宫颈癌中PRb、Bcl-2、1、P73的表达对P16过表达的影响

目的P16在宫颈癌中表达升高且很少发生突变。本文的研究旨在探讨P16在宫颈癌中的高表达是否受PRb、Bcl-2、P73表达的影响。方法对61例宫颈癌进行P16、PRb、Bcl-2、P73的免疫组化染色，观察P16表达与PRb的阳性率及作为PRb结合E2f功能指示器的Bcl-2和P73的阳性率的关系。结果P16高表达者在PRb、Bcl-2或P73阳性表达病例中分别占63．7％、61．0％、68．0％，而在PRb、Bcl-2或P73阴性病例中分别占43．6％、30．8％、38．9％；P16低表达者在PRb、Bcl-2或P73阳性表达病例中分别占36．3％，39．0％、32．0％，而在PRb、Bcl-2或P73阴性病例中分别占56.4％，70．2％、61．1％。经，检验分析，P16过表达与PRb含量关系不密切，但与Bcl-2和P73阳性率趋势一致。结论宫颈癌中P16表达升高不受PRb阳性率影响，而可能是由于PRb结合E2f功能减低所致。

Brefeldin A通过内质网应激途径协同增强顺铂抗肺癌细胞GLC-82作用

已有研究证明,内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)启动的未折叠蛋白质反应(unfolded protein response,UPR)信号途径有助细胞存活;然而,长时间剧烈ERS可诱导细胞凋亡,因此,ERS是肿瘤治疗的新靶点。抗癌药物具有严重的毒副作用,而药物的协同作用是减少抗癌药物使用剂量、减少毒副作用的重要手段之一。本研究证明布雷菲德菌素A(brefeldin A,BFA)与顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,CDDP)的协同抗肺癌细胞的作用。MTT试验显示,单独应用BFA和顺铂时,它们抑制肺癌细胞GLC-82生长的半数有效浓度(IC50)分别是100 ng/m L和4μg/m L;而采用半量的BFA和CDDP联合处理GLC-82细胞24 h后,其抑制生长作用进一步加强;等效线图解法及联合作用指数分析进一步证明二者具有协同作用。两药的这种协同作用进一步被形态学检查证明——与单独用药比较,除了细胞皱缩,出现了更多的染色质固缩,细胞质及细胞核裂解碎片,乃至形成凋亡小体,提示细胞凋亡的发生。实时定量PCR及蛋白质印迹证明,与单独用药比较,联合用药导致内质网应激标志分子GRP78、CHOP表达水平明显增加,提示有内质网应激通路激活。上述结果证明,BFA与CDDP联合用药可增强对肺癌细胞GLC-82的生长抑制作用,其协同机制可能与内质网应激通路的激活有关。我们的结果支持"ERS是肿瘤治疗新靶点"学说,对肺癌的新化疗方案有一定的指导意义。

针对Twist的短发夹RNA抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭

背景与目的:上皮-间充质转分化在胚胎发育和肿瘤转移过程中起重要作用。在发现人肺腺癌A549细胞高表达转录因子Tw ist的基础上,本实验研究了针对Tw ist的短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Tw ist mRNA的shRNA的阳性RNA干扰(RNA i)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNA i质粒,分别转染至A549细胞,新霉素抗性筛选得到Tw ist表达受抑制的阳性RNA i细胞(P i组)和Tw ist表达未受影响的阴性RNA i细胞(N i组)。针对正常(C组)、P i、N i三组A549细胞,分别采用RT-PCR和W estern b lot技术检测Tw is、tα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力。结果:C组:Tw ist和α-SMA表达强阳性,E钙-粘素表达弱阳性,Boyden小室穿膜细胞数为57.4±3.4;P i组:和C组相比,Tw ist和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E钙-粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden小室穿膜细胞数显著减少(P<0.01);N i组:Tw is、tα-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden小室穿膜细胞数皆和C组无显著差异(P>0.05)。结论:针对Tw ist的shRNA能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力。

β-榄香烯通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导A549细胞发生保护性自噬研究

目的初步探讨β-榄香烯能否通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路来诱导A549细胞发生自噬。方法采用MTT法检测β-榄香烯对A549细胞的增殖抑制率,荧光显微镜下观察吖啶橙染色后的细胞自噬现象,应用Western blot检测β-榄香烯处理后的LC3-Ⅱ、PI3K、AKT、mTOR蛋白变化。结果β-榄香烯可明显抑制A549细胞增殖,且抑制效果随浓度的增加而增强,β-榄香烯对A549细胞的IC50值为72.45μg·mL^(-1)。吖啶橙染色结果显示,低浓度(10μg·mL^(-1),50μg·mL^(-1))β-榄香烯处理A549细胞后形态无异常,用100μg·mL^(-1)、200μg·mL^(-1)、500μg·mL^(-1)浓度的β-榄香烯处理A549细胞时,细胞质逐渐出现空泡化,酸性囊泡增多,而细胞核逐渐浓缩。随着β-榄香烯浓度的增加,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ蛋白表达逐渐增高,而PI3K、AKT和mTOR蛋白表达逐渐降低,具有剂量依赖性。结论β-榄香烯能够通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进A549细胞自噬,且具有剂量依赖性。

血浆miR-200c作为肺癌早期诊断的临床价值研究

目的分析血浆miR-200c的表达与肺癌患者临床病理特征的相关性,并探讨miR-200c能否作为肺癌早期诊断的潜在肿瘤标志物的可能性。方法收集55例肺癌患者和53例健康体检者,采用实时荧光定量PCR检测受检者血浆miR-200c的表达情况,对检测结果进行统计学分析。结果 miR-200c在肺癌患者组血浆中表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。受试者工作特征曲线显示miR-200c能够将肺癌与正常对照组区分出来(AUC=0.676)。结论血浆miR-200c的表达可能与肺癌的发生有关,提示miR-200c可作为特异性生物标志物对肺癌患者进行早期诊断的可能性。

趋化因子受体CXCR2及其配基GROα、IL-8与肿瘤关系的研究进展

CXCR2是趋化因子受体家族中的重要一员,近年来研究发现CXCR2及其主要配体生长调节性癌基因-α(growth-regulated oncogene-α,GROα)和白介素-8(IL-8)在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用,不仅可以促进肿瘤的发生和形成,而且可以通过增加肿瘤的血管生成促进肿瘤的生长、浸润和转移。CXCR2及配体还可作为肿瘤标志物和独立预后因子用于肿瘤的早期诊断和预后判断。目前,抗CXCR2的各类药物正在进行各种基础和临床试验研究,因此作为新的靶向分子有望成为特异性药物作用靶点,从而为肿瘤分子靶向治疗开辟新途径。

miRNA-204在胃远端腺癌中的表达及作用初探

目的筛选胃远端腺癌中差异表达的miRNAs,并就其在胃癌发生、发展中的作用及机制进行初步研究。方法采用miRNA芯片,对胃远端(体、窦)腺癌组织及配对正常组织进行检测,筛选胃远端腺癌差异表达的miRNAs,并观察其与临床病理因素的关系;运用TargetScan等生物信息学方法,预测特定miRNA可能的靶基因。结果芯片检测发现共47条miRNAs在胃远端腺癌组织和配对正常组织中表达差异显著;实时荧光定量PCR验证了miR-204的表达在肿瘤组织中下调;生物信息学分析显示BCL-2、NR3C1和SOCS6等可能为miR-204的靶基因。结论胃远端腺癌有其独特的miRNA表达谱;预测BCL-2,NR3C1和SOCS6等可能为miR-204的靶基因。

子宫内膜癌中KiSS-1及GPR54mRNA的表达及意义(英文)

目的检测KISS-1及GPR54mRNA在子宫内膜癌组织中的表达,探讨其在子宫内膜癌浸润及转移中的作用。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测32例子宫内膜癌,10例子宫内膜上皮内瘤样病变(EIN)及12例正常子宫内膜组织中KiSS-1及GPR54mRNA的表达情况和其与各种临床参数的关系。结果KiSS-1mRNA在子宫内膜癌组中的表达率(37.5%)明显低于EIN组(80.0%)及正常内膜组(83.3%),并且其在子宫内膜癌组中的表达率与临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关,P均<0.05。GPR54mRNA在子宫内膜癌组的表达率(78.1%)高于EIN组(70.0%)和正常内膜组(66.7%),但无明显差异(均P>0.05)。GPR54mRNA在子宫内膜癌组中的表达与临床分期、组织分级、肌层浸润深度及淋巴结转移情况均无相关性(均P>0.05)。结论KiSS-1与其受体GPR54结合在抑制子宫内膜癌的浸润和转移过程中可能起着重要的作用。

血清miR-375水平可能是胃远端腺癌的标志物

目的观察miR-375在胃远端腺癌(DGAC)血清中的表达状况。方法实时荧光定量PCR检测DGAC组织、血清及胃癌细胞系、贲门腺癌(CAC)中的表达,并将其与临床病理因素进行关联。结果 miR-375在DGAC、CAC组织中均下调,但在DGAC下调更明显,两者比较差异有统计学意义(P=0.014)。miR-375的表达水平与DGAC的临床病理因素比较差异无统计学意义。血清miR-375水平在DGAC明显下调,和健康对照比较差异有统计学意义(P<0.001),鉴别DGAC的效能为0.835,特异性为80%,敏感性为85%,临界值为0.218。结论血清中明显下调的miR-375可能是一个潜在的诊断DGAC的标志物。

MTDH、miR-26a与肿瘤关系的研究进展

目前，肿瘤相关基因的研究仍然是肿瘤研究的热点与难点。临床研究表明，肿瘤细胞信号通路中的特定基因的扩增／突变／表达状态与靶向、化疗药物的有效性密切相关。肿瘤分子标记物的检测有助于发现新发肿瘤，临床上检测特定基因的异常改变情况，能针对性地为每位患者量身定做一套最适合的治疗方案，从而最大程度地提高治疗的有效率，减少药物的毒副作用，避免用药不当贻误治疗时机。同时，分子标记物的检测可以对相关肿瘤预后进行评价。找到1个或多个与某个肿瘤相关的基因，有助于肿瘤的早期诊断、治疗方案的选择及判断预后。肿瘤转移是恶性肿瘤中普遍存在的现象，同时也是治疗失败和导致患者死亡的主要原因之一。肿瘤的转移是癌细胞与宿主细胞相互作用的复杂过程，由一系列复杂的基因调控系统所组成。因此，几年来对于肿瘤分子生物学的研究重点逐渐转至肿瘤转移基因与抑制肿瘤转移基因，并对这些基因的调控因子和转移过程中的作用机制进行研究，期望通过揭示肿瘤转移在基因水平的本质，为改进肿瘤的诊断方法和治疗手段提供依据。MTDH 基因又称星形细胞提升基因-1（astrocyte elevated gine-1，AEG-1）、LYRIC 是2002年首次克隆出来的新基因。MTDH基因定位在人类8号染色体上（8q22），由于其能帮助肿瘤细胞紧贴上远距离的血管，因此对于癌症的扩散和转移意义重大［1］。微小 RNA （Mi-croRNAs，miRNAs）是一类由22～23个核苷酸组成的具有调控功能的非编码小分子 RNA，miRNAs通过与 mRNA 的3’-UTRs 结合而发挥调控作用［2］。有的 miRNAs通常在肿瘤中表达下调，发挥着抑癌基因的作用，而有的 miRNAs则起着癌基因的作用［3－4］。研究表明，miR-26a抑制鼻咽癌、乳腺癌、肝癌细胞的增殖［5－7］，但却促进胶质瘤细胞的增殖［8－9］。miR-26a可能在不同的肿瘤和不同的组织学类型中发挥着不同的作用。在 Target Scan Hu-man查到 miR-26a的下游靶基因是 MTDH。本文就MTDH 与 miR-26a 在恶性肿瘤中的作用以及MTDH与 miR-26a关系作一综述。

miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的观察miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响。方法在胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染化学修饰的microRNA抑制物,抑制miR-92b的表达。采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,并在荧光显微镜下观察细胞形态,western blot检测Bcl-2和p53的变化。结果抑制miR-92b表达后,细胞周期延缓,凋亡细胞比率增加,细胞核皱缩,Bcl-2和p53表达下调。结论 miR-92b在胃癌发展过程中推动细胞通过周期限制点,加速细胞生长,并可能通过抑制线粒体凋亡途径促进胃癌细胞增殖。

miR-21慢病毒表达载体的构建及稳定转染U266细胞系

目的:构建miR-21慢病毒表达载体,感染多发性骨髓瘤(MM)细胞U266,建立稳定表达miR-21的U266细胞系。方法:以has-miR-21前体序列pre-miR-21为模板,设计并合成引物,进行PCR扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒LV-anti中。对重组质粒进行双酶切鉴定后,所构建载体命名为LV-anti-miR-21-MOI。再进行miR-21基因慢病毒LV-anti-miR-21的包装及病毒滴度测定,将慢病毒颗粒以最适滴度感染MM细胞株U266,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用real-time PCR检测感染效率。结果:目的基因与慢病毒载体连接成功。慢病毒LV-anti-miR-21浓缩后的病毒滴度约为1.0×108TU/ml。慢病毒成功感染目标细胞U266,转染效率达90%以上。real-time PCR检测,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量分别为0.69±0.03和0.51±0.05较U266/un组(1.08±0.05)下降了38.9%和54.9%,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了miR-21慢病毒表达载体,并建立U266-miR-21稳定转染细胞系。为进一步研究miR-21的功能及作用机制奠定了基础。

miR-18b对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-18b(miR-18b)对胃癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法 miR-18b inhibitor对SGC-7901细胞进行转染;流式细胞仪进行细胞凋亡检测;Western blot检测P53、Bcl-2的表达变化。结果在SGC-7901细胞中抑制miR-18b的表达,能够促进细胞凋亡,并能降低凋亡相关蛋白P53、Bcl-2的表达。结论 miR-18b在胃癌的发生、发展中起一定作用,其可能通过调节P53、Bcl-2的表达而影响细胞凋亡。

NOR_1基因对HepG_2细胞E-选择素的影响及机制探讨

目的探讨NOR1基因对HepG2细胞E-选择素表达水平的影响及NF-kB通路是否参与了NOR1基因对HepG2的E-选择素的影响。方法将NOR1基因通过脂质体转染入HepG2细胞。分别设立HepG2细胞对照组、HepG2/pcDNA3.1(+)空白质粒细胞组、HepG2/pcDNA3.1(+)/NOR1转染阳性克隆细胞组、PDTC处理的HepG2/pcDNA3.1(+)/NOR1转染阳性克隆细胞组(后简称PDTC处理组),分别检测4组细胞E-选择素的mRNA水平和蛋白水平。结果基因芯片筛选转染NOR1基因的HepG2细胞E-选择素表达水平上调(cy3/cy5>2.0);RT-PCR结果显示转染阳性克隆细胞组E-选择素mRNA的表达水平明显高于空白组、对照组和PDTC处理组(P<0.01),ELISA结果显示转染阳性克隆细胞组E-选择素表达水平明显高于空白组、对照组和PDTC处理组(P<0.01)。结论NOR1基因诱导HepG2细胞E-选择素表达水平增高,NF-kB通路参与了NOR1基因对HepG2细胞E-选择素的影响。

miR-181c通过影响线粒体自噬发生调控锯齿状腺瘤癌变

目的探讨miR-181c表达变化在锯齿状腺瘤癌变过程中的作用及意义。方法用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测锯齿状腺瘤、锯齿状腺癌组织及FHC细胞、Caco-2细胞中miR-181c表达情况,同时用蛋白质免疫印记(Western Blot)实验检测2组组织中线粒体自噬相关蛋白PINK1,线粒体剩余量标志蛋白TOM20、HSP60的表达。结果锯齿状腺癌组织及Caco-2细胞中miR-181c表达较锯齿状腺瘤组织及FHC细胞明显减少,但TOM20、HSP60表达增加,PINK1表达减少(均P<0.05)。上调miR-181c表达后,Caco-2细胞中TOM20、HSP60表达减少,PINK1表达增加(均P<0.05)。结论miR-181c可通过调控线粒体自噬发生,参与锯齿状腺瘤癌变的过程。

制备肿瘤血管生成双靶点RGD10-NGR9-超顺磁性纳米氧化铁

目的构建新型肿瘤血管生成靶向双靶点RGD10-NGR9-超顺磁性氧化铁纳米颗粒，并检测其物理性质。方法设计合成双靶点RGDl0-NGR9杂合肽，以固相合成法异硫氰酸荧光素（FITC）标记杂合肽，检测其与人脐静脉内皮细胞的体外结合能力。采用共沉淀法制备核芯粒径8～12nm的超顺磁性氧化铁，包覆葡聚糖。以环氧氯丙烷活化葡聚糖，共价耦联靶向多肽，制备靶向多肽网状交联葡聚糖一超顺磁性氧化铁复合粒子。采用透射电子显微镜观测粒子大小、x射线衍射仪测试粒子晶型及组成，红外光谱仪分析粒子表面包覆物质表征，纳米粒度仪测定Zeta电位，振动样品磁强计仪测定磁化强度。结果双靶点杂合肽FITC—RGDl0-NGR9与人脐静脉内皮细胞有良好的体外结合能力。成功制备出肿瘤双靶点RGDl0-NGR9-超顺磁性氧化铁，电镜观测近似圆球形，总粒径约30nm。经振动样品磁强计仪测定，70℃时，复合粒子的饱和磁化强度为53．54emu／g，无磁滞现象，有超顺磁性，Zeta电位-60．9mV。结论成功制备出RGDl0一NGR9-超顺磁性氧化铁，其物理性质稳定，具有肿瘤血管生成靶向性。

HER-2/neu癌基因信息传递途径研究进展

HER- 2 /neu原癌基因编码的 P185 neu是“孤儿受体”,其配体至今尚未确定。HER- 2引起生瘤机制的关键是其酪氨酸蛋白激酶活性的调节。HER- 2原癌基因通过点突变、扩增及过量表达而活化 ,其活性由过表达时组成性的同源二聚体化调节 ,也可由与 erb B1、或与 erb B3及 erb B4异源二聚体化为异源配体 EGF、NDF、HRG等调节 ,通过促进降解调节等等。其下游信息传递途径由 Shc- Grb2 - Ras- Raf- MAPK及 Shc- Grb2 - Ras- Raf- PI- 3′- K组成 ,前者传递有丝分裂信号 ,后者传递转化或致癌信号 ,信息传递途径的每一部份均可作为免疫治疗及基因治疗的分子靶。

靶向LMP1基因siRNA作用对AP-1及其相关因子表达的影响

背景与目的:潜伏膜蛋白LMPl是EBV基因组BamH I Nhet片段上BNLF1编码的一种跨膜蛋白,它是发现最早的能在体外恶性转化细胞系的EBV潜伏期蛋白。本研字己旨在探讨LMP1沉默对AP-1信号转导通路及其下游与细胞转化、增殖和凋亡等相关因子转录表达的影响。方法:应用50 nmol/L靶向LMP1功能区编码序列的siRNA649转染EBV阳性的胃癌上皮细胞GT38,分别作用24、48、72、96、120 h,采用RT-PCR检测c-Jun,生存素,CDK4和MMP9 mRNA转录水平;免疫组化法检测细胞生存素蛋白表达;Western印迹法检测c-Jun,JunB和CDK4蛋白表达。结果:靶向LMP1特异性siRNA作用后,各时间点c-Jun和生存素mRNA水平均明显低于细胞对照组(P<0.05),c-Jun以24 h时降低最为明显,而生存素以48 h时降低最为明显;CDK4 mRNA水平均明显高于细胞对照组(P<0.05);转染后24、48、72 h时MMP9 mRNA表达水平均明显低于细胞对照组(P<0.05),96 h和120 h时MMP9则无明显改变(P>0.05)。与细胞对照比较,c-Jun和JunB蛋白表达均下调,JunB蛋白表达在作用第5天时有所恢复,CDK4蛋白表达均上调。免疫组化检测结果显示转染后细胞质中代表生存素阳性的棕色颗粒明显减少。结论:靶向LMP1功能区编码序列的siRNA转染可影响EBV阳性胃上皮细胞AP-1及其下游相关因子的表达,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

HER-2/neu癌基因与肿瘤的生成及演进

HER- 2 / neu癌基因产物是 185 k D的具酪氨酸蛋白激酶活性的待定生长因子受体 ,属 EGFR家族。 HER- 2在乳腺癌、NSC、L C卵巢癌、胃癌、结直肠癌中扩增并过量表达 ,与药物抗性及不良预后有关。本文综述了 HER- 2癌基因与乳腺癌、卵巢癌的生成及演进关系研究进展。HER- 2癌基因可能是 WTP5 3、WTPRb基因作用的靶子 ,其生瘤作用与其对凋亡的抑制。

miR-370-3p对胶质母细胞瘤U87-MG细胞株增殖能力的影响

目的探讨微小RNA-370-3p(miR-370-3p)对人脑胶质瘤细胞系U87-MG增殖能力的影响及其机制。方法将常规培养的U87-MG细胞分为空白组、无义序列转染组和模拟物转染组,后两组分别转染miRNA无义序列及miR-370-3p模拟物,qRT-PCR法检测其转染效率,免疫印迹法检测转染细胞叉头框蛋白M1(FoxM1)的表达;采用Ed U法评估细胞的增殖能力,采用平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果与空白组和无义序列转染组比较,模拟物转染组细胞miR-370-3p表达显著增加(P<0.05),而FoxM1的蛋白表达显著减少(P<0.05);而且模拟物转染组U87-MG细胞增殖能力及克隆形成率均明显减少(P<0.05)。结论 miR-370-3p能够抑制U87-MG细胞的增殖能力,可能与减少FoxM1的表达有关。