卡洛芬注射液对靶动物奶牛安全性试验研究

为研究卡洛芬注射液对靶动物奶牛的安全性,将20头健康奶牛随机分为4组,每组5头,各组试验奶牛分别按0、1倍推荐剂量(1.4 mg/kg B.W.)、3倍推荐剂量(4.2 mg/kg B.W.)、5倍推荐剂量(7.0 mg/kg B.W.)单剂量皮下注射卡洛芬注射液,连续给药3 d。试验期间观察记录各组奶牛的饮食、精神、粪便情况及试验前后的体重变化,测定给药前、给药后第1天及给药后第3天各组奶牛的血液生理生化指标,同时在给药后第3 d进行剖检,测定脏器指数,观察病理及组织学变化。结果显示,卡洛芬注射液各剂量组奶牛的临床体征、血液生理生化指标、剖检及组织显微结构等均未见明显异常,未出现中毒症状及死亡。与对照组相比,3倍剂量组和5倍剂量组血液生理指标中血小板平均宽度差异显著(P<0.05),5倍剂量组血液生化指标白蛋白数量明显增加(P<005),但所有指标均在正常范围内波动。结果表明,卡洛芬注射液在临床上推荐以1.4 mg/kg B.W.给药对靶动物奶牛是安全的。

中国和欧美国家养殖业抗生素使用负面问题及管理政策比较

畜禽养殖中抗生素的使用无疑推动了该产业的快速发展,但也引起了其耐药性威胁公共健康和养殖业可持续发展的担忧。本文系统梳理了兽用抗生素的使用,抗生素负面问题的显现、认知和管理政策的变化,分析了中国、美国、欧盟管理政策的差异及其背后的原因。本文认为,我国在推进农业现代化进程中:应长期关注养殖业中抗生素使用可能带来的负面问题,加快生产方式的绿色转型;应提升公众对抗生素耐药性的认识,引导公众参与遏制耐药性发展的行动;应考虑我国的发展目标,吸取美国因利益集团阻挠而反应缓慢的教训,综合考虑成本和收益,发挥我国的体制优势,找到政策上的最优解;支持、推动全球抗生素管理的国际协同行动。

环境中抗生素抗性基因的传播及抗生素的降解

畜禽养殖业快速发展的同时伴随着抗生素的大量使用,因抗生素不能被机体完全代谢而通过粪尿排出,粪尿中积累的抗生素通过多种途径进入环境,从而引起抗生素残留及耐药性问题,并对人畜健康及生态环境造成潜在威胁,因此有效去除环境中的抗生素至关重要。而去除抗生素不仅要注重降解效果,也要注意二次污染、降解成本等问题。本文介绍了养殖环境中抗生素与抗性基因来源及传播途径,重点阐述了现有的抗生素降解方法、原理和特点,包括物理吸附法、高级氧化技术及生物降解,并对现存抗生素污染问题提出建议,以期为抗生素高效降解提供参考。

丁香醛和丁香醇介导漆酶高效降解磺胺甲恶唑

为探讨不同漆酶介体系统(LMS)对磺胺甲恶唑(SMX)的降解效果。采用了多种漆酶介体体系,重点研究了天然介体如丁香醛和丁香醇与漆酶的结合降解效果,并与其他常见介体如2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)进行对比。同时,分析了漆酶的初始浓度、介体的起始浓度、pH以及温度等因素对降解效果的影响。结果表明:当使用丁香醛或丁香醇为介体时,降解效果明显优于其他介体。其中,当漆酶初始浓度为0.5 mg/mL、丁香醇起始浓度为0.5 mmol/L、温度为30°C、pH=5时,丁香醇在15 min内能降解92.4%的SMX,而240 min后提高至96.4%。天然介体丁香醛、丁香醇与漆酶的结合对SMX的降解表现出高效性和环境友好性,为水体中SMX污染的处理提供了一个有效方法。

好氧堆肥对畜禽粪便氟喹诺酮类抗性基因消减的研究进展

在畜禽养殖业中,氟喹诺酮类抗菌药(fluoroquinolones antibiotics, FQs)的广泛使用导致氟喹诺酮类抗性基因(fluoroquinolones resistance genes, FRGs)在环境中传播,对环境生态造成威胁。目前,好氧堆肥是去除FRGs的有效手段之一。笔者综述了畜禽粪便好氧堆肥中不同因素[FQs、微生物群落、可移动遗传元件(mobile genetic elements, MGEs)、环境因素(温度、pH值、含水量、碳氮比、电导率等)和重金属]对FRGs去除效果的影响,旨在为FRGs的有效控制提供参考。

辅酶Q0增强氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素杀灭大肠杆菌的效果分析

寻找新型的抗生素佐剂以提高现有抗生素的杀菌效率,实现快速高效杀灭病原菌是降低细菌耐药风险的重要手段。通过外源添加辅酶Q0(CoQ0)联合氨基糖苷类或喹诺酮类抗生素对大肠杆菌进行杀灭效果测试。结果表明:辅酶Q0能够显著增强氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素对大肠杆菌BW25113及8株临床耐药大肠杆菌的杀灭效果。浓度梯度测试和时间依赖性试验结果显示辅酶Q0增强氨基糖苷、喹诺酮类抗生素杀菌具有浓度依赖性和时间依赖性。辅酶Q0最适浓度为30µg·mL-1,其中辅酶Q0辅助庆大霉素的最佳作用时间为5 h、辅助氧氟沙星的最佳作用时间为8 h。研究结果为开发辅酶Q0作为新型氨基糖苷类或喹诺酮类抗生素佐剂提供了数据支撑。

抗生素对养殖业的危害及减量使用

抗生素是一类具有抗菌、抗寄生虫和促生长等功能的化学药物,在养殖业应用广泛,长期使用会带来威胁食品安全、产生耐药性和影响动物机体健康等危害。减抗是未来养殖业发展的一大趋势,建议养殖生产中采取将多种抗生素科学配伍使用,选用替抗物来替代部分抗生素功能,科学使用微生态制剂以及强化养殖场管理等措施来实现减抗目标,同时市场管理部门加大对兽药生产、流通、销售、应用等各环节的监察,使养殖业真正实现抗生素的减量使用。

D-海藻糖增强氨基糖苷类抗生素杀灭大肠杆菌的机制探究

寻找高效的抗生素佐剂并研究其增效杀菌机制是目前应对细菌耐药问题的有效策略之一。为探究D-海藻糖(D-trehalose)增强氨基糖苷类抗生素杀灭大肠杆菌的机制,以大肠杆菌BW25113为研究对象,测定D-trehalose联合氨基糖苷类抗生素作用前后的ATP、NADH含量以及质子动力势(PMF),分析菌体内能量代谢和膜电位水平的变化,并通过抑菌圈实验检测对抗生素摄取的影响。结果提示:D-trehalose联合妥布霉素或庆大霉素双处理后,D-trehalose能够通过升高大肠杆菌PMF水平增加ATP合成,提高NADH水平,促进抗生素摄取,由此显著增强抗生素的杀菌效果。研究结果为开发D-海藻糖作为新型氨基糖苷类抗生素佐剂提供依据。

马度米星铵对成肌细胞转录组和超微结构的影响

探究马度米星铵对成肌细胞基因表达和超微结构的影响。马度米星铵处理C2C12细胞后,于细胞实时分析仪中记录细胞生长情况;利用Illumina HiSeq平台进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行基因本体富集分析;显微镜下观察细胞空泡情况并拍照;透射电镜下观察拍照细胞超微结构。结果表明,马度米星铵抑制C2C12细胞生长,呈浓度和时间相关性;1μM马度米星铵处理细胞8 h后,差异表达基因共2450个,其中下调基因为1411个,上调基因1039个;基因本体分析发现,差异表达基因显著富集到空泡、DNA修复、转移酶活性正调控等;细胞内空泡显著增加;1μM马度米星铵处理细胞24 h后,细胞器明显肿胀、线粒体嵴结构髓样变、粗面内质网表面附着核糖体脱颗粒。由此可知,马度米星铵体外可诱导C2C12细胞空泡化,破坏细胞器结构,抑制细胞生长,从而导致其骨骼肌成肌细胞毒性作用,干预细胞空泡化是预防和治疗马度米星铵中毒的重要途径。

两种方法测试抗菌肽与抗生素的联合抑菌效果

为了解抗菌肽泰立停与抗生素的联合抑菌作用,本研究通过倍比稀释法和纸片法测试了泰立停和抗生素在单用和联用时对大肠杆菌和沙门菌的抑菌活性。结果表明:抗菌肽泰立停和抗生素安普霉素、恩诺沙星、多西环素在单用时对大肠杆菌和沙门菌均有不同程度的抑菌活性,在联合使用时,倍比稀释法观察到泰立停与恩诺沙星联合可以提高对大肠杆菌CVCC1568的抑菌活性;纸片法观察到仅泰立停与多西环素以8∶2的比例进行联合时对大肠杆菌AE1具有联合抑菌作用,同时观察到泰立停与某些抗生素联合时,抑菌效果与该抗生素单用的效果相当。说明抗菌肽泰立停与某种抗生素联合可针对某种菌的某些菌株有很好的抑菌活性,同时可以降低抗生素的使用剂量。这将减少抗生素在临床中的应用,进而避免或减少耐药菌的形成,维护人与动物的健康,保护生态环境。

加米霉素注射液在牛的药动学研究

采用平行试验设计,开展加米霉素注射液在靶动物牛的药物代谢动力学研究,为其在临床的合理使用提供数据参考。试验分为按推荐剂量(6 mg/kg·bw)颈部皮下注射给药组(6头牛)和按剂量(3 mg/kg·bw)静脉注射给药组(6头牛)。给药后按规定的时间点采集血液样品,经前期建立的超高效液相色谱-串联质谱检测方法分析牛血浆中的加米霉素含量,通过Winnonlin5.2软件分析处理12头牛的血药浓度-时间数据,获取有关的药代动力学参数。研究表明,加米霉素注射液不论通过皮下或者静脉给药后,呈现出在牛体组织分布广泛,消除缓慢,半衰期长的药物代谢动力学特点,且通过皮下注射方式其在牛体内吸收迅速完全。

T6SS效应蛋白Tae4对金黄色葡萄球菌和产单核细胞李氏杆菌的抑菌作用

旨在探究Ⅵ型分泌系统(TypeⅥsecretion systems,T6SS)的毒力效应蛋白Tae4酰胺酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)及产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)的抑菌作用。将pET-28a-Tae4重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21(Escherichia coli BL21,E.coli BL21)进行目的蛋白诱导表达,优化IPTG的诱导时间、浓度、温度,最后纯化后的Tae4蛋白通过琼脂孔扩散试验、最小抑菌浓度测定、抗生素联用抑菌试验分别作用于S.aureus和L.monocytogenes。SDS-PAGE电泳结果显示,本试验中重组蛋白诱导表达最佳条件为:IPTG终浓度为0.5 mmol·L^(-1),16℃诱导16 h。重组蛋白大小约为21 ku,可溶性表达于培养上清中。琼脂孔扩散试验结果显示,Tae4蛋白浓度500μg·mL^(-1)时S.aureus菌株均出现13mm以上抑菌圈,效果与菌株血清型有关,L.monocytogenes菌株均出现18mm以上抑菌圈;最小抑菌浓度试验结果显示,Tae4蛋白对S.aureus的MIC约为250μg·mL^(-1),对L.monocytogenes的MIC约为125μg·mL^(-1),点板法和微量肉汤稀释法结果一致;抗生素联用抑菌试验结果显示,Tae4蛋白与青霉素(penicillin,PG)联合使用均比单独使用的抑菌效果要好,且对L.monocytogenes的抑菌效果优于S.aureus。综上,Tae4蛋白对金黄色葡萄球菌和产单核细胞李氏杆菌具有抑菌效果,与青霉素联用抑菌效果得到了增强,为后续抗生素替代提供理论依据。

氟苯尼考原料药及制剂在大鼠体内的药代动力学及绝对生物利用度研究

对氟苯尼考制剂不同给药方式在大鼠体内的药动学特征和体内生物利用度进行了研究,以评价β-环糊精包合工艺对氟苯尼考体内生物利用度的影响。选取15只健康大鼠平行随机分为3组,分别静脉注射氟苯尼考原药,口服灌胃氟苯尼考物理混合物,口服灌胃包合工艺氟苯尼考粉,采用高效液相色谱法测定大鼠血浆中氟苯尼考的浓度,利用药代动力学软件PKSovler软件中非房室统计矩分析模型,计算药动学参数并进行药动学数据分析。结果显示,静脉注射组药物消除为半衰期(t_(1/2))为(367.04±159.85)min、平均药时曲线下面积AUC_(0-)为6622.16±927.55。包合工艺氟苯尼考组达峰时间(T max)为(40.00±14.14)min、达峰浓度(C_(max))为(28.82±4.00)μg/mL、半衰期(t_(1/2))为(378.40±226.34)min,平均药时曲线下面积AUC_(0-)为5627.60±1442.41。物理混合物组达峰时间(T max)为(68.00±30.33)min、达峰浓度(C_(max))为(15.64±4.40)μg/mL、半衰期(t_(1/2))为(288.29±52.25)时曲线下面积AUC_(0-)为4543.56±761.34。氟苯尼考粉物理混合组体内绝对生物利用度为68.6%,包合工艺氟苯尼考组在体内绝对生物利用度为85.0%。综上可判定包合工艺法氟苯尼考组能显著提高氟苯尼考达峰浓度和氟苯尼考体内吸收程度,生物利用度高。

泰地罗新在比格犬体内的药动学研究

为了获得泰地罗新在比格犬体内的药动学数据,选取15只比格犬分为3组,泰地罗新以推荐剂量4 mg/kg分别对比格犬进行肌肉和皮下注射,以2 mg/kg剂量进行静脉注射;于不同时间点采集比格犬血液,离心获得血浆,经处理后应用高效液相色谱测定血液中的药物含量;应用Winnonlin软件中的非房室模型对血药浓度-时间数据进行分析,获得泰地罗新在比格犬体内的药动学数据。结果显示,泰地罗新标准曲线性关系良好,相关系数超过0.99;检测限为5 ng/mL,定量限为10 ng/mL;5、50、500 ng/mL浓度的加样回收率在80%~120%之间,日内和日间变异系数均小于10%;稳定性试验中待测药物的响应值均低于20%。泰地罗新静脉、肌肉、皮下注射后在比格犬体内的T_(1/2e)分别为48.23 h±12.57 h、71.71 h±38.17 h、75.29 h±32.32 h;T_(max)分别为0.11 h±0.04 h、0.07 h±0.03 h、0.10 h±0.04 h;C_(max)分别为446.91 ng/mL±57.68 ng/mL、732.09 ng/mL±87.94 ng/mL、635.52 ng/mL±94.39 ng/mL;AUC_(0-t)分别为12661.11 ng·h/mL±3047.21 ng·h/mL、22898.57 ng·h/mL±5079.82 ng·h/mL、20974.46 ng·h/mL±4789.36 ng·h/mL;MRT_(last)分别为49.33 h±5.67 h、63.05 h±5.32 h、67.37 h±7.21 h;肌肉注射的生物利用度为90.42%±4.84%,皮下注射的生物利用度为82.83%±7.96%。泰地罗新在比格犬血液中吸收快、消除缓慢,血药浓度较高,皮下注射和肌肉注射的生物利用度高。

大肠杆菌过表达WcaB对氨基糖苷类抗生素敏感性的影响

为寻找新的靶点以加速解决由于抗生素滥用而引发的细菌耐药问题,通过利用pCA24N表达载体构建大肠杆菌BW25113过表达乙酰基转移酶WcaB菌株,在对数期进行氨基糖苷类抗生素杀伤效果测试,并进一步测定大肠杆菌BW25113过表达WcaB对氨基糖苷类抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和生长曲线。结果表明:WcaB过表达后会抑制细菌生长,氨基糖苷类抗生素对WcaB过表达株的MIC没有明显变化,WcaB过表达使细菌在庆大霉素或卡那霉素处理下的存活率降低,证明WcaB过表达提高了大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性。研究结果显示乙酰基转移酶在增强抗生素对大肠杆菌产敏感性方面具有重要的作用,该酶有望成为大肠杆菌新的药理靶点。

甲氧苄啶增溶技术研究

本文首先测定了甲氧苄啶在水中的溶解度,然后采用表面活性剂增溶、β环糊精包合、固体分散体等药剂学常用增溶技术对甲氧苄啶开展了溶解度提升研究。实验结果显示,甲氧苄啶在水中的溶解性为0.31 mg/mL,使用表面活性剂增溶、β环糊精包合、固体分散体三种增溶技术后,甲氧苄啶在水中的最高溶解度分别为0.37 mg/mL、7.06μg/mL和3.3 mg/mL。通过三种药物制剂技术的对比说明,固体分散体制备的最优方法为溶剂法,最优载体为聚维酮K30,最优冷冻时间为2小时,制得甲氧苄啶固体分散体溶液甲氧苄啶的浓度可以达到3.3 mg/mL,与自身溶解度0.31 mg/mL相比,浓度达到甲氧苄啶普通水溶液的10.64倍,有效提高了甲氧苄啶在水中的溶解性。

不同构型的氟苯尼考体外抑菌活性研究

采用管蝶法研究不同构型的氟苯尼考是否具有抑菌活性。结果表明左旋氟苯尼考对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑菌作用;而右旋氟苯尼考对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无抑菌作用;外消旋氟苯尼考对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用,其抑菌作用来自左旋氟苯尼考。

高稳定10%恩诺沙星溶液的制备及质量检测

本研究以恩诺沙星为原料,水、丙三醇为溶媒,亚硫酸氢钠作为稳定剂,聚乙二醇400作为助溶剂,NaOH作为酸碱调节剂,制备了一种恩诺沙星溶液,并对其稳定性进行了考察。结果显示,该溶液在0~5℃低温环境下无晶体析出,在(-20±2)℃冷冻解冻后性状稳定,含量符合标准;通过影响因素试验与加速试验,此款恩诺沙星溶液性质稳定。

我国养殖业抗生素耐药基因污染特征及“One Health”框架下应对策略

抗生素耐药性(ABR)是世界范围内日益严重的公共卫生问题,是全球健康的一个重要风险因素,现在被视为世界动物卫生组织One Health(同一健康)一个关键问题。而抗生素耐药性的产生是由于在人类、动物和相关环境中不合理地使用抗生素,造成抗生素的在环境中的污染,导致药物残留或耐药基因在环境中的持续存在,从而出现了耐药细菌库。为了在世界动物卫生组织“one health”框架下更好的解决我国抗生素污染而产生的抗生素耐药性问题,本文阐述了我国畜牧和水产养殖业抗生素和抗生素耐药基因的污染来源、污染特征,抗生素的危害以及one health框架下未来的应对策略,以期对我国在抗生素和抗生素耐药性的治理等方面起到重要的指导作用。

抗生素违规使用的常见方式及养殖危害

抗生素是兽医临床最为常用的抗感染药物,违规使用会对养殖产生较大危害,常见违规方式包括加大用药剂量,延长用药时间,变更用药方法,更换用药对象及不按规定配伍等,容易造成药残超标而影响食品安全,长期滥用的情况下可加速病原耐药性的产生,同时还可能导致病情加重;实际生产中应严控兽药采购关,严格按照药物使用说明进行用药,多种药物联合使用时应注重科学配伍。