动物精子的发生研究进展

精子发生主要在动物睾丸组织的曲细精管中进行,是由多种生殖细胞、体细胞共同参与的生殖进程之一。在精子发生过程中,细胞受到关键分子的影响,阶段性连续发生着独特的关键变化(有丝分裂、减数分裂、细胞变形及成熟精子形成),贯穿着精原细胞到精子的生命起始全过程。对精子发生过程中睾丸及相关细胞、分子进行研究对于动物繁殖、物种保护以及生产力提高具有重要意义。随着测序技术的发展、多技术手段的广泛联合应用,一些新型技术手段也被应用于动物精子发生的研究当中。本文主要对精子发生关键场所、关键细胞及关键分子的研究进展进行综述,以期为动物繁殖相关科学问题的深入研究提供参考。

剪接因子hnRNPF对蒙古马精子生成的影响

旨在探究可变剪接因子核不均一核糖核蛋白F(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein F,hnRNPF)对蒙古马精子生成的影响。本研究提取并培养3岁性成熟蒙古马睾丸支持细胞;构建hnRNPF过表达慢病毒载体,将载体转染至蒙古马睾丸支持细胞中;每组3个重复,分别在转染0、24、48、72 h时利用CCK-8检测转染后细胞增殖情况并确定最佳转染时间;提取转染后与未转染的蒙古马睾丸支持细胞RNA,设计已知与精子生成相关基因的引物进行qRT-PCR试验,检测精子生成相关基因在两种细胞中的表达情况。琼脂糖凝胶电泳结果显示,hnRNPF慢病毒过表达载体构建成功;CCK-8检测发现,细胞经过表达慢病毒载体转染72 h后活性最高,并且转染后细胞活性要高于未转染细胞活性,说明hnRNPF过表达会促进蒙古马睾丸支持细胞的增殖;qRT-PCR结果显示,精子生成相关基因(PKMYT1、CDC25C、YWHAZ、BUB1、BTRC、CCNE1、CALM1、PLK1、REC8、MAPK3、ADCY7)在两种细胞中的表达量差异显著,均在转染hnRNPF过表达载体细胞中含量较高。本试验结果表明,剪接因子hnRNPF可能对于蒙古马精子生成具有直接或间接的促进作用,为提高蒙古马精子数量和精液品质提供了新的思路。

马泌乳性能影响因素及分子调控机制

反刍动物奶源一直是全世界生产和消费的主要奶源。但随着功能性食品的推广,人们开始将注意力转移到小众奶制品上。马奶成分与人乳相似且具有独特的保健作用及低致敏性,因此得到了广泛的关注。马奶需求量的增加,也使得乳用马成为研究热点。文章从组织器官到分子育种系统概括了马的乳房结构、泌乳规律、乳成分及特点及影响奶产量的因素、泌乳的分子调控机制,以期为乳用马相关理论与实践研究提供参考。

电子信息技术在动物胚胎学研究中的应用

动物胚胎学是一门探讨动物胚胎发育过程、规律及其生物学意义的科学。利用电子信息技术可以更好地了解胚胎发育的规律和机制,从而更好地了解动物生殖生理过程,为动物不孕症等疾病的诊断和治疗提供依据,为动物遗传资源保护提供技术支持。动物胚胎学研究应用到的电子信息技术有计算机辅助成像技术、荧光成像技术、人工智能、激光共聚焦显微镜、基因测序技术、三维打印技术等,论文就这些电子信息技术在动物胚胎学研究中的应用进行了介绍。

基于转录组测序筛选母马大小卵泡中颗粒细胞相关上调基因

在这项研究中,通过采用转录组测序来筛选马的大卵泡和小卵泡的颗粒细胞中的差异表达基因。样本取自三匹蒙古马的大卵泡颗粒细胞和小卵泡颗粒细胞,对上调的基因进行了GO和KEGG信号通路的分析,并使用荧光定量PCR验证了差异表达的基因。结果表明:GO分析分为3大类50组,其中50%的基因参与生物学过程(BP),30%的基因参与细胞组成成分(CC),20%的基因参与分子功能(MF);KEGG信号通路分析发现了9条通路,其中参与细胞外基质受体相互作用通路的基因富集程度最为明显。在小卵泡中筛选出7个上调基因(col1a2、col6a1、col6a2、grem、mgp、bgn、ens)。根据荧光定量PCR的结果,这些基因在小卵泡颗粒细胞中的表达远远高于大卵泡。根据研究结果,在小卵泡中可能需要更丰富的转录物表达,以便为将来转化为优势卵泡的发展可能性提供物质准备。

猪卵丘细胞和壁颗粒细胞转录组差异分析

伴随着卵泡腔的形成,颗粒细胞逐步分化成两种不同类型:壁颗粒细胞(mural granulosa cells,MGCs)和卵丘细胞(cumulus cells,CCs)。目前许多研究表明壁颗粒细胞和卵丘细胞存在功能差异。壁颗粒细胞和卵丘细胞在卵母细胞生长发育过程中发挥着非常重要的作用,在细胞周期、DNA复制、缝隙连接等重要环节担任重要角色。为研究壁颗粒细胞和卵丘细胞存在的功能差异,我们利用转录组测序技术分析了壁颗粒细胞和卵丘细胞的差异基因,又通过GO分析和KEGG信号通路分析对差异基因进行富集。结果表明,壁颗粒细胞和卵丘细胞转录组存在较大差异,两者差异显著基因多达3305个,与壁颗粒细胞相比,卵丘细胞在细胞周期和DNA复制信号通路中大多数基因表达下调,而在缝隙连接信号通路中大多数基因表达上调,两者功能上存在较大差异。

冻融囊胚移植中囊胚形态学评分对妊娠结局和新生儿出生结局的影响

目的探讨囊胚形态学评分在冻融囊胚移植(frozen-thawed embryo,FET)周期中对妊娠结局及新生儿出生结局产生的影响,为评估囊胚移植手术临床安全性和有效性提供参考依据。方法2017年5月至2021年12月于我院行FET的患者共计2576个周期进行回顾性分析。以囊胚内细胞团(ICM)及滋养细胞层(TE)评分为标准进行分组:A组(移植≥4AA级别囊胚)108周期,B组(移植4-6AB,4-6BA级别囊胚)370个周期,C组(移植4-6BB,4-6CA级别囊胚)1170个周期,D组(4-6BC,4-6CB,4-6CC级别囊胚)共928个周期,对不同组别患者的妊娠结局和新生儿出生结局进行分析比较。结果四组患者的女方年龄、BMI、不孕年限、卵巢基础储备功能、子宫内膜容受性、超促排周期促性腺激素总量及天数差异无统计学意义(P>0.05)。四组冻融囊胚移植手术后妊娠结局比较:A组冻融囊胚移植后的临床妊娠率高于B、C、D组,B组高于C组和D组(P<0.05),A组和B组间临床妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05);四组着床率比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着ICM和TE评分的下降,着床率也下降(P<0.05);四组异位妊娠率、早孕流产率和中孕流产率、多胎妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05);A组与B组、A组与C组、C组与D组间双胎妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.5)。四组新生儿出生性别、出生体重比较差异无统计学意义(P>0.05),但A组男婴出生率高于D组,出生体重低于D组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,ICM和TE评分是临床妊娠率和活产率的独立影响因素(P<0.05)。结论ICM及TE评分可作为FET周期中预测移植后妊娠结局和新生儿出生结局的一个重要参数。

几种抗氧化剂对马精液冷冻保存效果的影响

马精液的冷冻保存效果与其他家畜相差很大,这主要是由于马精液对冷冻过程更敏感,表现出更高的氧化应激与质膜损伤率,因此,需要找出更有效的方法来提高马精液冷冻保存效果。试验选取抗氧化剂谷胱甘肽(Gsh)、牛磺酸(Tau)、维生素C、蛋氨酸(Met)和原花青素(OPC),加入精液稀释液中,用精子分析仪测定冻融后马精液的总体活力(TM)、前进式活力(PM)、快速运动精子比例(RAP)、平均路径速度(VAP)和直线性(LIN),以评估不同抗氧化剂对马精液冷冻效果的影响;进一步试验选取牛磺酸为基础抗氧化剂,组合添加其他抗氧化剂后,评测抗氧化剂组合对马精子冻融后保存效果的影响;然后,选择在精液离心前、冷冻前和冷冻解冻后添加抗氧化剂,评估不同的抗氧化剂添加程序对马精液冷冻效果的影响。结果表明:单独添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂的试验组2,3,4,5马精子活力参数均有提高;不同抗氧化剂组合试验中,添加谷胱甘肽与蛋氨酸的试验组9的抗氧化效果最好,马精子活力参数指标均高于对照组,而添加牛磺酸、谷胱甘肽、蛋氨酸的试验组8的抗氧化指标多数偏低;不同时间添加抗氧化剂牛磺酸,离心前添加的试验组10的马精子活力参数最高,冷冻前添加的试验组11次之,二者均显著高于冷冻前后二次添加的试验组12(P<0.05)。说明在精液稀释液中添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂是有益的,但牛磺酸与其他抗氧化剂配合没有达到很好的抗氧化效果;抗氧化剂适宜在离心前或冷冻前添加,而冷冻前后二次添加抗氧化剂可能对精子有伤害。

动物繁殖相关lncRNA的研究新进展

长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)是一类长度大于200nt,且不具有蛋白编码潜能的RNAs,在真核生物基因表达调控中发挥着重要作用。不同物种性染色体和部分印记基因的转录能力受到lncRNA的顺式调控作用。寻找与繁殖相关的lncRNA分子,研究这些lncRNA分子及其靶基因的生物学功能,阐明lncRNA在动物繁殖中的调控机制,是动物繁殖研究的一个热点。本文主要对繁殖过程中配子发生、胎盘形成和妊娠建立、激素调节、早期胚胎发育以及性别决定和性腺发育等重要阶段lncRNA的研究进行综述,为深入探究动物繁殖调控机制提供参考。

多胎萨福克羊与哈萨克羊级进杂交后代生长性能、屠宰性能、肉品质及血液生理生化指标分析

【目的】了解天然放牧条件下多胎萨福克羊与哈萨克羊级进杂交羔羊的生长性能、屠宰性能和肉品质等,评估多胎萨福克羊对哈萨克羊的级进杂交改良效果。【方法】试验以3月龄体况、体型基本一致的多胎萨福克羊及其与哈萨克羊级进杂交F1、F2代和哈萨克公羊为研究对象,天然放牧条件下饲养,试验预试期10 d,正试期90 d。试验结束后选择接近组内平均体重羔羊各10只,屠宰前测定各试验羊体尺指标,屠宰后分别测定屠宰性能、肉品质、营养成分及血液生理生化指标。【结果】(1)多胎萨福克羊、级进杂交F1和F2代羔羊的体高、胸深、宰前活重、胴体重、屠宰率、肉骨比、眼肌面积均显著高于哈萨克羊(P<0.05);级进杂交F1代羔羊和哈萨克羊的背脂厚度、尾脂重显著高于多胎萨福克羊和级进杂交F2代羔羊(P<0.05)。(2)级进杂交F1代羔羊背最长肌水分含量显著高于多胎萨福克羊、级进杂交F2代羔羊和哈萨克羊(P<0.05);哈萨克羊背最长肌中铁、锌、镁和粗脂肪含量均显著高于多胎萨福克羊、级进杂交F1和F2代(P<0.05)。(3)多胎萨福克羊、级进杂交F1和F2代羔羊血液中白细胞数、嗜碱性粒细胞数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数等显著高于哈萨克羊,嗜碱性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、血小板总数、平均血小板体积等均显著低于哈萨克羊(P<0.05)。(4)多胎萨福克羊、级进杂交F1和F2代羔羊血清中碱性磷酸酶活性显著高于哈萨克羊,总蛋白含量显著低于哈萨克羊(P<0.05);级进杂交F1代羔羊血清中谷丙转氨酶活性、铁含量均显著低于哈萨克羊(P<0.05);多胎萨福克羊血清白蛋白含量显著高于级进杂交F1、F2代和哈萨克羊(P<0.05)。【结论】天然放牧条件下,多胎萨福克羊及其级进杂交后代的产肉性能高于哈萨克羊,随着杂交代数的增加,屠宰性能明显提升、肉品质得到改善。

种公猪精液中与繁殖障碍有关的6种病毒的检测

采用PCR和RT-PCR技术,于2006年4月～10月对上海及其周边地区的30个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品355份进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和日本脑炎病毒(JEV)等6种与猪繁殖障碍有关的病毒的检测,结果表明,日本脑炎病毒检测为阴性,检出PRRSV、PRV、CSFV、PPV和PCV阳性数和阳性率分别为6份(1.69%)、9份(2.54%)、5份(1.41%)、75份(21.1%)、6份(1.69%),有一个猪场的5份样品存在PRV和PPV混合感染。

甘氨酸及二甲基亚砜对冷冻保存兔精液活率的影响

在筛选出稀释液配方和平衡时间的基础上,探讨了不同浓度的甘氨酸及DMSO对冻融后兔精子活率的影响。试验结果表明:(1)在同一浓度的甘氨酸(分别为7.0mg.mL-1、7.5mg.mL-1和8.0mg.mL-1)条件下,解冻后精子活率与DMSO浓度呈负相关,各组彼此差异显著(p<0.05)。(2)当DMSO浓度为7.5℅时,不同甘氨酸浓度对精液冷冻效果差异不显著(p>0.05);当DMSO浓度为10℅时,甘氨酸浓度为7.5mg.mL-1组的解冻后精子活率49.82%最高,其次是7.0mg.mL-1组43.41%,8.0mg.mL-1组37.29%最低,且各组间差异显著(p<0.05);当DMSO浓度为12.5℅时,甘氨酸浓度7.0mg.mL-1组的解冻后精子活率26.69%显著低于7.5 mg.mL-1组和8.0mg.mL-1组(p<0.05),而7.5mg.mL-1组(32.97%)和8.0mg.mL-1组(34.64%)间无显著差异(p>0.05)。综上所述,獭兔精液冷冻保护液中添加7.5mg.mL-1甘氨酸和7.5%DMSO,可得到较好冷冻保存效果。

日粮中代谢能和粗蛋白水平对马冈鹅繁殖性能的影响

[目的]探讨不同代谢能水平和粗蛋白水平对马冈鹅产蛋性能以及种蛋孵化率的影响。[方法]选择健康2年龄马冈母鹅随机分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组,分别饲喂含有不同代谢能和粗蛋白水平的日粮,收集鹅蛋并进行孵化。试验期间,观察鹅群的健康状况,记录蛋重、产蛋数以及种蛋孵化率。[结果]试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的马冈鹅平均产蛋率以及平均蛋重均显著高于对照组;种蛋合格率以及种蛋受精率也明显提高,试验Ⅲ组均显著高于其他各组(P<0.05);3个试验组的饲料成本均低于对照组,其中试验Ⅲ组的饲料成本高于试验Ⅰ和Ⅱ组。[结论]日粮中代谢能和粗蛋白水平对马冈鹅的产蛋性能以及种蛋孵化率均有显著影响。

黄豆对昆明小鼠生长繁殖性能的作用

了解黄豆对昆明小鼠生长繁殖性能的影响,为提高昆明小鼠生长繁殖性能提供依据。采用雌性昆明小鼠80只,分成4组,每组20只,雌性鼠与雄性鼠合笼交配7d后取出雄性鼠,分别记录黄豆1组、黄豆2组、黄豆3组和空白组雌性昆明小鼠的孕期、分娩母鼠数、产子窝重、产子数、哺乳仔鼠1周龄个数及窝重、哺乳仔鼠2周龄个数及窝重、哺乳仔鼠3周龄个数及窝重,其中黄豆1组～3组合笼后每笼每周两次分别饲喂黄豆4、8、16g。结果发现,黄豆1组～3组分别与空白组在离乳数指标上存在显著性差异,黄豆3组与空白组在1周龄～2周龄体重指标上存在显著性差异,其他指标在黄豆组间均没有显著性差异。表明在昆明小鼠生产繁殖过程中,每笼每周2次各饲喂4g黄豆可提高仔鼠的离乳数。

GH和GHR基因多态性与滩羊生长性状的关联分析

为了解滩羊生长发育的遗传机制,寻找与生长性状相关的分子标记,试验采用PCR-RFLP方法检测宁夏滩羊GH和GHR基因的多态性,分析了多态位点不同基因型及合并基因型与滩羊生长性状的关联性。结果表明:GH基因第2内含子和GHR基因第4外显子分别经PvuⅡ和HpaⅡ酶切各产生BB(0.375 0)、AB(0.625 0)和DD(0.825 0)、CD(0.175 0)2种基因型;GH基因PvuⅡ位点的不同基因型个体初生重和6月龄体重差异显著(P<0.05),与断奶重差异极显著(P<0.01),AB为优势基因型;GHR基因HpaⅡ位点的CD基因型初生重和6月龄体重显著高于DD基因型(P<0.05),而这两种基因型与断奶重差异不显著。对这两个SNPs位点进行基因互作分析发现双杂合基因型个体各生长性状均显著高于其他基因型组合(P<0.05),并且多标记位点的组合效应高于单标记位点。说明ABCD是影响滩羊生长性状的最佳基因型组合,可作为滩羊生长性状的遗传标记。

胎次对大约克母猪繁殖性能的影响

将大约克母猪繁殖性能按不同胎次进行分组,在每组中随机抽取30头母猪生产记录,统计分析母猪不同胎次的繁殖性能,结果表明:母猪的总产仔数、活产仔数、初生窝重随着胎次的增加而逐渐提高,到第4胎达到高峰,以后随着胎次的增加繁殖性能缓慢下降,呈一定的正态分布。

驴、马卵泡发育及黄体形成的超声显像初步研究

本实验采用实时Ｂ型超声显像法，初步观察了１６头母驴和１７匹母马发情期卵泡发育及黄体形成。卵泡为一轮廓完整的液性器官，卵泡液呈无回声（暗区）。卵泡壁在排卵前变薄，回声增强，轮廓更加清晰。７５％的马卵泡在排卵前２天由椭圆形变为梨形或锥形，大部分驴的卵泡始终保持椭圆形。９０％以上的驴和／或马的卵巢上有多个卵泡发育，多卵泡发育比单卵泡发育排卵迟缓。驴的最大卵泡从排卵前５天开始迅速增大，于排卵前１天达到最大（３９．４ｍｍ），第２大卵泡于排卵前６天开始逐渐萎缩。马的最大卵泡从排卵前５天开始迅速增大，于排卵前１天达到最大（４１．８ｍｍ），第２大卵泡发育缓慢，于排卵前３天开始萎缩。血体中央基本呈无回声，间杂有网状强回声，而黄体呈强回声，间杂有低回声区。实验还观察了气温对卵泡发育及排卵的影响。

精清浓度对马精子低温及冷冻保存效果的影响

本研究旨在比较不同精清浓度对马精子低温保存效果的影响。选取4匹4～12岁英纯血种公马,收集精液用含有不同浓度精清的稀释液进行精液低温保存或冷冻,检测保存和解冻后精液质量,评价精清浓度对马精子低温和冷冻保存效果的影响。结果表明：30%和40%浓度精清组低温保存后精液TM、PM、RAP及VAP值均显著低于0%、10%和20%精清浓度组（P〈0.05）,10%精清浓度组低温保存24 h后TM值显著高于0%和20%精清浓度组,但保存至96 h后精液TM显著低于0%精清浓度组。不同浓度精清对精液冷冻效果的研究结果表明,含0%浓度精清组冻融后精液质量最优,随着精清浓度的增加冻融后活力及质膜完整性逐级递减。综上数据认为,进行马精液低温或冷冻保存时不添加精清可获得最理想的保存结果。

蒙古马、纯血马eCG分泌水平的研究

本实验通过ELISA检测不同生理状态下的蒙古马和纯血马妊娠母马在妊娠30～100d体内eCG的表达水平,比较品种、母马年龄、胎儿性别对母马eCG分泌水平的影响。结果表明:蒙古马eCG效价在妊娠第60天出现峰值,平均值为82.1IU/mL,100d出现最低值16.6IU/mL,年龄对蒙古马eCG表达水平有影响,3～5岁组极显著高于大于10岁组(P<0.01)。纯血马在妊娠60deCG效价到达峰值,平均值为64.8IU/mL,在妊娠第30天出现最低值10.8IU/mL。怀雌性胎儿纯血马eCG分泌水平极显著高于怀雄性胎儿的纯血马(P<0.01)。蒙古马eCG的表达水平极显著高于纯血马(P<0.01)。

影响马胚胎移植成功率的关键因素分析

旨在探讨影响马胚胎移植效率的几种关键因素。本研究统计了国内北京马场、河北马场和山东马场2013-2018年胚胎移植数据,3个马场供体马数量分别为15、21和25匹,受体母马数量分别为56、50和75匹。所有母马年龄为3~12岁。统计供体马冲胚时间对胚胎回收率的影响;胚胎日龄对移植后受体马妊娠率的影响;供、受体母马排卵同期化程度对移植后妊娠率的影响;受体母马居住移植基地时间对移植后妊娠率的影响。结果显示,母马在配种季节注射前列腺素(PG)+GnRH类似物或PG+hCG诱发排卵,发情周期分别为(14.5±0.8)和(14.3±1.1)d,显著低于对照组的((20.5±2.6)d,P<0.05);排卵后第8天冲洗子宫的胚胎回收率均高于第7天,但差异不显著;8日龄胚胎移植后受体马的妊娠率均高于7日龄,差异不显著;供体母马排卵比受体母马早1 d时,胚胎移植后的妊娠率最高;受体母马在移植基地居住时间大于1年时,移植后妊娠率高于居住时间小于0.5年的受体马。根据以上结果,本研究得出如下结论,PG与hCG或GnRH类似物联合使用可缩短母马发情周期,母马排卵后第8天的胚胎回收率和移植后妊娠率较高,胚胎移植时选择居住时间大于1年且排卵时间比供体晚1 d的母马作受体。