十堰猕猴桃溃疡病病原鉴定及防治试验

由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种侵染引起的猕猴桃溃疡病严重影响了各地猕猴桃的生长。为明确鄂西北猕猴桃溃疡病病原形态及生物型,筛选合适的杀菌剂,探索避雨栽培对病害的控制效果,为防治病害提供科学依据,采用形态学和分子生物学技术鉴定猕猴桃溃疡病病原菌及生物型,使用抑菌圈法筛选15种杀菌剂对其抑制效果,调查避雨栽培和露天不同情况下猕猴桃溃疡病的发病率、病情指数和防治效果。结果表明,通过形态特征、16S rDNA及特异性引物鉴定到的菌株K-2为Pseudomonas syringae,生物型为biovar 3。室内毒力测试筛选到7种药剂对猕猴桃溃疡病菌有抑制效果,避雨栽培对猕猴桃溃疡病菌的防治效果可以达到58.06%,通过在避雨栽培下施用50%氯溴异氰尿酸可溶粉剂防治猕猴桃溃疡病,防治效果高达83.87%,说明避雨栽培对猕猴桃溃疡病具有较好的防治效果。

茉莉酸甲酯对猕猴桃果实抗葡萄座腔菌过程中能量代谢和膜脂代谢的影响

【背景】由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的软腐病是猕猴桃果实贮藏期的重要病害,对猕猴桃产业造成了严重的经济损失。茉莉酸甲酯(MeJA)是一类广泛存在于植物体内的生物信号分子,前期研究发现MeJA能够有效诱导猕猴桃果实抵御B.dothidea的侵染。【目的】分析MeJA对果实能量代谢和膜脂代谢的影响,深入解析MeJA介导的猕猴桃果实抗病机理。【方法】以‘红阳’猕猴桃(Actinidia chinensis cv.Hongyang)为试验材料,分3组进行试验:接种组(Inoculation),果实不经过MeJA处理,但接种B.dothidea;MeJA+接种组(MeJA+inoculation),果实经过0.1 mmol·L^(-1)MeJA熏蒸处理24 h并接种B.dothidea;对照组(Control),不作任何处理,即未经MeJA处理且不接种B.dothidea。所有果实于培养箱((20±1)℃、相对湿度90%—95%)中贮藏8 d。利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(H2DCFDA)染色分析果实活性氧(ROS)积累情况,测定丙二醛(MDA)含量和相对电导率,分析磷脂酶D(PLD)、脂肪酶(LPS)、脂氧合酶(LOX)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、H^(+)-ATP酶(H+-ATPase)、Ca^(2+)-ATP酶(Ca^(2+)-ATPase)和细胞色素C氧化酶(CCO)活性及其相应基因的表达,利用高效液相色谱仪(HPLC)检测三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)、草酰乙酸和延胡索酸的含量,并对接种组和MeJA+接种组猕猴桃果实膜脂代谢和能量代谢指标进行相关性分析。【结果】与接种组相比,MeJA处理抑制了接种B.dothidea果实中活性氧(ROS)的过量累积,减缓了膜脂过氧化程度,并有效降低了PLD、LPS和LOX活性及AcLOXs、AcPLD和AcLPS的表达,但提高了SDH、MDH、H^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase和CCO的活性及AcSDH、AcMDH、AcH^(+)-ATPase、AcCa^(2+)-ATPase和AcCCO转录水平,促进了ATP、ADP、草酰乙酸和延胡索酸的产生,延缓了果实能荷的下降,保障了果实抵御病原菌所需的能量。相关性分析表明,猕猴桃果实膜脂代谢与ROS的积累呈正相关,而与能荷呈负相关。【结论】MeJA诱导猕猴桃果实对B.dothidea的抗性与其调控果实能量水平和减缓ROS参与的膜脂代谢进程有关。

福建猕猴桃细菌性枯萎病的病原菌鉴定

为明确近年来在福建省宁德市蕉城区石后乡猕猴桃苗圃新发生的一种细菌性病害病的原菌,并进一步探讨其发生流行规律,采用稀释分离法对采集病株进行病原菌的分离和纯化,对获得的细菌菌株进行致病性测定,通过柯赫氏法则验证、常规的细菌生物学特性、生理生化反应、Biolog鉴定、16S rDNA和内切葡聚糖酶基因(egl)序列分析对病原菌进行分类鉴定。结果表明,从发病猕猴桃病株上获得9株细菌菌株,将其接种在健康的猕猴桃植株后,其发病症状与田间自然发病症状基本一致,且从接种后病株的茎秆和根部又重新分离到与原菌落形态相同的细菌。柯赫氏法则证实这9株细菌菌株为猕猴桃细菌性枯萎病的致病菌。这9株菌株在NA培养基上的菌落形态一致,均呈不规则型、扁平,并逐渐向四周扩散,不产生粘稠状物质,不会使培养基变色;在TTC培养基上,菌落颜色呈暗红色,产生可扩散至培养基中的红褐色色素,其流动性较差;在YDC培养基上,菌落呈乳白色。经综合分析,这9株细菌菌株均被鉴定为假茄科雷尔氏菌(Ralstonia pseudosolanacearum),生化型Ⅲ和演化型Ⅰ(亚洲组),序列变种14。这是首例青枯菌侵染猕猴桃的报道。以上研究结果为制定猕猴桃细菌性枯萎病精准有效的综合防控提供了理论依据。

猕猴桃根腐病根际土壤酶活性及真菌群落组成研究

分析猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌群落差异,可为研究猕猴桃根腐病发生机制及其调控技术提供依据。在浙江省天台县街头镇的“红阳”猕猴桃种植基地,以树龄9年的猕猴桃根腐病感病植株和未感病植株根际土壤真菌为研究对象,对菌群ITS序列进行高通量测序注释后,对比分析了真菌群落结构与多样性指数的差异,并测定分析了根际土壤脲酶、蔗糖酶和酸性磷酸酶的活性。结果表明,猕猴桃根腐病的发生极显著地降低了根际土壤脲酶、蔗糖酶和磷酸酶的活性(p<0.01)。感病植株根际土壤真菌群落丰富度指数(Chao1)显著低于未感病植株根际土壤(p<0.05)。在门分类水平上,感病植株根际土壤真菌中相对丰度降低的有担子菌门、未分类真菌和接合菌门,其差异均为极显著(p<0.01);相对丰度升高的为子囊菌门,其差异达极显著水平(p<0.01)。在属分类水平上,感病植株根际土壤真菌相对丰度增加的有赤霉菌属、丛赤壳属、镰刀菌属、假裸囊菌属和肉座菌属,其差异均达极显著水平(p<0.01);相对丰度降低的有未分类伞菌纲、枝鼻菌属、粗糙孔菌属、线虫草属、支顶孢属、粪盘菌属、木霉属和被孢霉属,其差异均达极显著水平(p<0.01)。猕猴桃感染根腐病后,根际土壤真菌在门和属水平上的菌群变化打破了原有的微生物拮抗平衡关系。

超声对猕猴桃溃疡病的抑制作用

首先通过设置不同超声频率、超声处理时长在体外对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Psa)进行处理,检测处理后Psa的活菌数、呼吸链脱氢酶活性,筛选具有较好杀菌效果的超声处理条件,然后对Psa侵染后的湘吉红、贝木离体枝条进行不同条件的超声处理,培养30 d后观测湘吉红、贝木离体枝条溃疡病病斑大小,探究不同超声条件对猕猴桃枝条溃疡病的抑制效果.结果表明,60 kHz超声处理45 min或者80 kHz超声处理15 min能够将贝木枝条病斑控制在2 cm左右,80 kHz超声处理30 min能将湘吉红枝条病斑控制在2 cm内,且能完全抑制贝木枝条的溃疡病感染.

猕猴桃黑头病生防菌的筛选、鉴定及防效评价

研究旨在筛选对猕猴桃黑头病病原真菌(Diaporthe eres)有拮抗作用的菌株。通过平板对峙法从陕西周至县猕猴桃根际土壤中分离筛选到1株具有明显拮抗作用的菌株BKH。显微及菌落形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析结果表明,该菌株为双向伯克霍尔德氏菌(Burkholderia ambifaria)。菌株BKH在平板上能显著抑制Diaporthe eres生长,抑菌率为72.5%,且对猕猴桃黑头病田间防效可达91.7%,在猕猴桃黑头病生物防治方面具有应用潜力。

猕猴桃溃疡病菌Ⅲ型效应蛋白HopAH1的三维结构与生化功能分析

猕猴桃溃疡病危害严重,影响猕猴桃的产量。对猕猴桃溃疡病菌14个保守的Ⅲ型效应蛋白进行了功能域预测分析,发现HopAH1属于糖基水解酶超级家族。搜索同源蛋白并结合进化树分析发现,HopAH1与丁香假单胞菌番茄致病变种的效应蛋白亲缘关系较近,而与其他同源蛋白的亲缘关系相对较远。Alpha Fold2预测三维结构发现,HopAH1具有糖基水解酶GH5家族典型的桶状结构。酶活性测定试验发现HopAH1不能水解槐树豆胶、羧甲纤维素钠以及对硝基苯基-β-D半乳糖苷等3种底物,推测可能存在其他特异性底物。使用农杆菌介导的蛋白瞬时表达体系在本氏烟中表达HopAH1,发现不能引起烟草细胞坏死。研究结果将为HopAH1的作用机制研究提供参考。

六种药剂对湘西地区猕猴桃褐斑病的防治效果

为筛选出防治猕猴桃褐斑病的高效药剂,特对6种杀菌剂的田间防治效果进行了综合评价。结果表明,40%苯甲·咪鲜胺水乳剂对猕猴桃褐斑病的防治效果最好,每隔7 d施1次,连施3次后的相对防治效果为81.05%,其病情指数仅为13.24,极显著优于其他药剂。同时,其可溶性固形物含量为13.8%,比对照高19.0%;其产量也最高,为855.7 kg·(667 m^(2))^(-1),比对照高21.4%。栽培上可将此杀菌剂作为防治猕猴桃褐斑病的理想药剂。

淡紫灰链霉菌gCLA4对猕猴桃溃疡病预防效果及抑菌活性成分分离鉴定

为明确分离自黄瓜叶片的内生淡紫灰链霉菌gCLA4菌株(gCLA4)对猕猴桃溃疡病预防效果及其抗菌活性物质,通过室内离体枝条接种及田间喷淋树干的方法评价其预防效果;借助“生物活性追踪”方法,采用离子交换树脂吸附、凝胶柱层析、质谱、核磁共振波谱分析手段对gCLA4的抑菌活性物质进行分离鉴定。室内离体枝条和田间树干喷施结果表明,gCLA4菌株发酵液对猕猴桃溃疡病的防效分别为83.43%和71.07%,明显优于市场对照生防菌剂解淀粉芽孢杆菌Ba168 WP和枯草芽孢杆菌WP。室内分析鉴定显示其主要抑菌成分为链丝菌素F。皿内抑菌结果表明,链丝菌素F与商品中生菌素原药对病菌的抑制效果差异不显著,抑菌圈直径分别为20 mm和22 mm,大于gCLA4发酵滤液的抑菌圈直径16 mm。综上可见:gCLA4对猕猴桃溃疡病防控效果显著,其活性成分链丝菌素F,具有溃疡病绿色防控生物药剂开发应用的巨大价值和潜力。

21种化学药剂对猕猴桃黑点病菌(Diaporthe phaseolorum)的室内毒力及田间防效

旨在筛选猕猴桃黑点病防治药剂并明确其防治效果。采用菌丝生长速率法,测定21种不同化学药剂对猕猴桃黑点病菌的毒力,并选择其中16种药剂进行田间药效试验。结果显示,烯肟·戊唑醇w=20%悬浮剂(SC)等9种药剂对黑点病菌具有极强的抑菌效果,其EC_(50)值均达0.05~1.12μg/mL,表现为极度敏感;其次为抑霉唑w=20%水乳剂EW、辛菌胺醋酸盐w=1.8%水剂(AS)及腐霉利w=50%可湿性粉剂(WP),其EC_(50)值为14.02~37.37μg/mL,表现为高度敏感;氨基寡糖素w=5%(AS)、嘧环·咯菌腈w=62%水分散粒剂(WG)和吡唑醚菌酯w=25%乳油(EC)的EC_(50)值分别为118.49μg/mL、195.32μg/mL和255.18μg/mL,表现为中度敏感或低度敏感;而苯醚甲环唑w=10%(WG)等6种药剂其EC_(50)值分别远大于350μg/mL,为不敏感;供试的16种药剂在田间均表现出极显著防治效果,其中:苯甲·丙环唑w=30%(EC)450 g/hm^(2)、氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑w=20%(SC)600 g/hm^(2)、嘧环·咯菌腈w=62%(WG)600 g/hm^(2)、腈苯唑w=24%(SC)900 g/hm^(2)、丙环唑·嘧菌脂w=18.7%(SC)600 g/hm^(2)、啶酰·咯菌腈w=30%(SC)900 g/hm^(2)及戊唑醇w=43%(SC)450 g/hm^(2)7种药剂处理平均防效达到84.32%~90.36%;其次为烯肟·戊唑醇w=20%(SC)900 g/hm^(2)、抑霉唑w=20%(EW)900 g/hm^(2)、吡唑醚菌酯w=25%(EC)720 g/hm^(2)、腐霉利w=50%(WP)750 g/hm^(2)、寡糖·吡唑酯w=27%(EW)900 g/hm^(2)及硝酸氨钙可溶性粒剂(SG)1500 kg/hm^(2)6种药剂处理,平均防效达到64.92%~81.78%;而其他3种药剂处理防效略差。结果表明,30%苯甲·丙环唑EC、20%氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑SC、62%嘧环·咯菌腈WG、24%腈苯唑SC、18.7%丙环唑·嘧菌脂SC、30%啶酰·咯菌腈SC、43%戊唑醇SC、20%烯肟·戊唑醇SC、20%抑霉唑EW、25%吡唑醚菌酯EC、50%腐霉利WP、27%寡糖·吡唑嘧菌酯EW 12种药剂及土施农用硝酸氨钙SG对猕猴桃黑点病均具有良好的防治效果,可作为今后防治猕猴桃黑点病的优选药剂。

贵州红阳猕猴桃棒孢叶斑病病原菌分离鉴定及防治药剂筛选

为明确贵州省红阳猕猴桃叶片上一种病害的病原菌,对病叶采用组织分离法分离得到6株病菌,通过ITS、EF-1α、β-tubulin基因进行多基因分子鉴定,6株病菌均为多主棒孢霉Corynespora cassiicola(Berk.&M.A.Curtis)C.T.Wei。采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对病原菌的抑菌效果,其中45%咪鲜胺微乳剂、20%咪鲜·嘧菌酯悬浮剂、30%吡唑醚菌酯悬浮剂、250 g/L丙环唑乳油、50%唑醚·喹啉铜水分散粒剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂的抑菌效果较好,EC50分别为0.52、0.88、2.56、2.94、4.80、4.90 mg/L。同时对6种杀菌剂进行了田间药效试验,结果表明20%咪鲜·嘧菌酯悬浮剂800倍液、10%苯醚甲环唑水分散粒剂750倍液、50%唑醚·喹啉铜水分散粒剂1500倍液、45%咪鲜胺微乳剂1500倍液防效较好,防效分别为80.86%、79.54%、76.86%、76.17%,可用于田间防治由多主棒孢霉引起的猕猴桃棒孢叶斑病。

草酸处理对采后猕猴桃抗软腐病及生理代谢的影响

以猕猴桃为试材,采用草酸(OA)浸泡的方法处理果实,研究采后OA处理对猕猴桃软腐病抗病性及生理品质的影响,以期为猕猴桃采后抗病性以及果实保鲜研究提供参考依据。结果表明:10 mmol·L^(-1) OA离体条件下对病原菌具有最佳抑菌率(92.59%)。10 mmol·L^(-1) OA处理能够有效延缓损伤接种猕猴桃果实失重率上升和硬度的下降,抑制可滴定酸(TA)含量下降并维持可溶性固形物(TSS)含量在较高水平;OA处理还降低了损伤接种猕猴桃果实中丙二醛(MDA)和游离脯氨酸(Pro)的积累,促进类黄酮和总酚物质含量提高,抑制过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性,但对超氧化物歧化酶(SOD)活性影响不明显;OA处理还提高了几丁质酶(CHI)和葡聚糖酶(GLU)活性,并延缓了苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的下降。综上,10 mmol·L^(-1) OA处理可以提高果实抗病性,延缓猕猴桃贮藏期的后熟软化,保持良好的果实品质。

湖北省猕猴桃周年病害病原菌鉴定分析

2019—2020年4月、6月及11月对湖北省赤壁、十堰、武汉、咸丰、宜昌及建始6个地区共计49个代表性栽培园区进行了猕猴桃病害调查。基于感病症状采集大量典型病害样本,综合生物学特性、分子鉴定及致病力测试进行病菌分析。结果表明,细菌性溃疡病及真菌性软腐病、灰斑病、褐斑病、黑斑病、炭疽病、根腐病为湖北省猕猴桃主要病害。该分析结果为湖北省后期病害的预测预报及综合防治提供了理论依据。

林下套种对猕猴桃溃疡病的影响

为充分利用猕猴桃园资源,对猕猴桃溃疡病进行防控,增加果农收入,2021年,根据猕猴桃树栽培规律和方法,选择了油菜、黑豆、白菜、紫云英、苦荞以及蒲公英等6种作物进行林下套种对比试验。结果表明,选择的6个套作作物均能降低猕猴桃溃疡病的发病率,其中防控效果最好的是蒲公英,防效达64.56%。在次年对林下套种蒲公英进行进一步试验,结果表明,套种蒲公英可降低猕猴桃溃疡病的发病程度,病情指数防效为61.18%,病株率防效为48.57%。同时,蒲公英收获每年能为果农增加收入4 000元/667m^(2),提高了果园的资源利用率,实现了农民增收增产。

利用小RNA测序鉴定江西奉新猕猴桃病毒种类

为探明江西省奉新县猕猴桃感染病毒的情况,2020年5月从该县山口、农合和新西蓝3个主要猕猴桃种植区共采集23份疑似病毒病叶片样品,利用小RNA深度测序技术对混合样品进行病毒检测,并通过RT-PCR和测序验证。结果共检测出4种病毒,分别是猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)、猕猴桃病毒B(Actinidia virus B,AcVB)、猕猴桃褪绿环斑相关病毒(Actinidia chlorotic ringspots associated virus,AcCRaV)和柑桔叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV),在23份样品中的检出率依次为87.0%、56.5%、65.2%和60.9%,多数样品存在病毒复合侵染,复合侵染率81.8%。表明引起奉新县猕猴桃病毒病的毒原主要有AcVA、AcVB、AcCRaV和CLBV 4种,优势毒原为AcVA,病毒复合侵染发生普遍。

安徽省金寨县猕猴桃病害调查

针对安徽省金寨县猕猴桃日益严重的病害问题,于2021年4、6及11月对10个园区进行了猕猴桃周年病害调查。基于感病症状采集大量典型病害样本,综合生物学特性、分子鉴定及致病力测试进行病菌分析,结果表明,安徽省金寨县猕猴桃主要病害为细菌性溃疡病,真菌性软腐病、褐斑病、炭疽病及黑斑病。该结果为金寨县后期病害的预测预报及综合防治提供理论依据。

猕猴桃种传潜隐病毒外壳蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

猕猴桃种传潜隐病毒(actinidia seed borne latent virus, ASbLV),属于乙型线状病毒科Betaflexiviridae李属病毒属Prunevirus,是一种在我国猕猴桃上广泛发生的病毒。本研究通过RT-PCR方法克隆ASbLV的外壳蛋白基因,并连接到原核表达载体pET28a(+)上,转化大肠杆菌Rosetta (DE3),经IPTG诱导后可表达分子量约为28 kD的融合蛋白。经过Ni^(2+)-NTA树脂纯化融合蛋白,然后以其为抗原制备多克隆抗体。Western blot结果表明,多克隆抗体的效价为1∶4 000。该多克隆抗体只与ASbLV发生特异性反应,而不与猕猴桃病毒1、猕猴桃病毒A、苹果茎沟病毒、柑橘叶斑驳病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒发生反应,说明该多克隆抗体特异性良好。利用间接ELISA对36份猕猴桃田间样品进行了ASbLV检测,检测结果表明其中20份样品被ASbLV侵染,且间接ELISA检测结果与RT-PCR检测结果一致。本研究建立的间接ELISA方法能够有效地应用于猕猴桃田间样品中的ASbLV检测。

不同猕猴桃品种溃疡病抗性及其与枝条含糖量的关系

采用致伤接菌法对中华猕猴桃和美味猕猴桃13个栽培品种的溃疡病抗性进行了室内鉴定和评价,并探究了猕猴桃枝条含糖量与溃疡病的关系.结果表明:所有供试材料的离体枝条在接种病原菌Psa后,溃疡病的发病率、发病时间及病斑长度均有较大差异.接种病原菌后第25天根据病斑长度由小至大排序,各品种的抗病性由强到弱依次为“米良一号”“米良二号”“楚红”“翠玉”“贝木”“湘碧玉”“湘吉”“湘吉红”“武植三号”“金艳”“东红”“贵长”“红阳”,以“米良一号”抗病性最强,“红阳”抗病性最弱.各品种猕猴桃枝条感病后,可溶性糖含量均下降.感病后可溶性糖含量仍维持在较高水平的品种,抗病性较强.枝条的还原糖含量、皮孔性状及皮层厚度与抗病性强弱无明显相关性.

红心猕猴桃溃疡病及其防治技术

湖北省恩施自治州属亚热带季风性山地湿润气候,适宜红心猕猴桃生长。多年来,由于溃疡病频繁发生,直接影响红心猕猴桃产量和品质,制约了恩施州猕猴桃产业高质量发展。本文阐述了红心猕猴桃溃疡病的发病条件、危害症状及发病原因,并提出了避雨栽培、植物检疫、农业防治及化学防治等综合防控措施,旨在为山区红心猕猴桃溃疡病的防控提供指导服务。

抗溃疡病猕猴桃新品种“先沃五号”的选育

“先沃五号”是在“炎农1号”溃疡病感染区中选育出来的抗性品种,该品种果实酸甜多汁,肉质细腻,平均单果质量101.4 g,干物质含量19.5%,可溶性固形物含量17.9%,可滴定酸含量1.1%,维生素C含量125 mg/100 g。在湖北省赤壁市种植,10月上旬成熟,丰产稳产,高抗溃疡病。