鸡传染性支气管炎病毒实验室检测方法研究进展

鸡传染性支气管炎(IB)是鸡的一种急性、高度接触性、呼吸道传染病,严重危害着养禽业的健康发展。为有效地控制本病的流行,建立快速准确的检测方法具有重要意义。本文从该病的病原分离和鉴定、血清学及分子生物学等方面对IB的实验室检测方法最新研究进展进行了综述。

一株肉鸡源大肠杆菌的分离鉴定与致病性分析

为了解规模化肉鸡养殖场致病性大肠杆菌的耐药性与致病性,并为规模化养殖场提供大肠杆菌病的防治参考。从山西省某规模化肉鸡养殖场采集病死鸡病料,进行大肠杆菌的分离培养、生化鉴定、药敏试验、致病性试验。结果表明:分离到1株血清型为O2的致病性大肠杆菌,分离菌对头孢类、喹诺酮类等8种药物耐药,对妥布霉素、阿米卡星高敏,对强力霉素、氧氟沙星中敏。结论:分离株肉鸡源大肠杆菌具有多重耐药性和较强的致病性,季节交替要加强鸡场饲养管理。

商品蛋鸡群马立克氏病与细菌性混合感染的诊断

对某养殖场送检的8只病死鸡,用琼脂扩散试验检出马立克氏病毒抗原阳性率为62.5%(5/8);马立克氏病毒抗体阳性率为66.7%(4/6)。从病料中分离出7株细菌,其中4株为大肠杆菌,3株为鸡伤寒沙门氏菌。根据流行病学、临床症状及实验室诊断,判定为鸡马立克氏病和细菌的混合感染。同时对马立克氏病与禽淋巴细胞性白血病进行了鉴别诊断。

一株APMV-4毒株的分离鉴定及其PCR检测方法的建立

2017年初从病鸭体内分离到了一株具有血凝性的血清4型禽副黏病毒(Avian Paramyxovirus type 4,APMV-4)。随后建立起针对APMV-4的一步法RT-PCR检测方法 ,结果表明该方法可特异性地区分APMV-1和APMV-4毒株。

快速检测技术在家禽屠宰检疫中的应用

根据家禽屠宰检疫的特点,结合新技术的推广与应用,适时开展禽流感、鸡传染性法氏囊病等现场快速诊断检测试验和利用琼脂免疫扩散法检测鸡马立克氏病试验,使化验室部分诊断技术前移至屠宰点,从而改变传统单一的感官检疫方法,提高检疫技术的科技含量,确保屠宰检疫肉品的质量安全。

鸡场常见传染病的血清学检测

鸡传染病具有明显的传染性和流行性,病原微生物侵入鸡体后在组织中或体表进行繁殖,产生能伤害或破坏机体细胞、器官或组织的化学物质(如毒素),往往引起鸡只大批发病和死亡,经济损失严重。采用血清学检测方法对鸡场常见传染病进行检测,并将检测结果与分析作一简述,以期为广大兽医人员进行临床诊治提供参考。

山东地区鸡源致病性大肠杆菌的相关基因检测及药敏试验

为了解近年山东省禽源大肠杆菌的毒力因子及耐药情况,分析潜在的公共安全问题,特将本实验室保存的大肠杆菌标准株与送检的发病(死)鸡中分离的菌株同时进行毒力基因的PCR检测及药敏试验。结果显示:16种常见抗生素中,青霉素G和万古霉素对20株大肠杆菌均无抑制作用,而抑菌效果较好的抗生素主要有阿米卡星、庆大霉素等;其中两株大肠杆菌分离株对上述16种抗生素均不敏感,17株大肠杆菌对超过5种以上抗生素耐药;13株含有5种以上毒力因子基因,占比65%;4株同时含有7种毒力因子基因,占比20%;仅1株不含被检毒力基因。上述结果表明,大肠杆菌耐药形势异常严峻,并且部分菌株具有较强的致病力。本次试验结果同样对保障公共健康、防止耐药菌株通过食物链进入人体造成危害具有借鉴意义。

一例种鸭病毒性肠炎与圆环病毒混合感染的实验室诊断

鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis,DVE)又称鸭瘟,是雁形目鸭科成员的一种急性、接触性、败血性传染病,主要侵害宿主的消化道、内脏和淋巴器官,造成消化道出血、淋巴器官受损和实质性器官的退行性病变。该病呈世界分布,在我国主要养鸭地区广泛存在,但主要呈地方性流行。该病的病原是鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),现归于疱疹病毒科马立克氏病毒属。该病毒可以感染各品种和日龄的鸭,发病率和死亡率最高可达100%,是对鸭致病性最强的病原之一,一旦感染往往会对鸭群造成严重损失。黄引贤等[1]最早于1959年报道了该病在我国的存在,之后我国研发出了针对该病的弱毒疫苗,起到了较好的防控效果。

一例鸡新城疫病RT-PCR的诊断

鸡新城疫（Newcastle disease，ND）是由副粘病毒引起的禽类的高度接触性传染病。该病呈世界性分布，又称为亚洲鸡瘟[1-3]。以高度呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血为主要特征[1-3]，具有较高的发病率和致死率，对养鸡业危害严重。2018年4月，山东博兴县某鸡场发生了以呼吸困难、拉绿色粪便及腺胃出血等特征的疑似鸡新城疫疾病，现将诊治疗过程报告如下：

鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立

为建立一种能够同时鉴别诊断鸡细小病毒、禽流感病毒且同时区分H9亚型禽流感病毒的检测方法,本研究根据GenBank中已发表的ChPV的NS基因、AIV最保守的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计引物,并通过对温度和反应体系的优化,筛选出最佳的三对特异性引物组合,建立了一种能同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV的三重PCR检测方法。特异性试验结果表明,建立的三重PCR方法可以在一PCR反应中同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV,其它常见的禽病病原体均未见阳性反应,该三重PCR方法特异性良好;敏感性试验表明,该三重PCR检测方法对ChPV、AIV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10^4拷贝/μL质粒;运用该法对130份临床样品进行检测,结果与ChPV PCR阳性产物测序及AIV分离测序结果完全一致。因此,本研究建立的ChPV和H9亚型AIV三重PCR检测方法是一种特异性良好、灵敏度高、简便有效的检测方法。

酶联免疫吸附试验简析

近年来,畜牧业在国家调控政策及市场需求影响下得到快速发展,但随着世界范围内养殖业规模的不断扩大,疾病对养殖危害也随之加剧,某些常规检测技术已经不能适应行业快速发展需求,伴随着检测技术的进步,ELISA技术以其灵敏度高、特异性强、操作步骤简单快捷、安全性高、污染少等优点越来越应用广泛,在疾病诊断、免疫效果评价方面具有实际指导意义。

一例黄羽肉鸡感染QX型IBV的实验室诊断

2017年12月份,广东省台山市某养殖场所饲养的黄羽肉鸡发生了一种以呼吸困难、潜伏期短、发病速度快为主要特征的疫病;以支气管有粘液或干酪样物为主要剖检病变。无菌采集病鸡的肝脏,接种麦康凯琼脂平板和血平板培养基均未见细菌生长。将采集的气管、脾脏、肾脏等组织用PBS充分研磨无菌处理后,接种10日龄SPF鸡胚,连续培养5d,鸡胚呈侏儒状。根据传染性支气管炎病毒S1基因设计引物,以收获的鸡胚尿囊液提取的RNA为模板,经过RT-PCR扩增、序列测定和分析,判定为QX型传染性支气管炎病毒。通过实验室诊断技术结合临床症状和流行病学等进行综合分析,将此次疫病确诊为QX型传染性支气管炎病毒感染所致。

病死鸡尸体发酵堆肥中蛋白酶分解菌的分离鉴定及发酵工艺的研究

从鸡场病死鸡自然发酵堆肥中取样,分离筛选得到一株产蛋白酶活性高(揺瓶培养基酶活为2000U/ml)的菌株,经过鉴定,该菌株为解淀粉芽孢杆菌。本文通过不断优化该菌株的产芽孢培养基及其发酵工艺,最终确定了该菌在100～2000L发酵罐的发酵工艺,放罐芽孢数可达3.1×10^(10)CFU/ml,芽孢率≥98%。

禽偏肺病毒分子生物学诊断方法研究进展

禽偏肺病毒可感染火鸡、鸡、雉鸡、珍珠鸡、鸵鸟等多种禽类,引起禽偏肺病毒病,该病世界范围广泛流行,染性强,传播迅速,容易混感或继发多种疾病时,给养禽业造成了严重的经济损失。分子生物学检测法是当前确诊禽偏肺病毒病现症感染最有效的方法,本文就禽偏肺病毒5种分子生物学检测方法进行综述,对禽偏肺病毒病的诊断和防控有一定的参考价值。