猪流行性腹泻弱毒株的培育

用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒。传代毒８３代之后适应了仔猪肾原代细胞。自９０代起进行了５次克隆纯化，克隆是在２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上，再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）。以８３７斑５株继续传代并做系列试验。传代毒的毒价为１０７．０～１０７．５ＴＣＩＤ５０／０３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位。克隆后５代（总代次１０４代）～２５代的５批次主动免疫试验的总保护率为９５９２％（４７／４９），对照组８８８％（１６／１８）发病。克隆后１７代～４０代的８批次被动免疫试验的总保护率为９６２％（７６／７９），对照组１００％（１０／１０）发病。以克隆后２５代（总代次１２５代）进行稳定性试验，经６代次返祖传代毒力未返强，仍是稳定的，已符合弱毒株的标准。在与ＴＧＥ弱毒株组合制备的二联弱毒苗的初步田间试验中取得良好效果。

猪流行性腹泻灭活疫苗的研究

用猪流行性腹泻(PED)沪毒株研制氢氧化铝灭活疫苗.接种途径为后海穴位。以0.1ml/头主动免疫接种3日龄仔猪,保护率为77.28%;以0.5ml/头主动免疫接种3～22日龄仔猪,保护率为85%;以3ml/头被动免疫接种妊娠母猪,其所产3日龄仔猪的保护率为97.06%。接种疫苗后14天开始产生免疫力。免疫期可达6个月.疫苗在室温(19～26℃)保存226天仍保持较好的免疫原性.

断奶日龄对仔猪断奶期腹泻和死亡影响的研究

选择杜洛克×豫农白猪Ⅰ系杂交仔猪８窝共７２头，均分为两组，每组４窝３６头。试Ⅰ组采用２８日龄断奶，试Ⅱ组采用３５日龄断奶。试验期从断奶前１周至６０日龄，分析比较不同断奶日龄对仔猪断奶期腹泻和死亡的影响。结果：①试Ⅰ组和试Ⅱ组仔猪，断奶后至６０日龄间发生腹泻１５９头次和８５头次，全群日平均腹泻发生率为１４．７６％和９．０８％；②试Ⅰ组和试Ⅱ组仔猪，断奶后至６０日龄间死亡数为４头和０头；③试Ⅰ组和试Ⅱ组仔猪，断奶后至６０日龄发生腹泻的高峰期在断奶后５～２２天和断奶后３～８天，持续期为１８天和６天，日腹泻发生率最高达４２．４２％和３３．３３％；④试Ⅰ组４窝仔猪在断奶至６０日龄期间，有３窝出现多个腹泻高峰，只有１窝为１个高峰；而试Ⅱ组４窝仔猪中，只有１窝出现多个腹泻高峰，其它３窝为１个高峰。

猪流行性腹泻病毒3种抗原卵黄抗体的制备

【目的】探讨猪流行性腹泻病毒（PEDV）3种不同抗原制备的卵黄抗体对PEDV的中和能力,为抗猪流行性腹泻卵黄抗体的制备提供新的方法和理论基础。【方法】根据PEDV S糖蛋白基因设计引物扩增PEDVS534基因（636~789位氨基酸）和PEDV COE基因（499~638位氨基酸）,并构建原核表达质粒pET32a-PEDV S534和pET32a-COE,分别转化表达菌株BL21（DE3）进行诱导表达。以原核表达的PEDV S534蛋白、COE蛋白以及PEDV灭活病毒为抗原,分别免疫产蛋鸡并制备卵黄抗体,通过病毒中和试验评价各卵黄抗体的中和效力。【结果】成功表达了PEDV S534蛋白和COE蛋白,Western-Blotting分析显示,2种蛋白均具有很好的免疫原性;制备的3种特异性卵黄抗体均具有一定的病毒中和能力,PEDV S534蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶12,COE蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶25,而PEDV灭活病毒的卵黄抗体中和效价达到1∶120。【结论】PEDV灭活病毒的中和能力最强,其次为COE蛋白特异性卵黄抗体,PEDV S534卵黄抗体的中和能力较弱。

不同毒力的猪轮状病毒感染仔猪后肠道病理学观察

用通过MA104细胞培养,经不同代次后,两种毒力不同的猪轮状病毒细胞毒,口服感染未吮初乳的1日龄仔猪,于29.5或48小时后宰杀,作消化道病理学及电镜超微结构变化的比较观察,结果证明,两种细胞毒,毒力虽不同,但都能侵入肠上皮细胞生长繁殖,而所引起的病理变化,则有不同。MA86F23细胞毒(强毒)能引起小肠段大量绒毛变形、脱落,绒毛固有层充血、出血、有嗜中性白细胞浸润,粘膜下水肿和充血等炎症反应。而口服MA86F90细胞毒(弱毒)的乳猪,其小肠绒毛大部分还保持完整,仅有少部分脱落,肠粘膜及肠腺分泌亢进,此外,在粘膜下见有多个淋巴细胞呈结节状增生。所设健康对照猪,基本无变化。

猪传染性胃肠炎病毒的血凝作用

将猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ａ株在ＩＢＲＳ２细胞上增殖，培养物经差速离心浓缩后与鸡红细胞出现了高凝集价（２８），这种凝集作用能被兔抗ＴＧＥＶ高免血清所抑制。试验的最适反应条件为体积分数０．５０％红细胞４℃作用１ｈ。通过反复试验，建立了一种简单实用的血凝抗原制备方法，病毒培养液不需浓缩可直接应用。

成年猪结肠肥大细胞的分布

成年猪结肠按常规制备石蜡切片 ,用甲苯胺蓝改良法显示肥大细胞。结果 :粘膜型肥大细胞 (MMCs)主要分布于固有膜深层 ,不同部位结肠粘膜中 MMCs的数量存在极显著差异 (P>0 .0 1) ,结缔组织型肥大细胞 (CTMCs)主要分布于粘膜下层且不存在数量上的区域性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :猪结肠

替米考星、红霉素体外诱导猪胸膜肺炎放线杆菌耐药性的初步研究

采用微量稀释法测定了替米考星和红霉素对5株临床分离猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的最小抑菌浓度,并用药物浓度递增法体外诱导App对两种药物的耐药性。结果表明替米考星和红霉素对App都具有很高的体外抑菌活性;经15代诱导,App对替米考星的最高耐受浓度没发生明显变化,而对红霉素的最高耐受浓度有了较大程度的提高,表明App对替米考星不易产生耐药,而对红霉素可缓慢产生耐药。试验结果提示替米考星是治疗App感染的理想药物。

RT-PCR方法快速诊断猪传染性胃肠炎

根据猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)标准毒株 (Purdue- 115 )的ORF6(N基因 )的基因序列 ,设计合成了一对引物Li0 1/Li0 2 ,用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术对发病猪的粪便进行检测。结果得到与预期大小相一致的约 1174bp(N基因 )的PCR产物 ,与从参照毒株TGEVTH - 98扩增出的片段大小相一致。进一步用限制性内切酶进行分析 ,发现从发病猪粪便中扩增出的N基因与参照毒株TH - 98株具有相同的限制性内切酶图谱 ,从而证实本病例致病病毒为TGEV。

早期断奶仔猪腹泻预防试验

早期断奶仔猪，往往由于断奶应激、饲料和营养的突变，导致消化机能紊乱，而发生消化不良和腹泻，使肠道正常菌群失调，某些致病性大肠杆菌大量繁殖，从而加重腹泻症状，严重影响饲料的消化、吸收，导致仔猪增重缓慢，影响６０日龄窝重。调查我县农村８０窝８１５头早期断...

K_(88)、K_(99)、F_(41)三价基因工程菌的构建

利用基因工程技术构建的带有K_(99)和F_(41)两种纤毛抗原基因的重组质粒与K_(88)抗原工程菌C_(84)的质粒转化同一受体菌,得到双质粒。同时表达K_(88)、K_(99)、F_(41)三种纤毛抗原的菌株。用小白鼠试验初步证实。该菌株生物学性质稳定,对动物安全,对K_(88)、K_(99)和F_(41)强毒菌的攻击具有较强的保护作用。

猪传染性胃肠炎病毒纤突S蛋白干酪乳杆菌表达载体系统的构建

根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突(S)蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,进行PCR,获得含有TGEV S基因4个主要抗原位点的约2000 bp目的片段,将其分别与表达载体质粒pPG611.1和pPG612.1进行连接,通过电转化进入宿主菌Lacto-bacillus casei393细胞内,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定分析,表明TGEV S基因已成功插入到表达载体质粒中,获得了TGEV S蛋白干酪乳杆菌表达载体系统。

猪流行性腹泻灭活疫苗区域性试验

应用猪流行性腹泻灭活苗在9个省、市、区40多个猪场进行了区城性试验、共预防接种10.3万余头猪,与实验室试验结果是一致的,取得了较好的效果。在疫苗的试用中,要先进行定性诊断,并注意混合感染及适时的使用疫苗。