鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育及肠黏膜屏障功能的影响

为了为鸭疫里默氏菌与机体的相互作用及作用机制研究提供基础数据,以雏鸭为研究对象,开展鸭人工感染鸭疫里默氏菌试验,分别测定感染组和对照组1、2、3、5、9、14 d等不同时间段的体质量、小肠各肠段的长度以及血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶含量;荧光定量PCR法检测肠黏膜屏障功能相关基因MUC2和MYLK的表达量,探讨鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育和肠黏膜屏障功能的影响。结果表明,与对照组相比,感染组5、9 d体质量显著降低;感染鸭疫里默氏菌5 d十二指肠和空肠的长度显著降低;感染鸭疫里默氏菌1 d血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶的含量均显著增加;鸭人工感染鸭疫里默氏菌的MUC2和MYLK表达量在十二指肠和空肠主要表现为下调,而在回肠MUC2的表达量表现为先下降再上调,MYLK的表达量表现为先下调再恢复至对照水平。综上,鸭人工感染鸭疫里默氏菌会减缓鸭的体质量增长和小肠生长,引起鸭的肠黏膜屏障功能相关基因的表达发生变化。

浅谈鸭疫里默氏杆菌病及其防控措施

鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,由鸭疫里默氏杆菌引起,是一种急性、慢性细菌性传染病。各日龄阶段鸭均能感染,2~3周龄鸭感染后死亡率最高。鸭场一旦发病,细菌可长期存在,很难根除,给养鸭业造成了严重的经济损失。文章综述了鸭疫里默氏杆菌的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及防控措施,以期为鸭疫里默氏杆菌病的防控提供参考。

慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建

干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。

鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脑RA分离株的血清型鉴定及药敏性测定与分析

该文对疑似鸭传染性浆膜炎的4个雏鸭病例肝脏和大脑分别进行了细菌分离、鸭疫里默氏菌(RA)血清型鉴定及药敏性测定与分析。结果自同一雏鸭病例肝脏、大脑中分离的RA菌株其血清型均相同,4个雏鸭病例中分离的RA菌株血清型分别为2型、2型、7型和11型;药敏性差异较大,均表现为肝脏中分离的RA菌株的药敏性明显低于大脑中分离的RA菌株的药敏性。以上结果提示,在对临床病例进行药敏性测定时,自肝脏、脑组织中分离细菌的药敏结果存在较大差异,应考虑药物是否通过血脑屏障,且选择高敏药物进行治疗和预防,方可收效。

一株具有插入和缺失突变特征鸭腺病毒B2毒株的分离鉴定

【目的】对一份疑似鸭腺病毒B2(Duck adenovirus B2,DAdV B2)感染的番鸭白肝病的病例进行确诊,并对分离株进行测序,为福建省DAdV B2流行病学研究提供参考。【方法】开展病料PCR检测,并进行病毒的分离鉴定、全基因二代测序,利用MegAlign和SnapGene软件对测序结果进行同源性及遗传进化分析,再进行动物回归试验,确定对雏番鸭的致病性。【结果】病料样本检测为DAdV B2阳性,并成功分离到一株DAdV B2毒株,命名为DAdV B2/BG48。该分离株感染鸡肝癌细胞(LMH)后细胞变大变圆、最后死亡崩解,形成特征性细胞病变;感染MDEF后细胞由长梭形变为圆形并聚集,细胞间出现空隙。测序结果表明,BG48基因组在pX基因区域中有3 bp的插入,在ORF19B基因区域有33 bp的插入,在ORF64和ORF67基因区域的交界处有42 bp的缺失,ORF67基因起始密码子往后第133位碱基为G,没有突变为终止密码子,其他编码基因与CH-GD-12-2014、实验室之前鉴定的BG27和BG18无特征性差异。动物回归试验显示,2日龄的番鸭对DAdV B2分离株BG48易感,致病率为50%,死亡率为0,发病鸭可见与自然感染病鸭相似的临床症状和病理变化。【结论】成功从番鸭白肝病病例中分离鉴定1株DAdV B2突变株BG48,BG48具有多位点插入和缺失特征,提示DAdV B2毒株容易突变,临床流行毒株复杂。本结果为DAdV B2的分子流行病学调查和遗传进化研究提供了参考。

鸭疫里默氏菌噬菌体宿主谱的拓宽

为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合液中单一噬菌体的噬菌谱。结果表明,30代噬菌体混合液可裂解79.2%(19/24)的鸭疫里默氏菌试验菌株;30代噬菌体混合液中分离出的单一噬菌体能裂解的试验菌株数量为2~9株;裂解数最多的5株单一噬菌体,以各自宿主菌传代10次,噬菌谱没有发生变化;将裂解谱互补的单一噬菌体混合,4株噬菌体即可裂解19株试验菌株,与30代噬菌体混合液相同。说明建立的方法可以拓宽噬菌体混合液、单一噬菌体的噬菌谱,为噬菌体鸡尾酒制剂的毒株选择奠定了基础。

中草药防治鸭病毒病的研究进展

鸭病毒性疾病是我国养鸭业传播最广泛、造成重大经济损失的传染病之一。由于抗病毒药物的稀缺,且使用化学药物具有明显的副作用和耐药性,中草药防治鸭病毒病有了重要的研究价值。中草药含有丰富的活性成分,运用不同制剂形式防治鸭病毒病能达到调节机体免疫力、改善临床症状等效果。文章主要阐述中草药抗鸭病毒的作用机制,以及在鸭病毒性肝炎、鸭瘟、鸭呼肠孤病毒病、鸭坦布苏病毒病、鸭禽流感5种常见病毒病中的应用研究,旨在为中草药在鸭病毒病防治中的研究提供一定的参考。

鸭坦布苏病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种有效、快速、准确的鸭坦布苏病毒(DTMUV)TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本试验针对NCBI发布的DTMUV E基因保守序列设计特异性引物和探针,建立qPCR反应体系。通过制备的标准质粒建立标准曲线,评估该方法的特异性、敏感性和重复性,并使用该方法对临床样本进行检测。结果显示,所建立的标准曲线相关系数为0.999 5,有良好的线性关系;该方法可特异检测DTMUV;对标准质粒的最低检测限为2.72×10^(2) copies/μL,是普通PCR的100倍;CT值组内变异系数为0.97%~1.32%,组间变异系数为1.24%~1.79%;人工感染DTMUV的20份鸭胚成纤维细胞样本以及12份人工攻毒2 d的雏鸭脾脏组织样本和12份泄殖腔棉拭子样本阳性率为100%(44/44);疑似感染的12份活鸭泄殖腔棉拭子阳性率为25.00%(3/12),14份病死鸭脾脏组织样本阳性率为28.57%(4/14)。结果表明,本试验建立的TaqMan探针qPCR方法有良好的敏感性、准确性和重复性,能特异检测DTMUV,适用于临床快速检测,为DTMUV的分子流行病学调查和临床疾病诊断提供了技术支撑。

一株鸭疫里氏杆菌的分离、鉴定与生物学特性分析

为确定引起2022年湖北省襄阳市某规模化鸭场的鸭急性死亡病因,对病料进行病原菌分离、对分离株进行生化特性鉴定、耐药性测定、动物回归试验及全基因组测序。结果表明,急性死亡的鸭病原菌仅有鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)分离鉴定为阳性。药敏结果显示分离菌株对药物敏感性较高,仅对环丙沙星、氧氟沙星耐药;动物回归试验结果显示分离菌株可引起雏鸭急性死亡,剖检可见典型的浆膜炎症状。组织病理学切片显示心脏、肝脏被膜有明显纤维性渗出,心肌细胞有炎性浸润、脾脏实质内可见淋巴细胞数量明显减少、脑组织可见较多的血管淤血扩张。毒力测定显示分离菌株的半数致死量为3.06×106CFU/mL。

一株鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为确认山东省德州市某肉鸭场疑似为鸭多杀性巴氏杆菌感染的病原菌,本试验对于送检病死鸭进行剖检、细菌分离培养、菌落观察、生化试验、PCR鉴定、16Sr RNA基因测序分析以及药敏试验等方法鉴定该病原菌。结果显示:分离得到的病原菌在含有5%胎牛血清的营养琼脂培养基中呈现为圆形、湿润、光滑的灰白色菌落,革兰氏染色为阴性短杆菌,瑞氏染色呈现两极浓染;分离菌株的生化特性可以发酵葡萄糖、蔗糖以及甘露醇,硫化氢、氧化酶等试验阳性;细菌特异性PCR扩增片段与预期条带大小一致;16S rRNA基因序列系统进化树显示与多杀性巴氏杆菌同源性为99%;分离菌株对于新霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟、林可霉素具有耐药性,对于氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、粘杆菌素B、卡那霉素、大观霉素敏感。本研究结果为鸭源多杀性巴氏杆菌病的防治提供一定参考依据。

肠炎沙门氏菌对雏鸭致病性差异与携带毒力基因相关性研究

为了探究肠炎沙门氏菌的致病性差异,选择7株鸭源肠炎沙门氏菌开展动物试验,并检测了20种毒力基因(avrA、sipA、sipC、sopA、ssaB、mgtC、misL、orf319、sopB、siiE、pipC、stn、fimA、spvB、spvD、spvC、sitC、sefA、sifA、pefA)在不同菌株中的分布情况,对毒株致病性与携带毒力基因的相关性进行分析。结果表明,所有肠炎沙门氏菌对雏鸭均有致病性,但致病性存在明显差异,致死率为12%~87.5%。毒力基因检测结果显示,不同菌株携带的毒力基因存在差异,其中SE115、SE161菌株携带基因avrA、sipA、sipC、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA、orf319、spvB、spvC、sitC、sefA、sifA、pefA等19种毒力基因;SE60、SE62、SE63菌株除携带上述基因外,还携带spvD基因;SE39菌株携带avrA、sipA、sipC、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA、orf319、sitC、sefA、sifA、pefAd等17种毒力基因;SE56菌株携带avrA、misL、ssaB、spvB、spvD等5种毒力基因。上述结果说明不同菌株的鸭源肠炎沙门氏菌对雏鸭的致病性存在差异,这种差异与其携带毒力基因的数量和种类有一定相关性,此研究结果为进一步研究沙门氏菌的致病机理提供基础理论。

2020—2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析

为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况,试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料,通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定,并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示:共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒,均属于GⅠa分支,且分属于GⅠa分支不同小分支,其中2020年分离株(20148、20149)与2021年商品肉鸭分离株(SP21042)核苷酸相似性在98.8%~100%;2023年商品鸭分离株(SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009)核苷酸相似性在99.7%~100%;2021年种鸭分离株(21083)与2022年、2023年种鸭分离株(22443、22468、BL23028)、2023年商品鸭分离株(SP23010)核苷酸相似性在98.8%~99.4%,小分支内相似性均高于98.8%,不同小分支间相似性在96.9%~98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明,山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异,需要加以关注。

黑木耳对力竭小鼠耐力及血脂的影响

为了探讨不同剂量黑木耳对小鼠耐力及血脂的影响,试验将32只昆明小鼠随机分为空白饲料组(FN)、面条对照组(NN)、低剂量黑木耳面条组(LAN)和高剂量黑木耳面条组(HAN),其中FN组与NN组分别使用小鼠饲料与未添加黑木耳的面条饲养,LAN组与HAN组分别用含2.97%、5.67%黑木耳粉的面条饲养,正试期为15 d。试验期间每组7 d对小鼠进行一次力竭游泳训练,记录游泳时长,末次训练时记录的游泳时长记为力竭游泳时间。试验结束后采集小鼠血清,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)含量;处死小鼠并取肝脏、肱二头肌检测肝糖原(HG)、肌糖原(MG)含量。结果表明:LAN组和HAN组小鼠的平均力竭游泳时间分别为41.11 min、42.76 min,较NN组与FN组极显著延长(P<0.01);与FN组和NN组相比,LAN组的HG含量、MG含量显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),HAN组的HG、MG含量均极显著提高(P<0.01);此外,LAN组与HAN组的TC及TG含量较NN组与FN组极显著降低(P<0.01)。说明供试剂量下的黑木耳面条可提高小鼠耐力并降低其血脂水平。

山东省临沭县鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及生物特性分析

为了解山东省临沭县鸭疫里默氏杆菌(RA)血清型、耐药性和致病性,2023年5—6月在8家养殖场无菌采集疑似感染RA的病死鸭鹅心血、脑和肝脏组织病料,利用细菌分离培养、生化试验和PCR方法对分离菌进行鉴定,用玻片凝集试验鉴定分离菌血清型,并对分离菌进行药敏性和致病性分析。结果显示:共有12株分离菌的菌落特性、镜检、生化特点和16S rRNA基因序列符合RA特征;有7株RA为血清1型,2株为血清2型,3株为血清11型;所有菌株均对丁胺卡那、庆大霉素、新霉素和阿莫西林耐药,对头孢他啶、头孢曲松、头孢氨苄敏感;用3种血清型RA攻毒均可导致雏鸭发病死亡,且临床症状、病理变化与RA感染典型特点相同。结果表明:临沭县RA感染比较普遍,主要流行3种血清型,其中血清1型为优势血清型;RA对多种抗菌药表现出耐药性,致病性较强。建议加强定期病原学监测和耐药性分析,结合本地菌株生物学特性选择疫苗和抗菌药防治,以提高RA感染防控效果。

规模化肉鸭养殖场生物安全防控体系构建措施

随着我国肉鸭养殖规模的不断发展扩大,现代化集约养殖场日渐增多。养殖场在提高饲养技术的同时,也需格外注重生物安全防控技术的构建,以期获得更高的经济效益。建立健全的生物安全防控体系是保障肉鸭养殖业健康稳定发展最为有效的手段。本文通过多次调研并结合生产实践,概述规模化肉鸭场的生物安全防控措施,为肉鸭养殖场(户)提供理论参考,进而帮助肉鸭养殖场/户构建和完善生物安全体系及防控措施。

一例鸭甲肝病毒3型与新型番鸭细小病毒共感染的诊断

2023年10月,福建漳州某鸭场饲养的14日龄樱桃谷鸭群发病,根据临床症状、病变观察和实验室病原检测,确诊该病例为鸭甲肝病毒3型与新型番鸭细小病毒共感染。

鸭大肠杆菌病的诊治与预防

鸭是主要的家禽养殖对象之一,在鸭养殖过程中,疾病是影响鸭生长并给养殖户造成经济损失的主要原因,养殖户需重视常见病的防治工作。鸭大肠杆菌病是鸭养殖中的常见病,对鸭养殖影响较大。主要围绕鸭大肠杆菌病的诊治与预防,从鸭大肠杆菌病发病特点、临床症状、病理特点、诊断、防治措施等方面展开分析,旨在更好地指导鸭大肠杆菌病的诊治与预防工作,促进鸭健康,保障养殖户的经济效益。

MDRV弱毒感染下番鸭肝脏源外泌体差异miRNA表达谱研究

为探究番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)活疫苗对番鸭肝脏源外泌体中microRNA(miRNA)的影响,选择40羽1日龄雏番鸭,随机分为试验组和对照组,每组各20羽。试验组肌肉注射MDRV活疫苗1羽份,对照组肌肉注射等量的灭菌生理盐水。免疫48 h后,采集肝脏制备肝原代细胞培养2 d,取上清用试剂盒法提取外泌体送生物公司进行miRNA测序。接着进行miRNA注释,差异表达miRNA分析,靶基因预测,并对靶基因涉及的生物功能进行GO和KEGG富集分析。结果表明:MDRV活疫苗免疫组与对照组相比,共筛选到显著差异miRNA 39个,预测到369个靶基因,这些靶基因的GO功能注释主要集中在单有机体过程、刺激应答、多细胞有机体过程、定位、细胞器、膜、胞外区、绑定分子功能等;KEGG通路富集分析集中在肝脏中氨基糖和核苷酸糖的代谢、糖酵解/糖异生、溶酶体、磷脂酰肌醇信号传导系统、磷酸肌醇代谢、细胞凋亡、细胞自噬作用等。结果表明,MDRV活疫苗免疫雏番鸭会影响肝细胞外泌体的miRNA表达水平,这些miRNA参与肝脏代谢等多种功能。研究结果可为MDRV感染的科学防控提供理论基础。

我国山东部分地区2019—2022年新型鸭细小病毒的流行病学调查

为了解山东地区新型鸭细小病毒(novel duck parvovirus,NDPV)的流行情况,进行现场流行病学调查,并设计NDPV-VP3基因引物,对采集具有鸭短喙侏儒综合征临床症状的1651份样品和由养殖户送检至山东某检测机构的2425份鸭血液或组织样品进行PCR检测及遗传进化分析。结果显示:送检的样品中有261份阳性,阳性率为10.76%;采集的样品中有1475份阳性,阳性率为89.34%。遗传进化分析显示,2020—2022年得到的8株分离株与Genbank上的其他细小病毒序列的核酸同源性为95.0%~99.5%。本调查结果为分析山东地区NDPV流行趋势提供重要依据。

鸭传染性浆膜炎的临床症状及防治措施

近年来,我国肉鸭养殖业快速发展,肉鸭产品的需求量增多,对肉鸭健康安全的要求也更加严格,传统疾病诊断和治疗的模式已经满足不了现阶段肉鸭养殖的需求,对于大部分疾病的诊断和防治需要及时创新,改变传统养殖理念。鸭传染性浆膜炎是由鸭疫巴氏杆菌感染引起的一种败血性传染病,故又称鸭疫巴氏杆菌病、鸭败血病或新鸭病,该病具有较高的传染性.