死亡或屠宰后不能采集血清时,可从新鲜、冷藏及冷冻胴体采集肉汁代替血清进行抗旋毛虫抗体的检测。

旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究

目的探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。方法应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA(Ts21-ELISA)与肌幼虫ES抗原ELISA(ES-ELISA)对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫(T1、T2、T3、T4和T7)感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平。将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠(20μg/只,免疫3次,每次间隔10d),末次免疫后10d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5d和42d后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率。结果Ts21-ELISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%(18/19)、15.8%(3/19)、9.1%(1/11)和7.7%(1/13),与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义(χ2=0,P>0.05;χ2=0.358,P>0.05)。Ts21重组蛋白与ES抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义(χ2=0.104,P>0.05),与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原(χ2=17.069,P<0.05)。小鼠感染300条旋毛虫后4周,应用Ts21-ELISA检测的血清抗体阳性率为100%(10/10);小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%(10/10)。Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5d和42d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%。结论Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应。

快速诊断人畜旋毛虫病ELISA试剂盒的研制及应用

本研究建立了快速诊断人畜旋毛虫病的ELISA试剂盒,该试剂盒与常规ELISA平行检测107例旋毛虫病人血清,阳性率分别为99.07％和97.19％;检测10份感染旋毛虫的病猪血清、5份病豚鼠血清、4份病犬血清、5份病兔血清,除病兔的阳性率两法均为80％外,其余两法均为100％。实验证明该试剂盒具有较好的特异性和重复性,已在全国人体寄生虫病分布调查中推广应用。

因生食风干羊肉致旋毛虫感染1例

本文报道了因生食风干羊肉致旋毛虫感染1例。患者主要表现为发热、水肿、全身肌肉及关节疼痛,腓肠肌活检出旋毛虫幼虫,以阿苯达唑治愈。

旋毛虫病疫苗

综述了旋毛虫病减毒活疫苗、天然抗原 (成虫、新生幼虫和肌幼虫粗抗原、ES抗原及纯化抗原 )疫苗、合成肽疫苗、重组抗原疫苗、核酸疫苗及其诱导的保护性免疫应答和预防接种效果 ,讨论了影响疫苗免疫效果的因素 ,如免疫佐剂、接种途径和接种剂量等。

旋毛虫病危险因素的Logistic回归分析

目的分析影响云南省旋毛虫病卫生、饮食和行为习惯等危险因素,为旋毛虫病防治提供对策。方法应用现场问卷调查和血清学检查方法,使用单因素非条件Logistic回归结合多因素非条件Logistic回归模型分析。结果有10个因素最终选入多因素非条件Logistic回归模型,包括生吃或半生吃猪肉和狗肉,不同的地区分布,是否一直是现居住地及居住年限。结论影响云南省旋毛虫病的危险因素为生吃或半生吃猪肉和狗肉等饮食习惯、不同的地区分布、是否一直是现居住地及居住年限,对旋毛虫病的防治应采取有效地防治措施以降低发病率。