细粒棘球绦虫EgM123表面展示型酿酒酵母菌株的构建及免疫原性初步评价

旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。诱导培养表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123,并进行体外分析,通过免疫荧光分析以及BCA蛋白定量法对EgM123蛋白进行定位鉴定及定量分析。诱导表达表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123菌株并免疫BALB/c小鼠。通过检测小鼠血清中抗体及细胞因子水平变化评价细粒棘球绦虫EgM123口服酵母活载体菌株的免疫效果。结果成功克隆了细粒棘球绦虫EgM123的ORF序列,长度为594 bp。PCR检测以及酶切鉴定结果表明,成功构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。免疫荧光结果显示,EBY100/pYD1-EgM123表面具有绿色荧光,BCA蛋白定量法测定50 OD_(600 nm)EBY100/pYD1-EgM123诱导72 h后蛋白的表达量为15.59μg,浓度为0.31μg/OD_(600 nm)。抗体水平检测结果表明,EBY100/pYD1-EgM123免疫组特异IgG、IgA、IgM抗体的分泌均高于PBS组、EBY100组及EBY100/pYD1组(P<0.05)。细胞因子检测发现,EBY100/pYD1-EgM123免疫组对小鼠细胞因子IL-17、IFN-γ的分泌量显著加强(P<0.001)。综上所述,通过对细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株免疫效果的初步评价,发现该口服活载体菌株具有免疫原性,可以刺激小鼠产生特异性免疫应答,进一步说明其具有成为终末宿主抗囊型包虫候选疫苗的潜力。

河南部分地区奶牛肠道纤毛虫感染情况及分子鉴定

为了明确奶牛肠道纤毛虫的感染情况及其人兽共患风险,从河南省不同地区8个集约化奶牛场中采集462份新鲜粪样,采用粪便直接涂片法镜检和基于18S rDNA和ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列对样品中纤毛虫感染情况和分子特性进行了鉴定。结果显示,奶牛粪便中存在有槽巴克斯顿纤毛虫和结肠小袋纤毛虫,其中有槽巴克斯顿纤毛虫感染率为29.9%,成年牛感染率显著高于其他年龄段奶牛(P<0.01);结肠小袋纤毛虫感染率为3.9%,不同年龄段感染率差异不显著(P>0.05),8份样品为有槽巴克斯顿纤毛虫和结肠小袋纤毛虫混合感染。未从奶牛粪便中检出瘤胃内纤毛虫,说明奶牛瘤胃内的共生纤毛虫不随粪便排出体外。研究结果为集约化奶牛场纤毛虫病的防控提供了重要的基础数据。

骨桥蛋白和p38MAPK信号通路在多房棘球蚴原头节发育中的作用

为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选取合适的SB202190浓度后在体外将原头节分为DMSO组、anti-p38MAPK组、PBS组、OPN组、OPN+anti-p38MAPK组,采用伊红染色、caspase-3试剂盒检测caspase-3、EDU和Hoechst染色、活性氧(ROS)检测探针检测原头节的活性、凋亡和增殖情况。结果显示,抑制Em的SB202190适宜浓度为20μmol/L,SB202190增加Em的伊红染色率、caspase-3水平,减少EDU阳性、ROS水平,OPN可减少Em伊红染色率、caspase-3水平,增加EDU阳性率、ROS水平,且SB202190可逆转OPN对Em的结果,这些结果表明SB202190可抑制Em的活性和增殖、促进凋亡并与浓度正相关,而OPN可促进Em的活性和增殖、抑制凋亡,且SB202190可逆转OPN对Em的作用。研究结果为OPN和p38MAPK信号通路可能成为治疗多房棘球蚴病的新分子靶点提供证据。

弓形虫组蛋白乙酰转移酶MYST-A对虫体蛋白质翻译后修饰的影响

为了探究弓形虫组蛋白乙酰转移酶MYST-A对弓形虫蛋白质翻译后修饰的影响,在弓形虫ToxoDB数据库获取基因全长序列,构建表达载体,大量纯化His标签重组蛋白质,免疫实验动物,制备多克隆抗体并纯化。利用间接免疫荧光实验对其进行亚细胞定位分析,用不同浓度的抗体作用于弓形虫并提取全虫蛋白,进行Western-blot验证,分析其是否对虫体蛋白质翻译后修饰产生影响。ALP2a蛋白质是组成组蛋白乙酰转移酶复合物的重要组成部分,MYST-A与ALP2a可能形成组蛋白乙酰转移酶复合物共同参与组蛋白的翻译后修饰,拟通过分子互作实验验证两者是否发生相互作用。结果表明:成功构建重组表达载体并纯化重组蛋白质His-MYST-A。His-MYST-A免疫小鼠以及兔子,并获得了特异性多克隆抗体。IFA分析结果表明:在细胞内的虫体中和游离速殖子中,弓形虫MYST-A均在虫体细胞质内广泛分布。MYST-A对弓形虫蛋白质翻译后修饰影响结果表明,随着抗体浓度的增加,泛素化、单甲基/二甲基化、丙二酰化、琥珀酰化的修饰水平均增强(尤其是55 kDa处),说明该蛋白质起负调控作用。分子互作实验验证MYST-A与ALP2a两者发生相互作用。研究进一步揭示了弓形虫组蛋白乙酰转移酶MYST-A对蛋白质翻译后修饰的重要调控作用,为深入研究其生物学功能奠定了基础。蛋白质翻译后修饰的研究对了解弓形虫的致病机制及其与宿主的相互作用、致病机制有重要意义,同时也为新型弓形虫疫苗研制及药物靶标的筛选提供一定的参考价值和理论依据。

云南省淡水螺广州管圆线虫感染情况调查分析

为了查明云南省淡水螺广州管圆线虫感染情况和分布特点,从野外和农贸市场采集5种螺共4502份,取其肌肉用组织压片法镜检广州管圆线虫幼虫,再提取组织DNA,采用PCR扩增广州管圆线虫ITS基因。镜检发现,在福寿螺中发现广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫;PCR扩增显示:5份样品为广州管圆线虫阳性,总阳性率为0.111%(5/4502);不同地区间,昆明市阳性率最高(0.231%,4/1734),德宏州(0.221%,1/453)次之;不同淡水螺种类中,福寿螺阳性率为0.192%(4/2081),环棱螺阳性率为0.160%(1/624),其余3种螺未检出;不同采样环境下,农贸市场阳性率为0.192%(4/2083),野外环境阳性率为0.041%(1/2419)。不同螺种类和采样环境感染率有统计学意义(P<0.05)。研究结果获悉了云南省部分淡水螺广州管圆线虫的感染情况,为云南省广州管圆线虫病的防控提供了重要基础数据。

元江县羊肠道寄生虫感染调查及危险性因素分析

采用饱和盐水漂浮法和流行病学的“病例-对照研究”对元江县羊肠道寄生虫感染现状进行调查和危险性因素分析。在元江县10个乡(镇)22个养殖场(户)所采集的339份羊新鲜粪便样本中,寄生虫卵囊总检出率为93.51%(317/339),其中线虫卵检出率为24.48%(83/339),球虫卵囊检出率为69.03%(234/339),混合感染虫卵囊检出率为20.06%(68/349),未检出吸虫虫卵;不同区域、品种羊肠道寄生虫卵囊检出率也有所差异。危险性因素分析显示,成年羊线虫、球虫及混合感染虫卵囊检出率分别是羔羊的2.47倍、2.84倍、2.31倍,表明元江县羊年龄因素与羊肠道寄生虫病流行有中等程度的关联;母羊线虫、球虫及混合感染虫卵囊检出率分别是公羊的1.11倍、1.09倍、1.21倍,表明元江县羊性别因素与羊肠道寄生虫病流行有弱程度的关联;高海拔球虫、线虫及混合感染虫卵囊检出率分别是低海拔的2.19倍、1.9倍、2.09倍,表明元江县海拔高度与羊肠道寄生虫病流行有中等程度的关联;温热气候条件下线虫、球虫及混合感染虫卵囊检出率分别是寒冷气候条件下的2.45倍、2.45倍、2.14倍,表明元江县气温与羊肠道寄生虫病流行有中等程度的关联。

新疆兵团第十二师养羊户布鲁氏菌病防控知信行现状及其影响因素

为了解新疆兵团十二师养羊户的布鲁氏菌病(简称“布病”)防控知信行情况及其影响因素,选取230个养羊户,通过问卷调查,收集其对人间和畜间布病感染途径和临床症状等防疫知识以及布病防控态度和关键预防行为实施意向等信息,运用SPSS软件对影响因素进行统计描述和分析。结果显示:被调查养羊户中,对布病防控相关知识的知晓率为69.7%,其中羊群布病感染途径和临床症状的知晓率分别为71.2%和67.3%,人群布病感染途径和临床症状的知晓率分别为64.4%和68.0%;78.5%的养羊户对布病防控持积极态度,关键预防行为实施意向率为73.3%。非参数检验分析表明,养羊户所在团场、民族及羊群饲养方式对其知信行水平影响较大,不同组间差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明,新疆兵团十二师养羊户的布病防控知信行水平还需提升,有必要采取相应的宣传干预措施,提升养羊户对布病的认识与预防水平,以保障公共卫生安全和畜牧业健康发展。

羊捻转血矛线虫病检测方法研究进展

羊捻转血矛线虫病是由捻转血矛线虫寄生于羊等小反刍动物皱胃内引起的一种危害严重的嗜血性寄生虫病。病羊临床表现为消瘦、贫血和衰弱等慢性消耗性症状,严重感染者可致死。该病在我国牧区普遍流行,目前暂无安全长效疫苗可用,加之耐药性严重,放牧羊群感染率和发病率居高不下,极大地降低了羊养殖业的经济效益。准确可靠的检测手段是诊断寄生虫感染、制定驱虫治疗方案、耐药监测及流行病学调查的关键环节。本文详细介绍了羊捻转血矛线虫病的检测技术研究现状,分析了病原学、免疫学及分子检测等方法的优缺点,并对未来检测技术发展趋势进行了展望,以期为该病新型检测方法的研发及综合防控策略提供参考。

miRNA在寄生虫与宿主协同进化中的作用

miRNA为非编码小RNA,通过RNA干扰的方式对基因表达进行调控。宿主和寄生虫之间的互作是一个复杂有趣,并且有特异性的协同进化过程。对于寄生虫来讲,寄生虫释放的一些miRNA为其在宿主体内繁殖起到重要作用,而一些宿主也可以通过miRNA靶向寄生虫基因,从而抵御寄生虫的入侵。miRNA参与到宿主和寄生虫体内的免疫调节、基因调控等过程,甚至可能在寄生致病机理、寄生特异性及共适应过程中发挥重要作用。研究寄生虫与宿主之间miRNA的互作,对于解析宿主抗性、寄生虫的毒性及传染性,以及协同进化过程中的平衡状态具有重要的研究意义。

ApiAP2转录因子家族调控弓形虫生长发育的研究进展

弓形虫病是世界范围内危害最为严重的人兽共患寄生虫病之一。WHO数据显示,全球人群弓形虫抗体阳性率在25%—50%。孕妇感染弓形虫引起的垂直传播严重危害胎儿及婴幼儿健康,弓形虫感染也是引起免疫缺陷病人死亡的主要因素。在畜牧生产中,弓形虫病引起孕畜流产、死胎,危害严重。弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内原生动物寄生虫,属于顶复门原虫,生活史复杂,包括在中间宿主(人类和其他温血动物)的无性增殖和在终末宿主(猫科动物)的有性繁殖。为完成弓形虫在中间、终末宿主复杂的生命周期,其在不同发育阶段的转化及生长需要严格而精准的基因调控,因此揭示弓形虫生长发育的调控机制对治疗性药物和疫苗的研发具有重要意义。ApiAP2转录因子是一类具有AP2结构域和强大调节功能的蛋白家族,在疟原虫、弓形虫等寄生虫的生长发育中发挥核心调控作用,是阐明弓形虫不同生活史阶段发育与转化调控机制的突破口。弓形虫作为顶复门原虫研究的模式生物,有67个含AP2结构域的转录因子被注释,部分转录因子在弓形虫生命周期生长发育和转化过程中发挥核心调控功能,但尚有大部分AP2转录因子的生物学功能未知,尤其是针对有性繁殖阶段发育调控的研究较为匮乏。本文对已报道的弓形虫AP2转录因子的研究手段、生物学功能、调控的互作基因及网络进行系统梳理,旨在挖掘对弓形虫生长发育的重要节点起核心调控作用的基因或分子,在微观分子层面初步勾勒出弓形虫复杂生活史不同生长发育时期的调控机制,并对其在新型药物和疫苗研发中的作用及潜能进行展望。以期为动物弓形虫病的防控提供新的思路和切入点,阻断人弓形虫病的感染源,践行“人病兽防、关口前移”,实现“同一世界、同一健康”。

四川、西藏部分地区牦牛场球虫感染情况调查

【目的】调查四川省和西藏自治区部分地区牦牛球虫感染情况,为该地区牦牛球虫病的预防、控制提供理论参考。【方法】从四川省和西藏自治区部分地区8个牦牛场采集2~6、7~12和>12月龄牦牛的新鲜粪样共376份,采用饱和盐水漂浮法对粪便样品中球虫卵囊进行定性检查,采用麦克马斯特计数法统计球虫阳性粪样中每克粪便中的球虫卵囊数(OPG),了解不同牦牛场、不同月龄牦牛的球虫感染情况。【结果】8个牦牛场均检测出球虫感染,阳性样品共85份,平均感染率为22.6%(85/376),平均OPG为1643。共检出9种艾美耳属球虫,优势虫种为阿拉巴艾美耳球虫,感染率为37.6%(32/85),多呈混合感染。平均感染率最高的是2~6月龄牦牛,感染率为37.9%(11/29);其次是7~12月龄牦牛,感染率为31%(57/184);>12月龄牦牛的球虫感染率为10.4%(17/163)。【结论】四川和西藏部分地区牦牛场均存在不同程度的球虫感染,均以混合感染为主。牦牛球虫感染率、感染强度以及优势虫种在不同地区、不同年龄牦牛之间存在差异。

宁夏地区奶牛源隐孢子虫分子鉴定与分析

为了明确宁夏地区奶牛隐孢子虫的流行情况及其优势基因型,采集宁夏4个地区10个规模化奶牛养殖场中1174份奶牛粪便样品,基于核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因通过套式PCR进行检测和分析。结果显示,宁夏地区奶牛隐孢子虫阳性率为28.5%(335/1174);共鉴定出4种虫种,即微小隐孢子虫、牛隐孢子虫、瑞氏隐孢子虫和安氏隐孢子虫,阳性率分别为40.6%(136/335)、36.1%(121/335)、19.4%(65/335)和3.9%(13/335);微小隐孢子虫共鉴定出4种基因亚型,分别为ⅡdA15G1(n=70)、ⅡdA18G1(n=26)、ⅡdA19G1(n=23)和ⅡdA20G1(n=17)。统计学分析显示,在宁夏地区,0~2月龄的犊牛隐孢子虫感染率最高,且奶牛隐孢子虫的感染率与月龄差异显著相关(P<0.001)。表明宁夏地区奶牛存在隐孢子虫感染且存在人畜共患虫种,ⅡdA15G1微小隐孢子虫是宁夏地区奶牛感染的优势亚型。

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白Et RON2 L1-2特性与功能初步分析

为研究柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(RON2)同源分子——Et RON2 L1-2的分子特性与功能,利用实时荧光定量PCR、Western blot、入侵抑制试验、间接免疫荧光试验以及双分子荧光互补实验(BiFC)等方法分析其生物学特征。结果发现Et RON2 L1-2蛋白序列与Et RON2仅有29.69%的同源性,转录水平和蛋白水平均在第二代裂殖子阶段最高。抗r Et RON2 L1-2抗体对子孢子入侵细胞有明显抑制作用。Et RON2 L1-2蛋白主要分布于经PBS孵育子孢子的胞质和表面,并分布于经完全培养基孵育或入侵DF-1细胞后2 h子孢子的顶端;其表达量在滋养体和未成熟裂殖体增加,且在带虫空泡膜也有分布;在第二代裂殖子中主要分布于整个胞质。Et RON2 L1-2与柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原4(AMA4)之间存在互作关系。

弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析

为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示,Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变;间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达;纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力,同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体(>1∶25600)。以上结果表明,通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。

柔嫩艾美耳球虫莫能菌素耐药株筛选及其与敏感株基因组SNP密度分布差异分析

【目的】明确莫能菌素耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异,进而解析莫能菌素耐药性产生的分子机制。【方法】通过模拟田间感染的方式诱导柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素的耐药性。第1次诱导试验,将400只14日龄无球虫鸡平均分为2组,分别为Ⅰ组(接种不加药组)和Ⅱ组(莫能菌素推荐剂量组),按照100 mg/kg在基础饲粮中添加莫能菌素。从Ⅰ组中随机选择10只鸡,接种对莫能菌素敏感的柔嫩艾美耳球虫豪顿株,剂量为5000卵囊/鸡。自接种后8 d开始,将Ⅰ组新鲜粪便抛洒到Ⅱ组垫料上模拟球虫田间感染,连续抛洒17 d。接种后33 d,随机剖检Ⅱ组10只鸡,收集盲肠内卵囊。第2次诱导试验,将100只14日龄无球虫鸡作为Ⅲ组(莫能菌素高剂量组),按照133 mg/kg在饲料中添加莫能菌素,随机选择10只鸡接种收集的卵囊,剂量为5000卵囊/鸡。接种后17 d,莫能菌素添加量提高至400 mg/kg。接种后27 d,收集盲肠卵囊。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)四项指标综合判定诱导株的耐药性。提取耐药株或敏感株孢子化卵囊基因组并进行基因组重测序,通过单核苷酸多态性(SNP)密度分布解析耐药株与敏感株之间的差异。【结果】第1次诱导试验,接种后33 d获得耐100 mg/kg莫能菌素的卵囊(1×莫能菌素诱导株)。第2次诱导试验,接种后27 d获得耐400 mg/kg莫能菌素的卵囊(4×莫能菌素诱导株)。4×莫能菌素诱导株的ACI为121,POAA为25.4%,RLS为33%,POP为64%。与参考基因组相比,敏感株基因组SNP共12191个,耐药株基因组SNP共74931个,耐药株在第11号染色体3.3~4.2 Mb区间内SNP富集分布,该区间内3个基因ETH2_1113700、ETH2_1113500和ETH2_1113600的SNP位于编码区。【结论】本研究获得了对莫能菌素完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。在第11号染色体,耐药株与敏感株的SNP分布具有显著差异,筛选到3个耐药候选基因。

miRNAs介导寄生虫和宿主互作机制的研究进展

寄生虫病流行范围广泛,严重威胁人类健康并影响畜牧业发展。miRNAs是一类长度约19~24 nt的高度保守的内源性非编码单链小分子RNAs,寄生虫会表达大量的miRNAs介导其感染宿主,同时宿主miRNAs的表达谱也会发生改变,这些miRNAs将影响宿主的抗性或易感性,miRNAs已成为研究寄生虫和宿主互作机制的热点方向之一。本文综述了不同种类寄生虫表达的miRNAs在其感染宿主中的作用及宿主miRNAs对寄生虫的调控,旨在为研发基于miRNAs的抗寄生虫感染的治疗措施提供参考。

弓形虫多表位PLGA纳米疫苗的研究

构建弓形虫多表位PLGA纳米疫苗并评估其可行性,预测弓形虫TgMIC3蛋白的B、T淋巴细胞优势抗原表位,联合抗原表位SAG1((238-256))、GRA7((20-28))和AS15,构建出新型多表位肽,用生物信息学工具对其理化性质、三级结构和分子对接能力等特征进行分析;原核表达并纯化多表位重组蛋白(multi-epitope protein, MEP),通过Western blot鉴定纯化效果;搭建MEP-PLGA纳米递送体系,对纳米颗粒进行表征。结果表明,多表位肽为亲水性蛋白非过敏原,具有一定抗原性,抗原表位均呈现在蛋白表面,能与MHC分子H-2-Dd稳定结合;可在BL21(DE3)大肠埃希氏菌表达系统中稳定表达,并能被特异性抗体所识别;构建的MEP-PLGA纳米递送体系包封为54.42%,纳米颗粒饱满,大小均一。成功设计并构建出弓形虫多表位PLGA纳米疫苗,为弓形虫新型纳米疫苗的研发奠定了基础。

四川省甘孜州部分地区藏猪消化道寄生虫感染情况调查

为了解四川省甘孜州部分地区藏猪消化道寄生虫感染情况,通过饱和盐水漂浮法结合形态学对采自该地区7个养殖场的176份藏猪新鲜粪便样品中的寄生虫虫卵和卵囊进行鉴定。结果显示,检测样品中猪蛔虫虫卵、猪毛尾线虫虫卵、食道口线虫虫卵以及猪囊等孢球虫卵囊的阳性率分别为42.04%(74/176)、25.57%(45/176)、5.11%(9/176)和43.18%(76/176),总感染率达75%(132/176);腹泻粪便样本寄生虫感染率80.88%(55/68),显著高于非腹泻粪便样本71.29%(77/108)(P<0.05);放牧藏猪寄生虫感染率85.06%(74/87),显著高于圈养藏猪65.17%(58/89)(P<0.05)。表明四川省甘孜州部分地区藏猪消化道寄生虫的感染较为严重,为该地区藏猪消化道寄生虫病的防控提供了依据。

包虫病的流行与诊治研究进展

包虫病(Hydatid disease)又称棘球蚴病(Echinococcosis),是由棘球属绦虫寄生于人、动物的肝脏和肺脏等组织器官引起的一种人畜共患寄生虫病。包虫病呈全球性分布,我国主要分布于西部牧区或半牧区,以囊型棘球蚴病和泡型棘球蚴病为主,严重危害人体健康和影响畜牧业发展,也引发了一系列的公共卫生问题和经济问题。本文综述了包虫病流行情况、诊断及防治,以期为包虫病的防控提供参考。

犬弓首蛔虫超氧化物歧化酶的分子特性及原核表达

为探究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)的分子特性,根据GenBank中登录的Tc-sod基因序列(GenBank:AAB00227.1),以T.canisc DNA为模板对Tc-sod全长基因进行扩增,并进行序列分析和多重序列比对;同时构建Tc-sod/pET-32a原核表达载体,经ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-sod全长基因为573 bp,共编码190个氨基酸;多重序列分析表明Tc-SOD的氨基酸序列与曼氏血吸虫、异尖线虫、美洲板口线虫、马来丝虫、犬钩口线虫均具有SOD-Cu保守结构域.种系发育分析发现Tc-SOD与马来丝虫进化关系较近. SDS-PAGE结果显示重组蛋白Tc-SOD的大小约为37 ku,以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以70 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测显示抗体滴度>1∶320 000,表明重组蛋白的免疫原性较好;Western Blot结果显示抗体能与Tc-SOD蛋白特异性结合,表明抗体特异性高.