加味强壮散对白羽肉鸡血清抗氧化及免疫功能的影响

研究加味强壮散对白羽肉鸡的抗氧化功能和免疫球蛋白及脏器组织形态结构的影响,为加味强壮散用于白羽肉鸡健康养殖提供依据。选取88只健康、体重相近的1日龄白羽肉鸡,雌雄各半,随机分成4组,包括1个空白对照组(饲喂基础饲粮)和3个试验组(分别在基础饲粮中添加0.2%、0.4%、0.8%的加味强壮散),连续饲养42 d。与对照组相比,饲粮添加0.8%加味强壮散能显著提高血清总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活力(P<0.05),显著降低血清中丙二醛含量(P<0.05),能显著提高血清免疫球蛋白IgA和IgM的含量(P<0.05);组织形态学观察发现加味强壮散可促进免疫器官发育。在饲粮中添加不同比例的加味强壮散可提高白羽肉鸡的抗氧化功能,增加免疫球蛋白含量,促进免疫器官发育,其中以0.8%的添加量效果最佳。

CD4^(+)T细胞相关细胞因子在人兽共患寄生虫感染中的作用研究进展

CD4^(+)T细胞亚群及其分泌的细胞因子在寄生虫感染过程中发挥着极其重要的调控作用,与寄生虫感染的发生、发展、预后密切相关。已知CD4^(+)T细胞亚群包括Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th9细胞以及Tfh细胞等,机体的Th1/Th2、Th17/Treg细胞处于动态平衡,但在特异性抗原刺激下,这种动态平衡会被打破。目前可用来预防或治疗寄生虫病的疫苗和药物较少,主要原因是对寄生虫病致病机制的认识有限。研究表明,寄生虫感染导致宿主炎症以及刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。论文主要阐述与CD4^(+)T细胞亚群相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-9及IL-21在寄生虫感染中的作用,以期为探索和研究寄生虫病的发病机制及寄生虫在宿主体内的免疫逃逸机制提供参考。

基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。

牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白对小鼠免疫应答的研究

为了评估牛环形泰勒虫(Theileria annulata)烯醇化酶(enolase)原核重组蛋白对实验动物体液免疫水平和细胞免疫水平的影响,用His纯化柱和超滤管对pET-32a-enolase进行纯化和浓缩,应用Western blot分析蛋白的反应原性;另外利用牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白(r Ta-enolase)免疫Balb/c鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA检测血清中重组蛋白的特异性抗体水平。免疫后,取小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,用流式细胞术检测脾脏T细胞亚群情况;用MTT试剂盒检测体外刺激后T淋巴细胞增殖情况;用Spss ANOVA单因素检验进行差异显著性分析。Western blot表明,enolase重组蛋白可与阳性血清发生特异性反应。ELISA检测免疫鼠特异性IgG/IgG1和IgG2a抗体均与对照组差异极显著(P<0.01);流式细胞术检测表明,免疫组(2.53±0.11)与对照组(1.85±0.11)CD4^(+)/CD8^(+)T细胞的比值差异极显著(P<0.01);用r Ta-enolase重组蛋白刺激小鼠脾脏淋巴细胞后明显促进其增殖(P<0.05)。研究结果表明r Ta-enolase免疫小鼠能够诱导小鼠产生极高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平,细胞免疫应答偏向于CD4^(+)T细胞,为后续其在疫苗中的免疫功能提供数据资料。

表达胸腺肽和干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌作为鸡新城疫病毒活疫苗免疫佐剂的初步研究

为评估以滴鼻方式免疫表达鸡胸腺肽和鸡干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌能否作为新城疫病毒(NDV)活疫苗的免疫佐剂及对其免疫效力的影响,本研究以表达鸡胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(cTα1-cIFN-γ,后简写为Tα1-IFN)的重组乳酸乳球菌(Tα1-IFN/r-L.lactis)与NDV活疫苗混合后(Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗)滴鼻免疫14日龄SPF鸡,同时设NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及PBS阴性对照组。分别于免疫后不同时间(3 d、7 d、14 d、21 d、28 d)采血,于免疫后14 d、21 d、28 d分别检测各组鸡血清中的HI抗体效价;采用间接ELISA测定免疫后3 d、7 d及14 d各组鸡血清中主要细胞因子的分泌水平;分离各组鸡免疫后21 d及28 d外周血单个核细胞(PBMC)和外周血白细胞,分别通过CCK-8法检测各组鸡PBMC和白细胞中抗原递呈细胞(APC)的增殖活性。HI抗体检结果显示,分别在免疫后14 d、21 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡的NDV HI抗体效价与NDV活疫苗组以及L.lactis+NDV活疫苗组均无显著差异;但免疫后28 d,该组鸡血清中的NDV HI抗体效价极显著高于其余两组(P<0.0001)。细胞因子检测结果显示,在免疫后各时间点Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IFN-γ及IL-2(Th1型细胞因子)和IL-4(Th2型细胞因子)的分泌水平基本均显著或者均极显著高于NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及阴性对照组(14 d的IL4除外)。Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IL-1β(促炎因子)和IL-10(抗炎因子)的分泌水平在免疫后3 d、7 d、14 d均极显著高于其余各组(P<0.0001)。细胞增殖活性的检测结果显示,免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于其余各组;免疫后28 d,该组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组(P<0.0001),但与NDV活疫苗组差异不显著(P>0.05);免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡外周血白细胞中APC的增殖活性均极显著高于其余各组(P<0.0001);免疫后28 d,该组鸡白细胞中APC的增殖活性极显著高于NDV活疫苗组(P<0.01),但与L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组均无显著差异。上述结果表明,本研究采用表达Tα1-IFN的重组乳酸乳球菌与NDV活疫苗同时滴鼻免疫SPF鸡后,可诱导其产生较高水平的体液免疫及细胞免疫反应,增强SPF鸡免疫系统的应答能力,同时又能维持鸡体内的免疫稳态。有望成为一种新型的、有潜力的免疫佐剂,为新型免疫佐剂的开发提供了重要实验数据及参考依据。

抗菌肽的来源与作用机理及应用

抗生素在畜禽养殖中的长期使用,导致了耐药菌株的出现,不仅危害畜禽机体健康,而且对人类健康构成威胁。抗菌肽也称宿主防御肽,是由宿主基因编码的具有抗微生物活性的小分子多肽,多呈阳离子性和两亲性,二级结构包括α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲等。抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤细胞等作用,同时可提高动物机体免疫力,在替代抗生素方面表现出良好效果。论文综述了抗菌肽的来源,可从天然获得和重组改造获得,并揭示了抗菌肽抗菌、抗病毒,增强机体免疫力的作用机制及在临床中的作用。

抗菌药物影响禽肠道菌群及免疫应答研究进展

肠道微生物在机体内参与营养物质的吸收与消化,影响着宿主免疫系统的发育和成熟,是维持机体内环境稳态的先天性防御屏障。而抗菌药物的滥用会直接或间接导致肠道菌群失调,造成宿主肠道免疫信号转导、免疫细胞发育、免疫应答功能障碍等,影响宿主的消化吸收及生长发育,导致宿主发育不良甚至死亡,直接影响经济效益。论文阐述了家禽肠道菌群的组成、肠道菌群与肠道免疫的关系、抗菌药物对肠道菌群及免疫的影响等方面的研究进展,以期为禽类肠道菌群及其与机体免疫系统关系的研究提供参考,推进抗菌药物的合理使用,促进禽类的绿色养殖。

雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。

动物免疫抑制研究进展

免疫抑制是由于机体参与免疫反应的细胞、组织和器官等组成的免疫系统受到损害,导致机体对抗原应答能力下降的一种免疫异常状态。动物免疫抑制给我国畜牧业生产造成了严重影响和巨大的经济损失。论文主要对免疫抑制性疾病、饲料霉菌毒素、药物、营养、应激等其他因素造成动物机体产生免疫抑制的原因。免疫抑制使动物免疫效果降低而出现免疫失败,抗病阈值下降而发病率和死亡率提高等对畜牧业的影响,以及采取加强饲养管理、均衡营养、消除诱因和使用中草药与生物活性制剂等免疫增强剂等措施,缓解和消除动物免疫抑制等的研究进展进行综述,以期为畜牧业生产和相关研究提供参考。

雏鸡服用益生素后局部粘膜免疫组织抗体生成细胞的动态变化

用商品益生素和自制益生素分别灌服1日龄雏鸡3天,灌服后1、4、7、10、18 d采用组织切片及免疫组织化学方法检测盲肠扁桃体、派伊尔结、哈德尔腺IgA、IgM、IgG生成细胞数量的动态变化,结果发现服用益生素雏鸡其上述三种粘膜组织的IgA、IgM、IgG生成细胞数量主要在4～7 d明显高于对照组雏鸡。表明益生素能够提高雏鸡呼吸道和消化道局部粘膜免疫组织的抗体生成细胞数量,商品益生素提高的更多一些。商品益生素组与自制益生素组的差异,可能与所含菌种和加工工艺有关。

绵羊Toll样受体家族在肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖(LPS)刺激对TLR2、TLR4表达的影响

为确定toll样受体家族在绵羊肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖（LPS）刺激过程中TLR2、4的动态表达规律。通过RT-PCR方法检测绵羊TLR1-TLR10表达分布;以α-tubulin和GAPDH为内标基因,对绵羊TLR2、4进行克隆和测序,将重组质粒作为标准品建立实时定量PCR标准曲线,通过实时定量PCR方法检测LPS诱导0-48 hTLR2、4的动态表达。结果表明,在绵羊肺泡巨噬细胞中检测到TLR1、2、4、6、7、8、9、10的表达,而TLR3、5未见表达;α-tubulin和GAPDH在LPS诱导前后表达量存在显著差异,均不适合作为内标基因,以使用的细胞数和总RNA量进行均一化校正,发现TLR2、4在诱导后20 min就达到高峰,且在整个诱导过程中维持较高水平。绵羊肺泡巨噬细胞TLR2、4对LPS刺激的应答反应很灵敏,参与机体的早期应答反应。

番鸭细小病毒弱毒株的选育及其生物学特性

应用生物技术对番鸭细小病毒莆田株（ｍｕｓｃｏｖｙｄｕｃｋｌｉｎｇｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）进行诱变，选育出符合制苗用的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株失去了对１日龄雏番鸭的致病力，对番鸭胚的ＥＬＤ５０为ｌｇ４．５～ｌｇ５．０；对ＭＤＥＦ细胞ＴＣＩＤ５。为ｌｇ５．０～ｌｇ６．０；在雏番鸭体内连续传５代，未见毒力返强现象。１日龄番鸭免疫接种ＭＰＶ－Ｐ１后，第３天部分鸭血清中出现抗体，第７天全部出现抗体，第２１～３０天抗体效价值达高峰。肌肉注射比滴鼻免疫接种方法效果好。该弱毒株具有良好的免疫原性和遗传稳定性。

鸡白细胞介素-6的原核表达及其对疫苗免疫增强效果的研究

本研究采用PCR技术,扩增、克隆了鸡白细胞介素-6(ChIL-6)成熟肽基因并进行原核表达,对表达的鸡白细胞介素-6组蛋白(rChIL-6)通过尿素变性、复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,经测定rChIL-6的促小鼠脾脏淋巴母细胞的增殖能力来评估重组蛋白的生物学活性;用4个不同浓度的rChIL-6在不同部位与NDV活疫苗、AIVH5N1灭活疫苗同时肌肉注射来评价其免疫增强作用。研究结果表明,表达rChIL-6为25ku左右,经纯化后的蛋白纯度在95%以上;100pg/mLrChIL-6注射组具有较高的促小鼠脾淋巴母细胞增殖活性;不同浓度的rChIL-6注射组对NDV和AIVH5N1疫苗都具有较好的免疫增强作用,但对其免疫抗体产生时间及抗体滴度峰值出现和维持时间均没有明显的影响,其中0.03μg/mLrChIL-6浓度注射组的对鸡疫苗的免疫增强作用最明显,过高或过低浓度的rChIL-6对疫苗免疫增强作用不显著。这些研究为新型免疫增强佐剂开发以及鸡免疫失败性疫病的预防和治疗奠定了基础。

重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%。将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定。结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性。重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL～250μg/mL。此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性。

芦丁对大鼠免疫器官指数的影响

研究天然植物提取物芦丁对大鼠免疫器官指数的影响,考察芦丁调节动物免疫功能的作用。选择16只Wistar雌性青春期大鼠,随机分为2组,每组8只,分别为对照组(每日每只灌胃生理盐水2mL)、芦丁组(每日灌服芦丁60mg/kg体重),正式试验为期2周。12只Wistar受孕母鼠,随机分为2组,每组6只,相同处理,从哺乳第4天开始连续给药2周,基础日粮相同。测定大鼠胸腺指数和脾脏指数。结果显示,雌性青春期大鼠芦丁组胸腺指数为56.57±1.91,脾脏指数为266.54±1.39,显著高于对照组的144.84±4.61和251.96±5.72(P<0.05),泌乳大鼠芦丁组胸腺指数和脾脏指数分别为89.36±1.82和247.41±18.13,同样高于对照组的72.57±6.16和191.89±12.61(P<0.05),呈现相同趋势。表明芦丁能够促进雌性青春期大鼠和泌乳大鼠免疫器官胸腺和脾脏的发育。

某复方中药抗禽流感病毒的免疫机制

通过SPF鸡服用某复方中药后,了解免疫器官指数、外周血液中CD+3、CD+4、CD+8及TCR+1T淋巴细胞百分比含量及IgG的变化,探索某复方中药对禽流感病毒作用的免疫机理。结果表明:给药组免疫器官指数、外周血液中CD+3、CD+4、CD+8及TCR+1T淋巴细胞百分比含量及IgG均比对照组高。所以,该复方中药可促进SPF雏鸡免疫器官的发育和迅速成熟,提高SPF鸡的细胞免疫及体液免疫功能。

分泌型IgA对肠道黏膜免疫的研究进展

分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)作为一种包被于肠道黏膜的抗体,能保护肠道免受病原微生物和毒素的攻击而不引起炎症反应,对激活黏膜免疫和维持肠道内环境稳态起到重要作用。在动物肠腔中,SIgA能通过调节肠道上皮细胞受体的识别能力,阻断病原微生物侵入黏膜相关淋巴组织,随后在肠道蠕动和黏液绒毛的协助运动下,最终将病原微生物清除;且最近也有报道揭示SIgA在肠上皮胞吞转运作用下的新机制。因此,作者主要阐述SIgA在肠道黏膜免疫及其内环境方面发挥关键的生物学特征和功能,以及探讨胞吞转运机制下SIgA的潜在作用。

传染性喉气管炎疫苗免疫对鸡红细胞免疫功能状态的影响

选择健康仔鸡 4 0只 ,随机分为 4组 ,每组 10只。Ⅰ组为健康对照组 ,Ⅱ～Ⅳ组为不同处理的试验组。在 4 5日龄时 ,Ⅱ组免疫传染性喉气管炎 (ILT)疫苗 ,Ⅲ组免疫ILT疫苗同时肌肉注射中药免疫增强剂Ⅰ ,Ⅳ组免疫ILT疫苗同时肌肉注射中药免疫增强剂Ⅱ。分别在免疫前 1天、免疫后第 3天和第 9天 ,测定各组鸡的红细胞免疫功能状态。结果发现 ,试验Ⅱ组的鸡在ILT疫苗免疫后 3天 ,RBC_CR1花环率和RBC_IC花环率显著降低 ,与其他各组比较差异极显著 (P <0 .0 1)。免疫后 9天 ,RBC_CR1花环率和RBC_IC花环率升高到正常水平 ;而Ⅲ组和Ⅳ组 ,免疫后RBC_CR1花环率高于Ⅰ组 (P <0 .0 1、P <0 .0 5 )。说明ILT疫苗免疫会引机体红细胞免疫功能的短暂性降低 ;

半胱胺对大鼠生长及免疫的影响

离乳大鼠和 1 60g左右大鼠每周口服半胱胺一次 (1 0 0mg/kgBW) ,结果发现半胱胺能明显促进 1 60g左右大鼠的增重 ,却对离乳大鼠没有明显效果。两组处理均发现大鼠血清生长激素水平显著升高 ,但是后者血清IGF I水平较前者具有更强的升高趋势。结果揭示 ,半胱胺的促生长作用与动物的生长周期密切相关 ,而且这种状况很可能由IGF I水平所决定。半胱胺处理大鼠引发诸多免疫指标的改变 。

RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展

模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)中的RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其RNA配体结合病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),识别非自身的病毒RNA。被感染的细胞中,这种相互作用可以通过触发RLRs以及下游信号分子的活化,最终导致I型干扰素的产生和炎性因子的产生,细胞做出抗病毒免疫应答。本文简单介绍了RLR信号通路的组成及其泛素化调控,总结了病毒逃避RLR通路信号转导的机制,最后阐述了NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)通路对RLR通路的影响。通过对RLR信号通路分子在抗病毒免疫调节中的作用了解,可以为控制病毒的感染和免疫调节提供一个新的思路。