疫苗免疫后胚胎移植时间对受体牛受胎率的影响

为探究受体牛疫苗免疫后胚胎移植时间对胚胎移植效果的影响、进一步提高冷冻胚胎移植的受胎率,于2019年6月和9月、2022年9月、2023年9月分批开展试验,选取红安格斯牛、和牛、荷斯坦牛,每种牛随机分成4组(10~15 d组、16~30 d组、31~45 d组、≥60 d组),在疫苗免疫不同时间进行胚胎移植。在胚胎移植第35天采用B超仪监测受胎率。结果表明:在进行疫苗免疫后不同时间进行胚胎移植,安格斯、和牛、荷斯坦牛受胎率均为31~45 d组、≥60 d组受胎率较高,显著高于10~15 d组、16~30 d组(P<0.05)。说明牛的胚胎移植受体牛接种疫苗应与预定移植日期保持30 d以上间隔,以避免胚胎移植受胎率下降。

牛胚胎性别鉴定与取样胚胎移植应用技术的研究

本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（４／２４）。犊牛性别验证与ＳＲＹ鉴定结果均相符合。实验中对胚胎发育时期的划分，胚胎质量评定和胚龄的确定，胚龄与受体发情时间在移植中的关系，胚胎的切割取样，取样胚胎的冷冻进行了研究。

牛体细胞核移植技术

对牛体细胞核移植技术中核供体细胞周期同期化处理、电融合条件及去核方法等进行了研究。结果表明 ,血清 -饥饿组 (细胞周期同期化处理组 )的移核重构胚细胞融合率 (83.3% )、卵裂率 (70 % )和囊胚发育率 (33.8% )与血清 -选择组对应指标间无显著性差异 (82 .3%、6 9.2 %、32 .4 % ,P >0 .0 5 ) ;但上述 2组分别极显著高于血清 -随机组(6 4 .8%、33.8%、4 .35 % ,P <0 .0 1)。试验确立了场强 1.0 2 5 k V/cm、脉冲宽度 5 0μs、连续 2次电脉冲为最佳电融合条件。摸索出的点击去核法 ,对卵母细胞进行去核 ,去核成功率达 90 % ,极显著高于吸引法的 6 8.3% (P <0 .0 1) ;其囊胚发育率为 34.1% ,显著高于吸引法的 18.0 % (P <0 .0 5 ) ,与挤压法 (2 0 .9% )相比差异不显著 (P >0 .0 5 )。移核重构胚胎移植后 ,产

EGF和FBS对牛孤雌胚胎发育的影响

在卵母细胞体外成熟液中分别添加0,10,30,50ng/mL表皮生长因子(EGF),24h检查成熟率,将成熟的卵母细胞置于5μmol/L离子霉素(Ionomycin)中激活5min后,在含有6-DMAP和CCB的培养液中培养4h,最后移入CR1培养液中培养,并在孤雌激活后第0,2,4,6天添加体积分数10%的胎牛血清(FBS),7～8d后检查囊胚率,探讨牛成熟培养液中添加EGF及FBS对牛孤雌胚体外发育的影响。结果表明,添加30ng/mL的EGF能促进卵母细胞的成熟率和孤雌囊胚的发育率;在第4天添加FBS更有利于胚胎的发育。

绵羊同期发情与冷冻胚胎移植技术的研究

本试验对绵羊冷冻胚胎移植过程中,不同孕激素制剂对同期发情的影响、受体卵巢单侧黄体数量以及移植方法对移植妊娠率的影响进行了研究。试验结果表明:用孕酮制剂(CIDR)和孕酮海绵栓进行绵羊同期发情,发情率分别为88.00%和87.41%;单侧黄体数量为1或2个时受体妊娠率分别为42.24%和45.20%;腹腔镜法和常规手术法胚胎移植后受体妊娠率分别为40.86%和44.55%,均无显著性差异(P>0.05)。

影响牛胚胎干细胞分离克隆因素的研究

采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式 ,以高糖DMEM ,添加 0 .1mM2 -巯基乙醇、犊牛血清、细胞因子为培养基 ,以 4～ 13周龄屠宰牛胎儿为实验材料 ,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素。结果发现 :当犊牛血清为 15 %时效果最好 ;细胞因子添加与否对胚胎干细胞的分离及同源牛胎儿成纤维细胞的贴壁与生长影响并不显著 ,而在传代过程中有一定影响 ;以 0 .2 %胰酶 +0 .0 4 %EDTA为细胞消化液效果最佳 ;以同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆牛胚胎干细胞 。

脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响

为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响，应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚，解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％，Ｐ＞０．０５），但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后，孵化率显著降低（４７．６％，Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻，解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂，胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％，Ｐ＞０．０５）。移植试验表明，在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似，与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异，但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。

CUE-MATE、PGF_(2α)诱导受体奶牛同期发情的效果

采用CUE MATE +PGF2α(Cloprostenol)法和PGF2α一次法进行受体奶牛同期发情试验 ,结果表明 :CUE MATE +PGF2α法的同期发情率达 94 .2 % ,其中有 97.3%集中在取栓后 72h内发情 ,可移植率 4 9.6 % ;同期发情效果以置栓时卵巢上有黄体和卵泡同时存在的受体牛为佳 ,其次为有黄体或卵泡的 ,最后为无黄体和卵泡的 ,但无显著差异(P >0 .0 5 ) ;取栓时阴道不同黏液颜色对发情率和可移植率无显著影响 (P >0 .0 5 ) ;3～ 6岁牛发情率显著高于7～ 11岁 (P <0 .0 5 )。CUE MATE +PGF2α法的发情率极显著高于PGF2α一次法 (P <0 .0 1)、可移植率显著高于PGF2α一次法 (P <0 .0 5 )。结果提示CUE MATE +PGF2α适于集中饲养。

影响黑白花母牛超排效果的主要因素分析

4年间超排307头次黑白花母牛的结果表明:①用高纯度的FSH超排供休母牛,所得的可用胚胎的比率高于普通FSH(P<0.05);②用FSH和PMSG+aPMSG超排的成功率和可用胚胎数分别是90.77%、89.29%和5.42、5.57枚(P>0.05);③供体母牛开始超排时黄体对侧卵巢有活性,比静止和有卵泡的黄体数和可用胚胎数高;④A级黄体母牛的超排结果好于B级(P<0.05)和C级黄体(P<0.01);⑤第2、3胎供体母牛比其它胎次的可用胚胎数稍高;⑥在发情周期的第8～14天开始超排,其中第10～12天的卵巢反应最好;⑦重复超排4次,第4次的可用胚胎数比前3次低;⑧不同的年度、季节、产奶量和产后60天以后开始超排的时间对超排结果没有显著影响。

引进良种肉牛冻胚规模移植技术研究

从加拿大引进良种肉牛利木赞、西门塔尔、盖洛威冻胚 ,移植受体 4 89头次。得到以下研究结果 :12 0d直检妊娠 2 4 9头 ( 50 9% ) ,产犊 2 2 1头 ,产程死亡 13头 ,产犊成活率 94 1%。应用氯前列烯醇同期发情 ,累计处理受体牛 93 0头次 ,880头次出现发情 ( 94 6% ) ,84 7头次达到同期发情 ,72h内同期率为 91 1%。经产黄牛移植成功率 4 9 2 % ( 2 11/ 42 9) ;育成荷斯坦牛移植成功率63 3 % ( 3 8/ 60 )。首批选中的受体移植成功率为 60 1% ( 158/ 2 63 ) ;首批移植落选牛和移植后未孕牛再进行选择 ,移植成功率 3 6 4 % ( 64 / 176) ;而对类似情况的受体牛经医疗护理和加强饲养管理 ,两个月后再进行第三批移植 ,成功率为 54 0 % ( 2 7/ 50 )。A级黄体受体牛移植成功率 54 7% ( 4 1/75) ;B级黄体受体牛移植成功率 4 4 7% ( 115/ 2 57) ,统计差异不显著 (P >0 0 5)。桑椹胚 ( 155枚 )在周期的第 6d、6 5d和 7d的移植成功率分别为 55 0 % ( 3 3 / 60 )、51 5% ( 3 4 / 66)和 51 7% ( 15/2 9) ,统计分析 6d与 6 5d、7d差异不显著 (P <0 0 5) ;而囊胚 ( 158枚 )在周期的 6d、6 5d和 7d的移植成功率分别为 4 7 2 % ( 2 5/ 53 )、54 8% ( 17/ 3 1)和 75 7% ( 56/ 74 ) ,6 5d与 7d差异显著 (P <0 0 5) ,6d?

不同核移植方法对牛体细胞核移植效率的影响

以牛皮肤成纤维细胞为供体细胞 ,比较了电融合法和细胞质内注射法 2种核移植方法对体细胞核移植效率的影响。电融合法构建重组胚的效率显著低于细胞质内注射法 (4 7.1%比 89.0 % ,P<0 .0 1) ;重组胚培养 36 h后的裂卵率和培养 8d时囊胚发育率无明显差异 (76 .4 %比 73.2 % ,11.2 %比 12 .3% ;P>0 .0 5 ) ,但相对于操作的卵母细胞总数而言 ,电融合法得到的总囊胚发育率显著低于细胞质内注射法 (5 .6 %比 10 .9% ,P<0 .0 1)。结果表明 ,用细胞质内注射法进行体细胞核移植效率更高。将发育到桑椹胚和囊胚期的 95枚核移植胚胎移植到 33头受体牛 ,其中 31头受体牛在移植后第 2个情期前返情 ;1头受体牛在移植后 75 d返情 ,但未进行直肠检查 ,无法确定妊娠情况 ;1头受体牛在移植后 6 0 d未见返情 ,直肠检查确证妊娠 ,93d受体牛流产。胚胎移植结果表明 。

云南水牛的同期发情、超数排卵和胚胎移植试验

为探讨水牛胚胎移植的效果 ,于 2 0 0 2年对云南水牛进行了胚胎移植试验 :①用国产氯前列烯醇(PG) 0 6mg/头·次处理供、受体水牛的同期发情率和可用率分别为 4 3 33% (13/ 30 )和 16 6 7% (5 / 30 ) ;同期发情率经产水牛高于青年水牛 (P =0 0 86 ) ,杂交水牛高于德宏水牛 (P =0 15 3) ,体重 4 0 1～ 5 30kg水牛显著高于体重 30 0～ 4 0 0kg水牛 (P <0 0 5 ) ;发情明显水牛的可用率极显著高于发情不明显的水牛 (P <0 0 1)。②选用河流型摩拉水牛与沼泽型德宏水牛的杂交一代 5头为供体 ,分进口激素组 (n =2 )和国产激素组 (n =3)进行超数排卵 ,共有 2头获 9枚胚胎 ;进口激素组供体的平均获胚数和可移植胚数分别为 2 0枚和 1 5枚 ,比国产激素组分别多 0 33枚 (P =0 4 5 4 )和 1 17枚 (P =0 2 88)。③所获 4枚可用鲜胚分别移植 3头受体 ,结果 90d的妊娠率为 33 33% ,但最终无一头产犊。试验结果表明使用进口FSH 2 4mg +PG (Lutalyse○R) 35mg和国产FSH 11mg +PG 0 8mg对水牛超数排卵有效 ,同时提示需要足够数量的受体 ,从中选用发情表现明显、黄体发育良好的进行胚胎移植 ,才能取得良好效果。

5-Aza-CdR联合TSA对牛核移植胚胎体外发育及表观遗传状态的影响

【目的】探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2-′Deoxycytidine,5-Aza-CdR)联合曲古抑菌素A(Trichosta-tin A,TSA)对牛核移植胚胎体外发育及其表观遗传状态的影响。【方法】以体外受精胚胎作为对照组,将部分体细胞、核移植胚胎以及体细胞联合核移植胚胎用5-Aza-CdR+TSA(5-Aza-CdR:20 nmol/L,72 h;TSA:50 nmol/L,12 h)进行处理,统计核移植胚胎体外发育率,并对2-细胞、8-细胞和囊胚阶段胚胎进行DNA甲基化和组蛋白乙酰化检测,研究5-Aza-CdR+TSA处理对核移植胚胎体外发育及其表观遗传状态的影响。【结果】与对照组相比,5-Aza-CdR+TSA单独处理供体细胞和核移植胚胎均可以显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数(P<0.05);供体细胞和核移植胚胎均用5-Aza-CdR+TSA处理后,核移植胚胎体外发育能力进一步提高,囊胚发育率显著高于单独处理供体细胞或核移植胚胎组(P<0.05)。免疫荧光检测发现,体细胞和核移植胚胎均用5-Aza-CdR+TSA处理,不但显著降低了2-细胞和8-细胞阶段DNA甲基化水平,而且也显著增加了组蛋白乙酰化水平(P<0.05),使核移植胚胎附植前各发育阶段的表观遗传状态更接近于体外受精胚胎。【结论】5-Aza-CdR联合TSA处理供体细胞和核移植胚胎可以更明显地提高克隆胚胎的体外发育能力,改变核移植胚胎的DNA甲基化和组蛋白乙酰化水平,使它们的表观遗传状态及体外发育率更接近于体外受精胚胎。

奶牛超数排卵的研究(第二报)

奶牛超数排卵是胚胎移植最重要的基础环节。只有稳定的超排方法才能提供充足的卵源,从而加速胚胎移植技术在生产中的应用。长期以来,许多人对牛的超排方法和影响超排效果的若干因素进行过大量研究,但超排效果仍不稳定,个体间存在明显的差异性。就一局部地区而言,寻找一种适合于当地条件、超排效果相对稳定的处理程序和方法,已是人们极为关注的研究课题。本试验目的是研究不同激素制剂处理方法,不同年龄和重复处理等因素对奶牛超排效果的影响,在1988年采卵供体平均获可用胚胎5.0枚的基础上,1989年采用较合理的超排处理方案,使每头采卵供体得可用胚胎提高到6.10枚,为探讨效果稳定的超排方法提供了依据。

云南省奶牛胚胎移植试验

实验用12头黑白花奶牛(3-9岁),PGF_(2α)作同步发情处理后,周期第10-12天,总剂量36mg的FSH-P按递减方式每日肌肉注射2次,间隔12小时,共注射4天,在第3天加注PGF_(2α) 35mg,进行超数排卵处理。12头供体牛共得胚135枚,可用胚数118枚,为总胚数的87.47％。平均每头得胚11.25枚,可用胚9.8枚。其中有3头供体共得胚76枚(分别为24、25和27枚),可用胚69枚,平均每头可别胚高达23枚。胚胎分别移植给20头同步发情处理的黑白花奶牛和20头黄牛受体(有3头为自然发情),海头移植1枚胚胎。结果,奶牛受孕率为35％(受孕7头,产犊7头);黄牛受孕率为40％(受孕8头,流产2头,产犊6头)。奶牛和黄牛总受孕率为37.5％。

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果贺文杰和彦利徐照学王二耀辛晓玲李峰（河南省农业科学院畜牧兽医研究所，郑州４５０００２）为了在畜牧业生产中推广应用冷冻胚胎移植技术，就必须简化冷冻胚胎的解冻、脱除冷冻保护剂的操作步骤。为此，我们于１９９４年开展了该...

应用聚合酶链式反应鉴定奶牛胚胎性别和移植试验

应用聚合酶链式反应鉴定奶牛胚胎性别和移植试验罗应荣，刘云海，朱化彬，朱志庆，朱成宽（中国农业科学院畜牧研究所北京）宫云浩，吴时友，蒋正军，孙淑芳，孙淑华（农业部动物检疫所青岛）前言胚胎性别鉴定是人为控制家畜后代性别的重要途径之一，特别是奶牛业，多生母...

提高胚胎移植中受体牛妊娠率的研究进展

胚胎的质量和受体牛的质量是影响胚胎移植受体牛妊娠率的两个非人为因素。近年来人们在提高胚胎的质量和建立旨在提高受体牛质量的受体牛选择标准方面做了大量的工作，使胚胎移植工作中受体牛的妊娠率有了很大提高。本文从超数排卵、体外受精两种胚胎生产方法中如何提高胚胎的质量以及受体牛质量控制等方面介绍了有关研究概况和发展动态。

不同激素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响

比较不同激素对高产荷斯坦奶牛超数排卵效果的影响,结果发现:供试的3种促卵泡素(FSH)制剂中,加拿大生产的制剂(FOLLTROP IN-V)超排效果比中国科学院动物研究所、澳大利亚生产的FSH好,可用胚胎比率达94.2%,平均每头可用胚胎数达9.84±4.76枚;加拿大生产的FSH(FOLLTROP IN-V)进行荷斯坦奶牛超排处理效果好于美国S igm a公司生产的孕马血清(PM SG)(可用胚胎数,9.06±2.78枚/头vs 4.54±2.12枚/头);超排母牛授精后注射促排卵素3号(LHRH-A 3),Ⅰ级胚胎比率可达57.3%,明显高于促黄体素(LH)、绒膜促性腺激素(HCG)两组(Ⅰ级胚胎分别为17.4%和19.3%),表明LHRH-A 3可提高胚胎质量。