SARS-CoVS蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达

目的检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能.方法取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4～6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达.取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照.结果在上述各种组织中均检测到了ACE.2的表达.结论眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索.

内源性脉络膜新生血管抑制因子的研究进展

脉络膜新生血管(choroidalneovascularization,CNV)是发达国家老年人视力损害的主要原因之一,发生机制尚不完全清楚。正常情况下,血管生成因子和抑制因子在体内处于动态平衡状态。任何原因引起血管生成因子相对或绝对增多就会导致新生血管生成。已有许多关于血管生成因子的研究报道,如碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)和血管内皮生长因子(vascularendothe-lialgrowthfactor,VEGF)等。近年陆续发现一些内源性血管抑制因子,如色素上皮衍生因子、可溶性血管内皮生长因子受体阻断剂、金属蛋白酶组织抑制因子、凝血酶敏感蛋白、软骨源性抑制因子、血管抑素和内皮抑素等。内源性血管抑制因子的抗新生血管作用为临床防治CNV相关疾病带来了新希望。

脂质体介导的C-myc反义寡核苷酸在视网膜色素上皮细胞中分布和稳定性的观察

目的在体外培养的人视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞中，观察脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）介导的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸转染效果，为进一步研究增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的防治提供实验依据。方法将人工合成带有ＦＡＭ荧光标记的反义寡核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）用脂质体包裹转染体外培养的ＲＰＥ细胞，同时用无脂质体介导的裸ＡＳ－ＯＤＮ作对比，在荧光显微镜下动态观察ＡＳ－ＯＤＮ在ＲＰＥ细胞内的分布和存留时间。结果与无脂质体介导的裸ＡＳ－ＯＤＮ相比，脂质体介导的ＡＳ－ＯＤＮ在细胞内、尤其在胞核的分布明显加强；不仅转染速度快，而且在细胞的存留时间延长１倍以上。结论脂质体能明显增强ＡＳ－ＯＤＮ在ＲＰＥ细胞内的转染效率，有望进一步用于防治ＰＶＲ的研究。

脂质体介导基因转染活体眼组织的研究

目的 了解活体内不同途径应用脂质体转染外源基因在眼组织的分布情况。方法 将包有 β 半乳糖苷酶基因质粒的脂质体DOSPER ,分别采用玻璃体腔内注射、尾静脉注射、表面点药及球后注射到小鼠体内 ,2h ,1,2天、1,2 ,4周后用 β gal染色法观察 β 半乳糖苷酶基因在眼组织内的分布情况。 结果 玻璃体腔内注射、尾静脉注射、表面点药及球后注射 4组的小鼠眼球组织包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜 ,均有 β 半乳糖苷酶基因表达 ,除表面点药组外 ,其他 3组小鼠脉络膜也有 β 半乳糖苷酶基因表达。用药 1天后开始出现 β 半乳糖苷酶基因阳性表达 ,持续达 1个月以上。 结论 脂质体能有效、稳定地转染外源基因到活体眼组织的角膜、虹膜、睫状体、脉络膜、视网膜。

正常角膜缘组织中与血管生成相关的生长因子及其受体的表达

目的探查正常人角膜缘组织里与血管生成相关的生长因子及其受体的分布。方法用冰冻切片和链亲合素过氧化物酶染色系统，选择一组兔抗人多克隆抗体，即：血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－Ａ）和转化生长因子－β １（ＴＧＦ－β １）及其受体对１１例角膜移植供体材料的角膜缘组织进行了检查。结果ＶＥＧＦ，ｂＦＧＦ，ＰＤＧＦ－Ａ和ＴＧＦ－β １ ４种生长因子仅在１或２例标本中不表达外，在大部分标本中表达阳性。４种生长因子的受体在角膜缘上皮、基底膜、上皮下组织和角巩膜组织内阳性表达分别是：ＶＥＧＦ ９例、７例、１０例和８例；ｂＦＧＦ ８例、９例、９例和８例；ＰＤＧＦ ５例、４例、１０例和７例；ＴＧＦ－β １３例、０例、１１例和６例。结论在正常角膜缘组织中，存在ＶＥＧＦ，ｂＦＧＦ，ＰＤＧＦ－Ａ和ＴＧＦ－β １及其受体，可能在维持正常的角膜功能和调节角膜缘组织的生长和增殖中起着重要作用。

内皮素-1对培养的兔角膜内皮细胞的影响

目的 研究内皮素-1(ET-1)对培养的兔角膜内皮细胞的增殖能力和移行能力的影响。 方法 采用MTT方法并通过损伤模型观察不同浓度ET-1加药48 h后,对体外培养的兔角膜内皮细胞增殖和细胞移行的能力。光镜下和透射电镜下观察ET-1对兔角膜内皮细胞形态的影响。采用免疫组化染色法和计算机图像分析系统检测不同浓度ET-1对细胞PCNA表达的影响。结果 一定浓度ET-1促进培养的兔角膜内皮细胞的增殖和移行,且呈剂量相关性。10 pmol／L时起作用,200 pmol／L时发挥最大作用。光镜下和透射电镜下发现ET-1对兔角膜内皮细胞的形态学特征和超微结构无影响。兔角膜内皮细胞PCNA表达阳性,ET-1促进其表达,且呈剂量相关性。 结论 ET-1可作为一种生长因子,一定浓度下可促进培养的兔角膜内皮细胞增殖和移行能力。

氧化应力对晶状体一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨氧化应力、5种抗白内障药物对晶状体一氧化氮合酶 (NOS)活性及一氧化氮 (NO)水平的影响。方法 建立晶状体温育模型 :培养液分 7组 :( 1)对照组含DMEM 10ml;( 2 )～ ( 7)组含DMEM 10ml外尚有 3 0 %H2 O2 0 2ml ,FeCL3 2mg ,并于 ( 3 )～ ( 7)组中分别加入海珠神、麝珠明目、益视安、晶福及视明露滴眼液各 1 0ml ,晶状体制备匀浆上清 ,测NOS ,NO ,MDA。结果 1.正常人、兔、SD鼠晶状体的NOS活性分别为 ( 6 45± 1 5 7)、( 18 0 3± 8 2 0 )、( 13 61± 2 13 )U/mgpro .,人、兔晶状体内均测不出NO ,而SD鼠NO为 ( 5 2 79± 2 0 79) μmol/mgpro .。 2 .氧自由基诱导温育晶状体NOS活性上升 1 5倍 (P <0 0 0 1) ,但晶状体内测不出NO。 3 .抗白内障药物影响NOS活性及NO水平 ,海珠神、麝珠明目、益视安及晶福组与氧化组相比显示抑制NOS活性 ,分别下降 15 % ,9% ,6%及 5 5 % ,而视明露组诱导NOS活性上升 41% (P <0 0 0 1)。 4.氧化组晶状体MDA上升 2 15倍 ,各抗白内障药物组MDA下降至对照组以下 ,证明 5种抗白内障药物都是抗氧化剂。结论 氧自由基诱导晶状体NOS活性上升 ,NO测不出。NO与白内障是否有关尚待深入研究。

兔虹膜和视网膜色素上皮细胞的体外培养比较

目的 观察比较有色素兔虹膜色素上皮(IPE)及视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外生长状况。方法采用酶消化法及酶辅助机械分离法分别分离IPE和RPE细胞。观察培养的两种细胞的生长状况,并对其进行免疫组化鉴定。结果原代IPE及RPE细胞大多呈圆形或六边形,细胞内充满了黑色素颗粒。随着传代的增加,呈梭形或纤维细胞样生长的细胞增多,细胞中的色素颗粒也逐渐减少。细胞角蛋白免疫组化染色显示IPE及RPE细胞绝大多数呈棕黄色阳性反应。Desmin免疫组化染色显示IPE细胞中阳性细胞约占5％。 结论 分离培养的IPE和RPE细胞纯度很高,IPE细胞中绝大多数为后层IPE细胞。IPE和RPE细胞的形态及体外生长特点类似。

高水平稳定表达人睫状神经营养因子细胞株的建立

目的 建立能稳定且高水平表达人睫状神经营养因子(CNTF)的永久细胞株。方法 采用阳离子脂质体介导CNTF表达质粒转染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL－2302细胞,经氨甲喋呤筛选出抗性克隆后,分别采用原位杂交检测细胞中CNTF mRNA的表达,采用免疫组织化学染色、Western blot方法检测细胞浆中CNTF蛋白质的表达,采用ELISA法检测培养液中CNTF的分泌水平。结果 不同的克隆产生和分泌CNTF的能力不同,但其中产生和分泌CNTF能力最强的克隆其培养液中CNTF的质量浓度分别是C2C12－CNTF 114OOpg/ml、NIH3T3－CNTF 9069.071pg/ml、HLF-CNTF 91046.15pg/ml及CRL-2302－CNTF 77 578.4 pg/ml。 结论 构建的多株细胞株均能持续、稳定、高水平表达和分泌CNTF。

锌钙镁铜在眼病中的作用

微量元素是一个多学科相互渗透相互影响的领域,它涉及到医学中的生化、免疫、营养、遗传、地方病、抗衰老及抗肿瘤等许多方面。随着现代科学技术的发展,尤其是微量测定技术的发展,微量元素与人体健康的关系已日益被人们所重视。眼部微量元素的研究最早见于Tauber等(1953)的报告,曾简单介绍了眼组织中含有铁、铜、锌、镁的作用。目前已知眼组织中含有铝、溴、钙、镉、氯、铬、铜、钾、铁、镁、锰、钠、钒、硒、锌等10多种元素,它们如同身体其它组织中微量元素一样,对维持正常眼的生理生化过程是必不可少的。这些微量元素的含量有一定的比例,处于动态平衡之中,一旦过量或不足,都可引起某些眼功能异常及病理性改变。现综合有关文献简要地论述锌、钙、镁、铜在眼病中的作用(其中钙、镁为宏量元素)。

人胎儿晶状体上皮细胞增殖及相关因子的动态研究

目的观察增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子（ＥＧＦ）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达，并探讨其在晶状体发育中的作用。方法用ＳＰ免疫细胞化学法对４８例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ免疫细胞化学染色。结果ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞内均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。ＰＣＮＡ阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状；经相关分析，ＴＧＦ－β１与ＥＧＦ以及ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ与ＰＣＮＡ均呈正相关。结论ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞内均有表达；ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ具有协同作用，共同促进晶状体上皮细胞的增殖。

牛视网膜微血管周细胞和内皮细胞的选择性培养

目的 建立视网膜微血管周细胞 (PC)和内皮细胞 (EC)选择性培养的简便方法。方法 采用含 2 0 %胎牛血清 (FBS)的DMEM和在该培养基中加入 5 %贫血小板人血浆 (PPP)及牛视网膜浸出液 (2 0 μl/ml) ,结合原代培养细胞克隆的分离、除杂。结果 获得的PC和EC能连续传代 ,纯净度 >95 %。PC形状不规则 ,无接触性抑制 ,对 3G5和α 肌动蛋白单克隆抗体染色阳性 ,Ⅷ因子抗体染色阴性 ;EC呈鹅卵石状生长 ,有接触性抑制 ,对Ⅷ因子抗体染色阳性 ,3G5和α 肌动蛋白抗体染色阴性。结论 用 2 0 %FBS的DMEM或在该培养液中加入 5 %PPP及视网膜浸出液 ,结合原代细胞克隆的分离、除杂 。

兔α-晶状体蛋白的分子伴娘功能的研究

目的了解兔α－晶状体蛋白是否具有分子伴娘功能。方法凝胶过滤法分离水溶性晶状体蛋白。在５５℃高温条件下，观察。一晶状体蛋白是否能抑制β－ｌｏｗ晶状体蛋白的凝集和变性；观察α－晶状体蛋白是否能抑制糖基化诱导的葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）的失活，均以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为对照。结果α－晶状体蛋白能抑制热诱导的β－ｌｏｗ晶状体蛋白的凝集和变性；α－晶状体蛋白亦能抑制糖基化诱导的Ｇ６ＰＤ的失活；而牛血清白蛋白却无此作用。结论α－晶状体蛋白具有分子伴娘功能。

次声对大鼠视觉诱发电位损伤的实验观察

目的 观察大鼠次声暴露后闪光视觉诱发电位(FVEP)的波形变化特征,探讨次声对视觉传导通路的影响。方法 48只大鼠按暴露时间随机分为8组,每组6只,暴露于8 Hz,130 dB的次声压力舱中,每天2 h,分别暴露1、4、7、11、14、18、21 d及正常对照组,暴露前后分别行FVEP的检测。 结果 次声暴露1 d后,FVEP P100波振幅出现明显降低,但随暴露时间的延长,振幅降低逐渐恢复。而潜伏期的改变,贯穿21 d的次声暴露均无统计学意义。 结论 结果提示次声对视通路的影响,以视网膜功能异常为主,但不排除对视神经直接的、可逆性的损害。

程序性死亡分子-1及其配体通路在眼科领域的研究进展

共刺激信号已经成为免疫学研究的一个热点。程序性死亡分子-1（PD-1）及其配体属于抑制性共刺激分子，其在自身免疫性疾病、器官移植排斥反应、病原微生物感染、肿瘤免疫逃逸等方面都发挥着重要作用。近年来，PD—1及其配体（PD-1／PD—L）通路在眼科方面的研究也取得了一定进展。眼部多种疾病和现象，如眼部免疫性疾病、眼部感染性疾病、眼部肿瘤、眼组织的免疫赦免等均发现有PD—1／PD—L通路的改变。这些发现不仅进一步阐明了一些眼部疾病的发病机制，而且为其预防和治疗提供了新的方向。就PD—1／PD—L通路的生物学特性及其在眼科生理病理中的研究进展进行综述。

视网膜神经节细胞多种培养方法的实验研究

目的探讨视网膜神经节细胞（ＲＧＣｓ）的多种培养方法。方法（１）在涂有鼠尾胶原的器皿上通过调整培养液培养：①乳鼠混合及纯化的ＲＧＣｓ；②单层星型胶质细胞上种植纯化的乳鼠ＲＧＣｓ；③引产胎儿混合ＲＧＣｓ。（２）检验鼠尾胶原及中脑顶盖提取液（Ｔｅ）对培养的乳鼠ＲＧＣｓ的影响。结果（１）混合培养的乳鼠及引产胎儿ＲＧＣｓ大多能存活２周以上；（２）纯化的乳鼠ＲＧＣｓ大多能存活４８ ｈ；（３）单层星型胶质细胞上种植的纯化乳鼠ＲＧＣｓ能存活４周以上；（４）鼠尾胶原及Ｔｅ对培养的乳鼠ＲＧＣｓ的贴壁及生长有明显的促进作用。结论通过调整培养液及改善微环境能用多种方法培养ＲＧＣｓ。

高渗透压对人角膜上皮细胞MMP-9的上调作用

目的评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性.方法在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞,然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol/L的NaCl,使培养液渗透压达到400～500 mOsm,运用酶图法和ELISA法测定加入高渗剂24 h后的培养液中MMP-9的质量浓度.结果不同渗透压组MMP-9的质量浓度有显著差异,培养液渗透压越高,MMP-9的质量浓度也就越高.结论高渗透压反应性刺激人角膜上皮细胞MMP-9的表达和产物.证实了眼表高渗透压是干眼症导致眼表面炎症的发病机制.

蛋白激酶C在缺氧人RPE细胞表达血管内皮生长因子中的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)信号转导通路在缺氧诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用。方法在细胞培养液内加入CoCl2溶液以模拟缺氧环境,培养RPE细胞0·5、48h后,用免疫荧光法检测人RPE细胞内PKC的表达。将PKC激动剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(PMA)及PKC抑制剂Chelerythrine分别加入人RPE细胞培养液,在缺氧状态下分别培养6、12、24h后,用ELISA检测各组RPE细胞中VEGF的表达。对照组为常氧状态下培养的RPE细胞。结果免疫荧光染色显示缺氧及常氧状态下,RPE细胞浆及胞核内均有PKC的表达。PKC激动剂PMA可增强缺氧状态下RPE细胞对VEGF的表达,而PKC抑制剂Chelerythrine可减弱缺氧状态下RPE细胞对VEGF的表达。结论缺氧诱导VEGF在RPE细胞中的表达,其信号传导途径部分是通过PKC通路实现的。

聚四氢呋喃聚乳酸共聚物C_4对眼组织毒性的实验研究

目的研究聚四氢呋喃聚乳酸共聚物(C4)对眼组织的毒性。方法将聚四氢呋喃聚乳酸共聚物分别置入兔眼玻璃体腔和前房内,定期进行临床观察和视网膜电图检查,6个月后摘除眼球行病理观察。结果聚四氢呋喃聚乳酸共聚物在兔眼玻璃体腔内(168.3±12.6)d完全降解,在前房内(136.5±9.6)d完全降解,视网膜电图正常,眼组织病理观察无异常,兔眼压于手术后第3d及第120d左右两次出现升高。聚合物直接接触角膜内皮1.5个月后内皮细胞消失。结论聚四氢呋喃聚乳酸共聚物对视网膜、晶状体无明显毒性,但不能直接接触角膜内皮。

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在成年大鼠不同视神经再生模型中的表达

目的 测层粘连蛋白(LN)和纤维粘连蛋白(FN)在成年大鼠视神经再生模型中的表达,探讨坐骨神经、LN和FN在视神经再生中的作用。 方法 选择64只健康成年雄性SD大鼠,随机分成2组,实验组自体视神经-坐骨神经吻合模型32只,对照组自体视神经-视神经吻合模型32只。术后15、30、45、60 d处死动物取吻合神经。利用免疫组化SP法和计算机图像分析,测定LN和FN在各组中的表达。 结果 实验组LN和FN表达水平高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。 结论 LN和FN涉及成年大鼠视神经再生。坐骨神经移植有助于增加两者表达,促进视神经再生。