鼻咽癌高危人群、癌前病变的确立

１９８６～１９９５年在广东省鼻咽癌高发区对近１０万人，以鼻咽部间接鼻咽镜检查、ＥＢ病毒多种抗体检测、鼻咽光导纤维镜检查、活检组织病理检查及ＥＢ病毒ＤＮＡ、ＥＢＥＲｓ检测等手段进行前瞻性研究。具有下列条件之一者为处于癌前状态：①ＥＢ病毒ＶＣＡ／ＩｇＡ≥１∶８０；②ＥＢ病毒ＥＤＡｂ≥６０％；③ＥＢ病毒ＶＣＡ／ＩｇＡ（≥１∶５）、ＥＡ／ＩｇＡ（≥１∶５）、ＥＤＡｂ（≥３０％）三项中任何双项或三项阳性；④ＥＢ病毒ＶＣＡ／ＩｇＡ、ＥＡ／ＩｇＡ、ＥＤＡｂ三项中任何单项持续高滴度或滴度持续升高。经病理检查：鼻咽粘膜呈中、重度异型增生／化生者应被视为处于癌前病变。凡处于癌前状态或癌前病变者，应被视为鼻咽癌高危人群。为在高发区人群筛查的实施，鼻咽癌Ⅱ级预防确立科学依据。

鼻咽癌组织中EB病毒LMP1的表达与癌细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨EB病毒编码的LMP1在体内鼻咽癌细胞中，是否可能通过影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡的生物学过程，而在鼻咽癌的发展演进过程中起作用。方法：采用TUNEL法原位检测癌细胞的调亡程度，用免疫组化LSAB法检测LMP1、PCNA、p53和bcl－2蛋白表达Z分析LMP1的表达与癌细胞增殖、凋亡以及与p53、bcl－2表达的相关性。结果：LMP1的表达与否，与鼻咽癌细胞增殖活性的差异无显著意义，而与癌细胞凋亡程度之间的差异有显著意义，其表达与癌细胞凋亡程度呈正相关；LPM1的表达与p53和bcl－2的表达无相关性。结论：提示LMP1在体内鼻咽癌组织中可能有促使癌细胞凋亡的生物学作用，其机制可能是通过激活细胞毒性T淋巴细胞，增强后者对癌细胞的杀伤作用。LMP1对癌细胞增殖和凋亡的作用可能并不受p53及bcl－2表达的影响。

鼻咽癌裸鼠移植瘤及其相应体外细胞株的建立与特性研究

从新鲜鼻咽活检组织建立了一株鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠移植瘤株（ＳＵＮＴ一１）及其相应的体外传代上皮细胞株（ＳＵＮＥ一１）。证实ＳＵＮＴ一１和ＳＵＮＥ一１为典型低分化鳞癌细胞，染色体分析二者均为人类肿瘤核型。以ＰＣＲ技术检测ＳＵＮＴ一１的Ｐ１～Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１直到第６１代培养的细胞中的ＥＢＶ一ＤＮＡ均为阳性。用原位溶细胞电泳技术（Ｉｎｓｉｔｕｌｙｉｎｇｇｅｌ）ＥＢＶ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，亦显示相应的ＥＢＶＤＮＡ区带。ＥＢＶ基因组为线性特征，且在ＳＵＮＴ一１Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１Ｐ５３细胞的电镜检查中均发现直径为９６一１００ｎｍ的ＥＢＶ样颗粒。用不对称ＰＣＲ一ＳＳＣＰ检测，显示有Ｐ５３第８外显子突变。带ＥＢＶ基因的ＮＰＣ瘤株及相应的上皮细胞株建立，为从分子水平、细胞水平上研究肿瘤的发生发展过程，以及治疗等方面提供了丰富的和更切合人体肿瘤的材料和模型。

BRD7单核苷酸多态性及鼻咽癌易感性分析

为了探讨BRD7基因的遗传变异在鼻咽癌发生的作用 ,采用PCR SSCP和直接测序方法对BRD7基因的编码区进行单核苷酸多态性 (coding regionsinglenucleotidepolymorphism ,cSNP)分析 ,并对两个鼻咽癌家系的高危成员、 5 7个散发性鼻咽癌病人和 5 0个正常人进行了BRD7等位基因分型 .在BRD7基因的编码区发现了 3个cSNP (C45 0T、A5 38C和A737G) ,其中A5 38C颠换导致其编码蛋白的第 16 2个氨基酸由Asp变为Ala ;C45 0T改变与同义的A737C多态性偶联发生在 87 7%的鼻咽癌活检组织和配对的外周血、所有的鼻咽癌家系的患者及8个易感成员 ,但是仅存在于 2 2 %的正常人血标本中 .C45 0T多态性变化可以导致其编码蛋白在第 133位氨基酸的翻译终止 (G133Ter) .以上结果说明 ,C45 0T和A737C偶联的多态性改变是鼻咽癌发生和发展的重要遗传易感风险因子之一 (P <0 0 1) ;BRD7基因有两种翻译方式 ,G133Ter可以导致另一种截断的翻译本 (truncatedisoform) .

细胞色素P450 2E1基因与鼻咽癌易感性分析

目的：为了探讨鼻咽癌的病因发病机理，进一步揭示鼻咽癌的易感因素，本文进行了细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１） 基因多态性与鼻咽癌易感性关系的研究。方法：采用病例－ 对照分子流行病学方法分析１０５ 例鼻咽癌患者和９３ 例正常人体细胞ＣＹＰ２Ｅ１ 基因型。结果： 发现ＲｓａＩ和ＰｓｔＩ识别的ＣＹＰ２Ｅ１ 基因纯合子突变型（Ｃ２／Ｃ２） 在鼻咽癌人群为５－７ ％ ，显著高于正常人群（１－１％ ） 分布（χ２ ＝ ４－８６ ，Ｐ＜ ０－０５） ；携带Ｃ２／Ｃ２ 基因型个体发生鼻咽癌的危险性比携带其它基因型个体高５ 倍左右。结论：ＣＹＰ２Ｅ１ 基因的多态性可能是鼻咽癌易感的因素之一。

鼻咽癌癌变过程中EBERs表达状况的研究

本文采用重组质粒ｐＳＰ６５（带有ＥＢＥＲｓ的基因）体外转录合成的地高辛标记的单链反义ＲＮＡ探针，用原位杂交方法检测处于癌变不同阶段的鼻咽活检组织中ＥＢＥＲｓ的表达状况。ＥＢＥＲｓ检出率为：鼻咽癌（２３／２４），正常鼻咽组织，慢性炎症增生及单纯性增生和化生（０／３０），异型增生和化生（５／８），头颈部其它肿瘤（０／５），鼻咽癌颈淋巴结转移灶（１／１）。进一步证明：（１）ＥＢＶ与ＮＰＣ密切相关；（２）ＥＢＶ在ＮＰＣ转移过程中并不丢失；（３）ＥＢＶ可能并不感染正常鼻咽上皮。

高发区鼻咽癌病理组织学类型构成的特点

[目的]复查鼻咽癌高发区2610例鼻咽癌的病理组织学类型 ,比较未经治疗和复发性鼻咽癌在组织学类型构成方面的差异,以反映高发区鼻咽癌病理组织学类型构成的特点。[方法]复查1999年至2000年鼻咽活检4503人次 ,有适合组织学分型的鼻咽癌2610例。其中2370例是未经治疗的 ,240例是复发性的。比较未经治疗与复发性鼻咽癌病理组织学类型的构成。[结果]根据世界卫生组织的分型标准 ,绝大多数未经治疗的鼻咽癌 (2292/2370,96.71% )是非角化性癌 ,仅55例 (55/2370,2.32% )为角化性鳞状细胞癌。在2292例非角化性癌中 ,2088例 (2088/2292,91.10 % )是鼻咽型未分化癌。与未经治疗的鼻咽癌相比 ,角化性鳞状细胞癌在复发性鼻咽癌中所占的百分率(24/240,10%)以及分化型非角化性癌在非角化性癌中所占的百分率(40/214,18.69%)均显著增高(P<0.001)。[结论](1)在鼻咽癌高发区(广州)所见的鼻咽癌大多数是非角化性癌,其中以鼻咽型未分化癌占绝对优势 ;(2)在未经治疗的鼻咽癌中,角化性鳞状细胞癌和非角化性癌两大类在平均年龄和男女比例方面没有差异 ;(3)在经放疗后的复发性鼻咽癌中 ,分化较好的类型比率增高。

鼻咽癌p53蛋白表达与p53基因结构改变及mdm_2蛋白表达的关系和意义

目的：探讨影响NPCp53蛋白表达的因素、p53和mdm2蛋白在NPC发生中的变化和意义。方法：采用免疫组化法检测p53和mdm2蛋白、Southern杂交法检测p53基因结构。结果：31例p53蛋白阳性的NPC中10例（32．3％）有p53基因结构改变；在2．8／6kh（4例）与8kb（6例）HindⅢ杂交片段者之间，mdm2蛋白表达有显著差异（P＝0．0238）。无p53基因结构改变的21例NPC中12例mdm2蛋白表达阳性和9例阴性。p53和mdm2蛋白表达在中－重度异型性改变（32例）与轻度异型性改变（21例）之间，或与NPC（34例）之间均有显著差异（P＜0．01）；两蛋白同时表达率在中一重度异型性改变时从“0”骤升至50．0％，非常接近NPC（54．3％）。结论：p53基因结构改变和mdm。蛋白过度表达是影响NPCp53蛋白过度表达的两个因素；不同类型p53基因结构改变所产生的p53蛋白激活MDM2的功能并不相同；p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两蛋白协同作用，可能在NPC发生中起重要作用。

鼻咽癌中 EB 病毒基因组状态研究

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增Ｅｐｓｔｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）的ＢａｍＨＩＷ片段，在２０例低分化鼻咽癌活检组织中，检测出ＥＢＶＤＮＡ片段；裸鼠低分化ＮＰＣ移植瘤株ＳＵＮＴ－１从第１至第３４代持续存在ＥＢＶＤＮＡ，其相应体外细胞株ＳＵＮＥ－１第１至第６２代仍阳性。用原位溶细胞电泳技术（Ｉｎｓｉｔｕｌｙｓｉｎｇｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）结合ＢａｍＨＩＷ片段为探针，进行ＤＮＡ杂交，发现ＳＵＮＥ－１第２０代细胞中有ＥＢＶ线性ＤＮＡ存在。２０例ＮＰＣ活检组织的ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切，以ＬＭＰ２Ａ外显子ｅ１～ｅ５为探针，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，１９例均只出现一条带，证明病毒ＤＮＡ不是以线状或整合状，而是以环状附加体形式存在。说明ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞已经过克隆选择，或者其中一个病毒感染的克隆已成为选择优势，提示ＥＢＶ感染在ＮＰＣ癌变过程中起重要作用。

EB病毒与促癌物协同作用诱发人鼻咽恶性淋巴瘤和未分化癌的研究

将ＥＢ病毒感染的人胎儿鼻咽粘膜移植于２２只Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠皮下，每周一次皮下注射丁酸和佛波醇二酯（ＴＰＡ）。约１０天后肿物逐渐增大，１５周内行病理学检查，诊断为恶性淋巴瘤４例（其中Ｔ淋巴细胞型３例），未分化癌３例。ＰＣＲ和原位杂交显示，两种肿瘤组织和细胞中均含有ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因，核苷酸序列分析表明，与Ｂ９５一８细胞ＬＭＰ１基因相应序列的同源性约为９６％和９９％。说明ＥＢ病毒感染人胎儿新鲜鼻咽上皮细胞和淋巴细胞，引起细胞恶性转化后，ＥＢ病毒ＤＮＡ仍存在于癌细胞中。本研究在国际上首次证明，完整的ＥＢ病毒和促癌物协同作用可以诱发未分化癌。

鼻咽原发性癌的组织学类型——30年经验总结

目的 :提出既能与“国际接轨”又能充分反映我国鼻咽癌病理学研究成就的鼻咽原发性癌组织学类型的方案。方法 :在总结作者 30年来从事鼻咽癌病理学研究成果的基础上 ,参阅WHO的组织学分类 ,并广泛征求同行的意见后 ,概括出本方案。结果 :鼻咽原发性癌可分为 4种类型 ,即角化性鳞状细胞癌、非角化性癌、腺癌和原位癌。角化性鳞状细胞癌可按分化程度分为分化好、中等分化和分化差。非角化性癌是鼻咽癌高发区常见的癌 ,又可分为分化型、未分化型和混合型 3个亚型。鼻咽腺癌有普通型和涎腺型之分 ;原位癌则有鳞状细胞型和柱状细胞型之别。结论 :上述鼻咽原发性癌的组织学类型既反映了实际情况 ,能与“国际接轨” ,又较易掌握 ,建议在日常病理诊断中试用。

鼻咽癌中p53蛋白积聚的生物学特征和临床意义

收集３４７例鼻咽癌组织，全部或部分进行了ＣＭ－１、ｐＡｂ２４０、ｐＡｂ１８０１和ｐＡｂ４２１四种ｐ５３蛋白抗体以及ＰＣＮＡ和Ｋｉ６７抗体的染色。综合分析染色结果并结合组织学特征，临床分期以及预后等资料，得出以下结论：①鼻咽癌中ｐ５３蛋白的积聚率为４４．３％，积聚的ｐ５３蛋白其抗原性不完全一样；②ｐ５３积聚的癌细胞具有增殖活性较强和侵袭性较弱的特点；③ｐ５３蛋白积聚的百分率在无颈淋巴结转移的原发瘤中比有颈淋巴结转移者高；在早期原发瘤中比晚期原发瘤中高；在放疗后存活５年以上者中比放疗后１．５年内死亡者中高。

鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。

鼻咽癌扩散途径的研究

本文对47例鼻咽癌尸解资料临床病理分析,研究其扩散途径。结果表明:鼻咽癌是一种局部侵袭力强、远处较移广泛的恶性肿瘤。局部扩张可以向头颅器官、副鼻窦腔、咽旁软组织间隙、颅底骨质、颅腔内广泛侵犯。远处转移率高达77.5％(31/40)。本研究发现,鼻咽癌好发淋巴结转移,占远处转移的55％,居第一位,其次为骨、肝、脊髓等。鼻咽癌如此广泛的局部侵犯和远处转移,单纯放疗难以取得理想的效果,故提出鼻咽癌的治疗应采取综合治疗手段,并对如何提高疗效,提出一些意见和建议。

鼻咽癌细胞系 SUNE 中 EBV-LMP1 基因对上皮细胞增殖的影响

目的研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ┐ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响，探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞，检测ＬＭＰ１的表达，观察细胞在软琼脂中的集落形成能力，ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛，能在软琼脂中形成多个集落，ＭＴＴ吸收能力增强，ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，促进细胞的生长、增殖和转化，使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。

蛋白激酶C亚型在鼻咽癌细胞中的分布及在增殖中的作用

本文检测了人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）颗粒部分与胞浆部分ＰＫＣ的三种主要亚型的含量和分布。结果发现：（１）ＣＮＥ－２Ｚ细胞的颗粒部分中ＰＫＣ－Ⅱ型相对较少，而ＰＫＣ－Ⅰ，Ⅲ型则相对较多；（２）随ＴＰＡ浓度增大，ＰＫＣ总量及颗粒部分的ＰＫＣ－Ⅲ下降明显，细胞的生长也受抑制，１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，ＰＫＣ－Ⅲ仅为对照的３５．６％，抑制率达６０％；（３）随ＴＰＡ作用时间延长，ＰＫＣ总量及颗粒部分的ＰＫＣ－Ⅲ下降明显，ＰＫＣ－Ⅲ的变化自１５ｍｉｎ时开始，１２０ｍｉｎ时仅为对照的１８．６％；在１３ｈ后，细胞增殖出现抑制，２６ｈ抑制率达５５％。结果提示，ＰＫＣ在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中以Ⅰ，Ⅲ型含量较多，尤其ＰＫＣ－Ⅲ对生长起重要作用。

VCAM在非角化性鼻咽癌中表达的初步探讨

ＶＣＡＭ在非角化性鼻咽癌中表达的初步探讨＊李群１宗永生３梁英杰３林世珍１韩英伟２＊：该研究课题得到海南省自然科学基金资助（３９３０７）。作者单位：１海南医学院病理教研室（海口５７０１０２）２海南医学院附属医院耳鼻喉科３中山医科大学病理教研室第...

化学诱癌过程中大鼠鼻咽上皮非典型增生与癌变的相关性分析

ＳＤ纯种大鼠８０只，皮下注射二亚硝基哌嗪（ＤＮＰ）作鼻咽诱癌实验，３０只大鼠作对照，分批处死动物。结果大鼠鼻咽各种非典型增生４２例，各阶段癌３２例，其出现频率都随动物存活期延长而增加。癌变与鳞状上皮、柱状上皮和底层非典型增生呈正相关，几乎所有发癌动物都同时伴随非典型增生。二者共存的比例很高，且有统计学意义。能看到癌变部位直接与非典型增生相连的２３例中，癌旁病变全部是鳞状上皮非典型增生，其中１９例是基底层细胞非典型增生。因此，从形态学的统计学分析，非典型增生，特别是基底层细胞非典型增生是ＤＮＰ诱发的大鼠鼻咽癌的癌前病变。

鼻咽癌血管生成及nm23基因表达与复发转移关系初探

目的 :探讨微血管密度 (Microvesseldensity ,MVD)及nm2 3基因蛋白表达与鼻咽癌复发转移关系。方法 :采用免疫组织化学S -P法检测了 73例鼻咽癌 (NasopharyngealCarcinoma ,NPC)组织中的微血管密度、血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及nm2 3基因蛋白表达。结果 :NPC中复发转移者或伴有颈部淋巴结转移者的MVD及VEGF表达显著升高 ,而nm2 3基因蛋白表达则较无复发转移者或不伴有颈部淋巴结转移者的低。结论 :NPC的MVD及nm2 3、VEGF与其浸润和转移密切相关 ,有可能作为判断肿瘤生物学行为、转移潜能及预后指标。

鼻咽癌病人的心理症状及特点分析

目的 :分析鼻咽癌病人的心理症状及其特点。方法 :采用症状自评量表、焦虑自评量表和抑郁自评量表对 6 1例鼻咽癌、30例肝炎和 30例健康人进行评定。结果 :1症状自评量表发现 ,鼻咽癌病人抑郁、焦虑因子分显著高于健康人和肝炎病人 ;但人际敏感、敌对、偏执和精神病性因子分却显著低于肝炎病人。 2鼻咽癌组的焦虑、抑郁程度及焦虑、抑郁发生率均显著高于二个对照组。结论 :鼻咽癌病人存在严重的焦虑和抑郁症状 ,住院初 ,以焦虑障碍为主 ,并有压抑愤怒 ,抑制自我的倾向。