基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的三种基原溪黄草及其干预小鼠肝纤维化的血清化学研究

目的应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术研究三种基原溪黄草及其在肝纤维化小鼠口服给药后的血清化学成分。方法采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm);流动相为0.1%甲酸水(A)-甲醇(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃。通过结合高分辨质谱数据及质谱裂解规律,对三种基原溪黄草药材样本及其给药小鼠血清的化学成分进行表征。结果在三种基原溪黄草药材中鉴定出40个化合物,主要包括二萜类、黄酮类、酚酸类化合物。在小鼠血清中鉴定出2个入血成分以及2个可能的代谢产物。结论本研究初步鉴定了三种基原溪黄草在四氯化碳致肝纤维化小鼠中的入血成分及部分代谢产物,为其用于治疗肝纤维化的药效物质基础提供了理论参考。

HPLC-MS-MS法测定人血清中氟西汀、文拉法辛及其代谢产物与应用

建立可同时快速测定人血清中氟西汀(Fluoxetine, FXT)、文拉法辛(Venlafaxine, VEN)及其活性代谢产物N-去甲氟西汀(Norfluoxetine,N-FXT)、O-去甲文拉法辛(O-Desmethylvenlafaxine,O-VEN)浓度的方法,并应用于临床,监测相关药物在人体中的代谢情况。临床样本,以甲醇-甲酸混合溶剂作蛋白沉淀剂,处理后,离心后取上清,进样高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS),使用Phenomenex Kinetex Biphenyl色谱柱(2.1 mm×50 mm, 2.6μm),流动相为含0.1%甲酸和1 mmol/L甲酸铵的水和甲醇,流速0.4 mL·min^(-1),柱温45℃,进样量5μL,采用电喷雾正离子多反应监测模式检测。检测方法特异性和选择性较好,血药质量浓度分别在10~1 000,32~3 200,18~1 800,18~1 800 ng/mL范围内线性良好,回收率在85%~115%之间,批内批间精密度RSD均小于15%,临床样本在室温放置24 h、反复冻融、长期冻存保存下,检测准确度在85%~115%之间,相对基质效应均在20%以内,临床检测患者血药浓度,VEN加O-VEN,结果平均(263.89±176.67) ng/mL;FXT加N-FXT结果平均(139.12±121.3) ng/mL。方法样品用量少,处理简便,准确度高,特异性强,稳定性好,适用于同时快速测定人血清中FXT、VEN及其活性代谢产物的浓度,为精准个性化用药提供可靠的方法学支持。

银柴胡多糖超声辅助提取工艺优化及抗氧化活性分析

目的:为了提高银柴胡多糖得率,对银柴胡多糖提取工艺参数进行优化,并评价其体外抗氧化活性。方法:采用超声辅助提取银柴胡多糖,在单因素实验基础上结合响应面法(Box–Behnken Response Surface)对提取工艺参数进行优化,并采用Sevag法除蛋白得银柴胡粗多糖,进一步对其抗氧化活性进行分析。结果:优化后银柴胡多糖最佳提取工艺参数为超声温度50℃、时间3.20 h、提取次数2次,在此条件下多糖得率最高,为28.24%±0.10%,多糖含量为59.13%;体外抗氧化测定结果显示,银柴胡粗多糖清除DPPH自由基、OH自由基、ABTS+自由基的IC_(50)分别是5.47、2.40和1.44 mg/mL,表明其具有一定的抗氧化能力。结论:本研究经优化得到的银柴胡多糖提取工艺切实可行,可为银柴胡资源的开发利用提供理论依据。

华佗豆的红外指纹图谱和薄层色谱鉴别及酚酸类成分含量测定

目的建立瑶药华佗豆药材的红外指纹图谱、薄层色谱鉴别和酚酸类含量测定的方法。方法采用红外光谱法构建10批华佗豆药材的指纹图谱,采用相似度分析、聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析对光谱数据进行分析;采用薄层色谱法对华佗豆中的绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C的含量。结果红外光谱法可推测出华佗豆含有有机酸、黄酮类等成分,红外指纹图谱共标定9个共有峰,相似度评价>0.999。聚类分析、主成分分析结果显示分为两大类,产地S1、S2、S3聚为一类,其余产地为一类;偏最小二乘判别分析筛选出5种差异性成分(VIP>1);建立的薄层色谱的供试品和对照品显示位置一致,且斑点清晰,分离度好;华佗豆中6种酚酸类成分线性关系均良好(r≥0.9992),平均加样回收率97.77%~102.59%,相对标准偏差(RSD)均≤2.90%。结论建立的华佗豆药材薄层色谱和红外指纹图谱方法简便可行、结果稳定;建立的华佗豆中6种酚酸类成分的含量测定方法结果可靠,为该药材的质量控制研究奠定科学基础。

基于网络药理学和分子对接的锁阳治痿弱活性成分筛选及含量测定

目的:基于网络药理学和分子对接技术筛选锁阳治痿弱的功效成分并测定其含量。方法:利用BATMAN-TCM数据库及文献检索获取锁阳的化学成分并筛选出潜在的活性成分;通过PharmMapper和Genecards等数据库筛选潜在活性成分靶标和性功能障碍的靶标;利用STRING数据库获取成分与疾病交集靶标之间的相互关系,构建PPI网络和成分-靶点-通路网络分析锁阳干预性功能障碍的核心靶标;通过Autodock进行核心靶标与活性成分的分子对接,筛选出锁阳治痿弱的功效成分并测定其含量。结果收集并筛选到锁阳的40个潜在的活性成分,通过调节76个潜在靶标参与疾病过程。分子对接结果显示槲皮素、木犀草素、熊果酸、根皮苷4种成分与核心靶点结合能力突出,为锁阳改善性功能障碍的主要物质基础。HPLC测定锁阳中其主要存在形式芦丁、木犀草苷、根皮苷、熊果酸的含量分别为0.331 mg·g^(-1)、0.184 mg·g^(-1)、1.768 mg·g^(-1)、0.017 mg·g^(-1)。结论:芦丁、木犀草苷、熊果酸、根皮苷为锁阳治痿弱的功效成分,建立的HPLC含量测定方法简便、稳定、可靠。

经典名方开心散制剂工艺研究

目的:研究经典名方开心散提取制剂工艺,提高活性成分转移率,保证药品质量。方法:采用水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油,Box-Behnken实验设计方法优化所得挥发油包合工艺;以总多糖量、总皂苷量和出膏率为指标,通过均匀设计法确定后续水煎煮提取的料液比、时间和次数等条件。结果:确定β-环糊精与挥发油比例为6∶1,包合温度40℃,包合时间为80 min的包合工艺;水煎煮提取条件为料液比1∶12,提取时间3 h,提取次数3次。结论:该实验确定了开心散提取制剂工艺条件,挥发油成分转移率增加近94.94%。

贝伐珠单抗联合奥希替尼协同抑制非小细胞肺癌细胞增殖及机制

目的研究贝伐珠单抗(Bev)联合奥西替尼(Osi)对人非小细胞肺癌细胞株(A549)的增殖抑制作用、诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,并分成4组:空白对照组、Bev组、Osi组及联合处理组(Bev+Osi)。利用CCK-8实验检测各组处理后的细胞增殖情况;细胞凋亡情况、活性氧水平变化通过流式细胞术实验检测;细胞凋亡相关蛋白和信号通路相关蛋白的表达通过蛋白免疫印迹法进行检测。结果CCK-8结果显示,联合处理组对A549细胞的增殖抑制作用最强,对人胚肺成纤维MRC-5细胞几乎无毒副作用,与单独用药处理组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示,联合处理组对A549细胞的诱导凋亡作用更强,较2个单药处理组分别高出45.7%和42.6%;联合处理组能够上调A549细胞中的活性氧水平,加入N-乙酰半胱氨酸后,诱导凋亡能力恢复到2个单药处理组相近的水平。蛋白免疫印迹法结果显示,联合处理组能够抑制ERK的磷酸化水平,上调p38的磷酸化水平。结论Bev与Osi联合使用能够上调细胞中ROS水平,调控p38/ERK信号通路,降低线粒体膜电位,引发A549细胞凋亡,联合使用具有明显的优势,有望成为肺癌治疗领域的重要策略。

肾性高血压住院患者用药特点及经济负担研究

目的分析肾性高血压住院患者的用药特点与经济负担,为减轻患者经济负担及优化卫生资源的合理配置提供依据。方法回顾性收集整理某大型综合医院2019年1月1日至2022年9月30日的肾性高血压住院患者信息,分析用药特点、逐年住院费用变化、各项住院费用变化、各临床特征与住院费用的相关关系,多元逐步回归分析住院费用影响因素。结果共纳入3286例患者,以男性、30~60岁、湖南患者居多。用药种类数为(2.69±1.51)种,使用两类药物进行治疗的患者最多。以DDDs总值为指标排序,使用最多的是钙离子通道阻滞剂、α受体阻滞和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂类。住院总费用均值为(39690.53±85305.44)元,中位数为10797.83元,P25~P75为7130.48~20677.13元;西药费均值为(10206.41±24170.42)元,中位数为1961.61元,P25~P75为857.25~5012.93元。单因素回归分析结果提示患者性别、年龄、住院天数、是否进行肾移植以及当前肾脏病所处分期对住院总费用的影响差异均有统计学意义(P<0.05)。多元逐步回归分析结果提示对人均住院总费用的影响程度从大到小依次为住院天数、是否进行肾移植、当前肾脏病所处分期、性别和年龄。结论肾性高血压患者由于需要多种药物联合治疗,住院天数以及是否进行肾移植是肾性高血压患者住院总费用影响程度最大的因素,通过早筛查早诊断早治疗、制订合理的和个性化的药物治疗方案、进行药物经济学研究等措施可以在一定程度上降低肾性高血压患者的经济负担。

加味桃红四物汤含量测定、指纹图谱以及抗氧化活性研究

建立加味桃红四物汤(白及、桃仁、红花等)HPLC指纹图谱,测定其中没食子酸、苦杏仁苷、绿原酸、芍药内酯苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊花糖苷、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯、苯甲酰芍药苷和藁本内酯共12种成分的含量。色谱柱采用(250 mm×4.6 mm,5μm)Shim-pack VP-ODS柱,柱温30℃;以0.05%磷酸-甲醇为流动相梯度洗脱,体积流量为1.2 mL/min,检测波长分别为210、225、280 nm。10批加味桃红四物汤样品指纹图谱中,共标定26个共有峰,不同批次间相似度均大于0.96,且所有成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998),平均回收率98.03%~101.43%,RSD为0.72%~1.93%。同时,对加味桃红四物汤的抗氧化活性进行测定,结果显示其清除DPPH、ABTS及羟基自由基的IC_(50)分别为51.11、44.13、275.39μg/mL。该方法准确、简便、快速,可用于抗氧化活性良好的加味桃红四物汤的质量控制。

黑干姜的加工方法、化学成分、药理作用的研究进展及其质量标志物的预测分析

黑干姜是四川特有的道地药用干姜的一种商品规格,经古法加工而成,也是日本药典所用干姜药材来源。黑干姜具有温中散寒,回阳通脉,温肺化饮的功效。在日本常用于加工保健食品、功能饮料。不同的加工方法、温度及干燥条件会对黑干姜的化学成分、药理作用产生影响,其化学成分主要是挥发油、姜辣素类成分,具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化的作用。但目前国内外对黑干姜的相关研究较少,并且缺乏相应的质量控制评价标准。系统综述了黑干姜的炮制方法、化学成分、药理作用的研究进展,并对质量标志物进行了预测分析,为黑干姜的质量标准建立及开发利用提供了参考。

中药饮片耐胆盐革兰阴性菌量化风险评估研究

目的建立中药饮片耐胆盐革兰阴性菌的量化风险评估方法。方法收集中国知网2012年1月1日至2021年12月31日耐胆盐革兰阴性菌数据,采用潜在失效模式和效应分析模型,从耐胆盐革兰阴性菌可能的种类、生物负载等角度进行分析,并将风险指标量化,评估风险等级。结果共纳入中药饮片品种53个(760批次)。穿心莲、两头尖、部分枸杞和部分麦冬饮片污染风险高(6.25%),红花、夏枯草和部分菊花饮片污染风险中等(4.69%),其余饮片污染风险低(89.06%)。枸杞等10个品种中药饮片中有7种(除枸杞、麦冬、菊花外)风险评估结果一致。结论建立的中药饮片耐胆盐革兰阴性菌的量化风险评估方法可行,为中药饮片的微生物控制提供了参考依据,是对当前中药饮片外源性污染物风险评估模型的补充。

二代雄激素受体抑制剂治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌的快速卫生技术评估

目的 对二代雄激素受体抑制剂治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌(nmCRPC)的安全性、有效性和经济性进行初步评估,以满足决策者的需要。方法 系统检索计算机检索pubmed、embase、the cochrane library、NHS EED和CADTH等英文数据库,中国知网(CNKI)、万方数据库和重庆维普(VIP)等中文数据库,搜集达罗他胺(Darolutamide),恩扎卢胺(Enzalutamide),阿帕他胺(Apalutamide)治疗nmCRPC的系统评价/Meta分析、经济学研究以及HTA报告,由2名评价者根据纳入排除标准提取数据.对结果进行定性分析。结果 共纳入系统评价/Meta分析18篇,经济学评价1篇,恩扎卢胺和阿帕他胺与达罗他胺间接比较无转移生存期(MFS)较高;总生存期(OS)相近无显著差异;阿帕他胺提供最大无进展生存期(PSA-PFS)的可能性最高,其次是恩扎卢胺。在涉及不良事件(AEs)的情况下,达罗他胺是首选剂,经济性方面,达罗他胺相较于其他两种药物治疗nmCRPC,成本-效果更好。结论 三种二代雄激素受体抑制剂治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌均有显著优势,其中恩扎卢胺和阿帕他胺与达罗他胺间接比较有效性较高,阿帕他胺为首选。在考虑到AEs的情况下,达罗他胺为首选剂,其不良反应和耐药性显著减少,且具有经济性优势,为完善研究,应进一步在临床扩大试验增加数据。

延胡索乙素在大鼠体内的立体选择性药代动力学

目的研究dl延胡索乙素在大鼠体内的立体选择性动力学过程。方法血浆样品经液液萃取后,用非手性手性HPLC联用法测定血浆中延胡索乙素对映体的浓度,配对t检验比较两对映体的血药浓度和药代动力学参数。结果大鼠血浆中l延胡索乙素的浓度均明显高于d延胡索乙素的浓度,两对映体的AUC,MRT和Cmax均有显著性差异。结论大鼠灌胃延胡索乙素消旋体后,两对映体在体内的药代动力学过程具有显著的立体选择性。

HPLC同时检测保健品及中成药中非法添加9种抗高血压化学药物的研究

目的 建立一种RP-HPLC-DAD 条件可同时对降压保健品及中成药中非法添加的9种化学合成降压药(阿替洛尔、氢氯噻嗪、盐酸可乐定、卡托普利、酒石酸美托洛尔、盐酸普奈洛尔、盐酸地尔硫卓、利血平、苯磺酸氨氯地平)进行检查的方法.方法 采用C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,甲醇为流动相A,0.03 moL·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH值至3.0)为流动相B,进行梯度洗脱;流速:0.7 mL·min-1;柱温:35 ℃;二极管阵列检测器,检测波长为215 nm,并同时采集200～400 nm的光谱图.结果 在本色谱条件下,9种降压药有很好的分离度,最小检出量阿替洛尔、盐酸可乐定、卡托普利、苯磺酸氨氯地平、酒石酸美托洛尔为25 ng,氢氯噻嗪、盐酸地尔硫卓为10 ng,盐酸普奈洛尔、利血平为5 ng.结论 本法简便准确,可作为降压保健品及中成药中非法添加化学成分的快速筛查方法.

高效液相色谱法测定人血中脂溶性维生素的含量

目的建立同时测定人血中5种脂溶性维生素的高效液相色谱法。方法取血清0．5mL,甲醇蛋白沉淀后用正己烷、乙醚分2次提取,提取液氮气吹干,用甲醇-氯仿(3:1)液定容进样。色谱柱:Hypersil ODS(4．0 mm×250 mm);流动相:0-4．0min 甲醇-水(90:10),4．5-9 min甲醇-异丙醇(95:5),10-20 min甲醇-异丙醇(60:40);检测波长:维生素A 325 nm,25-羟基维生素 D3和维生素D3 265 nm,维生素E 290 nm,β-胡萝卜素450 nm;流速:1．0 mL·min-1;柱温:30℃。结果维生素A和β-胡萝卜素在0．1-1．2 mg·L-1,25-羟基维生素D3在10．0-120．0 μg·L-1,维生素D3在20-240μg·L-1,维生素E在2．0-24．0 mg·L-1内线性良好;提取回收率均大于69％,方法回收率均大于92％,日内、日间RSD均小于6％;以本法测定了50例体检儿童血清中5 种脂溶性维生素的浓度。结论本方法快速、灵敏,操作简便易行。

HPLC同时测定苯巴比妥、苯妥英、卡马西平和氯硝西泮血药浓度

目的建立同时测定血清中摹巴比妥（PB）、苯妥荚（PT）、卡马西平（CBZ）和氯硝西泮浓度的HPLC.方法分析柱为Agilent C18柱（4．6mm×250mm,5μm），流动相为水-甲醇-乙腈（45：45：10），流速为1．0mL·min^-1，检测波长为254nm，柱温30℃、阿普唑仑为内标物。结果PB，PT，CBZ和氯硝西泮的线性范围分别为2．5～80，1．25～40，0.75～24，0.02～0.64μg·mL^-1，最低检测浓度分别为0．2,0．2,0．1，0．005μg·mL^-1，方法回收率分别为99．1％，100.8％，100.1％，98.1％，日内、日间RSD均〈3．5％，绝对回收率分别为91．7％，90．2％，89．9％和89．3％，RSD均〈2％。结论该方法快速、灵敏、买用，适用于治疗药物监测。

LC/MS分析大鼠体内氧化苦参碱及其主要代谢物

目的研究氧化苦参碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法以氧化苦参碱和苦参碱为对象优化液相色谱/电喷雾离子阱质谱(LC/ESIITMSn)实验条件,分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和二级质谱裂解规律,作为氧化苦参碱大鼠体内代谢物结构分析的依据。健康大鼠腹腔肌注40mg·kg-1氧化苦参碱,收集0～24h的尿样,尿样中的代谢物经C18小柱进行富集与纯化后,在优化的LC/ESIITMSn条件下进样分析。代谢物的结构推导主要依据代谢物的色谱保留时间及其电喷雾离子阱质谱(ESIITMSn)电离规律。结果在大鼠尿样中有原药及其6种I相氧化及还原代谢产物,且主要代谢物为苦参碱。未发现II相代谢物。结论本法不仅操作简便、快速,而且灵敏度高、专属性强。该分析技术是研究药物代谢最有效的方法之一。

HPLC-ESI-ITMS^n法鉴定麻黄碱及其大鼠体内主要代谢产物

目的建立快速灵敏的LCESIITMSn分析检测麻黄碱及其大鼠体内代谢物的方法。方法以麻黄碱对照品对LCESIITMS2色谱及质谱条件进行了优化,分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律,以此作为麻黄碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据。健康大鼠空腹灌胃麻黄碱10mg·kg-1,收集0～48h的尿样,经C18小柱固相萃取分离纯化后,直接采用LCESIITMSn方法对尿样进行测定。结果根据生物体内药物代谢转化规律及母体药物的色谱质谱行为规律,在尿样中鉴定出3个第I相代谢产物,未发现第II相代谢产物。结论本方法灵敏、快速、选择性高、专属性好,可用于麻黄碱的代谢产物研究。

红芪多糖的提取分离纯化及组成分析

目的获得红芪多糖纯品并且得到其单糖组成。方法通过分步醇沉法和凝胶柱色谱获得红芪多糖纯品,用气相色谱法测其组成。结果红芪多糖1和2经Sephadex G-200纯化后分别得到两个组分,红芪多糖3通过Sephadex G-25得到两个组分;红芪多糖1,2,3均由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖五种单糖组成。结论分步醇沉法获得的三种多糖1,2,3经Sephadex G-200和Sephadex G-25纯化可获得红芪多糖纯品,GC法测其组成方法简便可行。

代代叶、花与果挥发油中化学成分的GC-MS分析

目的通过对闽产代代叶、花、果挥发油中主要化学成分的研究,分析比较其中化学成分组成及其含量的差别。方法采用水蒸气蒸馏法分别从闽产代代的新鲜叶、花及果中提取挥发油,运用气相色谱-质谱联用法,分析比较其中化学成分的组成差别,并用归一法测定各组分的相对含量。结果代代叶油中分离出41个组分,代代花油中分离出41个组分,而代代果皮挥发油中分离出43个组分。结论闽产代代叶、花、果挥发油中主要化学成分的组成及其含量显示出差异,化学成分的研究为充分利用和综合开发其药用价值提供了实验依据。