基于转录组测序的金银花提取物抗鸽源新城疫病毒感染的作用机制研究

[目的]探究金银花提取物抗鸽源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染的作用机制。[方法]选取未接种NDV疫苗的健康28日龄美国王鸽40只,适应性饲养7 d,于35日龄随机分为金银花预防(KO)组和攻毒对照(OE)组,每组20只。KO组试验鸽于35日龄开始在饮水中添加1.2%的金银花提取物,持续饮用7 d,42日龄时肌肉注射HA效价为5log2的鸽源NDV Pi/NJ/CH/4416/2016株0.5 mL/只;OE组试验鸽于35日龄进入正式试验,正常饮水,42日龄时肌肉注射HA效价为5log2的鸽源NDV Pi/NJ/CH/4416/2016株0.5 mL/只。攻毒7 d后,每组选取3只试验鸽采集脾脏组织样本制备组织切片,同时提取总RNA构建转录组文库,利用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-Seq)技术进行差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)鉴定、GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。随机选取4个显著差异表达基因,利用qRT-PCR验证测序结果。[结果]OE组鸽子脾细胞核异常增大且出现白色空泡,并伴有大量粒细胞浸润,而KO组脾脏组织仅见较多白色空泡和少量粒细胞浸润,未见脾细胞核异常增大。利用RNA-Seq技术从KO组鸽脾脏中共鉴定出374个DEGs,其中,112个基因表达显著上调,262个基因表达显著下调。GO功能富集分析显示,共有875个DEGs富集到312个GO条目,其中,生物学过程富集到149个条目,细胞组成过程富集到33个条目,分子功能过程富集到130个条目。KEGG通路富集分析显示,共有226个DEGs主要被富集在信息传递通路、代谢通路、天然免疫相关通路、细胞凋亡通路等93条KEGG信号通路。qRT-PCR验证结果显示,从DEGs中随机选取的4个显著差异表达基因(LOC110360702、LOC110360688、SFRP5、CHAD)的相对mRNA丰度变化趋势与RNA-Seq结果显示的4个基因变化趋势一致。[结论]金银花提取物通过激活宿主的信息传递、代谢调节及免疫应答等重要生理过程发挥抗鸽源NDV感染作用。研究结果为进一步探究鸽源NDV感染中免疫应答的分子机制提供了科学依据。

鸽禽I型副粘病毒油佐剂灭活苗对肉种鸽免疫效果观察

用鸽Ａ／ＰＭＶ－１ＳＸ株（简称ＳＸ株）制成的油佐剂灭活苗与ＮＤＶ油佐剂灭活苗分别免疫肉种鸽，免疫后２０天抗体水平达到峰值，抗体水平在３ｌｏｇ２以上维持３０天以上。免疫后４０天用鸽ＳＸ株和新城疫强毒对两种疫苗免疫鸽分别进行攻击，两种疫苗免疫组对ＮＤＶ强毒攻击的保护率均为１００％，鸽Ａ／ＰＭＶ－１油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率为１００％，而ＮＤＶ油佐剂灭活苗免疫组对鸽ＳＸ株攻击的保护率仅为６６７％。鸽Ａ／ＰＭＶ－１油佐剂灭活苗田间试验抽检４８份肉种鸽血清，抗体平均值为４３０±１１６ｌｏｇ２。

鸽新城疫油乳化灭活疫苗研制

研制了灭活的油佐剂鸽新城疫疫苗,对疫苗的安全性及免疫效果进行观察,结果表明疫苗对鸽十分安全,每鸽肌肉注射0.5ml疫苗后,12天能耐受强毒的攻击,免疫持续期在6个月以上,疫苗4℃保存6个月以上仍有免疫效果,扩大试用了1万多羽肉鸽和赛鸽也十分安全有效。

信鸽暴发鸽新城疫

信鸽暴发鸽新城疫王玉东张子春蒋贻海吴延功王永玲（农业部动物检疫所，山东青岛２６６０３２）青岛市自１９９６年９月份以来，信鸽连续发生一种急性传染病，以腹泻，拉黄绿色水样便，呼吸困难，张口呼吸，头颈歪斜，转圈，耷翅及瘫痪为主要症状，发病率１００％，死亡率...

应用反转录聚合酶链反应检测鸽Ⅰ型副粘病毒的研究

根据鸡新城疫病毒（ ＮＤＶ） 和鸽Ⅰ型副粘病毒Ｆ 基因的保守序列，设计合成１ 对引物ＸＺ９ 、ＸＺ１０ ，用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 对３ 株鸽Ⅰ型副粘病毒和６ 种其它禽病原体进行检测。结果，该引物对３ 株鸽Ⅰ型副粘病毒均扩增出与预期大小相符的ＲＴＰＣＲ 产物，而对鸡传染性支气管炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、大肠埃希氏菌、禽腺病毒、禽巴氏杆菌扩增结果均为阴性；ＲＴＰＣＲ 最低能检出１ ｐｇ 的鸽Ⅰ型副粘病毒的核酸模板。

鸽禽Ⅰ型副粘病毒生物学特性的比较研究

鸽禽Ⅰ型副粘病毒生物学特性的比较研究李柠，黄引贤，李乃津，曾桂兰（华南农业大学兽医系）鸽的禽Ⅰ型副粘病毒（Ａ／ＰＭＶ－１）感染是鸽的一种严重传染病，对鸽群造成的发病率和死亡率均很高，不少学者认为鸽人／ＰＭ＼’－！感染是鸡新城疫传染的结果，鸽在传播鸡新...

鸽痘疫苗的研究

本研究采用鸡胚连续传代的方法,使自然鸽痘强毒致弱,从而获得一株免疫原性好、安全且使用简便的鸽痘弱毒疫苗株。结果表明弱毒株所制疫苗接种鸽体后10～14天,便产生最少达9个月的坚强免疫力,现场试验的保护指数在88以上,使用于出壳当天的雏鸽也未见有任何不良的接种反应。置零下28～30℃冰箱中疫苗及其种毒分别经12、24个月效果均未受影响。

胚胎免疫火鸡疱疹病毒后鸡淋巴器官的超微结构观察

用火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗对孵化至１８日龄的鸡胚胎进行免疫注射。超微结构观察显示，１８日龄胚胎免疫鸡出壳后对淋巴器官的早期发育具有明显的免疫促进作用；而鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）攻毒试验的结果则表明，非免疫鸡出现较明显的淋巴样细胞的退行性变化。

不同ND抗体水平鸵鸟对NDV强毒的抵抗力试验

以不同新城疫 (ND)HI抗体水平的 5只鸵鸟进行新城疫病毒 (NDV )感染试验 ,HI抗体效价 (Log2 )在 3Log2以内的 3只鸵鸟均表现ND的典型症状和病变 ,4Log2的鸵鸟耐过NDV的侵袭 ,5Log2的鸵鸟未表现任何症状。这表明当鸵鸟的NDHI抗体水平≤ 4Log2时应及时接种ND疫苗。

鸽新城疫流行的调查研究

通过对广东省十余个鸽场的新城疫流行的调查，我们发现鸽新城疫流行期，病鸽死亡率可达５０％，其中幼鸽易感性较成鸽高。病鸽症状以下痢和神经症状为主，消化道出血少见；通过病原分离，引起鸽新城疫的病原为Ⅰ型副粘病毒的不同株；注射鸡新城Ⅱ且系、Ⅲ系弱毒疫苗或鸽新城疫油乳剂灭活苗可及时控制疫情的流行。

鹌鹑对新城疫病毒的易感性试验

用从新城疫病死鹌鹑中分离的新城疫病毒(NDV)株(QNDV-1)和鸡新城疫毒株(F_(48)E_8),对5日龄、10日龄、25日龄、35日龄和70日龄等不同日龄鹌鹑进行了感染试验,并用15日龄鹌鹑做了呼吸道、肌肉注射、皮下注射、脑内注射、静脉注射和消化道等不同途径的感染试验。结果表明:供试不同日龄鹌鹑均可被感染发病,并出现和自然病例同样的症状或死亡,随着日龄增长,死亡率有降低趋势,70日龄鹌鹑(成年产卵)出现同自然病例同样的产卵量下降和产出异常卵现象;不同途径均可使鹌鹑感染发病或死亡,其中以脑内注射和静脉注射所表现的发病或死亡最为急剧;从病死鹌鹑中可重新收回到新城疫病毒,发病耐过鹌鹑可产生特异性抗体。

鸵鸟传染性喉气管炎病毒的分离鉴定

经临床症状、病理变化观察、琼脂扩散试验、病毒分离以及人工接种试验确诊为鸵鸟传染性喉气管炎。并通过自制组织灭活苗,紧急预防接种等综合防制措施控制了疫情。

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断鸽新城疫

某群肉鸽暴发了一种急性、烈性传染病、发病率近１００％，死亡率达４０％，发病鸽多数有呼吸症状，拉绿色稀粪，部分鸽有神经症状，病死鸽剖检表现全身充血、出血、出血性纤维素性肠炎、肺炎、气管炎等病理变化。采取病死鸽泄殖腔棉拭样品，应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断，结果表明，该鸽群发生了鸽新城疫。应用典型的病毒分离、鉴定和毒力试验的新城疫诊断方法诊断，证实了试剂盒诊断结果的正确性。应用鸽源ＮＤＶ强毒作抗原制成的油佐剂灭活苗免疫鸽群。

鸽新城疫的综合防制

鸽新城疫是由鸽Ⅰ型副粘病毒（Ｐａｒａｍｙｘ－ｏｖｉｒｕｓ－Ⅰ，ＰＭＶ－Ｉ）引起的一种高接触性传染病。其主要临床特点是肠炎、下痢和神经症状，且来势凶猛，发病率和死亡率极高，对养鸽业造成巨大威胁，是肉鸽养殖的大敌。１流行特点鸽新城疫最早由德国人于１９６３...

鸽新城疫病毒分离株F0裂解位点的基因克隆及序列分析

为探索鸽新城疫的流行特点，在分子水平上阐明鸽新城疫病毒分离株与鸡新城疫病毒株之间的相互关系，我们用ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了分离株Ｆ０裂解位点附近３００ｂｐ的基因片段，将其克隆到ｐＵＣ１９载体上得到一重组克隆ｐＮＤＶ２１，序列分析表明，插入片段与鸡新城疫强毒Ｔｅｘａｓ相应区域的同源性为８７．７％；而与弱毒株Ｄ２６／７６及ＬａＳｏｔａ的同源性分别是９１．７％和９８％。其Ｆ０裂解点的氨基酸顺序为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ。

鸽源新城疫病毒陕西分离株P基因的克隆及序列分析

【目的】对鸽源新城疫病毒（NDV）陕西分离株P基因进行克隆和序列分析,为研究P基因及V基因的功能奠定基础,并为防治新城疫提供科学依据。【方法】参考GenBank发表的NDV基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR扩增NDV/Pigeon/ShX/China/2003P基因的全长片段,并进行克隆、序列测定和分析。【结果】NDV/Pigeon/ShX/China/2003P基因全长1 451 bp,其完整的ORF长度为1 188 bp,编码395个氨基酸。同源性比较可知,NDV/Pigeon/ShX/China/2003与其他分离株P基因的核苷酸序列同源性在63.6%~92.9%,推导的氨基酸序列同源性在67.7%~92.2%。系统发育进化树表明,NDV/Pigeon/ShX/China/2003与鸽源分离株P68亲缘关系最近,与F48E9和La Sota毒株处于进化树的不同分支。【结论】NDV/Pigeon/ShX/China/2003与国内外已报道的NDV毒株间存在较大变异。