阴囊热应激对山羊血睾屏障结构和功能的影响

旨在探究热应激对山羊血睾屏障(BTB)结构和功能的影响,为山羊热应激防治提供理论依据。本研究选择6只1~1.5岁的健康雄性关中山羊,随机分为2组,每组3只。对照组正常饲喂,试验组采用改良后的阴囊热刺激法建立山羊睾丸热应激模型。利用CASA法检测精液质量变化,光镜与透射电镜观测睾丸结构,生物素示踪法显示BTB通透性改变,蛋白质印记法与免疫组织化学法检测BTB关键蛋白表达定位。热应激组中山羊睾丸指数、精子数量、精子活率、精子总运动性和精子前进运动率均显著降低(P<0.05)。热应激导致睾丸组织形态受损明显,生精细胞数量减少且排列紊乱;支持细胞内质网扩张,并出现大量空泡;支持细胞间紧密连接结构松散且不连续。热应激引起BTB通透性升高,关键连接蛋白表达水平显著降低(P<0.05),但分布定位未受影响。热应激损伤山羊睾丸组织形态,破坏支持细胞结构并降低BTB关键蛋白表达,从而导致BTB结构和功能完整性受损,造成精子质量下降,影响雄性山羊繁殖性能。

奶山羊高效繁殖技术研究进展

近年来,随着我国国民经济的发展,羊奶市场不断扩大,我国奶山羊产业进入发展快车道。然而在当前的经济技术条件下,本交繁殖的传统生产模式已经不适用于规模化养殖,提高奶山羊繁殖效率成为生殖生产中亟待解决的问题。应用奶山羊高效繁殖技术可有效改善奶山羊的繁殖效率,其中同期发情、超数排卵、人工授精等技术在奶山羊生产中得到广泛应用。本文针对奶山羊高效繁殖技术的研究与应用现状进行综述,以期为奶山羊高效繁殖技术的推广和生产效益的提高提供参考。

雄激素受体抑制剂恩杂鲁胺对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响

旨在通过使用恩杂鲁胺探究雄激素受体(AR)对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响。本研究首先对山羊卵泡颗粒细胞进行体外分离培养,然后利用显微镜观察和CCK8探究颗粒细胞的恩杂鲁胺适合培养浓度;之后将试验分为3个组,即空白对照组(不做处理)、阴性对照组(DMSO处理)和试验组(恩杂鲁胺处理),每个组均设置3个重复;然后利用EDU检测颗粒细胞的增殖情况,使用Caspase3活性与细胞凋亡检测试剂盒检测颗粒细胞的凋亡情况,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测颗粒细胞增殖凋亡相关基因和蛋白的表达情况。结果表明,AR抑制剂恩杂鲁胺能够显著地抑制颗粒细胞的增殖和降低颗粒细胞中CCND1、PCNA和MKI67基因的mRNA水平,并且还能够显著抑制CCND1、PCNA和β-catenin蛋白的表达;此外,恩杂鲁胺还能够促进山羊卵泡颗粒细胞的凋亡,显著提高山羊卵泡颗粒细胞中BAX和BCL2的mRNA水平,但不影响BAX和BCL2的蛋白表达,另外恩杂鲁胺虽然没有影响CASP3基因的mRNA水平但能够提高Caspase 3的活性。这些结果表明,恩杂鲁胺抑制AR活性后能够影响颗粒细胞中β-catenin、PCNA、CCND1、Caspase 3等的表达,参与调控颗粒细胞的增殖凋亡。

降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存效果的影响

试验旨在研究降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存的影响。设计毛巾包裹(1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h)和37℃水浴(50、100、150、200、250mL)2种降温方式并探究最佳试验条件,在此基础上各自添加冷冻II液后平衡0、0.5、1.5、2.5、3.5 h,并确定最优平衡时间,最后比较2种最优方式下湖羊冷冻精液的精子活率、活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量。结果表明:毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);添加200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h处理与200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h处理的精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均不存在显著差异,但毛巾包裹降温处理的精子ROS含低于水浴降温处理(P<0.05)。由此可见,毛巾包裹降温2.5 h后添加冷冻II液继续平衡2.5 h是湖羊精液冷冻保存较适宜的处理方式,湖羊精液冷冻保存效果显著提高。

0~28日龄大足黑山羊羔羊胃肠道的解剖特点与组织形态发育研究

本实验旨在研究断奶前大足黑山羊羔羊消化系统解剖特点和组织形态变化规律,为羔羊开食训练和早期断奶提供依据,进而发挥其生长潜力。选取健康、出生体重相近的19只大足黑山羊,实验羊分别饲喂至0日龄(n=4)、7日龄(n=4)、14日龄(n=4)、21日龄(n=3)和28日龄(n=4)进行屠宰取样并制作石蜡切片,HE染色,同时测定各阶段羔羊胃肠道全重、净重及长度等参数,系统分析羔羊胃肠道变化规律。结果显示:0~28日龄,大足黑山羊羔羊的瘤胃、网胃和瓣胃全重逐渐增加,14日龄瘤胃净重、瘤胃背囊乳头高度、皱胃净重显著高于0~7日龄;十二指肠组织各指标也呈增长趋势,0、7日龄十二指肠全重显著低于28日龄,14日龄空肠、回肠隐窝深度显著高于0~7日龄;大肠各段黏膜层和肌层有增厚趋势,且大肠各段全重、净重和长度在0~28日龄均呈增长趋势。由此可见,大足黑山羊7~14日龄的胃肠道发育较为迅速,14日龄胃肠道重量相比于7日龄显著增加,而后变缓,应特别重视山羊14日龄前的羔羊护理,14日龄后可进行早开食训练。

不同处理方法对湖羊初产母羊同期发情和繁殖性能的影响

旨在探究促性腺激素释放激素(GnRH)和前列腺素(PG)对湖羊初产母羊同期发情和繁殖性能的影响。将199只健康、体况良好、空怀的初产母羊随机分为GnRH组(n=103)和PG组(n=96),分别用2种激素进行同期发情处理,GnRH组采用GnRH+PG+GnRH方法处理,PG组采用PG+PG方法处理;处理后24、48、72 h观察母羊的发情表现,对发情母羊即时进行人工授精,配种时每只羊肌肉注射促黄体素释放激素A3;授精后35 d使用B超机进行妊娠诊断,统计受胎率和产羔情况。结果显示:2组母羊发情时间均主要集中在0~24 h,显著高于24~48 h和48~72 h(P<0.05);总发情率GnRH组(84.47%)与PG组(79.17%)之间无显著差异(P>0.05);2组母羊的受胎率、产羔率、单羔率、双羔率、多羔率和流产率也均无显著差异(P>0.05);PG组的药物费用为6.55元/只,GnRH组的药物费用为9.91元/只,PG组的成本更低。结论:鉴于GnRH组与PG组的同期发情效果接近,考虑到成本因素,建议在集约化养殖过程中应用PG组方法对初产母羊进行同期发情处理。

绵、山羊性控精液的制作技术与应用研究进展

绵、山羊性控精液的生产与应用大大提高了群体扩繁的效率,推动了羊产业快速发展。自性控精液技术发展以来,研究者们虽取得了一定的科研成果,但在羊生产中的应用仍然十分有限。本文系统综述了羊性控精液分离技术的发展及不同因素(包括品种、个体差异、稀释液配方、冷冻程序、饲养管理)对绵、山羊性控精液制作的影响,并阐述了羊性控精液的推广应用及前景展望,为绵、山羊性控精液高效分选、输精技术的研发及推广应用提供参考。

丝胶蛋白对承德无角黑山羊精液冷冻保存的影响

旨在探究丝胶蛋白对承德无角黑山羊精液冷冻保存效果的影响。本试验采用假阴道法采集3只健康状态良好的承德无角黑山羊精液,随机分为6组,分别为对照组和在OptiXcell 2稀释液中添加不同浓度的(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1%)丝胶蛋白试验组,每组设置5个重复,精液稀释完后进行细管分装、平衡、冷冻;精液冷冻-解冻后检测精子活力、顶体完整率、质膜完整率、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位、ATP含量等指标,并进行数据统计。结果显示,承德无角黑山羊精液冷冻稀释液中添加不同浓度丝胶蛋白均能够提高冻融后精子质量。其中,添加浓度为0.6%丝胶蛋白与其他各浓度相比,可显著提高精子冷冻-解冻后的精子活力、顶体完整率、质膜完整率以及线粒体膜电位和ATP含量,并且使抗氧化酶T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT活性分别提高至(13.61±0.39)mmol·g^(-1)、(26.52±1.30)U·mg^(-1)、(165.45±11.10)U·mg^(-1)、(13.76±0.30)U·mg^(-1),降低MDA值至(3.15±0.20)μmol·mg^(-1)。综上,在冷冻稀释液中添加不同浓度的丝胶蛋白均可提高承德无角黑山羊冷冻精液品质,且最适添加浓度为0.6%。

槲皮素对山羊精液低温保存的影响

山羊精液在储存过程中容易受到氧化应激的损害。槲皮素是一种广泛存在于植物中的黄酮醇化合物,具有多种生物活性,已被证明可以改善精子质量。该试验旨在研究精液稀释液中添加槲皮素对低温(4℃)储存山羊精液质量的影响。采集9只健康1~3岁陕西关中奶山羊的精液,添加不同浓度(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素后分析低温保存山羊精液的抗氧化性、ATP含量及相关磷酸化蛋白表达水平。结果表明:添加槲皮素可提高低温保存精子的活力,保护质膜和顶体的完整性,抑制精子蛋白的去磷酸化,提高磷酸化蛋白的表达水平;槲皮素可通过cAMP-PKA信号通路抑制精液中过多活性氧(reactive oxygen species,ROS)诱导的精子蛋白去磷酸化,且槲皮素的最佳浓度为50μmol/L。因此,在山羊精液低温保存时添加50μmol/L的槲皮素可以改善精液质量。

关中奶山羊发情期不同时段宫颈阴道粘液非靶向代谢组学比较分析研究

为了揭示关中奶山羊自然发情状态下发情期生殖道代谢特征,探索关中奶山羊发情期特异性化学信号,为精准发情鉴定和适时人工授精等繁殖工作提供代谢机制层面的理论依据,以3只2~3岁经产母羊为研究对象,采集关中奶山羊发情期0~12 h(A组),12~24 h(B组),24~36 h(C组)的宫颈阴道粘液,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)测定关中奶山羊发情期宫颈阴道粘液中的代谢产物。结果显示,来自发情期不同时段的关中奶山羊宫颈阴道粘液中共检出221种不同的代谢产物,其主要分类是碳水化合物、脂质、氨基酸、核苷酸、异生素、辅助因子和维生素、肽类、能量等;0~12 h VS 12~24 h的差异代谢物有6种,12~24 h VS 24~36 h的差异代谢物有3种,0~12 h VS 24~36 h的差异代谢物有14种;这些差异代谢物主要富集在半乳糖代谢、碳水化合物消化吸收、矿物质吸收、甘油酯代谢、ABC蛋白转运、嘧啶代谢等通路上。

miR-144-5p靶向WNT5a对山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响

旨在探究miR-144-5p靶向WNT5a对山羊颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本研究选用2岁健康雷州母山羊的卵巢颗粒细胞来过表达和抑制表达miR-144-5p及WNT5a,通过荧光定量PCR(real-time qPCR, RT-qPCR)、Western blot、双荧光素酶报告基因、CCK-8等技术来探究miR-144-5p与WNT5a对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,miR-144-5p在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.01),WNT5a在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著低于小卵泡颗粒细胞(P<0.01);CCK-8检测发现,miR-144-5p抑制了GCs增殖,过表达miR-144-5p后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达极显著下调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA和蛋白表达极显著上调(P<0.01);Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著降低(P<0.01);另外,miR-144-5p能靶向WNT5a抑制其表达。同时,CCK-8检测结果表明,WNT5a可促进GCs增殖,过表达WNT5a后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白水平极显著上调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA显著下调(P<0.05)、蛋白水平极显著下调(P<0.01),Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著提高(P<0.01)。综上所述,在GCs中,miR-144-5p靶向负调控WNT5a的表达,调控Wnt/β-Catenin通路,进而上调BAX/BCL-2的比值来抑制颗粒细胞增殖并促进其凋亡,这可能对山羊的排卵数和产羔数产生一定的影响。

白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响

为研究白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响,实验通过假阴道法采集健康黑头山羊精液,在基础稀释液中分别添加0、25、50、100、200μmol/L白藜芦醇溶液,常温保存过程中检测精子活力、质膜完整率、顶体完整率、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)水平。结果表明:与0μmol/L组相比,在基础稀释液中添加白藜芦醇能提高黑头山羊常温保存精子的活力、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05),并提升精液T-AOC水平,降低ROS及MDA含量(P<0.05);其中黑头山羊精液常温保存时白藜芦醇的适宜添加浓度为25μmol/L。本研究证实了在精液稀释液中添加白藜芦醇可改善黑头山羊常温保存的精液品质,保存3 d对母羊受胎率无显著影响。

常用抗氧化剂在奶山羊精液冷冻保存中的应用

在奶山羊精液稀释液中添加抗氧化剂等能够抑制精液冷冻保存过程中活性氧(Rcactive oxygenspccics,ROS)的生成,并维持精液抗氧化系统的平衡,提高精液冷冻保存的质量。该文从奶山羊精子理化特性、精液冷冻保存、精子的氧化损伤以及不同抗氧化剂的应用进行综述,为研究奶山羊精子抗氧化损伤机制提供理论基础。

山羊精液冷冻保存技术研究进展

精液冷冻保存与人工授精的有效结合,对种质资源的保护及生产育种等方面具有重要而积极的作用。本文介绍了山羊精液与精子的特点,简述了冷冻稀释液的组成及其作用机理,并系统分析了山羊精液的冷冻-解冻过程,同时提出了改进精液冷冻保存技术的策略。最后对山羊精液冷冻保存技术的未来发展进行了展望,以期为相关研究及应用提供有益参考。

莱芜黑山羊同期发情及早期妊娠诊断技术研究

目前莱芜黑山羊存栏量急剧下降,亟需采用先进的繁殖技术手段提高母羊繁殖效率,快速扩繁并提高种群数量。试验选用2~4岁经产莱芜黑山羊进行同期发情处理,研究同期发情方案、季节以及品种对母羊发情和妊娠的影响,并在配种后15~40 d利用B超对母羊进行早期妊娠诊断。结果表明:(1)莱芜黑山羊同期发情处理时,第18天时撤栓发情率和情期受胎率均显著高于第12天撤栓(P<0.05);(2)春、秋两季进行同期发情处理,发情率和情期受胎率均差异不显著(P>0.05);(3)莱芜黑山羊本品种的发情率和情期受胎率均显著高于莱芜黑山羊×波尔山羊杂交培育品种(P<0.05),且掉栓率显著低于杂交品种(P<0.05);(4)配种后第20天利用B超可探查到子宫内有明显的胎液,第25 d首次观察到胎体,其扫描切面形似“铜钱”状,第30天胎儿进一步发育增大,妊娠诊断特征明显。以上结果表明,莱芜黑山羊采用孕酮栓放置18 d,撤栓时肌注500 IU PMSG可取得较为理想的同期发情效果;配种后20~30 d可利用B超对母羊进行早期妊娠诊断。

脯氨酸对山羊精液低温保存的影响

为提高精液对精子的抗氧化保护能力,延长精子在体外的存活时间,在低温保存(4℃)条件下,向山羊精液基础稀释液中添加浓度为0、0.5、1、2、4 mM的脯氨酸,经保存24 h、48 h后,检测各处理组的精子活力、顶体完整率、质膜完整率,及48 h各组线粒体活性、活性氧水平、丙二醛、脂质过氧化物含量、抗氧化酶活性等精子质量评定指标。结果表明,在精液中添加一定浓度的脯氨酸可提高精子抗氧化能力,且添加最适浓度为1 mM。在1 mM处理组中,精子48 h总活力71.3%,比对照组显著提高18.57%(P<0.01),顶体完整率提高12%,质膜完整率提高10.5%,线粒体活性提高23.15%,抗氧化酶活性均显著提高(P<0.05),活性氧水平、丙二醛、脂质过氧化物含量均显著降低(P<0.05),并且脯氨酸脱氢酶活性显著提高(P<0.05),凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspas-9、P53和BCL-2)表达量显著降低(P<0.05)。因此,在4℃液态保存的山羊精液中,添加脯氨酸能够提高保存后的精液品质。这为脯氨酸作为一种可以有效提高山羊精液品质的抗氧化剂提供了新的思路。

绒山羊细管冻精保存时间对使用效果的影响

为了比较绒山羊细管冻精不同保存时间的品质变化和使用效果,笔者将辽宁绒山羊公羊的细管冻精从2005年分别保存0,5,10,18年,并分别进行抽检,选用成年母羊进行冻精输精,比较了细管冻精解冻后的活力、畸形率、冻精输配受胎率及冻精后代的产羔率、羔羊初生重和120 d断奶重。结果表明:2005年生产的辽宁绒山羊细管冻精经过0,5,10,18年的冷冻保存,解冻后的活力和畸形率没有显著变化(P>0.05),细管冻精的配种受胎效果与后代生产性能也没有显著差异(P>0.05),冻精后代的产羔率、羔羊平均初生重和120 d断奶重都没有显著差异(P>0.05)。说明细管冻精的保存时间在一定期限内对细管冻精的质量和使有效果没有不利影响。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

不同处理方法对疆南绒山羊同期发情效果和繁殖性能的影响

实验旨在探究不同同期发情处理方法对疆南绒山羊同期发情效果和繁殖性能的影响。选择健康、空怀的经产疆南绒山羊母羊272只,随机分为3组,埋置阴道孕酮海绵栓,并记为第0天,第14天时撤栓,撤栓时分别向3个实验组的每只羊肌肉注射孕马血清促性腺激素(PMSG)200 IU(n=90)、PMSG 240 IU(n=97)、前列腺素F2α(PGF2α)1 mg(n=85),在撤栓后的第24、48、72小时观察3组母羊的发情表现,对发情母羊即时人工授精,同时肌肉注射A_(3)12.5μg,在45d后使用兽用B超机进行妊娠诊断,并记录产羔数据。结果表明:240 IU PMSG组的总发情率(92.78%)、产羔率(152.22%)均高于PGF2α1 mg组(80.00%、123.53%)(P<0.01),与200 IU PMSG组(88.89%、147.50%)无显著差异;各组间撤栓后24~48 h的发情率高于0~24 h和48~72 h(P<0.01);各组海绵栓丢失率、阴道感染率、受胎率、单羔率、双羔率、多羔率、流产率均无显著差异。综上,考虑到发情率、产羔率、双羔率和药品成本,建议在疆南绒山羊养殖生产中推广应用240 IU PMSG组的同期发情处理方法。

黄芪多糖对奶山羊精液冷冻保存效果的影响

为了切实提高奶山羊精液冷冻保存效果,并为新型精液冷冻稀释液配方的研发提供试验依据,该研究在奶山羊精液冷冻稀释液中添加不同浓度的黄芪多糖,冷冻-解冻后检测精子活力、运动参数、抗氧化性能、线粒体膜电位等指标。结果表明:在奶山羊精液冷冻稀释液中添加0.2 g/L黄芪多糖能够显著提高精液冷冻保存效果(精子活力、质膜完整率、顶体完整率分别达到52.89%、55.34%、50.31%,直线运动速率和曲线运动速率分别达到45.84μm/s和59.46μm/s),提高精子冻后总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalse,CAT)的活性,降低精子内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平和氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,提高冷冻-解冻后精子线粒体膜电位和ATP水平,从而有效改善精液冷冻保存效果。研究表明,在奶山羊精液冷冻稀释液中添加0.2 g/L黄芪多糖能够减少奶山羊精子冷冻过程中的氧化损伤,提高奶山羊精液冷冻保存质量,为奶山羊精液冷冻保存和其在人工授精方面的应用提供科学理论参考。