RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的 探讨RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号对促进人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial–mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。Western blot与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号相关分子,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合。结果 MTT检测显示,T0901317处理组较MGC803细胞增殖能力呈时间依赖性增加(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验显示,T0901317处理组细胞迁移与侵袭能力较MGC803细胞明显增强(P<0.05)。Western blot检测显示,T0901317处理后较未处理组RORα蛋白明显下调(P<0.05),并且可上调MGC803细胞β-catenin总蛋白与核内β-catenin(P<0.05)。T0901317处理后较对照组RORα蛋白与β-catenin蛋白结合分别明显减少(P<0.05)。T0901317处理的细胞较未处理MGC803细胞的长梭形细胞增加,异型性更为明显。T0901317可明显上调MGC803细胞Rac1、TGF-β1、Vimentin的表达(P<0.05),并抑制E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 T0901317可通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT。

plk1、Raf-1和Ki-67在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨plk1、Raf-1和Ki-67在胃癌组织中的表达及其相关性,分析它们的表达与胃癌临床病理指标之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测80例胃癌组织和15例癌旁正常胃组织中plk1、Raf-1和Ki-67的表达水平。结果80例胃癌组织中plk1、Raf-1和Ki-67的阳性表达率分别为82.5%(66/80)、81.3%(65/80)、80.0%(64/80),15例癌旁正常胃组织中均未见表达。plk1和Raf-1表达与胃癌的浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移显著相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度无相关性;Ki-67表达与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移显著相关(P<0.01),而与其它因素无关。plk1与Ki-67、Raf-1与Ki-67、plk1与Raf-1的表达显著相关(P<0.01)。结论plk1、Raf-1和Ki-67的过表达可能与胃癌的发生发展有关,三者联合检测可为判断胃癌生物学行为乃至预后提供重要的参考指标。

棉酚通过Akt/β-catenin通路抑制胃癌细胞迁移

目的探讨棉酚(gossypol)对胃癌细胞迁移能力的影响,并探讨相关机制。方法胃癌细胞经不同浓度棉酚处理后,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测丝/苏氨酸激酶/β-链蛋白(Akt/β-catenin)信号通路活性及相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(Ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平。结果MTT实验显示,棉酚对胃癌细胞具有增殖抑制作用,且随浓度增加而增大;Transwell小室实验显示棉酚对胃癌细胞迁移能力具有抑制作用;棉酚对胃癌细胞迁移能力的抑制率高于增殖抑制率;与对照组相比,棉酚可明显下调胃癌细胞的pAkt、β-catenin、cyclin D1、MMP-2和vimentin蛋白表达水平,明显上调E-cadherin蛋白表达水平。结论棉酚通过下调Akt/β-catenin通路活性抑制胃癌细胞迁移。

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2／M期检查点Chk1与Chk2的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。

硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系

目的硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系。方法 Brdu ELISA法测细胞增殖活性;Boyden小室培养测细胞的迁移率;Western blot测细胞uPA、NF-κB的蛋白水平;细胞免疫化学测NF-κB细胞表达及细胞定位。结果 (1)与对照组(无血清培养基组)相比,10%FCS组细胞增殖活性与迁移率明显增高(P<0.05);与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及迁移,硼替佐米浓度为(4μg.L-1),人胃癌SGC-7901细胞增殖活性与迁移率均明显降低(P<0.05);与PDTC组(10μmol.L-1)相比,两者无明显差别;(2)与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB蛋白表达,硼替佐米浓度为(4μg.L-1)时uPA、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05);与NF-κB特异性抑制剂PDTC组相比,两组uPA、NF-κB表达均无明显差别;硼替佐米浓度为(4μg.L-1)能明显降低NF-κB核蛋白含量,与PDTC组相比,两者无显著差异(P>0.05);(4)细胞免疫化学结果示:硼替佐米(4μg.L-1)抑制10%FCS诱导人胃癌SGC-7901细胞NF-κB核移位。结论①硼替佐米抑制血清诱导胃癌SGC-7901细胞增殖迁移及uPA、NF-κB蛋白表达,②硼替佐米降低胃癌SGC-7901细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB活性,降低UPA水平有关。

新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽（cecropinXJ）是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0．01～1000mg·L^-1浓度范围内的cecropinXJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24h，采用MTT法检测cecropinXJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响；透射电镜观察细胞超微结构变化；Hoechst染色观察细胞凋亡情况；流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Westernblot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素CmRNA和蛋白水平的表达变化。结果CecropinXJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖（P〈0．05），并具有浓度依赖性，IC90值为61．19mg·L^-1，但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropinXJ处理24h后，AGS细胞核固缩，呈现典型细胞凋亡特征，同时细胞内活性氧增加，线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Westernblot结果表明，cecropinXJ能够引起Bcl-2表达下调，Bax表达上调，促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。CecropinXJ促进caspase-3活性呈剂量依赖，经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropinXJ介导的AGS细胞死亡率。结论CecropinXJ可通过下调Bcl-2表达，上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡，是其抗肿瘤机制之一。

Caspase-4活化参与TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡

目的研究caspase-4在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法采用碘化丙啶染色,流式细胞术检测TRAIL和caspase-4抑制剂(z-LEVDfmk)单独或联合作用对胃癌细胞凋亡的影响;化学合成3条针对caspase-4基因的小干扰RNA(small interfering,siRNA),用脂质体法转染胃癌细胞,采用Western blot验证沉默效果,流式细胞术观察转染后对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响;Western blot检测TRAIL作用后葡萄糖调节蛋白78(78-ku glucose-regulated protein,GRP78)的表达情况,以内质网应激经典诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)为参照;Western blot检测TRAIL作用后caspase-3和caspase-4蛋白的表达情况。结果 z-LEVD-fmk能明显地抑制TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡(P<0.05);与阴性对照相比,转染caspase-4 siRNA后caspase-4蛋白表达水平明显下降,且转染后细胞凋亡率降低(P<0.05);和TM相比,TRAIL能诱导较低程度的内质网应激反应;在TRAIL处理的早期caspase-4和caspase-3即活化。结论 Caspase-4的活化参与了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,这可能与TRAIL诱导的内质网应激有关。

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞Rac1-Pak1／Rock1通路的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞Rac1-Pak1/Rock1通路分子的影响。方法 30 mg·L-1DADS分别处理MGC803细胞不同时间后,采用RT-PCR、Western blot分别检测Rac1、Pak1、Rock1、cofilin1和destrin的mRNA和蛋白水平。结果 DADS可下调MGC803细胞Rac1、Pak1和Rock1 mRNA和蛋白水平(P<0.05),对cofilin1和destrin的表达无影响,但可抑制cofilin1磷酸化(P<0.01)。结论 DADS可下调Rac1、Pak1和Rock1表达和磷酸化cofilin1;DADS抑制Rac1-Pak1/Rock1通路可能与DADS抗人胃癌MGC803细胞迁移侵袭作用机制有关。

miR-34c-5p过表达抑制胃癌细胞侵袭和迁移

目的研究微小RNA(miR)-34c-5p在胃癌组织中的表达及调控胃癌细胞侵袭和迁移机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测人胃癌组织及胃癌细胞中miR-34c-5p mRNA表达;在人胃癌细胞中构建miR-34c-5p过表达模型,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染情况,RT-qPCR验证转染效率。利用划痕实验、Transwell实验检测过表达miR-34c-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响;通过Western blot检测各组胃癌细胞中MAP2K1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达情况。双萤光素酶报告基因检测MAP2K1是否是miR-34c-5p的靶基因。结果miR-34c-5p mRNA在10例人胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05);miR-34c-5p mRNA在胃癌HGC-27细胞中的表达明显低于正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组、miR-34c-5p-NC组比较,miR-34c-5p-mimics组miR-34c-5p mRNA表达水平明显升高(P<0.05);划痕实验及Transwell实验结果表明,过表达miR-34c-5p明显抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05,P<0.01);Western blot检测结果表明,过表达miR-34c-5p后胃癌HGC-27细胞中MAP2K1、Vimentin蛋白表达水平明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);此外,与mimic-NC+miR-34c-5p-mimics组相比,转染pmiR-MAP2K1-WT质粒细胞的萤光素酶活性降低(P<0.01),而转染pmiR-MAP2K1-Mut质粒的萤光素酶活性无改变。结论miR-34c-5p在胃癌组织和胃癌细胞中低表达,可能通过靶向调控MAP2K1表达抑制胃癌细胞侵袭和迁移。

TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系

目的研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制。方法结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型。利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变。在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变。在干扰TRB3条件下,利用细胞划痕实验检测细胞迁移。结果肾纤维化模型组TRB3蛋白表达高于假手术组(P<0.01),且与纤维化严重程度正相关。在大鼠肾小管上皮细胞NRK中过表达TRB3,导致E-cadherin表达降低,而α-SMA表达增高。干扰TRB3降低TGF-β1诱导的HepG2细胞迁移。结论 TRB3在纤维化肾脏组织中表达增高。TRB3可能通过诱导上皮-间叶转化在纤维化的进展中发挥促进作用。