牛羊布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验的建立与应用

【目的】建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品。【方法】建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2287份、非免疫地区252份牛、羊血清。【结果】建立了NH-AGID方法,检测稳定,重复性好,具有较高的特异性;对自然感染阳性动物检测敏感性低于80%,对排菌动物的检测敏感性高于90%,检出布病阳性抗体的阈值高于RBT。免疫地区血清NH抗体平均检出率17.8%,LPS抗体平均检出率52.3%;非免疫地区血清NH抗体平均检出率40.9%,LPS抗体平均检出率54.8%。【结论】应用NH-AGID方法可鉴别区分免疫地区牛、羊布病感染动物和免疫动物。检出NH抗体动物处于布鲁氏菌活动期或排菌期为布病感染动物,应及时剔除出群。

鸭甲型肝炎病毒3型信阳株的分离鉴定及遗传演化分析

为了解信阳地区鸭甲型肝炎病毒3型的遗传变异特性,对信阳市发生疑似肝炎的金定雏鸭进行9种常见病毒PCR/RT-PCR检测,同时采集病鸭肝脏组织无菌处理后,尿囊腔接种10日龄SPF鸭胚进行病毒分离,并对分离毒株进行全基因组和VP1基因序列分析。结果:成功分离到1株鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV3),命名为HNXY23;接种病毒的鸭胚发育不良,死亡胚体全身呈出血水肿;序列比对和系统发育树表明,分离株HNXY23属于DHAV3 GⅠ基因型,与2022年分离株HB-1、HZ-1、HZ-2和HZ-3亲缘关系较近;利用DNAMAN软件比对31株DHAV3 VP1氨基酸位点变异情况,发现在184、187、195、206和209位这5个氨基酸位点有较为明显的变化差异。本研究结果丰富了信阳地区DHAV3的分子流行病学资料,为进一步研究DHAV3的致病机制奠定了基础。

2010—2021年甘肃省山羊传染性胸膜肺炎流行病学调查分析

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。调查结果显示,2010—2021年全省CCPP平均发病率为8.15%(11 077/135 860),病死率为29.49%(3 267/11 077),CCPP发病率与物种、季节、年龄和是否采取治疗措施有关。山羊CCPP发病率(9.79%,9 038/92 306)极显著高于绵羊(4.68%,2 039/43 554)(P<0.01);冬季发病率(10.62%,8 129/76 548)极显著高于夏季(4.43%,1 979/44 715)(P<0.01);幼龄羊发病率(5.58%,1 899/34 060)极显著低于成年羊(9.02%,9 178/101 800)(P<0.01);有既往发病史的老疫点CCPP发病率和病死率均低于首次发病的新疫点,且治愈率更高;采取治疗措施羊只的CCPP发病率和病死率均低于未采取治疗措施羊只;不同性别和养殖规模的CCPP发病率均无显著差异(P>0.05),CCPP的发病也无明显地域性。结果表明,CCPP在甘肃省普遍流行,山羊比绵羊更易感,在年龄较大、寒冷季节和缺乏治疗的情况下发病率增加。因此,养殖场户应当针对风险因素制定预防策略,并通过采取定期调查监测、预防接种和治疗等措施,降低CCPP在甘肃省的发病率。

新型鹅细小病毒徐州分离株NGPV XZ-01的分离和致病性研究

为了研究2021年6月江苏徐州某商品半番鸭养殖场所发疾病的病原及其致病性,从该养殖场发病的半番鸭群中无菌采集肝脏、脾脏、肠道等临床样品,采用PCR方法对病原进行鉴定,将所采集样本处理后接种至非免疫鸭胚中,连续多次传代后,对鸭胚组织及尿囊液进行病理学、电镜检查及动物试验。结果显示:PCR检测结果鉴定为新型鹅细小病毒阳性;鸭胚尿囊液在电镜下观察到细小病毒粒子,胚体病理切片观察显示符合细小病毒所致病变;动物试验显示,攻毒试验鸭主要表现为生长发育明显受阻,大部分试验鸭成为“僵鸭”,于20日龄后陆续出现上下喙变短、舌头外露等症状,剖检病变主要为肠内容物稀薄及泄殖腔膨大,肠道组织切片观察显示肠绒毛上皮细胞坏死、脱落及部分肠腺坏死,符合鸭短喙侏儒综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)所致雏鸭的症状与病变。结果表明:该肉鸭养殖场所发疾病为SBDS,将该场分离的病毒命名为新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)。

西藏牦牛皮蝇蛆病防治的SWOT分析

文章旨在深入了解西藏牦牛牛皮蝇蛆病的防治形势,运用系统全面的理念进行牛皮蝇蛆病防治,完善西藏地区动物疫病防控和公共卫生体系。运用动态分析法,根据SWOT分析框架,对西藏牦牛皮蝇蛆病防治工作具备的优势、劣势、机遇和挑战进行全面分析,并提出相应的对策。结果显示,在西藏地区,包括牛皮蝇蛆病在内的寄生虫病防治得到了重视和支持,建立了相对完善的防控体系,积极开展了以“春防”“秋防”为主的防治工作,但仍然存在牛皮蝇蛆病综合防治难度大、媒介控制困难等挑战。应继续发挥政府主导作用,加强制度建设,引导市场积极参与,提升广大农牧民防病治病意识,做到群防群控,为牦牛牛皮蝇蛆病防治建立可持续机制。

山羊肺源肠外致病型大肠杆菌和粘质沙雷氏菌混合感染的病原分离鉴定、毒力因子基因检测和耐药性分析

为了确定1例成年山羊突然急性死亡的原因,本试验采用病史调查、病理剖检、病原菌分离和鉴定明确细菌性病原,对分离菌进行致病性试验和药敏试验,并根据药敏试验结果对其余未发病山羊进行给药预防;对分离到的大肠杆菌进一步进行系统进化群分析和毒力因子基因检测。结果显示,死亡山羊剖检可见部分结肠肠段严重出血,心内膜有散在出血斑,瘤胃黏膜局部充血;从肺组织中分离获得大肠杆菌和粘质沙雷氏菌;致病性试验结果显示,大肠杆菌对小鼠的致死率为90%,粘质沙雷氏菌对小鼠无致病性;药敏试验结果显示,大肠杆菌对头孢曲松和丁胺卡那敏感,粘质沙雷氏菌对恩诺沙星、丁胺卡那、庆大霉素和磷霉素中度敏感;使用头孢噻呋钠和恩诺沙星注射液对其余未发病山羊进行预防性注射给药后,未再出现发病死亡。系统进化群分析显示,分离获得的大肠杆菌属于A群;毒力因子基因检测结果显示,该大肠杆菌携带2种毒力标记基因(afa和iutA),因此属于肠外致病型大肠杆菌,该菌还携带其他毒力因子基因(ompA、ompT、traT、iss、iroN、iucD、fimH和gafD);本试验结果可为山羊大肠杆菌和粘质沙雷氏菌混合感染的诊断和治疗提供参考。

2020-2022年湖南省小反刍兽疫春、秋季免疫效果评估

为掌握湖南省小反刍兽疫集中免疫效果,科学评估各市州免疫质量,2020~2022年在全省开展小反刍兽疫春、秋季免疫效果评估。结果显示:2020~2022年小反刍兽疫集中免疫的群体合格率为65.3%,个体合格率为71.0%。全省各地区小反刍兽疫免疫不平衡,个体免疫率最高的可达94.4%,最低的仅为47.5%。规模场免疫效果好于散养户。调查显示,一些散养户免疫意识较弱,存在免疫操作不规范情况。需要进一步加强对散养户的宣传和指导。

辽宁绒山羊产气荚膜梭菌的分离鉴定与耐药性分析

研究对疑似产气荚膜梭菌感染的辽宁绒山羊病例样本进行细菌分离鉴定,以期为辽南地区辽宁绒山羊养殖过程中科学防治产气荚膜梭菌病提供参考。试验采集腹泻辽宁绒山羊的粪便肛拭子和腹泻病死羊肠道内容物,结合临床症状进行染色镜检、PCR扩增、测序及药敏试验。结果显示,样本经细菌分离培养、染色镜检、鉴别培养、PCR鉴定确诊为产气荚膜梭菌感染。药敏试验结果显示,分离株对红霉素、四环素、诺氟沙星等耐药,对氟苯尼考、氯霉素和哌拉西林等敏感。研究表明,导致该辽宁绒山羊养殖场内羊腹泻及死亡的病原为产气荚膜梭菌,可根据药敏试验结果进行用药,避免出现耐药性影响治疗效果。

2017—2021年云南省猪瘟病原学和血清学监测情况分析

为全面了解2017—2021年云南省猪瘟(CSF)流行及免疫状况,预估疫病流行和发生风险,采集病原学样品63 224份、血清学样品146 547份,进行CSF病原和血清抗体监测。结果显示:2017—2021年云南省CSF免疫抗体合格率分别为82.94%、81.47%、80.79%、80.24%、82.53%,规模场合格率略高于散养户,但差异不显著(P>0.05);CSF病原核酸阳性率分别为0.52%、0.74%、1.10%、1.02%、2.42%,散养户、屠宰场阳性率高于规模场。结果表明:自2017年CSF退出强制免疫后,云南省CSF免疫抗体合格率均达到国家标准,但病原阳性率整体呈上升趋势,且分布范围广,免疫密度低和抗体合格率低的散养户发生CSF的风险较高,提示应对其加强监测和免疫。

鸡球虫重组蛋白rEnApiAP2对鸡免疫保护效果的观察

将毒害艾美耳球虫重组蛋白rEnApiAP2单独免疫(单免)或分别与柔嫩艾美耳球虫重组蛋白rEtGAM56或rEtGAM59联合免疫(联免)雏鸡,同时设rEtGAM56单免、rEtGAM59单免、未免疫攻虫和空白组为对照,分别攻毒害艾美耳球虫或柔嫩艾美耳球虫,以成活率、排出血便数、平均增重、相对增重率、病变记分、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)和血清抗体水平为指标,评价rEnApiAP2单免及与rEtGAM联免的免疫保护效果。结果显示:各试验组的成活率均为100%;与未免疫攻虫组比较,各免疫组鸡排血便堆数减少、平均增重增加。在rEnApiAP2单免组间,低剂量组的相对增重率(82.36%)、卵囊减少率(73.88%)和抗球虫指数(155.26)均为最高,平均病变记分最低(1.71)。攻毒害艾美耳球虫后,联免组的ACI值均大于相应的单免组,其中rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(169.83)最高。攻柔嫩艾美耳球虫后,rEnApiAP2单免组的ACI值(128.37)低于rEtGAM56、rEtGAM59单免组(130.12、151.88),rEnApiAP2与rEtGAM59联免组的ACI值(141.62)接近于rEtGAM59单免组,rEnApiAP2与rEtGAM56联免组的ACI值(115.46)小于rEtGAM56单免组。各免疫组血清抗体水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。rEnApiAP2对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护效果,与rEtGAM联免可提高对毒害艾美耳球虫的免疫保护力。本研究结果为鸡球虫病重组亚单位疫苗研制奠定了基础。

青蒿防治球虫病研究进展

近年来,随着减抗替抗政策的发布,中药防治球虫病越来越受到人们的重视。使用青蒿防治球虫病,在抗球虫效果、增强免疫力、抗菌抑菌、缓解临床症状等方面具有独特的优势。本文主要就青蒿在防治球虫病的安全性、经济性、抗球虫效果和抗球虫作用机理等的研究进行综述,以期为生产一线畜禽球虫病的防控提供参考。

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果显示:从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2~3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品(DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪)的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。

猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵宿主细胞途径研究进展

病毒入侵宿主细胞是其完成自身复制周期的首要步骤。全面解析病毒入侵宿主细胞途径可深入揭示病毒感染及其致病机制,有助于制定更为有效的抗病毒策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是具有囊膜的单股正链RNA病毒,对全球养猪业造成巨大的经济损失。以往研究报道PRRSV主要通过网格蛋白介导的内吞途径(CME)入侵宿主细胞。近年来研究发现,除CME外,PRRSV还会采取其他途径入侵宿主细胞。本文通过总结PRRSV入侵宿主细胞途径的最新研究进展,以期加深人们对PRRSV的认识,并为防控该病毒提供新的思路。

巨型艾美耳球虫感染对鸡Toll样受体的影响

为了探究巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)感染对宿主局部免疫组织盲肠扁桃体和系统免疫组织(脾脏和外周血)中Toll样受体(Toll like receptor,TLR)的影响,用巨型艾美耳球虫感染雏鸡,感染后第0、3、7和11天,采集鸡盲肠扁桃体、外周血和脾脏淋巴细胞,用实时荧光定量PCR检测上述组织中8种鸡TLR的mRNA水平变化。结果显示:TLR4和TLR21 mRNA水平在3种组织中无显著变化;TLR2 mRNA水平在感染后第3天开始在外周血和脾脏中显著下降(P<0.05),在盲肠扁桃体中第3和7天无显著变化,在第11天显著上升(P<0.01)。TLR1、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15 mRNA水平在3种组织中显著上升(P<0.05),但应答时间有所差异,具体为TLR1和TLR3 mRNA水平在盲肠扁桃体中在第3天开始上升,而在外周血和脾脏中第7天开始上升;TLR5和TLR15 mRNA水平在外周血和脾脏中第3天开始上升,而在盲肠扁桃体中第7天开始上升。结果表明:巨型艾美耳球虫感染上调宿主3种组织中的TLR1、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15 mRNA水平,下调外周血和脾脏中的TLR2 mRNA水平;盲肠扁桃体TLR1和TLR3 mRNA水平上升早于外周血和脾脏,而其TLR5和TLR15 mRNA水平上升晚于外周血和脾脏。本研究为揭示鸡TLR在抗球虫感染中的作用提供依据,也为揭示鸡球虫先天性免疫机制提供参考。

2019—2021年皖南地区地方品种鸡源沙门菌的血清型鉴定、毒力基因和耐药性检测

为了分析皖南地区地方品种鸡(淮南麻黄鸡、淮北麻鸡、霍邱鸡和五华鸡)来源沙门菌的分布、毒力基因和耐药性情况,本试验于2019—2021年采集该地区地方品种鸡养殖场疑似沙门菌感染病死鸡的肝脏组织、肛拭子和死胚等病料组织456份,采用细菌分离培养、形态学观察、生化试验和特异性invA基因的PCR检测进行沙门菌鉴定,采用Kauffmann-White法、PCR法和K-B纸片法分别检测分离菌株的血清型、毒力基因、耐药基因和耐药性。结果显示,共分离得到127株沙门菌,分属于13种血清型,其中以鸡白痢沙门菌、禽伤寒沙门菌和肠炎沙门菌为流行的优势血清型,分别占分离菌株的26.0%、20.5%和17.3%;127株沙门菌中携带的4种毒力基因(spvA、spvB、spvC和spvR)检出率介于7.1%~74.8%,携带的4种毒力岛基因(SPI-1 SPI-2、SPI-3和SPI-5)检出率介于38.6%~81.1%;127株沙门菌对阿莫西林、氨苄西林和磺胺二甲氧嘧啶等8种药物的耐药率介于56.7%~99.2%,以耐10(12.6%)、9(15.0%)和8(20.5%)种药物为主,耐药基因sul 1、sul 2、sul 3、tet(A)、tet(M)和tet(R)检出率介于32.3%~89.8%;经分析,地方品种鸡流行优势血清型与毒力基因和耐药基因均有一定的相关性。结果表明,从安徽省皖南地区4种地方品种鸡中分离的沙门菌具有多种血清型、携带多种毒力基因、耐药性严重,且携带多种耐药基因。

噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用研究进展

畜禽生产中抗生素的长期、大量不规范使用,导致细菌耐药性问题日益严重,给畜禽细菌性疾病的预防和治疗带来极大困难,甚至已经威胁到公共卫生安全。噬菌体裂解酶是噬菌体编码的一种肽聚糖水解酶,能够高效、特异地杀灭细菌且具有抗生物被膜活性,已经成为一种新型抗菌药物,逐渐被纳入细菌尤其是耐药菌感染的治疗策略。畜禽生产中,噬菌体裂解酶已经成功应用于金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性菌引起的畜禽细菌性疾病的防控与治疗中,其在大肠杆菌、沙门菌等革兰阴性菌上的应用尚处于体外研究阶段。笔者对噬菌体裂解酶的结构特点、作用机制及其在畜禽生产中的应用进行综述,探究噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用现状及前景,以期为噬菌体裂解酶更进一步地应用于防控和治疗细菌性疾病提供参考。

快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。

安溪县布鲁氏菌病和弓形虫病血清学调查与分析

布鲁氏菌病和弓形虫病是危害严重的人畜共患传染病。为了解安溪县家畜猪牛羊布鲁氏菌病和弓形虫病感染情况,采集规模场和散养户家畜血清共2080份(猪1340份、羊560份、牛180份)进行2种病的血清学检测。结果显示:布鲁氏菌病阳性样品4份,总阳性率为0.2%,主要存在于羊样品中,羊感染率为0.7%。弓形虫病阳性样品69份,总阳性率为3.3%,其中猪阳性样品有50份,阳性率为3.7%;羊阳性样品有18份,阳性率为3.2%;牛阳性样品有1份,阳性率为0.6%。调查结果可为安溪县人畜共患传染病防控提供依据。

牛支原体兔体攻毒模型的建立

牛支原体是引起牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease, BRD)的重要病原之一,对养牛业造成了不可估量的经济损失。牛支原体对大多数抗生素都具有耐药性,目前没有较好的药物可以进行治疗,因此疫苗免疫是最有效的防控方法。缺乏小动物评价模型是牛支原体疫苗研发的重要制约因素之一。建立小动物攻毒模型,为后续疫苗的研究与制备提供一定的研究基础,并降低后续试验的科研成本。为建立牛支原体小动物感染模型,本研究以2月龄日本大耳白兔作为研究对象,分为4组:1)单独攻击HB0801株牛支原体,2)注射地塞米松后攻击HB0801株牛支原体,3)攻击HB0801株牛支原体后注射KLH和巯基乙酸盐培养基;4)空白对照组。通过PCR检测牛支原体排菌情况,检测血清中抗体水平,第31天后取肺制作病理切片。研究结果显示,注射地塞米松后攻击HB0801株牛支原体组的牛支原体检出率和抗体均最高,牛支原体检出率为42.11%,91.67%的动物被检测为抗体阳性。显著高于其它各组。除空白对照组外,其它攻毒组均出现了肺泡壁增厚,巨噬细胞浸润以及肺部不同程度的纤维素性渗出,符合牛支原体导致的间质性肺炎的病变特征。本研究建立了牛支原体HB0801株攻毒日本大耳白兔的感染及评价模型,地塞米松造成免疫抑制后攻毒HB0801株具有最好的造模效果。

综合洗消体系对阻断非洲猪瘟病毒传入猪场的作用

切断非洲猪瘟病毒(ASFV)传播途径是防控非洲猪瘟的有效手段。本试验旨在通过在某种猪场建立综合洗消体系以阻断ASFV传入。对拟进入猪场的车辆在出发前和距猪场1 km处清洗和消毒,在猪场门口进行第3次消毒;人员进入猪场前洗澡和隔离,并将其衣物消毒;输入物资进场前消毒。通过实时荧光定量PCR检测经洗消的车辆、人员、物资和猪场内猪只携带ASFV核酸情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测猪只的ASFV抗体水平。结果显示,2019、2020、2021和2022年,车辆ASFV检出率分别为2.6%、1.3%、0和0,人员ASFV检出率分别为3.0%、1.1%、0和0.9%,物资ASFV检出率分别为12.5%、0、5.9%和0;4年间,猪场内猪只的ASFV核酸和抗体检测均为阴性。结果表明,通过建立完善的洗消体系并开展ASFV检测,能有效阻断ASFV传入猪场。