银柴胡多糖超声辅助提取工艺优化及抗氧化活性分析

目的:为了提高银柴胡多糖得率,对银柴胡多糖提取工艺参数进行优化,并评价其体外抗氧化活性。方法:采用超声辅助提取银柴胡多糖,在单因素实验基础上结合响应面法(Box–Behnken Response Surface)对提取工艺参数进行优化,并采用Sevag法除蛋白得银柴胡粗多糖,进一步对其抗氧化活性进行分析。结果:优化后银柴胡多糖最佳提取工艺参数为超声温度50℃、时间3.20 h、提取次数2次,在此条件下多糖得率最高,为28.24%±0.10%,多糖含量为59.13%;体外抗氧化测定结果显示,银柴胡粗多糖清除DPPH自由基、OH自由基、ABTS+自由基的IC_(50)分别是5.47、2.40和1.44 mg/mL,表明其具有一定的抗氧化能力。结论:本研究经优化得到的银柴胡多糖提取工艺切实可行,可为银柴胡资源的开发利用提供理论依据。

参麦注射液中人参皂苷Rg_1和Re药代动力学研究

目的 研究参麦注射液中人参皂苷Rg1和Re人体药代动力学。方法 采用已建立的LC/MS/MS法同时测定人血浆中人参皂苷Rg1和Re浓度,并计算其药代动力学参数。结果 人参皂苷Rg1和Re线性范围为 1 023 -1 023μg·L-1和 1 05-1 050μg·L-1,方法回收率在 99% -105%和 99% -104%,日内、日间RSD值均小于 15%。参麦注射液 60mL经静脉滴注后人参皂苷Rg1和Re的药时曲线均符合二房室开放模型,T1 /2α分别为 0 28h和 0 10h,T1 /2β分别为 2 1h和 1 2h。结论 该法简便、灵敏、特异,适用于血浆中人参皂苷Rg1和Re浓度的测定。参麦注射液中人参皂苷Rg1和Re在人体内血药浓度较低,分布和消除速度较快,药代动力学行为符合二房室模型。

HPLC-UV测定人血浆瑞芬太尼浓度

目的建立高效液相色谱-紫外检测法测定人血浆瑞芬太尼浓度。方法人血浆经甲醇沉淀蛋白后先用氯丁烷萃取,再将药物提取至0.01mol·L-1盐酸中。以HypersilCN(4.6mm×250mm,5μm)为固定相;0.02mol·L-1NaH2PO4水溶液-乙腈(70:30),内含三乙胺0.01%为流动相,流速1.5mL·min-1,紫外检测波长为210nm。结果标准曲线在1.0-100ng·mL-1内线性关系良好(r=0.9984)。3种不同浓度平均方法回收率为(113.18±12.26)%,提取回收率为(87.90±3.21)%,日内RSD和日间RSD分别小于10%,15%。结论本方法准确、灵敏、专一性好,适用于临床瑞芬太尼血药浓度检测和药动学研究。

UFLC-MS/MS法测定急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星含量及其药代动力学差异

目的建立高效液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆左氧氟沙星含量的方法,并研究急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星的药代动力学变化情况。方法采用超快速液相色谱串联质谱(UFLC-MS/MS)法,以Gemini 3uC18柱(75mm×3mm,3μm)分离,以乙腈∶水∶甲酸(体积比55∶45∶0.1)为流动相进行洗脱,流速0.4mL/min,柱温30℃,进样10μL,电喷雾正离子电离(ESI)模式、多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式进行检测。12只大鼠被随机分为平原组与高原组(n=6),实验前禁食12h。实验时,大鼠灌胃给予左氧氟沙星(20mg/kg)。于给药前(0h)和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12和24h,由眼眶静脉丛采血0.2mL,并采用UFLC-MS/MS法测定大鼠体内左氧氟沙星浓度。结果左氧氟沙星的峰面积与其质量浓度在一定浓度范围内均呈良好的线性关系(r=0.999 5),该方法线性范围为5.00~2.00×10~5μg/L,最低检测限为5.00μg/L。比较急进高原组与平原组大鼠体内左氧氟沙星药动学参数,发现其发生了显著变化,药时曲线下面积从(5 799.27±1 867.18)(μg·h)/L增大到(33 828.41±8 196.08)(μg·h)/L,峰浓度增大、体内平均驻留时间延长、总清除率降低,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论急进高原后,左氧氟沙星在大鼠体内代谢过程发生明显变化,研究结果为平原和急进高原后临床合理应用左氧氟沙星提供参考依据。

5-氟尿嘧啶纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内靶向性分布

目的研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布。方法制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只。A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组。采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布。结果在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P<0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号。结论在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布。

飞机草挥发油成分的GC-MS分析

目的研究飞机草地上部分的挥发油成分,为充分开发飞机草提供科学依据。方法采用CO2超临界流体萃取飞机草地上部分的挥发油,GC-MS法鉴定化学成分,归一化法测定各成分相对含量。萃取条件:萃取釜压力19.5 MPa,温度40℃;分离釜1压力6.8 MPa,温度35℃;分离釜2压力5 MPa,温度20℃。流速20 L.h-1,萃取时间90 min;GC-MS条件:DB-1石英毛细管柱(0.2 mm×30 m,0.25μm);载气为高纯氦气,流量1.0 mL.min-1;质谱分析条件:EI电离源70 eV;离子源温度220℃。结果从飞机草挥发油中共鉴定出69个化合物,占总挥发油的57.57%,主要成分为9-甲基-10-亚甲基-三环[4.2.1.1(2,5)]癸-9-醇(13.66%),富马酸乙基-2-(2-亚甲基环丙基)丙酯(5.02%),4-(4-羟基-2,2,6-三甲基-7-氧杂双环[4.1.0]庚-1-基)-3-丁烯-2-酮(3.24%),4-羟基-2-戊酮(3.16%)。结论有68个化合物首次从飞机草中报道,此外许多相对含量较大的成分未能从数据库中检索,提示极有可能是新的挥发油成分,有待应用色谱分离技术和波谱鉴定技术对飞机草挥发油进行更深入的研究。

高效液相色谱法测定吲达帕胺的血药浓度

目的建立测定吲达帕胺血药浓度的方法。方法选择以乙腈(pH=2.8)磷酸缓冲液(32∶68)为流动相,格列吡嗪为内标,血浆样品以重蒸乙醚为提取溶剂,经DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm)柱分离后,在紫外吸收波长240nm处进样40μL检测。结果吲达帕胺血浆样品在25～500ng/mL的范围内线性关系良好(r=0.9996,n=6),绝对回收率>67%,相对回收率>92%日内日间的RSD<6%。结论本法简便、准确、灵敏、重现性好,可用于吲达帕胺的药物动力学的研究。

小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较

目的比较高效液相色谱(HPLC)-紫外光(UV)、HPLC-荧光(FLD)和HPLC-质谱(MS)3种检测方法测定小鼠不同脑组织中单胺类神经递质含量的优劣性,并应用最优方法测定血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质的含量。方法分别采用HPLC仪器搭配UV、FLD和MS检测器建立小鼠不同脑组织中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)的含量测定方法,并进行系统的方法学验证,采用HPLC-FLD法对血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质DA、NE和5-HT含量进行测定。结果 HPLC-UV法的定量限分别为DA 103.5ng/mL、NE 107.5ng/mL、5-HT 93.6ng/mL;HPLC-FLD法的定量限分别为DA 10.35ng/mL、NE 10.75ng/mL、5-HT9.36ng/mL;HPLC-MS法的定量限分别为DA 10.35ng/mL、NE 32.25ng/mL、5-HT 9.36ng/mL。HPLC-FLD和HPLC-MS法对DA和5-HT的测定优于HPLC-UV法,HPLC-FLD法对于NE的测定优于HPLC-MS法,而HPLC-MS法存在较强的基质效应。HPLC-FLD法检测结果示血管性抑郁小鼠海马组织中DA含量最低,大脑皮质中5-HT含量最低,而不同脑组织中NE含量没有明显差别。结论与HPLC-UV法和HPLC-MS法相比,HPLC-FLD法更适用于小鼠脑组织中单胺类神经递质(DA、NE、5-HT)的含量测定。DA和5-HT可以用作血管性抑郁症疾病的诊断标志物。

癌症患者尿液2，3-吲哚醌含量的测定及其临床意义

目的探讨癌症患者尿液2,3-吲哚醌含量测定的临床意义。方法采用高效液相色谱法测定健康志愿者及不同系统癌症患者尿液2,3-吲哚醌的含量。结果健康志愿者与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者尿液中2,3-吲哚醌含量有显著性差异(P<0.05);与腹部恶性肿瘤患者之间有极显著性差异(P<0.001);腹部恶性肿瘤患者分别与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者之间有显著性差异(P<0.05);胸部恶性肿瘤患者术前和术后7 d之间,以及不同TNM分期之间无显著性差异(P>0.05)。结论尿液2,3-吲哚醌含量可能为临床诊断癌症的检测指标。

RP-HPLC法研究盐酸伐昔洛韦片人体生物利用度

目的建立准确度高、灵敏性好的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定血浆中盐酸伐昔洛韦水解产物阿昔洛韦的浓度,以研究盐酸伐昔洛韦片在体内的药代动力学及相对生物利用度。方法采用两制剂双周期交叉试验设计,18名男性健康志愿者先后分别单剂量口服盐酸伐昔洛韦受试片剂或参比片剂300mg,采用RP-HPLC,以更昔洛韦为内标,测定血浆阿昔洛韦浓度。用3P97药代动力学程序处理血药浓度数据并计算参数,并作出生物等效性评价。结果口服盐酸伐昔洛韦受试片剂和参比片剂后的药代动力学参数AUC0-t分别为(9.87±2.48)和(9.94±2.67)(μg.h)/ml,AUC0-∞分别为(10.84±2.98)和(10.83±3.18)(μg.h)/ml;Cmax分别为(3.06±0.66)和(3.16±0.66)(μg.h)/ml;Tmax分别为(1.25±0.26)和(1.17±0.24)h。受试盐酸伐昔洛韦片剂以AUC0-t和AUC0-∞计算其相对生物利用度分别为(100.6±11.7)%和(101.7±13.3)%。结论建立的阿昔洛韦血药浓度监测方法灵敏、准确,测定结果可靠;统计分析结果表明受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

HPLC-TOF/MS鉴别大鼠给药重楼提取物后尿液中甾体皂苷类成分

目的采用高效液相-飞行时间质谱(HPLC-TOF/MS)联用技术快速分离并鉴别大鼠灌胃给予重楼提取物后尿液中甾体皂苷类成分,以探索重楼皂苷在大鼠体内的代谢途径。方法选用SD大鼠,按照1.6g/kg体质量灌胃给予重楼提取物,收集给药后24h内的尿液。样品分析采用MG-C18柱(3.0mm×100mm,3.0μm),乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,在TOF/MS电喷雾离子源下采集正、负离子模式下的数据。利用TOF/MS得到的精确相对分子质量,对照化学成分数据库,对尿液中的甾体皂苷类成分进行鉴别。结果共鉴别出尿液中20个甾体皂苷原型成分,通过碎片离子以及与对照品相比较鉴别出2对同分异构体:重楼皂苷Ⅶ和偏诺皂苷元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)-α-L-鼠李吡喃糖基(1→3)[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷,纤细薯蓣皂苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)[α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷。结论该方法准确、可靠,可成功用于重楼体内成分的鉴别,可为药动学和药效学研究提供参考。

维氏气单胞菌吉林分离株外膜蛋白AⅡ基因的克隆及生物信息学分析

目的克隆维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,AV)吉林株外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析。方法根据维氏气单胞菌已知OMPAⅡ基因序列设计合成一对引物,通过PCR技术扩增OMPAⅡ基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,阳性重组质粒经PCR鉴定后进行序列测定,通过BlastN分析维氏气单胞菌OMPAⅡ基因序列与其他菌种OMPAⅡ序列同源性,并构建系统进化树,同时对维氏气单胞菌OMPAⅡ蛋白进行生物信息学分析。结果克隆基因长1 001bp,与GenBank报道的基因序列同源性为95%,生物信息学软件分析OMPAⅡ蛋白无跨膜区,其N端含有1个信号肽,二级结构以β折叠和β转角为主,有10个区域可能存在B细胞抗原表位。结论成功的克隆维氏气单胞菌OMPAⅡ基因,并对OMPAⅡ蛋白的相关生物信息学进行了分析。

溴泰君在大鼠的组织分布和排泄

目的 研究溴泰君(W198)在大鼠的组织分布和排泄,为临床试验提供依据。方法 用HPLC紫外检测方法测定大鼠ivW198后生物样品中的药物含量。结果 大鼠ivW198 20mg·kg-1后组织的药物含量远高于相同时间的血清药物浓度。药物主要分布在肺,其次在肾、心、肝等组织,大部分组织的药物含量于给药后0 25h最高,给药后2h显著下降,至24h均缓慢下降;大鼠ivW198 20mg·kg-1后从尿、粪(0-96h)和胆汁(0-24h)中排泄的原型药物分别占给药总量的0.150%, 2.1%和0.063%。结论 W198主要分布于肺组织中。从尿、粪和胆汁中排泄的原型药物很少。

3,5-双三氟甲基苯乙醇的手性毛细管电泳拆分

目的建立用毛细管电泳对3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体的手性拆分方法。方法采用环糊精及其衍生物作为手性选择剂,用毛细管电泳技术对3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体进行分离,考察了环糊精种类、环糊精浓度、缓冲溶液pH值、缓冲溶液浓度、分离电压、温度等因素对分离的影响,并对分离条件进行了优化和重复性考察。结果在pH=8.0的磷酸缓冲溶液(0.05 mol.L-1)中,以0.01 mol.L-1的磺丁基-β-环糊精为手性选择剂,15 kV为分离电压,在15℃下可使3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体达到基线分离,分离度为1.54。分离度RSD小于2%,迁移时间RSD小于5%。结论该方法简单快速,灵敏度高,重复性好。

单剂量口服“生脉饮”人体药代动力学的研究

目的研究健康志愿者单剂量口服生脉饮的药代动力学特征。方法12名健康志愿者口服单剂量生脉饮300 ml后,于不同时间点采集血样。用高效液相色谱法检测人血浆中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re浓度,用3p97软件程序进行数据处理,计算药物动力学参数。结果人参皂苷Rg1和Re的药时曲线均符合一房室模型,Rg1和Re的平均达峰时间Tmax分别为(4.86±1.07)和(4.75±1.04)h,平均峰浓度Cmax分别为(26.33±12.74)和(43.32±16.47)μg/ml,消除半衰期t1/2ke分别为(7.99±4.63)和(7.91±4.56)h,清除率CL分别为(2.73±2.50)和(1.23±1.12)ml/h,表观分布容积V分别为(31.10±32.26)和(11.96±9.40)ml,AUC0-30分别为(205.96±114.57)和(338.73±89.10)(μg.h)/ml。结论采用高效液相色谱法检测简便、准确,适合人参皂苷Rg1和Re血浆浓度测定。口服300 ml生脉饮吸收较快,在所试剂量下,人参皂苷Rg1和Re属一级动力学吸收、消除过程。

高效液相色谱法测定人体血浆中替加氟的方法研究

目的建立一种高效液相色谱法测定人体血浆中替加氟浓度的方法。方法色谱柱为Zorbax-ODS C18（250 mm×4.6mm,5μm）,检测波长为273 nm,流动相为0.01 mol/L磷酸盐（用磷酸溶液调pH 5.2）-甲醇（85∶15）,流速1.0 mL/min,柱温为35℃。结果替加氟血药浓度在0.1-20μg/mL（r=0.999 7）内线性关系良好,最低检测浓度为0.1μg/mL,绝对回收率均在95%以上,相对回收率在94%-104%,日内、日间RSD分别为3.0%和4.1%。结论本方法简单、快速、准确,适用于临床药动学研究及血药浓度监测。

用液相色谱-质谱-质谱法测定人血清中非洛地平浓度

目的:建立液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)法测定人血清中非洛地平的浓度。方法:血清样品经液-液萃取预处理。色谱柱为Xterra柱(50 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为乙腈-0.02%氨水,采用梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。非洛地平和尼莫地平(内标)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z382.1→145和m/z417.2→92,两者的保留时间分别为1.24 min和1.06 min。结果:非洛地平在0.04～20 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7),低、中、高浓度(0.08、8.0、16.0 ng/mL)的日内RSD分别为6.60%、7.22%和5.01%(n=6),日间RSD分别为9.42%、8.46%和5.12%(n=14),准确度为98.21%～106.20%(n=6)。结论:本法操作简便,检测准确、灵敏、专一,重复性好,适用于非洛地平血药浓度监测和药动学及生物利用度研究。

HPLC法测定人血浆中对乙酰氨基酚浓度

建立测定人血浆中对乙酰氨基酚浓度的HPI．C法，并应用于人体药代动力学研究。血浆样品用6％高氯酸沉淀蛋白。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18柱，流动相为0．02mol·L^-1甲酸铵溶液（含甲酸0．2％）-甲醇-乙腈（88：6：6），流速为1．0mL·min^-1，紫外检测波长245nm。血浆中内源性物质对样品测定无干扰。本方法线性范围为0．1-20μg·mL^-1（r=0．9996），最低定量浓度为0．1μg·mL^-1，方法回收率为99．0％-100．2％，日内、日间RSD均小于6％。本法简便、准确，适用于对乙酰氨基酚药代动力学的研究。

不同产地三叶青中重金属元素含量测定研究

目的:建立三叶青中5种重金属元素砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)、镉(Cd)和铅(Pb)含量测定的方法。方法:三叶青样品经过前处理后,采用原子荧光光谱法测定As和Hg,采用原子吸收光谱法测定Cu、Pb和Cd。结果:5种重金属元素检测方法线性关系良好,r值均大于0.9992,加样回收率为95.31%~99.87%,RSD为2.54%~6.95%。结论:不同产地的三叶青样品重金属元素检测结果按《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》规定计算,Pb、As、Cu、Hg、Cd均未超标,该方法加强了三叶青重金属检查,为三叶青药材的规范化种植和安全评价提供实验依据。

再次输注利妥昔单抗致严重不良反应1例

华氏巨球蛋白血症(waldenstrom macroglobulinemia,WM)属于罕见B细胞淋巴瘤,年发病率为3/100万,占全部B系淋巴瘤1%~2%[1]。利妥昔单抗(Rutuximab)为NCCN指南(2013年版)治疗WM的一线用药,因WM发病率极低,目前关于利妥昔单抗治疗WM致严重不良反应的研究鲜有报道。