lncRNA ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的研究一种新的长链非编码RNA ENST00000452996.1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭等的影响及其调控机制。方法TCGA数据集分析肝癌组织ENST00000452996.1表达;构建ENST00000452996.1的shRNA载体,包装病毒感染Huh-7细胞(shENST00000452996.1组),CCK-8法、克隆形成法、流式细胞术、划痕法和Transwell小室法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;Western blot法检测shENST00000452996.1组、ERK激动剂EGF处理组和GSK-3β抑制剂TDZD-8处理组的ERK/GSK-3β/β-catenin信号分子的表达。结果TCGA分析发现,肝癌组织ENST00000452996.1表达水平明显高于癌旁组织,且与Edmondson-Steiner分级呈正相关,与总生存时间呈负相关;与对照组相比,shENST00000452996.1组细胞增殖、迁移及侵袭能力明显下降,凋亡能力明显增强,p-ERK1/2、p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin表达均下调,GSK-3β和p-β-catenin表达上调,核β-catenin表达下降;与shENST00000452996.1组相比,EGF处理组p-ERK1/2表达升高,EGF处理组和TDZD-8处理组p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin及核β-catenin表达均升高,GSK-3β和p-β-catenin表达均降低。结论干扰ENST00000452996.1表达抑制ERK1/2磷酸化,阻止GSK3β^(Ser9)磷酸化,导致β-catenin磷酸化,抑制β-catenin核转位,推断ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路增强肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,抑制细胞凋亡,从而发挥促进肝细胞癌的作用。

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。上调miR-205-5p组mTOR、P70S6K、p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达显著低于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。结论上调miR-205-5p可以影响mTOR/P70S6K信号通路的活性,参与肝癌细胞侵袭、增殖、凋亡的过程。

葫芦素B诱导细胞铁死亡抑制肝癌Huh-7细胞增殖的机制

目的 研究葫芦素B(cucurbitacin B,Cu B)对肝癌Huh-7细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度Cu B对Huh-7细胞的存活率;葫芦素B(0.5、1、2μmol·L^(-1))作用于Huh-7细胞24 h, EdU染色检测细胞增殖;DCFH-DA,C11-BODIPY和FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧水平,细胞内脂质过氧化水平和细胞内Fe^(2+)浓度;谷胱甘肽(GSH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR和Western blot分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况;免疫共沉淀法检测GPX4蛋白的泛素化。结果 与对照组比较,随Cu B药物浓度增大,Huh-7细胞存活率逐渐降低,其IC50为0.96μmol·L^(-1);与对照组比较,不同剂量Cu B干预后,EdU阳性细胞明显减少(P<0.05);细胞内活性氧、脂质过氧化水平和Fe^(2+)浓度的荧光强度明显增强(P<0.05);同时细胞内脂质过氧化产物MDA的积累明显增多(P<0.05),而细胞内GSH水平明显下降(P<0.05);此外,不同剂量Cu B干预后,GPX4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05);而且Nrf2和HO-1的蛋白水平明显降低(P<0.05)。免疫共沉淀分析显示,Cu B促进了GPX4的泛素化和降解。结论 Cu B可能通过促进GPX4泛素化和降解诱导细胞铁死亡抑制肝癌细胞Huh-7增殖。

苦参碱诱导人肝癌细胞系HepG_2凋亡的研究

目的 观察苦参碱是否能诱导人肝癌细胞系HepG2 凋亡及凋亡相关基因的变化。方法 0～ 3 .0g/L苦参碱处理HepG2 细胞 ,光镜和电镜下观察细胞形态 ;TUNEL法原位检测DNA断裂 ;流式细胞仪检测凋亡峰 ;AnnexinV FITC/PI双标记检测早期凋亡 ;免疫组化和原位杂交法检测wp5 3 ,bcl 2 ,bax ,c myc ,Fas等凋亡相关基因的表达 ,采用真彩色图像分析仪定量检测。结果 1.5～ 3 .0g/L苦参碱可诱导HepG2 凋亡 ,并且使凋亡相关基因wp5 3 ,bax ,Fas表达上调 ,而抗凋亡基因bcl 2 ,c myc表达下调。结论 一定浓度的苦参碱可诱导人肝癌细胞HepG2 凋亡 ,并且该凋亡与凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。

PCNA、p53蛋白在肝癌临床中的意义

原发住肝癌易发生肝内转移，其术后复发率很高。为寻找有效的方法以降低术后的复发率，我们用抗ｐ５３和抗ＰＣＮＡ单克隆抗体对１０２例手术切除的肝癌标本作免疫组化检测。本文分析了肝癌的不同病理形态，ｐ５３，ＰＣＮＡ情况，结果表明：ＰＣＮＡ指数与ｐ５３的表达呈正相关系，ＰＣＮＡ指数与肿瘤大小，肿瘤包膜，组织分化程度无统计学差异；ｐ５３的表达多见于大肝癌中，但与肿瘤包膜，组织分化程度无统计学差异。ＰＣＮＡ和ｐ５３的免疫组化方法虽然简单，但实用，能为预后和临床治疗提供有用的指标，高指数ＰＣＮＡ或高表达ｐ５３的肝癌术后复发率高，预后差；这些病人术后应接受积极的辅助治疗，术后的介人治疗（栓塞化疗）能降低其术后复发率，提高生存率。

转化生长因子胞内信号蛋白Smad2/3在糖尿病大鼠肾脏表达的动态观察及意义研究

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。

肝癌和癌旁肝组织中IGF-Ⅰ,IGF-Ⅰ受体mRNA的表达

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ（ＩＧＦⅠ） 及其受体（ＩＧＦⅠＲ）在肝细胞癌变过程中的作用及意义．方法 采用ＤＮＡＲＮＡ 原位杂交方法观察肝癌（ ｎ ＝ ３０） 和癌旁肝组织中ＩＧＦⅠ，ＩＧＦⅠ受体ｍ ＲＮＡ 的表达．结果 在肝癌和癌旁肝组织中ＩＧＦⅠ的表达率分别为４０－０ ％和５０－０ ％ ，ＩＧＦⅠ受体的表达率分别为４６－７ ％ 和５３－３ ％ ；ＩＧＦⅠ，ＩＧＦⅠ受体在分化较差的癌细胞和不典型增生肝细胞中表达最为明显．结论 ＩＧＦⅠ和ＩＧＦⅠ受体可能在肝细胞癌变过程中发挥重要作用．

肝癌的动脉供血分类研究:规则性、变异性和寄生性供血

目的:研究肝癌的动脉供血分类及其临床意义。材料与方法:1116例肝癌在 THAIE 前行常规腹腔动脉造影,对疑为肝动脉变异的194例和23例分别作肠系膜上动脉及胃左动脉造影,对肿瘤邻近膈肌的114例作了选择性膈下动脉造影。结果:血管造影显示,1116例中,规则性供血886例(79.4%),变异性供血230例(20.6%),变异性供血又进一步分为5个供血亚型。腹腔动脉造影显示47例右肝下部的肝癌合并胃网膜右动脉的寄生性供血。选择性膈下动脉造影证实有89例台并膈下动脉寄生性供血。结论:肝癌的动脉供血可分为规则性、变异性和寄生性供血3大类,这对肝癌的造影诊断和介入治疗具有重要作用。

癌基因蛋白ras p21、甲胎蛋白在实验性大鼠肛癌前病变中的表达

应用免疫组化技术，检测了ｒａｓｐ２１、ＡＦＰ在二乙基亚硝胺（ＤＥＮＡ）诱发的大鼠肝癌前病变中的表达。结果显示：诱癌早期肝小叶周边区即出现ｐ２１、ＡＦＰ表达阳性细胞，随诱癌过程进行，阳性细胞增多并主要分布在变异肝细胞灶和结节中，且常见两者同时表达的现象。由此提示，两者与大鼠肝癌发生有密切关系，ｐ２１过度表达直接参与了大鼠肝癌的启动和演进。同时表达ＡＦＰ、ｐ２１的细胞和病变是较具特异性的癌前病变。ｐ２ｌ与ＡＦＰ的联合表达可为人类肝癌提供一个参考诊断标志。

肝细胞粘弹性实验研究

采用微管吸吮技术考查肝实质细胞癌细胞粘弹性特性，并与采用秋水仙素处理微管蛋白后的肝癌细胞及正常胎肝细胞粘弹性进行对照。选择标准线性固体模型拟合实验结果并用三个粘弹性系数比较各组肝细胞的力学性质。实验结果表明肝实质细胞癌细胞较胎肝细胞更容易变形，而经秋水仙素处理后的肝癌细胞运动或变形能力下降，细胞刚性增加。正常胎肝细胞具有较高的弹性，类似于淋巴细胞核的力学性质。该结论还对定量研究肝瘤转移和治疗有方法学参考意义。

肝硬变病程中血清甲胎蛋白含量变化与肝癌发生的关系

对106例肝硬变患者血清AFP含量进行18个月至7年时间的动态观察,分析AFP含量变化特点,探讨其变化类型与肝癌发生的关系。结果表明,血清AFP含量在较高浓度(>60μg/L)反复波动的肝硬变人群的肝癌发生率(46％)明显高于其他肝硬变人群(P<0.05)。7例后来发展为肝癌的肝硬变患者血清AFP含量开始一直在200μg/L以下,但发现肝癌前半年内,其含量每月以1.5～4倍速率上升。因此,当血清AFP含量在高浓度持续波动,或经一段时间缓慢地上升后随即迅速升高,应认真进行影像学检查,以便及早确诊肝癌。

鼠肝脏癌变过程中GGT及其同工酶的表达与动态变化

本文对化学致癌剂２－ＦＡＡ诱发鼠肝癌过程中，膜结合γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）及其同工酶的表达与动态变化进行了研究，Ｗｉｓｔａｒ大鼠经２－ＦＡＡ喂饲后，经病理学及的组织化学证实，在肝脏由癌前病变到癌变过程中，肝细胞大量表达ＧＧＴ并分泌入血。肝组织ＧＧＴ，实验各组均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），接近胎鼠肝ＧＧＴ水平，血中ＧＧＴ呈持续住增加．早期升高速度慢于ＡＤＡ，ＧＳＴ和ＡＬＴ，正常鼠肝及血ＧＧＴ仅为单一区带，肝癌鼠肝与血清ＧＧＴ也呈动态改变，显示正常鼠和胎鼠肝ＧＧＴ的双重特征，研究结果提示鼠肝癌时ＧＧＴ大量表达，且有癌胚性质，且血中同工酶异常区带出现较早，检测其同工酶有助于对鼠肝癌的早期诊断。

不同浓度绿茶及茶叶渣对黄曲霉霉素B_1致大鼠肝癌作用的影响

在研究癌的化学预防中,寻找拮抗化学致癌物的物质,越来越受到重视。我们曾报道茶叶及不同品种的绿茶对黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致肝癌作用有显著的抑制效果,但在这些研究中,绿茶用量均为5％,为找出绿茶的最低有效剂量,选择了3种不同浓度的绿茶作实验研究,并用茶叶渣作对比实验,现报告如下。

三型肝炎病毒感染与肝癌关系的病例对照研究

为探讨乙型、丙型和庚型肝炎病毒感染与肝癌的关系，应用酶联免疫法（ＥＩＡ）对江苏海门市１１７例肝癌患者和１４５例健康对照的血清中ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＧＶ感染标志物进行了检测。结果显示，病例组ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＣＶ和抗－ＨＧＶ阳性率分别为７１．８％、４．３％和２１．４％，对照组分别为２２．８％、２．１％和５．５％，ＨＢＶ与ＨＣＶ或ＨＧＶ合并感染的ＯＲ值（１６．６７和２４．６９）大于它们单独阳性的ＯＲ值之和。表明海门市乙型肝炎病毒感染与肝癌关系密切，庚型肝炎病毒感染可能与肝癌发生有关；

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的研究新型抗癌药物去甲斑蝥素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑蝥素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果１０ｍｇ／Ｌ去甲斑蝥素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小体的形成。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示，处理组部分细胞的ＤＮＡ已降解成以约２００ｂｐ为基数的ＤＮＡ片断，呈现典型的“梯状”带纹。免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示该过程伴随癌基因蛋白Ｂｃｌ－２表达的减弱。结论新型抗癌药物去甲斑蝥素可以诱导人肝癌细胞发生凋亡。

VEGF p53和p21 ras在原发性肝细胞癌中的表达及其临床病理意义

目的：研究ＶＥＧＦ，ｐ５３和ｐ２１ｒａｓ在原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的表达和三者间的相关性及其与ＨＣＣ病理分级，转移行为的关系。方法：应用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对３４例ＨＣＣ的癌组织中的ＶＥＧＦ，ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３的表达作了研究。结果：ＶＥＧＦ，ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３三者在肝癌和癌旁组织的阳性率均有非常显著的差异（Ｐ＜０．０１），ＶＥＧＦ的表达与ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３均呈显著的正相关（Ｐ＜０．０１）。三者间的协同表达亦与ＨＣＣ的病理分级和转移行为有关，而与肿瘤大小，ＡＦＰ水平，ＨＢｓＡｇ阳性无关。结论：ＶＥＧＦ可能在ＨＣＣ的形成，发展和转移中与ｐ５３和ｒａｓ基因协同作用，三者的协同作用可能与ＨＣＣ的病理分级和转移行为有关。

人原发性肝癌P53基因缺失和突变

在多种人体肿瘤组织中P53基因有缺失,P53基因作为一个抗癌基因,能在体外抑制肿瘤细胞的生长。肿瘤组织中P53基因缺失或发生突变,丧失了抗癌基因的活性,某些突变体还具有协同转化活性。本文分析了12例肝癌及其相应癌旁正常组织P53基因的存在状态,发现3例(25％)P53基因有缺失,3例P53基因有突变。这一结果提示P53基因为人肝癌抗癌基因,它的缺失或突变与肝癌的发生或演进有关。

以乙型肝炎病毒感染为主因的肝癌病因多因素分析

1989年3～9月,在启东肝癌高发区应用1:4配比病例对照研究和条件Logistic回归分析,对肝癌病因多因素进行了流行病学研究。结果:1.Mantel-Haenszel卡方检验中,除IgM抗-HBc外,其余各指标病例与对照均有极显著的差异,OR_(M-H)值从2.68～16.00不等;2.单因素Logistic分析也显示以HBV-DNA、Pre-S_2和HBsAg三指标的OR值较高,P<0.005;3.多因素条件Logistic回归分析得到A、B两个模型,它们显示:仍以乙肝指标(HBs-Ag、抗-HBC、HBV-DNA、Pre-S_2蛋白)的OR值较大。这进一步显示在启东肝癌高发区仍以HBV感染为肝癌的重要危险因素之一;饮酒史也可能是一个危险因素。

集落刺激因子1及其受体的单抗对人肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用

探讨集落刺激因子┐１及其受体在人原发性肝癌中的过量表达及其意义。方法抗ＣＳＦ１Ｒ和抗ＣＳＦ１单克隆抗体对裸鼠移植性人肝癌７７２１细胞的生物学作用。结果两个单抗分别以７４．８８％和７７．９３％的体积抑瘤率在裸鼠体内抑制７７２１细胞的生长。结论ＣＳＦ１Ｒ和ＣＳＦ１可能是一新发现的肝癌自泌和旁泌系统。

原发性肝癌的供血动脉解剖分析

目的：探讨供血动脉分型与肝癌的生物学特性的关系及其对临床治疗选择的意义。方法：分析和统计了419例巨块型原发性肝癌（＞10m）患者的动脉造影资料及临床资料。结果：根据供血动脉的数量的多少及形态，把原发性肝癌的供血动脉分为中央型、外周型、混合型和少供血型四种。前三型为多供血型，占71．84％，少供血型占28．历叽。中央型根据血管的分枝形态分为穿透型，树枝型，团状型三种亚型，分别占中央型的40．63％、52．60％、6．77％。外周型根据供血动脉的数量分为单枝型和多技型两种亚型，分别占外周型的30．43％和69．57％。外周型肝癌患者的1年和2年生存率较中央型和混合型高，而少供血型肝癌较多供血型低。结论：肝癌的供血动脉分型对肿瘤生物学特性的了解、临床治疗的选择及预后的判断具有重要的意义。