近红外光谱技术在乳及乳制品质量检测中的应用

随着生活水平的提升,人们对食品质量的关注日益增加,快速获取产品质量信息已成为热点问题之一。近红外光谱技术作为一种快速、无损、定量的检测手段,能够在短时间内获取食品的质量信息,该技术已逐渐在食品质量评价中得到广泛应用。本文综述了近红外光谱技术在乳及乳制品质量检测方面的应用,旨在为该技术在乳制品行业中的进一步应用提供参考。

MUC2基因沉默对脂多糖干扰Caco-2/HT-29细胞紧密连接蛋白表达的影响

肠道黏膜屏障阻碍病原物质入侵的第一道防线是由黏蛋白-2(MUC2)组成的肠道黏液层,覆盖于上皮细胞表面,由杯状细胞分泌而成。脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)可通过损伤肠黏膜从而干扰屏障功能的正常发挥。论文对Caco-2/HT-29(3∶1)共培养模拟肠道上皮细胞,通过沉默黏蛋白-2(siMUC2)分析脂多糖对肠道黏液层屏障及其上皮紧密连接结构的影响。结果显示,与对照组相比,LPS组E-钙黏素(E-cadherin)、闭合蛋白mRNA表达量均明显降低。与LPS组相比,LPS+siMUC2组中连接蛋白(claudin)、连接附着分子(JAMA)、E-cadherin以及桥粒(desmosome) mRNA水平显著降低,细胞连接蛋白mRNA水平的下调可能影响细胞通透性进而导致屏障功能紊乱。说明黏蛋白-2作为黏液层骨架蛋白成分可以保护细胞紧密连接蛋白免受LPS的干扰。LPS可诱导Caco-2/HT-29细胞模型黏蛋白-2表达增多以及E-cadherin、闭合蛋白mRNA表达下调。当黏蛋白-2基因被沉默后,LPS可导致细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的显著下降,提示肠道上皮细胞紧密连接的屏障功能可能被破坏。

猪流行性腹泻病毒微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法的建立

为了建立简便快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)荧光定量RT-qPCR检测方法,根据GenBank数据库公布的猪流行性腹泻病毒囊膜蛋白E基因,设计特异性引物和探针结合微芯片技术,建立微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法。该方法除对PEDV检测为阳性外,对与其同源性较近的致病病毒的检测均为阴性;最低检测限为1 copies/μL,常规荧光RT-qPCR检测限为10 copies/μL。批内、批间重复性试验表明,Ct值变异系数均在2%以内,可对PEDV临床样本进行检测。建立的检测方法特异性好、敏感性高、检测时间短且重复性好,适用于临床检测。

白鲜皮免疫调节机制的网络药理学分析及验证

本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。

硒的生理功能及其在动物生产中的应用研究进展

硒是动物机体必需的微量元素之一,具有抗氧化、抗炎、抗癌、防癌、免疫调节等功能。目前,硒在动物生产上的研究日益深入,但其对动物机体的具体调控机制还未被完全阐明。因此,笔者对硒的来源、摄入量、生理功能及在动物生产中的应用进行综述,为硒在动物生产上的进一步研究应用提供参考。

《动物生理学实验》教学中的动物福利伦理教育探讨

文章结合《动物生理学实验》课程特点,阐述了实验过程中的动物福利伦理问题,提出进行福利伦理教育的相关策略,探讨实验教学中融入动物福利伦理教育的实施方法及课程考核评价方法,为相关实验的动物福利伦理教育提供参考。

道路运输对羔羊体重、血液生化及临床指标的影响

试验旨在研究道路运输对羔羊体重、血液生化指标和临床指标的影响,为生产中有效缓解羔羊运输应激提供理论依据。选取平均体重(21.52±1.22)kg健康4月龄羔羊10只进行8 h的长途运输,分别在运输前后进行称重、静脉采血,并测定体温、呼吸频率、脉搏等临床指标。结果表明:①道路运输使羔羊体温、呼吸和脉搏频率极显著升高(P<0.01),体重降低了15.31%(P<0.05)。②道路运输极显著升高了羔羊血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和乳酸脱氢酶(LDH)水平(P<0.01),显著升高了皮质醇(COR)和肌酸激酶(CK)水平(P<0.05),血清中谷丙转氨酶(ALT)水平无显著变化(P>0.05)。③道路运输显著降低了羔羊血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平(P<0.05),显著升高了白介素-6(IL-6)水平(P<0.05),血清中免疫球蛋白M(IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平与运输前差异不显著(P>0.05)。④道路运输显著降低了羔羊血清中葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)水平(P<0.05)。⑤道路运输显著降低了羔羊血清中红细胞总数(RBC)、红细胞压积(HCT)、血红蛋白含量(MCH)(P<0.05),红细胞平均体积(MCV)极显著降低(P<0.01),白细胞总数(WBC)显著升高(P<0.05)。综上所述,羔羊经过8 h道路运输后发生了明显的应激反应,导致羔羊体重下降,机体代谢增强,炎症反应增强,免疫系统受到了一定程度损伤。

健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中微生物组成的特征及差异研究

奶牛乳腺炎的发生与多种病原微生物密切相关,乳汁中菌群特征的分析对建立乳房炎防控体系和提高乳制品质量和安全具有重要意义。本研究通过16S rRNA基因的V3-V4区测序,分析河南省某奶牛场17头健康奶牛和10头乳房炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度。结果发现,微生物菌群在11个门、24个纲、37个目、82个科和184个属水平上的相对丰度存在显著差异。乳腺炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度显著低于健康奶牛乳汁,在乳腺炎奶牛乳汁中厚壁菌门、变形菌门、放线菌门的相对丰度较高。乳腺感染后,变形菌门、软壁菌门的丰度显著降低;互养菌门的丰度显著升高。乳腺炎奶牛乳汁中的链球菌科、链球菌属的相对丰度增加,棒状杆菌科、罗尔斯通氏菌属、假单胞菌属的相对丰度下降。优势菌属中有4个嗜冷菌,健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中的嗜冷菌总丰度分别为19.5%和42.0%。提示乳汁中微生物组成变化可能与奶牛乳腺炎的发生发展有密切联系,该研究为奶牛场乳房炎的防控及原料奶的质量控制提供了理论依据。

动物生理学线上线下混合式教学与思政元素协同育人的应用探究

课题调研情况。“线上线下”的教学模式已经成为当前教育领域的重要教学模式之一。该课题主要通过实际调研的方式,了解动物生理学课程教学过程中,线上线下混合教学与思政元素的具体应用案例,总结其实施经验,为今后开展线上线下混合教学与思政元素协同育人提供新的思路和方向,促进我国高校专业教学质量的提升。课题调研采取访谈和问卷调查的方式进行,共发放调查问卷50份,收回问卷50份,回收率100%;座谈采取学生代表和教师共同座谈的方式进行,座谈会共计50分钟。

脂联素在动物心血管疾病中的作用机制研究进展

脂联素是一种关键的细胞因子,主要由脂肪细胞、心肌细胞以及内皮细胞和骨骼细胞释放到循环血液中的调节激素,是一种内源性生物活性多肽或蛋白质,参与多种生物学过程,如脂质代谢、能量调节、炎症和胰岛素敏感性,具有增强血管内皮功能、抗炎、抗氧化、抗凋亡以及抗心肌缺血/再灌注损伤等多种生物学特性。脂联素可以通过改善脂质代谢、保护血管内皮细胞、抑制泡沫细胞形成和血管平滑肌细胞增殖来预防心血管疾病。脂联素作为机体含量最丰富的脂肪细胞因子,在代谢性心血管疾病中发挥着多方面的作用。综述脂联素在心血管疾病中的作用及机制研究进展,以期为阐明动物心血管疾病的发病机制和指导临床防治工作,具有一定理论价值和实践意义。

SIRT2调控自噬的作用机制研究现状

沉默调节蛋白2(Sirtuin 2,SIRT2)是一种能够调节蛋白质乙酰化修饰的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,是沉默信息调节因子(Sirtuins)家族成员之一,具有多种生物学功能,其在神经退化、细胞分化、葡萄糖和脂质代谢、肿瘤发生、细胞自噬等过程中均发挥调节作用。细胞自噬是一种通过清除异常蛋白或细胞器来维持机体稳态的保护机制,具有促进细胞更新和保持质量的作用。细胞自噬可分为3种主要形式,包括巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬,均通过溶酶体来对受损的细胞器、错误折叠和聚集的蛋白质及其他大分子物质进行降解或回收。其中,巨自噬研究最多,分为非选择性巨自噬(即常说的自噬)和选择性巨自噬。线粒体自噬是真核细胞中选择性去除或降解受损和多余线粒体的主要途径,也是SIRT2在细胞中主要调控的一种选择性巨自噬。作者主要综述了SIRT2在自噬及线粒体自噬上的调控作用及机制,以期为后续更深入地研究SIRT2在哺乳动物生理上的更多调控功能及其在各类疾病上的治疗作用提供参考和方向。

热应激对反刍动物抗氧化和免疫功能的影响及营养调控进展

热应激是指动物受到高热环境的刺激超过了其自身体温调节范围而形成的包括热非特异性反应和特异性障碍在内的全身性适应反应。反刍动物由于被毛厚、瘤胃发酵热增耗高,非常容易受到热应激的影响,严重损害其健康和生产性能。文章总结了热应激对反刍动物抗氧化和免疫功能的影响,以及近年来生产和科研方面缓解反刍动物热应激的营养调节措施,以期为生产中减少热应激对反刍动物危害提供参考。

鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。

日本兽医器械行业监管体系与启示

日本医疗器械包括兽医器械尤其高尖端医疗器械在国际市场上占据明显的领先地位而其科学的监管模式对此起到了至关重要的作用。本文从《药品与医疗器械法》在日本法律体系中的位置、兽医器械的定义与分类,以及政府监管体系、相关法规主要规定等4个方面进行分析探讨,较为详细地概述了日本兽医器械行业监管体系状况,以期为我国兽医器械立法工作提供借鉴。

不同来源外泌体对骨骼发育及骨骼疾病的影响

在骨骼发育过程中,骨骼是通过膜内成骨和软骨内成骨两种不同的成骨机制形成的,软骨内骨化是长骨发育的第二阶段,生长板是机体进行软骨内骨化的场所,生长板软骨细胞受损会破坏软骨内成骨的进程,严重抑制骨骼发育或产生骨骼疾病。外泌体是由膜的双层内陷形成,具有脂质双分子层的细胞外囊泡,可以包裹蛋白质、脂质和核酸(非编码RNA、mRNA)等,作用于靶细胞从而发挥细胞间通讯的关键作用。外泌体作为近年来研究的热点,有大量研究发现其与骨骼发育、骨骼疾病的发生和治疗关系密切。因此,本文主要综述了不同来源外泌体对骨骼发育和骨骼疾病的影响,梳理了不同来源外泌体对骨骼的调控作用,为探究不同来源外泌体在畜禽骨骼发育与骨骼疾病方面的预防和治疗提供理论依据。

参芪补气散对亚健康西门塔尔犊牛血清生化、激素及部分免疫指标的影响

研究参芪补气散对亚健康西门塔尔犊牛发病率、血清生化、激素与免疫指标的影响。选择3月龄亚健康西门塔尔犊牛105头,随机分为对照组、参芪补气散低剂量组、参芪补气散高剂量组3个组,每组35头。对照组每日饲喂基础饲粮,给药组在基础饲粮基础上分别每日添加精料15 g/kg(低剂量组)和30 g/kg(高剂量组)的参芪补气散,连续饲喂21 d,观察每组犊牛腹泻、感冒的发生情况。试验结束后每组犊牛采集血液用于血清生化、激素、免疫指标检测。与对照组相比,参芪补气散高、低剂量组犊牛的感冒、腹泻发病率呈降低趋势,高剂量组降低明显。与对照组相比,参芪补气散低剂量组犊牛的甘油三酯、尿素、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、免疫球蛋白A均显著升高(P<0.05),总胆红素、结合胆红素均显著降低(P<0.05);与对照组相比,参芪补气散高剂量组犊牛的甘油三酯、血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血钾、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、免疫球蛋白A和免疫球蛋白M含量均显著升高(P<0.05);总胆红素、结合胆红素均显著降低(P<0.05)。说明参芪补气散可以明显改善亚健康西门塔尔犊牛的血清生化、激素及免疫相关指标,防病增重效果确切。

猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法的建立

猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性,与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性好,对慢病毒阳性对照品的最低检出限为10~1 copies/μL,比普通RT-PCR灵敏10倍。使用该方法检测模拟病毒样品,发现最低检出限为10~1 TU/mL,与荧光定量RT-PCR方法一致。本研究首次建立了可检测猪Linda病毒的巢式RT-PCR方法,其特异性强、灵敏度高,为在口岸以及条件有限的场地对猪Linda病毒进行精准且快速的检测提供了有效技术手段,也为防范Linda病毒传入提供了有力技术支撑。

基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTMEnzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况。利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化。【结果】重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接。分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率。PCR产物经CruiserTMEnzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp。Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达。细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P<0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞。KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料。

草质素对巨噬细胞铁死亡效应的影响

【目的】研究草质素对RAS-选择性致死小分子3(RSL-3)诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡效应的抑制作用,探究草质素对巨噬细胞铁死亡的影响。【方法】利用0、5、10、20、40、80μmol/L草质素处理RAW264.7巨噬细胞48 h后,用CCK-8法检测细胞活力。将RAW264.7巨噬细胞分为对照组(Control)、RSL-3(15μmol/L)组、草质素(20、40、80μmol/L)组、铁死亡抑制剂铁抑素-1(10μmol/L Fer-1)组,草质素组和Fer-1组分别与RSL-3共孵育48 h,通过乳酸脱氢酶(LDH)试验检测各组细胞损伤效应,利用比色法检测各组细胞裂解液中铁离子、谷胱甘肽及丙二醛(MDA)含量。利用荧光探针法检测各组细胞胞浆内Fe^(2+)荧光强度、线粒体膜电位(MMP)和脂质活性氧(ROS)水平。采用Western blotting检测各组细胞裂解液核因子红细胞系2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-4)的表达量。【结果】与0μmol/L草质素组相比,40μmol/L草质素可显著增强巨噬细胞活力(P<0.05);与40μmol/L草质素组相比,80μmol/L草质素组细胞活力显著降低(P<0.05),故5~40μmol/L为药物安全浓度。与对照组相比,RSL-3组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe^(2+)浓度、Fe^(3+)浓度、Fe^(2+)平均荧光强度、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著升高(P<0.05);细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著降低(P<0.05),提示出现铁死亡效应。与RSL-3组相比,40μmol/L草质素组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe^(2+)浓度、Fe^(3+)浓度、Fe^(2+)平均荧光强度、GSSG含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著降低(P<0.05);GSH含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著升高(P<0.05)。与Fer-1组相比,40μmol/L草质素组的上述所有指标均无显著差异(P>0.05)。Western blotting结果表明,与RSL-3组相比,40μmol/L草质素显著升高了Nrf-2、HO-1和GPX-4的表达量(P<0.05);与Fer-1组相比,40μmol/L草质素组的上述指标均无显著差异(P>0.05)。【结论】草质素通过调控RSL-3诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡相关分子指标,升高了GPX-4的表达水平,并激活其Nrf-2/HO-1通路发挥抑制RAW264.7巨噬细胞的铁死亡效应。本研究通过离体试验初步揭示了40μmol/L草质素可显著改善巨噬细胞铁死亡损伤效应及其机制。