蜂胶超临界提取萃余物的主要化学成分分析及其防治奶牛乳房炎的效果评价

为了探究蜂胶超临界提取萃余物和蜂胶超临界乙醇提取萃余物(醇提蜂胶超临界萃余物)的化学成分,及两种萃余物防治奶牛乳房炎的作用效果,试验参考国家标准对两种萃余物中基本营养成分、矿物质元素含量进行测定,采用福林酚法和亚硝酸钠-硝酸铝法[NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)]法分别测定总酚和总黄酮含量;同时,采用高效液相色谱法鉴定6种主要多酚成分。进一步以脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症模型,通过CCK-8法分析蜂胶超临界提取萃余物和醇提蜂胶超临界萃余物对MAC-T细胞活力的影响,通过实时荧光定量PCR评估蜂胶超临界萃余物和醇提蜂胶超临界萃余物对MAC-T炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA相对表达量的影响。结果表明:两种萃余物中营养成分含量无较大差异,但蜂胶超临界提取萃余物的脂肪含量显著低于醇提蜂胶超临界萃余物(P<0.05);蜂胶超临界提取萃余物中总酚和总黄酮含量较高,分别为178.21,514.60 mg/g,显著高于醇提蜂胶超临界萃余物(P<0.05);且6种多酚成分总含量高于醇提蜂胶超临界萃余物,其中蜂胶超临界提取萃余物的短叶松素、白杨素和高良姜素含量显著高于醇提蜂胶超临界萃余物(P<0.05),咖啡酸和松属素含量差异不显著(P>0.05)。蜂胶超临界提取萃余物中钙、镁、钾含量均显著低于醇提蜂胶超临界萃余物(P<0.05),钠、铝、锰含量显著高于醇提蜂胶超临界萃余物(P<0.05),两种萃余物中铁含量差异不显著(P>0.05)。25~200μg/mL的蜂胶超临界提取萃余物和醇提蜂胶超临界萃余物对MAC-T细胞没有明显的细胞毒性,并且蜂胶超临界提取萃余物和醇提蜂胶超临界萃余物均能极显著降低MAC-T细胞炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA相对表达量(P<0.01)。说明蜂胶超临界提取萃余物和醇提蜂胶超临界萃余物仍含有部分黄酮类和酚酸类等多酚化合物,并且可通过降低促炎因子水平防治奶牛乳房炎。

复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液对注射用青霉素钠在猪体内的药代动力学的影响

本研究旨在探究复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液对注射用青霉素钠在猪体内的药代动力学参数的影响。将12头荣昌杂交长白健康猪随机分为对照组和试验组,每组6头,两组均在猪右侧耳后方颈部按照30000 IU/kg BW剂量肌内注射青霉素钠(注射用,使用前用生理盐水溶解),同时,试验组在猪左侧耳后方颈部按照30 mg/kg BW剂量肌内注射复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液。分别于给药后0.083 h、0.167 h、0.250 h、0.333 h、0.500 h、0.750 h、1.000 h、1.500 h、2.000 h、3.000 h、4.000 h、6.000 h、8.000 h、12.000 h,使用一次性肝素钠采血管自前腔静脉采集血样1~2 mL,通过HPLC进行血浆药物浓度测定,并将测得数据用3P97药代动力学程序软件计算拟合,获得药代动力学参数。结果显示,对照组和试验组猪血液中青霉素的消除半衰期t_(1/2(β))分别为(1.13±0.22)h、(2.27±0.25)h,达峰时间T_(peak)分别为(0.14±0.03)h、(0.25±0.04)h,达峰浓度C_(max)分别为(28.48±4.87)g/L、(23.09±3.66)g/L,药时曲线下面积AUC分别为(27.77±3.24)h·(g/L)、(47.43±4.15)h·(g/L)。表明复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液与青霉素联用可以延长青霉素的半衰期,降低药物的释放速度,使药物的作用时间延长。结果提示,两者可以延迟分开注射联用,但不宜混用。

吉非替尼中SM1、中间体1、中间体2残留研究

鉴于基因毒性杂质对人体产生不可逆转的伤害,制定科学合理的杂质研究控制策略,建立基于风险评估的药物杂质研究方法显得尤其重要。本研究采用UPLC-MS/MS测定吉非替尼中基因毒性杂质SM1[2-氨基-4-甲氧基-5-(3-氯丙氧基)苯甲腈]、中间体1[3-(3-氯丙氧基)-4-甲氧基苯甲腈]和中间体2[2-硝基-4-甲氧基-5-(3-氯丙氧基)苯甲腈]的残留量,采用Agilent SB-C_(18)色谱柱进行分离,梯度洗脱,流动相A为0.2%乙酸溶液,流动相B为甲醇,质谱检测器,流速0.4 mL/min。结果显示,SM1、中间体1、中间体2的线性范围为3.6~36.0 ng/mL,相关系数r为0.9998~1.0000,定量限浓度为3.6 ng/mL,检测限浓度为1.1 ng/mL;精密度试验和精准度试验中3种化合物的平均回收率分别为100.43%~101.78%和99.01%~102.07%,RSD均小于5.0%。本方法可简便、快速、灵敏、准确地定量测定吉非替尼中SM1、中间体1和中间体2杂质含量。

冰鱼抗菌肽Chionodracine的生物信息学分析及其优化肽预测

为了研究从冰鱼中分离出的抗菌肽Chionodracine及其4种优化肽的生物学功能,试验利用生物信息学软件对其理化性质、二级结构、三级结构、两亲性和修饰位点等进行预测分析,并以冰鱼抗菌肽Chionodracine(母肽)的氨基酸序列为基础,用赖氨酸(K)替换不同位置组氨酸(H)和丝氨酸(S)对该抗菌肽进行优化改造,改造后的抗菌肽命名为Cnd-1~4,并应用生物信息学软件进行预测分析。结果表明:冰鱼抗菌肽Chionodracine是由22个氨基酸组成的阳离子型抗菌肽,其二级结构主要由α-螺旋结构(90.91%)和少量无规则卷曲结构(9.09%)组成,理论等电点为9.99,净电荷为+5,有较高的稳定性和疏水特性,无跨膜区和信号肽,属于细胞膜外蛋白,含有3个磷酸化修饰位点和1个泛素化作用位点,能够被11种蛋白酶剪切,为无毒性蛋白质。在4种优化肽中Cnd-1、Cnd-2、Cnd-3的分子量均小于母肽,理论等电点和正电荷数均比母肽高;二级结构与母肽相似,其中优化肽Cnd-4二级结构中α-螺旋结构占比为95.45%,大于母肽。说明可通过氨基酸位点替换的方式对冰鱼抗菌肽Chionodracine进行优化改造,改造后的冰鱼抗菌肽Chionodracine与细胞膜之间的相互作用及稳定性可能优于母肽。

抗菌药物体内疗效评估方法的不足和探索

由细菌耐药性引起的干预疗效不佳或治疗失败正不断挑战人类和动物健康。研究如何科学合理使用抗菌药物治疗和有效评估宿主体内抗菌药物疗效具有重要意义。本综述总结抗菌药物体内疗效评估方法并分析其不足之处,提出新的思考与探索,旨在为科学、合理、有效使用抗菌药物提供参考,减少耐药性产生,最大程度降低干预疗效不佳或治疗失败引起的影响。

动物毒液的抗菌活性研究进展

研究发现动物毒液中含有多种活性蛋白和多肽,具有广谱抗菌、抗病毒、抗癌、免疫调节等功能,目前针对蛇、蜜蜂、蝎子、蚂蚁和蜈蚣毒液的研究较为广泛,其毒液中所分泌的活性物质有望成为抗菌药物的来源。蛇毒中的磷脂酶A2和L-氨基酸氧化酶是发挥抗菌作用的主要活性物质,碱性磷脂酶A2可以杀灭金黄色葡萄球菌、鼻疽杆菌。L-氨基酸氧化酶在氧气的作用下产生过氧化氢,对巴氏杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌有抑菌活性。蜂毒液的主要成分包括蜂毒素、磷脂酶A2和蜂毒肽,其中蜂毒肽和蜂毒素抗菌效果显著,对唾液链球菌、粪肠杆菌、沙门菌具有抗菌活性,蜂毒肽对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有抗菌活性。蝎毒液作为生物活性肽的来源之一,分为二硫键桥肽(DBPs)和非二硫键桥肽(NDBPs),大部分非二硫键桥肽具有良好的抗菌效果,但部分非二硫键桥肽对真核细胞具有毒性作用。蚂蚁毒液富含生物活性蛋白和其他挥发性与非挥发性化合物,部分蚂蚁毒液肽对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌表现出一定的抗菌活性。蜈蚣毒液分离出的抗菌肽主要有抗菌肽ScolopinⅠ、抗菌肽ScolopinⅡ和抗菌肽Scolopendrin 1,其中ScolopinⅠ和ScolopinⅡ对金黄色葡萄球菌及多重耐药菌株的生长均有抑制作用。在当前全球细菌耐药性问题日益严重的情况下,动物毒液作为一种潜在的原材料,为抗菌药物的研发提供了一个新思路,但由于动物毒液的毒性、稳定性等限制其作为药物直接进行应用,需通过改造、重组等手段进行改进,且多数研究还处于试验阶段。本文综述了蛇、蜜蜂、蚂蚁、蝎子、蜈蚣毒液的抗菌活性,旨在为开发新型、有效、低毒的抗菌药物提供参考。

分子印迹传感器在兽药残留分析领域研究进展

动物源食品中兽药、微生物毒素、防腐剂以及食品加工过程中的药物残留可引起明显的毒性作用和过敏反应,给人类健康带来威胁。分子印迹技术主要通过诱导模板在聚合物中形成特定识别位点,具有预定性、识别性以及实用性等优点,在兽药残留检测领域发挥了重要作用。使用分子印迹技术制备的聚合物受体所具有的坚固性、高亲和力、特异性和生产成本低等特性,使它们成为天然受体以及有毒化合物可选择的替代品。将分子印迹技术与传感器技术相结合,使两者的优势特点充分发挥,聚合物科学和纳米技术的进步有助于提高分子印迹聚合物传感器的性能,分子印迹传感器所适用的领域也进一步扩大。近年来许多高质量文献报道了分子印迹聚合物传感器在生物分子、滥用药物和爆炸物等领域的研究,推动了该技术在生命科学和危化品领域的应用。作者重点简述了分子印迹技术与分子印迹传感器的原理,介绍了基于分子印迹聚合物的传感器技术的最新成就以及面向兽药残留检测应用领域的研究。

兽用消毒剂环境安全性研究进展

消毒剂常被用于杀灭传播媒介上的病原微生物,兽医和牲畜用消毒剂是控制传染性病原体的关键要素。随着我国集约化养殖模式的扩大,消毒剂的应用量不断增加,消毒剂及其副产物在环境中的暴露量不断增大,带来了一系列的环境影响,例如生态毒性和微生物耐药性的增加,间接影响人类健康。消毒剂大多以消毒副产物(DBPs)的形式存在于环境,大量存在于水体和土壤,进行环境安全性评价有助于了解其潜在危害。本文简述了部分消毒剂及其副产物在环境中的暴露现状,并总结其环境行为特性、生态毒性、对耐药性和抗性基因的影响,对其在环境中的安全性研究现状进行综述,为科学消毒模式提供参考依据。

新农科背景下动物药学专业药物分析设计性实验创新与改革

药物分析实验是动物药学专业的一门专业核心课程,主要是利用各种检测技术准确客观反映药品真实质量。作为药品质量的“守门员”,需具备强烈的质量意识、严谨求实与精益求精的专业素养。西南大学药物分析实验课程学时少,教学模式单一,实验内容简单且多为验证性实验,学生对实验课的热情度不高,缺乏互动性、创新性。在新农科建设背景下,课题组对实验教学大纲重新进行了全面修订,并邀请企业一线技术专家参与讨论,深入开展线上线下混合式教学,实施研讨式、探究式、参与式等多种教学方法,促进学生自主学习;增加了设计性和综合性实验,建立多元化的考核评价体系,注重过程性考核与结果性考核有机结合,着力培养学生的创新意识和创新能力。在2020级与2021级动物药学专业初步尝试了药物分析实验的创新设计性实验,发现本项教学改革使验证性实验转变为真正的探索性实验,激发了学生学习的主动性和积极性;有利于充分发挥学生的主观能动性,提高创新思维能力,培养了学生独立思考和解决问题的能力,也提升了学生的科研能力、创新能力。本项教学改革可提高教学质量,培养能促进动保行业健康发展的动物药学人才,同时可为建设药物分析实验一流课程与其他专业课课程体系提供参考。

阿苯达唑-甲基-β环糊精包合物的制备和物像鉴定

为提高难溶性药物阿苯达唑(ABZ)的水溶性,制备阿苯达唑-甲基-β-环糊精包合物(ABZ-Me-β-CD)。通过单因素试验和正交试验,以包合物的包合率和回收率为指标,探索了包合物的最佳制备工艺。通过相溶解度试验,确定最佳包合材料。用高效液相色谱法(HPLC)对包合物的溶解度、包合率以及体外溶出度进行了检测。最后用粉末X-射线衍射(XRD)和扫描电镜(SEM)对包合物的物象结构进行鉴定。结果表明,包合物的最佳制备工艺为超声法、时间60min、功率60%(360W)、主客摩尔比1:3;最佳包合材料为甲基-β-环糊精。包合物在水中的溶解度为(22.3±0.66)mg/mL,是阿苯达唑原药(0.2μg/mL)的11万倍。包合物的体外溶出度是阿苯达唑原药的8倍。包合物的平均回收率、包合率分别为95%和16.5%,经X-射线衍射和扫描电镜鉴定,证实了阿苯达唑和环糊精处于非晶体结构的包合状态。研究制备的阿苯达唑环糊精包合物,大幅提升了难溶性药物阿苯达唑的水溶性和溶出度,且制备方法简单易行,适用于工业生产。

pBD-2对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用

为了研究猪β-防御素-2(porcinβ-defensin2,pBD-2)对热应激致小鼠小肠形态结构损伤及紧密连接蛋白表达的修复作用,试验将36只1月龄昆明小鼠随机分为空白对照组、热应激组和热应激+pBD-2组,每组12只。空白对照组和热应激组每天每只小鼠按体重10μL/g以灌胃的方式给予生理盐水,热应激+pBD-2组每天每只小鼠按体重0.01μg/g以灌胃的方式给予pBD-2。灌胃后将热应激组和热应激+pBD-2组放入40℃温箱热应激处理1 h,取出后与空白对照组一起放置于室温下进行饲养。按照相同的方式共处理28 d,并于第28天处理后断颈处死。每天灌胃前观察各组的行为,记录采食量并称重,试验结束后计算各组平均日采食量和平均日增重,并对小鼠进行剖检,分别取十二指肠、空肠、回肠组织进行石蜡切片制作和H.E.染色,比较各组肠绒毛高度与隐窝深度比值和单位面积内杯状细胞数目,并采用免疫组织化学技术对紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-3和Occludin进行检测与相对表达量分析。结果表明:试验期间,空白对照组无异样行为;热应激组探索行为增加,焦虑好动;热应激+pBD-2组比热应激组安静。热应激组平均日采食量显著高于热应激+pBD-2组和空白对照组(P<0.05),而热应激+pBD-2组和空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组平均日增重差异不显著(P>0.05)。空白对照组肠道健康、无红肿,肠道内容物适中;热应激组肠道表面充血、红肿,肠道内容物较多;热应激+pBD-2组肠道无红肿现象,肠道内容物较少。热应激组十二指肠、空肠、回肠绒毛高度与隐窝深度比值均显著低于空白对照组和热应激+pBD-2组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。热应激+pBD-2组十二指肠和空肠单位面积内杯状细胞数量显著高于空白对照组和热应激组(P<0.05),空白对照组显著高于热应激组(P<0.05);热应激+pBD-2组回肠单位面积内杯状细胞数量显著高于热应激组(P<0.05)且与空白对照组间差异不显著(P>0.05),热应激组与空白对照组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组和热应激+pBD-2组十二指肠、空肠和回肠中ZO-1蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠和空肠中Claudin-3蛋白的相对表达量显著高于热应激组和热应激+pBD-2组(P<0.05),热应激+pBD-2组显著高于热应激组(P<0.05);各组回肠中Claudin-3蛋白的相对表达量差异不显著(P>0.05)。空白对照组十二指肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组,但热应激+pBD-2组与空白对照组、热应激组均差异不显著(P>0.05);空白对照组和热应激+pBD-2组空肠和回肠中Occludin蛋白的相对表达量显著高于热应激组(P<0.05),但空白对照组和热应激+pBD-2组间差异不显著(P>0.05)。说明热应激处理会影响小鼠的消化吸收功能和小肠形态结构,降低小鼠小肠中紧密连接蛋白的表达量,而pBD-2对热应激造成的上述影响具有较好的修复作用。

猪病治疗中兽医的用药经验分析

为解决猪病在治疗过程中由于用药问题造成的治疗效果差、疫病暴发、生猪死亡等情况,需针对兽医在猪病治疗中用药问题展开详细分析,以便保障用药的科学性,达到治疗生猪疾病的效果。因此,本文针对兽医在猪病治疗中用药问题做出进一步探究,提出确诊后再用药、对症下药、合理接种疫苗、制定科学用药方法、严格把控用药剂量、联合用药等用药措施,以期为相关人员提供帮助。

咯利普兰对猪中性粒细胞表达Mac-1的作用及有关信号机制

【目的】阐明咯利普兰为代表的磷酸二酯酶4抑制剂的抗炎新机制。【方法】采用密度梯度离心法分离猪中性粒细胞,流式细胞术检测猪中性粒细胞表达巨噬细胞表面分子抗原-1(Macrophage surface molecular antigen-1,Mac-1);Real-time qPCR和Western blot技术检测猪中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p65核转录因子(p65 NF-κB)mRNA表达和磷酸化活性。【结果】佛波酯(phorbol myristate acetate, PMA)可显著上调中性粒细胞表达Mac-1(P<0.01),咯利普兰对PMA上调的中性粒细胞表达Mac-1有一定抑制作用,其中,5μmol/L咯利普兰可极显著抑制中性粒细胞表达Mac-1(P<0.01);PMA可极显著上调中性粒细胞p38 MAPK、ERK和p65 NF-κB mRNA表达和磷酸化活性(P<0.01),5μmol/L咯利普兰对PMA升高的中性粒细胞p38 MAPK、p65 NF-κB mRNA表达有极显著抑制作用(P<0.01),对ERK mRNA表达有显著抑制作用(P<0.05),对PMA升高的中性粒细胞p38 MAPK、ERK和p65 NF-κB磷酸化活性有极显著抑制作用(P<0.01)。【结论】咯利普兰可显著抑制中性粒细胞表达Mac-1,其机制与阻遏p38 MAPK、ERK、p65 NF-κB基因表达和磷酸化活性有关。

基于HPLC-MS/MS对海博麦布中对甲苯胺、对氟苯胺、邻氟苯胺的残留检测研究

基于HPLC-MS/MS法建立海博麦布中对甲苯胺、对氟苯胺、邻氟苯胺的检测方法。采用高效液相色谱进行分离,以Waters ACQUITY UPLC^(?)BEH C_(18)(2.1 mm×100.0 mm,1.7μm)为色谱柱,以0.1%甲酸溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱;以三重四极杆质谱为检测器,质谱采用电喷雾离子源、正离子、多反应监测模式(MRM)采集数据。结果显示,对甲苯胺、对氟苯胺、邻氟苯胺在1.0000~20.0000 ng/L范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.9975~0.9999;方法检出限为0.33 mg/kg,定量限为1.00 mg/kg;方法加样回收率为85%~95%。本方法建立了海博麦布中对甲苯胺、对氟苯胺、邻氟苯胺的检测方法。该方法操作简单,线性关系良好,检出限低,回收率高,可为海博麦布制备工艺中对甲苯胺、对氟苯胺、邻氟苯胺的质量控制提供技术支持。

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中4,4'-硫代二苯酚残留量

建立牛奶中4,4'-硫代二苯酚残留量的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。用乙腈将牛奶中4,4'-硫代二苯酚全部提取,加入氯化钠去除脂类物质,用固相萃取柱去除杂质,采用超高效液相色谱-串联质谱仪检测4,4'-硫代二苯酚,以外标的方式进行定量。结果显示,4,4'-硫代二苯酚标准品的质量浓度在1.0~20.0 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r大于0.99。样品中4,4'-硫代二苯酚的检出限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg。在空白牛奶中添加4,4'-硫代二苯酚,质量浓度在1.0~5.0μg/kg范围内,回收率均在60%~90%之间,计算得出相对标准偏差(RSD)均小于10%。该方法具有检测限低、回收率高、定性准确等优点,适用于牛奶中4,4'-硫代二苯酚残留量的检测。

基于HPLC-MS/MS测定替考拉宁中4种黄曲霉毒素

建立高效液相色谱-三重四极杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定替考拉宁中4种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2。样品经溶解、萃取、氮气吹干、再溶解处理,去除了基质对目标物检测的干扰;处理样品经C_(18)色谱柱梯度洗脱分离,采用电喷雾离子源与正离子多反应监测(MRM)模式采集三重四极杆质谱数据,对替考拉宁中4种黄曲霉毒素同时进行检测。4种黄曲霉毒素在4.000 0~80.000 0 ng/L质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数r>0.999 9;检测限为0.06μg/kg,定量限为0.20μg/kg;回收率为85.3%~95.0%,RSD为3.3%~3.6%。对3批替考拉宁样品中的黄曲霉毒素进行检测,均未检到黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2。本方法操作简捷,灵敏度高,准确性好,适合于替考拉宁中黄曲霉毒素的定量测定。

大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌机制研究

【目的】研究大豆异黄酮(Soybean isoflavone,SI)的抑菌机制。【方法】本试验利用呼吸代谢抑制实验和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光染色对大豆异黄酮的抑菌机制进行研究。【结果】呼吸代谢抑制实验结果表明,当SI的终浓度为0.8mg·ml-1时,可显著抑制金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶的活性,SI组苹果酸脱氢酶的比活性与对照组相比降低了74.97%。DAPI染色结果显示,DAPI可以和金黄色葡萄球菌内的核酸结合,经过SI作用28h后,菌体内的核酸含量呈明显下降趋势,其中DNA的荧光强度减少了33.53%,RNA减少了39.82%。【结论】SI具有有较强的抑菌活性,其抑菌机制是通过抑制细菌的呼吸代谢和核酸的合成等方面实现的。

氨基糖苷类药物耐药新机制——16S rRNA甲基化酶的研究进展

从16 S rRNA甲基化酶的发现、作用机制、基因环境、分布和起源等方面介绍了16 SrRNA甲基化酶介导的氨基糖苷类耐药机制。阐明16 S rRNA甲基化酶是在革兰氏阴性杆菌中新出现的介导对庆大霉素等氨基糖苷类高度耐药的酶;16 S rRNA甲基化酶基因位于质粒和转座子上,具有易于传播和扩散的特点,成为临床抗感染的重要问题。

鸡、猪大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

为检测不同动物源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型,探究ESBLs对大肠杆菌耐药性的影响,指导兽医临床有效防治大肠杆菌病。采用NCCLS标准方法和双纸片协同法,对102株大肠杆菌菌株进行抗菌药物敏感性测定和和ESBLs检测,设计合成4对引物,用PCR方法进行了ESBLs耐药质粒的DNA扩增和基因型分析。结果表明:以产ESBLs细菌的耐药质粒为模板扩增出了与预期片段大小相符的TEM、CTX-M型ESBLs产物,但均未扩增出SHV、OVA型ESBLs产物。鸡源、猪源产ESBLs菌株检出率分别为81%、6%。CTX-M、TEM型为山东莱西地区动物源产ESBLs大肠杆菌菌株的流行基因型,且鸡源产ESBLs大肠杆菌菌株分布广泛,应加强当地产酶耐药菌的监测和研究,以有效防治此类细菌引发的疾病。

鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化

[目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化。[方法]以改进的二步灌流法分离8~12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性,用q PCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量。[结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90%以上;用含0.5 mg·L^-1牛胰岛素、10 g·L^-1双抗（100 U·m L^-1青霉素和链霉素）和体积分数为10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好。生长曲线和LDH活性测定结果显示：培养3~5 d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8 d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显著差异。[结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L^-1胰岛素、100 U·m L^-1青霉素、100μg·m L^-1链霉素和10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3~5 d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机。