橙皮苷通过氧化磷酸化途径缓解高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激

旨在研究橙皮苷(Hesperidin, HDN)对高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激损伤的保护作用及作用机制。将18只雄性C57BL/6(体重20~23 g)小鼠,随机分为对照(control)组、高脂饮食(HFD)组、高脂饮食+橙皮苷(HFD+HDN)组(300 mg·kg^(-1)),每组6只。control组小鼠饲喂常规饲料(脂肪含量10%、碳水化合物含量70%、蛋白质含量20%);HFD组小鼠饲喂高脂饲料(脂肪含量60%、碳水化合物含量20%、蛋白质含量20%);HFD+HDN组在饲喂高脂饲料的同时每天灌胃给药HDN 300 mg·kg^(-1)。16周后腹腔注射3%戊巴比妥钠(60 mg·kg^(-1))麻醉小鼠后进行眼球采血,采血完毕后对小鼠进行脱颈处死并解剖取肝组织;使用试剂盒检测血液中肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;使用试剂盒检测肝组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及总抗氧化能力(T-AOC)的水平;采集肝组织进行转录组学测序,筛选出HFD组和HFD+HDN组的差异表达基因集进行KEGG通路富集分析,以P<0.05作为显著性富集的阈值,据此筛选出HDN干预后影响最显著的一条信号通路;从筛选出的信号通路上挑选显著变化的基因并采取qRT-PCR和蛋白免疫印迹的方法验证转录组学结果;检测mtDNA相对含量和线粒体外膜蛋白(TOMM20)相对表达量;检测肝组织ATP含量。结果显示:与HFD组相比,HDN干预改善了高脂饲喂引起的肝损伤,显著降低了小鼠血液中ALT以及AST活性(P<0.01);显著降低小鼠肝MDA含量(P<0.01);显著升高T-AOC、T-SOD以及GSH-Px水平(P<0.05),KEGG富集分析,筛选出氧化磷酸化(OXPHOS)途径是最显著上调的信号通路(P<0.000 1);与HFD组相比,HDN干预后肝组织Cox8b、Cox6a2、Gm10231、mt-Atp8、mt-Nd4l、Gm11237、Ndufb8、Ndufb10的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),Atp6v0d2、Cox6c2的mRNA的相对表达量显著下调(P<0.05)。Cox6a2、Ndufb8、Ndufb10的蛋白表达量显著升高(P<0.05),Atp6v0d2d蛋白表达量表达量显著降低(P<0.001),与转录组学结果一致;与HFD组相比,HDN干预后TOMM20相对表达量、mtDNA相对含量、ATP含量显著升高(P<0.05)。结果提示,HDN通过调节OXPHOS途径降低高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激。

腹泻犊牛粪便菌群及粪便代谢物的变化特征分析

【目的】揭示腹泻犊牛粪便菌群和粪便代谢物的变化特征。【方法】根据粪便评分和临床症状,本研究将30日龄内哺乳犊牛分为健康组(CK)和腹泻组(D),应用16S rRNA扩增子测序技术对CK和D组犊牛粪便菌群进行比较分析。应用液相色谱-质谱联用法,对犊牛粪便进行非靶向代谢组分析,筛选差异代谢物并对其进行KEGG通路富集分析,对粪便菌群和粪便差异代谢物进行Spearman相关性分析。【结果】与CK组相比,D组犊牛粪便菌群OTU数量和Chao1指数极显著升高(P<0.01),Shannon和Simpson指数极显著降低(P<0.01)。D组粪便中梭杆菌门、变形菌门、酸杆菌门和绿弯菌门,以及埃希-志贺属、梭杆菌属、梭菌属等9个菌属相对丰度极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05),而放线菌门、厚壁菌门和广古菌门,以及粪杆菌属、罕见小球菌属、厄氏菌属、双歧杆菌属等11个菌属极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。梭杆菌门、变形菌门、梭杆菌属、埃希-志贺菌属、死亡梭杆菌、大肠埃希菌是腹泻犊牛粪便生物标志物。从CK和D组犊牛粪便中共筛选到54个差异代谢物,其中PC(16∶1(9Z)/16∶1(9Z))富集到甘油磷脂代谢途径,与梭杆菌属极显著正相关(P<0.01),与柯林斯菌属、巨型球菌属、厄氏菌属显著或极显著负相关(P<0.05;P<0.01)。脱硫生物素富集到生物素代谢途径,与梭杆菌属显著负相关(P<0.05),与罕见小球菌属、巨型球菌属、罗尔斯通菌属显著正相关(P<0.05)。二氢生物蝶呤和二氢新蝶呤三磷酸富集到叶酸生物合成途径,与梭杆菌属、消化链球菌属极显著或显著负相关(P<0.01;P<0.05),与罕见小球菌属、巨型球菌属、厄氏菌属、双歧杆菌属、普雷沃菌属、柯林斯菌属、粪杆菌属、副拟杆菌属极显著或显著正相关(P<0.01;P<0.05)。【结论】腹泻犊牛粪便菌群丰富度、多样性、物种组成及粪便代谢物组成均发生了显著变化,犊牛肠道甘油磷脂代谢、生物素和叶酸生物合成受到影响,肠道菌群的紊乱和粪便代谢物的显著变化紧密相关。

一株猪源摩氏摩根菌的分离鉴定与药物敏感性分析

摩氏摩根菌是一种可导致多种疾病的条件性病原菌,已成为全球范围内的一种重要新发病原菌。为了解猪源摩氏摩根菌的药物敏感性和致病性,从河南省某猪场病死猪肠道中分离得到一株疑似致病菌,对其进行革兰氏染色、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定和16S rRNA基因同源性分析,然后测定14种药物对该菌株的最小抑菌浓度,并进行小鼠感染试验。结果显示,该菌为革兰氏阴性短杆菌,鉴定为摩氏摩根菌,命名为A185。药敏试验结果表明,该菌对阿莫西林、美罗培南、替加环素、多黏菌素、多西环素、头孢西丁耐药;对环丙沙星、庆大霉素中度敏感;对磷霉素、头孢他啶敏感。小鼠感染试验结果显示,感染摩氏摩根菌的昆明鼠表现为肝脏、肠道和肺脏不同程度出血。以上结果表明,猪源摩氏摩根菌A185具有多重耐药性和较强的致病性。

胸椎小关节紊乱模型的建立和对消化机能的影响

胸椎小关节紊乱综合征系指胸椎小关节在外力作用下发生解剖位置的改变,且不能自行复位而导致的疼痛和功能受限等症状的一种病症。以成年家兔为实验动物,通过外科手术的方法使胸椎T6~T8前后滑脱式错位及侧弯侧摆式错位。术后对每只家兔进行定量饲喂,绘制体重变化曲线;术后第6周,测定家兔血清中血管活性肠肽、胃动素、胃泌素、生长抑素的含量;测量家兔的胃电图和肠蠕动力,并取胃和十二指肠壁制备组织切片,评价胸椎小关节紊乱对于胃肠机能的影响。结果表明,T6~T8胸椎小关节前后滑脱式错位及侧弯侧摆式错位可使家兔血管活性肠肽、胃泌素、胃动素、生长抑素的分泌水平出现不同程度的变化,试验组家兔胃肠蠕动减弱变慢,胃肠壁发生不同程度的病变,表明该节段胸椎小关节脱位可影响家兔的消化能力。

新型鹅星状病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为了研制针对新型鹅星状病毒(GAstV)的血清学检测方法和高效抗体,克隆新型GAstV HNZZ-4毒株的ORF2基因序列,构建pET-32a-Cap重组质粒,进行衣壳蛋白(Cap)原核表达;用重组Cap蛋白免疫兔只制备多克隆抗体,并采用Western blot和免疫过氧化物酶单层试验鉴定制备的多克隆抗体的反应原性。结果表明,重组质粒pET-32a-Cap经限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ进行酶切后,得到大小约5000 bp和750 bp的2个与预期一致的条带;阳性重组质粒测序结果显示,成功构建了重组表达载体pET-32a-Cap;pET-32a-Cap原核表达获得了分子质量约为27.5 ku的GAstV重组Cap蛋白;制备的兔抗GAstV Cap多克隆抗体能够与重组Cap蛋白发生特异性反应,且能特异性结合感染LMH细胞的GAstV。综上,制备的兔源抗新型GAstV Cap多克隆抗体保留了抗原性,特异性较好。

《兽医内科学》课堂教学供给侧改革的探索与实施

兽医内科学是动物医学专业理论性、实践性很强的一门核心课程,要求学生具备分析、解决临床实践问题的综合能力。课堂教学是课程实施的前沿阵地,而课堂教学与临床实践之间的专业脱节,是影响兽医内科学培养目标达成的突出问题。文章从农林教育专业和课程供给侧改革视域下,从教学大纲、教学资源、教学方法及教学评价等四个方面对兽医内科学课堂教学进行优化,以增强兽医内科学课堂教学对专业实践能力培养的供给侧支撑力度,保障动物医学人才培养目标的有效达成。

“学为中心”视域下动物解剖学教学方法的反思

由于信息技术的快速发展和动物医学专业需求的变化,动物解剖学教学在内容和方法方面发生了重大变化。动物医学专业教育已从被动和以教师为中心向积极、以临床为基础和以学生为中心转变。本文在“学为中心”背景下分析各种教学模式在动物解剖学教学中的作用和有效性。

奶牛酮病诊断方法及防治措施

奶牛酮病是影响畜牧业发展的代谢疾病之一。高产奶牛易患酮症,会对奶牛的健康、生育能力和产奶量产生影响。奶牛酮病的发生受遗传和营养因素的影响,培育健壮、抗病能力强的奶牛是养殖场的工作目标。论文从奶牛酮病的分类、国内外发病率及其对牧场生产的危害,综述了奶牛酮病的诊断方法及其防治措施,以期为牧场保障奶牛健康,提高奶牛生产能力做参考。

地方农业院校兽医内科学教学改革的研究

兽医内科学作为动物医学专业的核心课程,面对目前国内畜牧业和宠物经济的蓬勃发展,如何培养出符合产业需求的应用型人才,是兽医教育的核心问题。通过对兽医内科学传统教学中所存在的问题进行分析,并从教学方式、教学内容和考核方式方面提出改革建议,结合实践表明可达到促进学生学习积极性提升的目的。

案例教学法在《兽医内科学》教学中的应用

《兽医内科学》在整个动物医学教育中具有非常重要的地位和作用,该学科具有较强的临床实践性。将案例教学法应用于《兽医内科学》的教学中,课堂上以真实的病例为案例,师生共同分析研究,能够激发学生主动学习的兴趣,锻炼思维能力,教学效果比单向知识输出模式更好。该文将从案例教学法的必要性、实施过程、积极意义和关键问题等方面进行阐述,希望案例教学法能在《兽医内科学》教学中得以推广实施,培养出更加优秀的兽医专业学生。

丙酸对牛前脂肪细胞增殖及分化的影响

奶牛前脂肪细胞的增殖及分化对于正常脂肪组织发育极为重要。为在细胞水平上探讨丙酸对牛前脂肪细胞增殖及分化的影响,试验分为2组。试验组:牛前脂肪细胞用0.1~3 mmol·L^(-1)PA处理12~48 h,对照组不予处理。试验采用油红O染色技术检测牛前脂肪细胞脂质生成情况,通过EdU细胞增殖检测试剂盒检测脂肪细胞增殖情况,使用流式细胞术分析细胞周期进程,使用免疫蛋白印记法(Western Blot)检测脂肪细胞中几种增殖相关蛋白以及分化相关指标的蛋白表达情况,包括细胞周期蛋白(CCND1、CCND2、CCND3、CCNE1),细胞周期蛋白激酶(CDK2、CDK4、CDK6)和过氧化物酶体增殖活化受体(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)以及固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)。结果表明:与未处理组相比,0.1 mmol·L^(-1)PA处理48 h可以促进牛前脂肪细胞增殖,增加S期细胞比例,并升高细胞周期蛋白的蛋白质丰度。此外,PA还可以通过上调分化相关指标的蛋白质表达来促进牛前脂肪细胞的分化,说明0.1 mmol·L^(-1)PA处理48 h会促进牛前脂肪细胞增殖与分化,对正常脂肪组织发育具有潜在作用。

1例犬血小板减少症的临床诊治报告

血小板减少症是指血小板数低于正常范围所引起的病症,见于原发性免疫性血小板减少、再生障碍性贫血等血液系统疾病、自身免疫系统疾病并发血液系统损伤、感染性疾病及肿瘤放化疗等病程中。血小板减少症的标准一线治疗为采用糖皮质激素,但复发率较高,且易出现不良反应。一旦出现上述情况,往往会选择二线治疗方案,如选用利妥昔单抗、环孢素A等免疫抑制剂进行治疗。文章记录一例采取一线和二线联合治疗的血小板减少症患犬的治疗过程,以期提高该病的临床治愈率,降低复发性。

《兽医内科学》现场与案例相结合的教学模式探究

[目的]为了促进《兽医内科学》教学改革,培养应用型兽医人才。[方法]通过走访院校和企业,结合本科教学现状,采用现场与案例相结合的教学模式,探索适合培养兽医内科人才的教学改革路径。[结果]通过教学设计、案例筛选与使用、现场教学的完善等路径,丰富了现有兽医内科教学体系,形成了具有专业课程特色的教学模式。[结论]现场与案例教学作为培养学生辩证思维能力的主要方法,能保障本科教学质量、激发学生学习潜力,该方法有利于培养兽医应用型人才。

小动物肠道异物性梗阻和出血性胃肠炎诊治的比较研究

小动物肠道异物引起犬肠道梗阻是犬常见肠道疾病之一。在临床上容易和出血性胃肠炎发生混淆。本试验通过一例患犬的病史,结合血常规检查、CRP检查、内窥镜检查,并与出血性胃肠炎鉴别诊断,确定为犬肠道异物性梗阻,并对患犬尝试使用剖腹探查术治疗,术后以消炎、补充营养和体液、修复胃肠道粘膜为主,取得明显的治疗效果。研究结果可为宠物犬肠道异物性梗阻和出血性胃肠炎的鉴别诊治提供可参考的诊治方案。

鹅源新型鸭呼肠孤病毒广西株G-NDRV-GX-2022全基因组分子特征的分析

为研究鹅源新型鸭呼肠孤病毒的全基因组分子特征及其广西流行株的进化特点,本研究采集广西地区3份发病鹅的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏病料样品,采用多重荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),并以NDRV阳性样品的核酸为模板,采用RT-PCR分段扩增其全基因组并测序,采用BioEdit软件分析其全基因组序列的相似性;采用NetNGlyc 1.0软件预测NDRVσC蛋白N-糖基化位点;通过Mega 7.0软件绘制σ系列基因的系统发育树及RDP5和SimPlot软件分析NDRV全基因组的重组事件。RT-q PCR结果显示,检出1份NDRV阳性样品,经测序及序列拼接,获得一条鹅源NDRV广西流行株G-NDRV-GX-2022全基因组序列,全长23353 bp,分为L1~L3、M1~M3及S1~S4共10个基因;BlAST分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株10个基因与GenBank中相应基因序列的相似性最高为91.2%~98.4%,对应的病毒株均源自中国广东、福建、山东、浙江及湖北等地的NDRV,宿主有野鸭、番鸭、绿头鸭等,表明G-NDRV-GX-2022株基因来源广泛且多样;σC蛋白N-糖基化位点预测结果显示,G-NDRV-GX-2022株与NDRV参考株均为^(121)NLTS^(124);σ系列基因遗传进化树显示,σB、σNS进化树中NDRV参考株均为连续不间断的进化分支,而σA、σC进化树中NDRV参考株为不连续间断的进化分支,且均未呈现流行时间与地域关联的进化特点,表现出生物遗传多样性的特征;全基因组重组分析结果显示,G-NDRV-GX-2022株的M3基因检测到重组信号,主要亲本为野鸭源NDRV SD-12株,二者相似性为95.4%,次要亲本为鹅呼肠孤病毒(GRV)GD2020株,二者相似性为94.3%,证实野鸟与水禽的呼肠孤病毒之间能够发生基因重组。本研究丰富了水禽呼肠孤病毒基因库信息,并为禽呼肠弧病毒分子遗传进化研究提供基础数据。

米托蒽醌甲磺酸盐预处理脂肪间充质干细胞对犬糖尿病的治疗效果评价

本研究在高脂饮食(high-fat diet, HFD)饲喂和链脲佐菌素(streptozotin, STZ)注射的联合作用下成功建立小鼠及犬糖尿病模型,旨在探究米托蒽醌甲磺酸盐(mitoquionl mesylate, MitoQ)预处理脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs)对糖尿病动物模型治疗效果的提升作用及机制。取正常培养状态的ADMSCs及添加1μmol·L^(-1)MitoQ处理的ADMSCs,对MitoQ处理的细胞形态变化、生长、增殖、迁移及抗氧化能力等进行检测。选取48只8周龄的昆明(KM)雄性小鼠和12只中华田园犬,随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(Diabetes组)、ADMSCs单独治疗组(ADMSCs组)和MitoQ预处理ADMSCs联合治疗组(MitoQ-ADMSCs组)。常规方法制作小鼠及犬糖尿病模型,对模型小鼠和犬分别进行ADMSCs和MitoQ-ADMSCs细胞静脉移植治疗,细胞数为2×10^(6)·只^(-1)(小鼠)和1×10^(7)·只^(-1)(犬),每周1次,连续3周。持续监测临床指标变化,治疗结束后1周收样,血清学、组织学、氧化应激及犬血清代谢组学分析。结果表明,MitoQ预处理ADMSCs不会影响其细胞形态,但能促进其生长、增殖及迁移能力,同时增强其抗氧化能力;ADMSCs和MitoQ-ADMSCs移植治疗后,发现MitoQ显著促进ADMSCs降低血糖的能力,且提高胰岛β细胞功能和机体血糖调节能力;ADMSCs经MitoQ预处理后有效减轻糖尿病伴发的肝代谢功能障碍和血脂代谢异常;ADMSCs可以减轻胰腺和肝组织损伤,促进胰岛素分泌,减轻肝糖原合成障碍和纤维化水平,而MitoQ处理能够显著改善ADMSCs治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs能够有效提升机体的抗氧化能力,减轻氧化损伤,进而增强治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs可以显著促进机体内与抗氧化相关的代谢物表达上调。结果揭示,MitoQ能够通过提高ADMSCs的抗氧化能力、加速组织损伤修复,从而更好地治疗小鼠及犬糖尿病。

组学技术在判定奶牛酮病发病中的应用

酮病作为围产期奶牛常见的群发性营养代谢病,会显著降低奶牛机体健康和生产性能,给养殖业带来巨大经济损失。近年来,转录组学和代谢组学技术被越来越多地应用于研究动物疾病的发生发展过程,有效助推了奶业高质量发展。本文主要综述奶牛酮病发病特点、转录组学和代谢组学,并重点介绍转录组学和代谢组学在筛选奶牛酮病发病的生物标志物中的应用情况,总结出已有研究中奶牛酮病发病的候选基因、代谢物及生物学途径,为后续筛选奶牛酮病发病生物标志物提供理论参考依据和技术支撑。

维生素D3的来源与功能及动物维生素D缺乏症

维生素D_(3)通常被认为是一种“阳光维生素”,这是由于大多数动物在紫外线照射下都能合成,即维生素D_(3)是动物体内必备的维生素,具备显著脂溶性。现阶段,我国养殖动物表现出一定集约化的发展趋势,选取封闭饲养的方法减少动物被阳光照射的时间,不能得到促进自身健康生长的维生素D_(3)含量。长时间之后,动物体内会产生维生素D_(3)的情况,阻碍机体对钙元素以及磷元素的充分吸收,降低动物免疫能力、繁殖水平和生产性能等。在维生素D_(3)含量比较多时,引出动物新陈代谢的过程受到阻碍,降低体内代谢的速度,甚至对动物生存带来伤害。具体表现上,缺乏维生素D_(3)的典型症状是软骨病或佝偻病,D_(3)前体缺乏(7-脱氢胆固醇缺乏),可减少D_(3)、25-OHD_(3)合成,进而产生维生素D缺乏症,高产奶牛因缺钙产后瘫痪;小鸡骨结构变形;猪和马身上出现的骨软骨症生长过快;体重过大的鸡和火鸡中,可看到骨矿化缺乏,称之为胫骨软骨发育不良。

利用1型糖尿病小鼠模型分析犬成纤维生长因子21的长效降糖效果

本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用cFGF-21、R11-cFGF-21、Fc-cFGF-21和TAT-cFGF-21治疗。治疗分为3个阶段:1)每天给药一次(第1~14天);2)每3 d给药一次(第15~29天);3)每5 d给药一次(第30~44天)。在治疗过程中,每隔3 d检测一次小鼠血糖,在每阶段结束时检测试验小鼠12 h内血糖波动。试验结束前,对所有小鼠进行口服葡萄糖耐量试验。通过ELISA法检测小鼠血清中炎症相关因子IL-10、IL-1β、IL-17A和抗炎因子IL-10表达水平。通过Real-time PCR检测肝、脂肪、肠和肾等组织中的糖代谢相关因子的转录水平。试验结束后,对所有小鼠进行糖基化血红蛋白(HbA1c)、血脂四项和肝功能、血清胰岛素和HbA1c检测并对小鼠胰腺组织进行病理分析。结果显示:在治疗的第一阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21降糖效果明显降低,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组没有显著差异;在治疗的第二、三阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21组血糖明显上升,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组可在给药3~5 d内能将血糖控制在更低的水平。治疗8周后,与cFGF-21组相比,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组口服葡萄糖耐量(OGTT)和血脂紊乱明显改善,糖化血红蛋白(HbA1c)接近正常水平,肝损伤明显修复,而TAT-cFGF-21组与cFGF-21组没有明显差距。此外,ELISA检测和HE染色结果显示,相较cFGF-21和TAT-cFGF-21组,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组氧化应激和炎症反应得到显著改善且胰岛β细胞修复效果明显。经R11和Fc修饰的cFGF-21长效降糖能力的显著增加,而TAT-cFGF-21长期的降血糖能力较弱。此外,经R11和Fc修饰的cFGF21能显著改善氧化应激、胰腺炎症和脂质代谢,修复肝损伤和胰岛β细胞,治疗效果明显优于cFGF21。

中西兽医结合治疗家禽疾病的优势

随着人们对食品安全和动物福利关注的不断加强,畜禽疾病的有效治疗成为一个日益重要的课题。传统的西医疗法虽然在治疗某些疾病方面取得了显著成效,但也存在一些不足,如对环境的污染、抗生素耐药性等问题。而中药在长期的临床实践中积累了丰富的经验,具有靶向性好、毒副作用小等优势。将中西医结合,发挥各自的优势,对于提高畜禽疾病的治疗效果、减少抗生素滥用、促进绿色养殖具有重要意义。本文从家禽疾病的流行情况出发,阐述了中西医结合治疗家禽疾病的可行性和优势,并对其发展前景进行了展望。