钙调神经磷酸酶依赖的信号通路参与血管紧张素Ⅱ刺激的心肌细胞肥大

本研究观察了钙调神经磷酸酶（CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用。在AngⅡ刺激的大鼠心肌细胞肥大模型上，应用环孢素A（CsA）阻断CaN通路，观察心肌细胞3H-亮氨酸掺入、CaN、MAPK及PKC活性的变化。结果表明，AngⅡ（10－7mol/L）刺激大鼠心肌细胞3H-亮氨酸掺入校对照组增高46％（P＜0．01），CsA（0．5－5μg/ml）可以浓度依赖性方式抑制AngⅡ刺激的心肌细胞3H-亮氨酸掺入；同时观察到AngⅡ刺激的大鼠心肌细胞CaN及PKC活性分别较对照组增高39％和280％（P＜0．001），CsA可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性增加，但对PKC活性没有明显影响。实验还观察到MAPK特异性抑制剂PD098059亦可显著抑制AngⅡ刺激的心肌细胞3H-亮氨酸掺入。结果提示，CaN依赖的信号通路可能在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中起重要作用。

胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨

目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基 因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的 提取；心脏特异性引物的合成和ＲＴ－ＰＣＲ反应；探针标记、纯化和比放射活性测定；ＲＮＡ斑点杂交。结果：用最 适条件培养液对ＦＳＣ定向诱导分化，可使８０％以上的ＥＳＣ分化为心肌细胞。心肌细胞以同步的方式进行收缩。 反转录ＰＣＲ和斑点杂交的结果显示：心肌在早期发育就开始表达其特异性基因。结论：胚胎干细胞体外能诱导 分化为心肌细胞。胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同，对ＥＳ细胞定向诱导为心肌 细胞均有影响。最佳诱导条件是用２ｎｍｏｌ／Ｌ维甲酸、０．６％二甲基亚砜和２０％胎牛血清组成的条件培养液。

缺氧预处理对乳鼠心肌细胞蛋白激酶C活性的影响

在培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧（A／R）模型上，观察缺氧预处理（APC）的细胞保护作用及其对细胞蛋白激酶C（PKC）活性和蛋白磷酸化的影响。结果表明，APC可减轻心肌细胞的H／R损伤：提高细胞存活率（P＜0．01），减少细胞脂质过氧化产物（MDA）生成（P＜0．01）及细胞内乳酸脱氢酶（LDH）和蛋白质的漏出（P＜0．01）。模拟APC的短暂缺氧（TA）显著激活PKC（125．0±11．2vs对照组52．1±8．4pmolPi／106cells，P＜0．01），使心肌细胞内分子量为66kD和31kD的蛋白条带32P掺入增加；PKC抑制剂H7完全消除APC对心肌细胞的保护作用，并抑制了短暂缺氧引起的PKC激活及蛋白磷酸化反应。磷酸酶抑制剂OA模拟，而激动剂BDM完全消除APC的保护作用；提示PKC介导了APC对心肌细胞的保护，其机理涉及PKC对其底物蛋白的磷酸化。

心肌肥大大鼠心肌尾加压素II受体的变化

目的 :观察心肌浆膜上新发现的强缩血管活性肽尾加压素II(UII)的受体在压力超荷性心肌肥大中的变化及意义。方法 :在腹主动脉缩窄复制的大鼠压力超荷性心肌肥大模型上 ,采用放射性配基结合技术 ,测定术后 1d(早期组 )和 30d(晚期组 )大鼠心肌浆膜上UII受体的结合位点。结果 :早期组血压较正常对照组和假手术组分别高 5 4%和 43% (P <0 0 1) ,心重 /体重比值无明显差异 ,受体数目 (Bmax)分别上调 184%和 15 9% (P <0 0 1) ,亲和力下降 (Kd值分别高 2 2 4%和 2 0 6 % ,P <0 0 1)。晚期组血压较对照组和假手术组分别高 85 %和 6 7% (P <0 0 1) ,心重 /体重比值分别高 18%和 2 2 % (P <0 0 5 ) ,受体数目分别下调 35 %和 41% (P <0 0 5 ) ,亲和力增强 (Kd值分别低30 %和 33% ,P <0 0 5 )。结论 :压力负荷引起心肌浆膜UII受体先增加后减少的双相变化 。

牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性与MDA含量影响

目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ，５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７８３％、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７５６％和５０２０％（Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０．８７，Ｐ＜０．０１）。Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性与ＭＤＡ含量也呈显著负相关（ｒ＝－０７９，Ｐ＜０．０１）。在注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ）前３０ｍｉｎ腹腔注射Ｔａｕ（２００ｍｇ／ｋｇ）则Ｍｉｔ中ＭＤＡ含量、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性均未见显著异常改变。结论：Ｔａｕ可能通过抑制ＭＤＡ的生成实现其保护Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性的作用。

微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的：观察比较去甲肾上腺素预处理与经典缺血预处理对大鼠缺血／ 再灌注心脏的保护作用。方法：将实验动物分为对照组、缺血／ 再灌注组、经典缺血预处理和去甲肾上腺素预处理４ 组，在相应时点分别测定心肌梗塞面积、心功能，观察心肌超微结构、线粒体内膜标志酶损伤性反应及热休克蛋白７０－ ｍ ＲＮＡ 表达的变化。结果：与经典缺血预处理相似，去甲肾上腺素预处理也能减少心肌梗塞面积、改善左心功能、保护心肌超微结构、增强热休克蛋白７０－ｍ ＲＮＡ。结论：去甲肾上腺素预处理与经典缺血预处理对大鼠缺血／ 再灌注心脏有相似的保护作用。鉴于前者方法简便且无明显创伤性。

丹参素对大鼠心肌缺血/再灌注致线粒体变化的影响及其作用机理的探讨

本实验分别以ESR自旋标记法、TBA比色法测定大鼠离体心脏缺血,再灌注时线粒体膜流动性及脂质过氧化物含量。发现心肌线粒体膜深层的流动性在缺血40分钟后有氧再灌注20分钟时(S=0.112±0.006、τ_e=7.13±0.09×10^(-10)sec)明显低于富氧灌注组(S=0.103±0.007、τ_e=6.86±0.20×10^(-10)sec),P<0.05;而脂质过氧化物含量再灌注组(3.02±0.68nmol/mgpr.)则极明显高于富氧灌注组(1.94±0.35nmol/mgpr.),P<0.01。预先给予丹参素,对以上变化有明显的改善作用,上述两项指标与富氧灌注组相比,无明显差别,P>0.05。另外,采用ESR自旋捕集技术发现丹参素对外源性O_2^-·有清除作用。因而推测,丹参素可能作为一种O_2^-·的清除剂保护心肌线粒体免受氧自由基引发的脂质过氧化损害。

异丙肾上腺素致大鼠心肌坏死时心肌细胞核钙转运功能的变化

目的：观察ＩＳＯ心肌坏死时大鼠心肌细胞核钙转运系统的改变。方法：大鼠心肌坏死模型采用皮下注射ＩＳＯ制备，心肌细胞核采用差速离心和密度梯度离心分离纯化，用酶学方法鉴定核的纯度及测定ＡＴＰａｓｅ活性，用４５Ｃａ２＋同位素法测定核钙摄取。结果：与对照组相比，ＩＳＯ坏死心脏组织呈显著的损伤和坏死，心系数增加３５％（Ｐ＜０．０１），心肌组织ＭＤＡ和钙含量分别增加５７％和８０％（Ｐ＜０．０１）。与对照组相比，ＩＳＯ心肌坏死细胞核Ｃａ－ＡＴＰａｓｅ的［Ｃａ２＋］反应Ｖｍａｘ降低２７．５％（Ｐ＜０．０１），Ｋａ无显著变化；对［ＡＴＰ］反应的Ｖｍａｘ无显著变化，而Ｋｍ增加６１．７％（Ｐ＜０．０５）；ＩＳＯ组４５Ｃａ２＋摄取显著降低（Ｐ＜０．０１），Ｖｍａｘ与对照组相比降低４６．１％（Ｐ＜０．０１），Ｋｍ无显著变化。结论：坏死心肌细胞核钙转运系统功能显著降低。

大鼠心脏血压超负荷诱导左心室HSP70基因表达

本工作应用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，测定了大鼠腹主动脉缩窄后左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平。结果表明：大鼠腹主动脉缩窄后４ｈ，动脉血压已明显升高，并持续在高水平上；大鼠左心室重／体重比在第三天开始增加，然后持续升高，第４周时比对照组增加５９％；左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在腹主动脉缩窄后４ｈ已明显升高，１ｄ，２ｄ，１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐消失。实验结果提示：大鼠心肌负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加。

降钙素基因相关肽对大鼠心肌缺血损伤的影响

目的 :观察降钙素基因相关肽对大鼠缺血心肌的保护作用。方法 :用单剂量异丙肾上腺素皮下注射复制大鼠心肌缺血损伤模型 ,单剂量降钙素基因相关肽静脉注射治疗 ,2h后采血测定血清心肌酶及血清MDA、SOD水平 ,同时取心肌组织匀浆测组织MDA、SOD水平 ,并观察心肌组织结构改变。结果 :(1)异丙肾上腺素致缺血心肌损伤大鼠血清和心肌组织MDA升高、SOD下降 ,而CGRP治疗能逆转上述改变 (P <0 0 5 )。 (2 )CGRP治疗组心肌酶CK、LDH明显低于损伤组 (P <0 0 5 )。 (3)心肌光镜、电镜结果示CGRP组细胞损伤程度明显低于损伤组 (P <0 0 5 )。结论 :CGRP对异丙肾上腺素所致大鼠缺血心肌有保护作用 ,抗膜脂质过氧化可能是其重要机制。

自发性高血压大鼠心肌肥大与心肌 MAPK 及 Ang Ⅱ 的实验研究

通过观察高血压心肌肥厚与心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的关系，探讨高血压心肌肥厚的可能细胞内信息传递机制。４个月的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和Ｗｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏ（ＷＫＹ）大鼠各８只。采用放免法测定血浆及心肌组织ＡｎｇⅡ含量，凝胶内磷酸化法测定心肌ＭＡＰＫ活性，以心脏重／体重的比值表示心肌肥厚程度。与ＷＫＹ大鼠比较，ＳＨＲ心肌ＭＡＰＫ活性增加１０７．０％（Ｐ＜０．０１），血浆及心肌组织ＡｎｇⅡ分别升高２１８．６％和１０１．２％（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１），心肌肥大程度严重（Ｐ＜０．０１）。其中ＭＡＰＫ活性与心肌肥大程度呈明显正相关（ｒ＝０．７０８，Ｐ＜０．０５）。作者推论，ＭＡＰＫ可能介导了ＳＨＲ心肌肥厚。

心脏肾素－血管紧张素系统在游泳引起的生理性心肌肥大中的作用

本实验采用游泳训练（ＳＷ）引起的大鼠心肌肥大模型，通过放射免疫及生化等方法，对生理性心肌肥大时，心脏和循环肾素－血管紧张素系统（ＲＡＳ）的变化进行了初步研究。观察到游泳五周时，大鼠左、右心室重与体重比值（Ｖ／Ｂｗｔ）显著升高，同时，左、右室心肌血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量及心肌Ａｎｇ转换酶（ＡＣＥ）活性也较对照组明显升高（Ｐ＜０．０５）。心肌ＡｎｇⅡ与Ｖ／Ｂｗｔ之间存在明显的正相关关系（ｒ＝０．７７２１，Ｐ＜０．００１）。ＳＷ组血浆ＡｎｇⅠ，Ⅱ及肾素活性（ＲＡ）与对照组相比无明显差异，其血浆ＡｎｇⅡ与Ｖ／Ｂｗｔ之间无明显相关性。上述研究提示：心脏ＲＡＳ在ＳＷ引起的生理性心肌肥大中可能起着重要作用，而且这种作用在很大程度上不依赖于循环ＲＡＳ。

细胞骨架在牵张刺激心肌细胞肥大过程中的作用

目的 探讨细胞骨架在牵张刺激心肌细胞肥大过程中的作用。方法 在可变形膜上培养心肌细胞 ,采用 3H 亮氨酸掺入法反映心肌细胞肥大指标和放射免疫测定培养上清血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量 ,观察细胞骨架解聚剂对牵张刺激心肌细胞肥大的影响。结果 4μmol/L秋水仙素即可部分地抑制牵张刺激诱导的3H 亮氨酸掺入 (P <0 .0 5 ) ,而细胞松驰素B对牵张刺激诱导的 3H 亮氨酸掺入无影响。牵张刺激细胞骨架解聚剂处理后的培养上清刺激心肌细胞 3H 亮氨酸掺入的活性显著低于单纯牵张刺激时的培养基。同时 ,细胞骨架解聚剂显著抑制牵张刺激心肌细胞分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素。结论 细胞骨架仅通过介导细胞自分泌细胞生长因子参与牵张刺激诱导的心肌细胞肥大反应。

心肌细胞缺氧通过激活AMPK促进GLUT4移位和葡萄糖摄取

目的 :探讨心肌缺氧时 AMP激活的蛋白激酶 (AMPK)激活对葡萄糖转运子 4(GL U T4)移位和葡萄糖摄取的作用。方法 :大鼠心室肌经 5 0 0 μm ol/ L 腺嘌呤 - 9- β- D-阿糖呋喃腺苷 (ara A)处理后 ,分别与胰岛素、氰化钾、5 -氨基咪唑 - 4-氨基甲酰 - 1- β- D核糖呋喃腺苷 (AICAR)孵育 ,用放射性核素分析技术测定其葡萄糖摄取量和 AMPK活力 ,应用 Western印迹法分析心肌细胞 GL UT4含量。 结果 :AMPK特异性激活剂 AICAR和氰化钾可使心肌葡萄糖摄取增加 (1倍和 1.5倍 ) ,但均受ara A抑制。AICAR增加心肌 AMPK活力和葡萄糖摄取 ,而 ara A则有抑制作用。心肌细胞质膜 GL U T4分布明显增加而细胞器膜 GL U T4分布相应减少。 结论 :氰化钾所致的心肌缺氧与 AICAR一样可通过 AMPK激活途径 ,促进 GL U T4移位和葡萄糖摄取 ,它有别于胰岛素所通过的 PI3K激活途径。

醛固酮致自发性高血压大鼠心肌纤维化的作用机制

为探索醛固酮介导高血压心肌纤维化作用机制，测定了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）、醛固酮受体拮抗剂螺内酯预处理ＳＨＲ及正常血压大鼠不同培养时间点心肌细胞对３Ｈ－ｐｒｏｌｉｎｅ 掺入量、心肌胶原蛋白含量及丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性等。结果表明：ＳＨＲ心肌胶原蛋白含量及ＭＡＰＫ活性增加，其各时间点的３ Ｈ－ｐｒｏ－ｌｉｎｅ 摄入量均高于治疗组和正常对照组。说明高血压心肌纤维化可能与醛固酮通过其受体介导心肌ＭＡＰＫ 激活，诱导心肌成纤维细胞对脯氨酸摄入增加而致胶原蛋白合成旺盛有关。

阿霉素中毒心肌细胞脂质过氧化及其导致的钙超负荷的研究

目的和方法：通过测定心肌细胞脂质过氧化水平及细胞内钙离子浓度，探讨了阿霉素中毒心肌细胞损伤机制与脂质过氧化及钙离子超负荷的关系。结果：中毒心肌细胞培养基中ＬＤＨ释放量由２５０．２增加到８５３．７μｍｏｌ／Ｌ，ＳＯＤ活力由２５７．５５（Ｕ／ｍｇ·ｐｒｏ）下降到１８５．８８（Ｕ／ｍｇ·ｐｒｏ），丙二醛（ＭＤＡ）含量由１．４０９（ｎｍｏｌ／ｍｇ·ｐｒｏ）增加到１．６３８（ｎｍｏｌ／ｍｇ·ｐｒｏ），细胞内游离钙浓度由２４０．１８（ｎｍｏｌ／Ｌ）增加到１４６０．４０（ｎｍｏｌ／Ｌ）；阿霉素中毒早期仅有〔Ｃａ２＋〕ｉ升高；中毒４ｈ后出现脂质过氧化、心肌损伤加重及〔Ｃａ２＋〕ｉ的进一步升高；结论：心肌细胞内〔Ｃａ２＋〕ｉ早期增高是心肌损伤的始动环节。

舒芬太尼预处理对H9C2细胞缺氧复氧损伤后细胞活力和乳酸脱氢酶活性的影响

目的观察舒芬太尼预处理对H9C2细胞缺氧复氧损伤后细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)的影响及其浓度依赖性。方法采用培养的H9C2心肌细胞进行实验,以细胞处于缺氧环境而后进行复氧作为损伤模型。细胞分为正常对照组(NC组)、缺氧复氧损伤对照组(HR组)、舒芬太尼预处理组(SF组)。根据不同浓度舒芬太尼(1×10-11、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L),SF组又分为SF11、SF10、SF9、SF8、SF7、SF6组,每组6孔。处理后MTT法测定细胞活力,检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果培养的H9C2细胞经过缺氧3h复氧3h之后出现明显的损伤。与NC组相比,HR组培养液上清中LDH活力明显升高、细胞活力显著下降(P<0.01)。给予不同浓度的舒芬太尼预处理15min后再进行缺氧复氧,这种损伤可被抑制。与HR组相比,舒芬太尼预处理组培养液上清中LDH活力降低、细胞活力提高,并发现当舒芬太尼的浓度达到10-9mol/L时其保护效果已基本达到最大,浓度再增大时,保护效果的增加已差异无显著性。结论舒芬太尼预处理可明显增强H9C2细胞抗缺氧复氧损伤能力,具有浓度依赖性。

碱性成纤维细胞生长因子对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌坏死的拮抗作用

目的和方法：观察了碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对异丙肾上腺素（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ，ＩＳＯ）引起的大鼠心肌坏死的拮抗作用及其机制。结果：ｂＦＧＦ明显减轻了ＩＳＯ引起的大鼠心肌坏死的程度，血浆ＬＤＨ、ＭＤＡ及心肌ＭＤＡ水平比单纯ＩＳＯ组动物分别降低２４８％、３２８％及２００％（Ｐ＜００１）；心肌胶原及心肌细胞线粒体钙含量分别降低１８２％及２０８％（Ｐ＜００５）；心肌ＡＴＰ含量增加３６７％（Ｐ＜００１）。结论：ｂＦＧＦ对ＩＳＯ引起的大鼠心肌坏死具有明显的保护作用，其机制与抗脂质过氧化及心肌细胞内钙超载有关。

α受体和儿茶酚胺所致心肌损害发生机理关系的实验研究

新西兰免78只分成8组。试验组、M组和对照组分别静滴去甲肾上腺素(NE)1毫克/公斤、美索克新明或生理盐水。其余5组在NE之前分别给予酚妥拉明(R组)、心得安(P组)、美多心安(MP组)、育亨宾(Y组)以及(口派)唑嗪(PR组)。以半定量方法分析心肌病理损害程度,并测定心肌中糖酵解中间产物11项以及能量代谢产物。结果发现NE组心肌损害显著(P<0.01);P组、MP组、Y组和M组心肌损害类似于NE组;R组和PR组则较NE组减轻(P<0.01)。NE组和MP组心肌尚有明显的代谢障碍,而R组则较接近正常。提示NE所致心肌损害中α受体,尤其α_1受体起了主要作用。作者等对其发生机理进行讨论,并提出新的假设。

热应激心肌细胞损伤的线粒体机制探讨

目的 :观察热应激对大鼠心肌细胞线粒体氧化磷酸化和钙代谢功能的影响、研究线粒体膜渗透性转换 (PT)的变化及其病理学意义、探索热应激心肌细胞损伤发生机制。方法 :用Klark氧电极极谱法测定线粒体呼吸功能 ,用生物发光法测定心肌ATP含量及线粒体Ca2 +。ATP酶活性 ;用电感耦合等离子 原子发射光谱仪测定线粒体内Ca2 +含量 ,用分光光度法测定线粒体膜PT。结果 :热应激大鼠心肌细胞线粒体的呼吸控制率 (RCR)及氧化磷酸化效率 (P/O)均随热应激强度的增强呈显著逐步降低趋势 ;心肌线粒体Ca2 + ATP酶活性和Ca2 +含量亦明显下降 ;暴露于Ca2 +超载和氧化应激状态的线粒体 ,膜PT发生明显变化 ,钌红、抗氧化剂及反应体系酸化状态的纠正能够有效阻抑PT变化。结论 :线粒体结构与功能的破坏在热应激机体心功能损伤的发生中有着极其重要的意义。