中华鳖出血性肠道坏死症流行病学

中华鳖出血性肠道坏死症是近两年来发生且危害性较大的一种新的流行病，主要危害成鳖、亲鳖和１００～２００ｇ的幼鳖。肠道糜烂出血，胃肠粘膜组织坏死是该病的主要症状。养殖区流行该病的主要流行季节为５～７月，６月是发病高峰月，占发病总例数的３９．８％；水温２５～３０℃时该病较易发生。该病潜伏期较长，发生期（１４．３±６．９）ｄ，暴发期（１４．７±６．２）ｄ。对湖北省９５个养殖场（户）的调查结果表明，该病发病率为４３．２％，平均死亡率（４４．５±２５．６）％，日平均死亡率（６．９±６．５）％。

鳖源摩氏摩根菌分离鉴定及药敏特性分析

【目的】从患中华鳖出血性肠道坏死症病鳖体内分离病原菌并进行鉴定与药敏特性分析,为有效防控中华鳖出血性肠道坏死症提供参考依据。【方法】在无菌条件下分别从病鳖腮腺、肠道、肝脏、精巢及卵巢等病变器官中分离病原菌,然后进行人工回归感染试验、生理生化与分子鉴定及系统发育树分析,并采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。【结果】从患中华鳖出血性肠道坏死症的病鳖体内分离出5株菌株JZ-01、JZ-02、JZ-03、JZ-04、JZ-05,人工回归感染试验结果表明这5株菌株对中华鳖的致死率均达100.00%。5株菌株均为革兰氏阴性菌,无芽孢,在普通营养琼脂培养基上生长呈灰白色、边缘整齐、半透明、湿润的菌落;通过梅里埃VITEK-2全自动微生物鉴定仪对5株菌株进行生理生化鉴定,证实均为摩氏摩根菌(Morganella morganii),且5株菌株(GenBank登录号分别为KP054384、KP054385、KP054386、KP054387和KP054388)与摩氏摩根菌菌株(GenBank登录号JF508858.1)的亲缘关系最近。5株菌株对复方新诺明、多粘霉素B、诺氟沙星、强力霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考等6种抗生素高度敏感。【结论】摩氏摩根菌能引起中华鳖出血性肠道坏死症,对中华鳖具有很强的致病性,生产中可选用复方新诺明、多粘霉素B、诺氟沙星、强力霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考等药物进行防治。

中华鳖爱德华菌病病原菌的分离鉴定及致病因子研究

采用API 20E系列生化鉴定及16S rDNA和gyrB基因序列同源性分析方法,对从患病中华鳖(Trionyx sinen-sis)肝脏中分离到的一株细菌TL5m进行了鉴定,并通过人工感染试验,对该菌株进行了毒力检测;此外分别提取该TL5m株的主要致病因子外膜蛋白、脂多糖和胞外产物,对中华鳖进行毒力和免疫保护率试验。结果显示:菌株TL5m的API 20E鉴定编码为4544000,99.9%为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda);其16SrDNA序列和gyrB基因序列(GenBank登录号分别:EF121756和GU563803)与迟钝爱德华氏菌的同源性最高(分别为94%和98%);菌株TL5m对中华鳖的半数致死量LD50为2.45×106 CFU/ind。药敏感结果显示菌株对磷霉素、菌必治、头孢孟多、头孢噻吩、壮观霉素高度敏感。外膜蛋白攻毒剂量60μg/ind和脂多糖攻毒剂量400μg/ind时,对中华鳖的致死率都为33.3%,胞外产物对中华鳖的LD50为31.73μg/ind;全菌灭活苗、胞外产物、外膜蛋白和脂多糖的免疫保护率分别为75%、62.5%、25%和87.5%。结果表明,发病中华鳖的病原菌为迟钝爱德华氏菌,其分泌的胞外产物对中华鳖具有较高毒力;提取的脂多糖对中华鳖遭受迟钝爱德华氏菌攻击具有较高免疫保护率。

中华鳖普通变形杆菌的分离鉴定及其致病性研究

国内外已研究证实变形杆菌能感染多种动物，引起食物中毒、尿路感染和伤口感染而导致败血症。近年来国内学者也陆续报道变形杆菌可与嗜水气单胞菌等细菌混合感染鳖，引起鳖的穿孔病和白斑病。但有关变形杆菌在鳖细菌性疫病中出现的频率和致病机理尚未见报道。作者在鳖细菌...

甲鱼暴发性传染病的病原分离及治疗试验

从１５例表现为“红底板”、“红脖子”、“烂甲”的患病甲鱼肝脏分离到９株无荚膜、无芽胞、革兰氏阴性、β溶血的短杆菌，经理化特性鉴定均为气单胞菌属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）嗜温有动力菌群，其中温和气单胞菌（Ａ．ｓｏｂｒｉａ）７株，豚鼠气单胞菌（Ａ．ｃａｖｉａｅ）２株。从Ａ．ｓｏｂｒｉａ和Ａ．ｃａｖｉａｅ各选一代表菌株（ＪＡ－１和ＪＡ－２）分别感染健康鲫鱼均引起发病和死亡，其ＬＤ５０分别为４．３×１０５、５．５×１０７，并回收到该２种菌。在该２种菌培养上清中存在１种具有溶血活性的毒素。以ＪＡ－１和ＪＡ－２为菌种制成混合菌苗，在应用由黄芪、有机锗制成的免疫增效剂后，再用混合菌苗免疫家兔，制得的多价高免血清（效价达１∶５１２）与庆大霉素、恩诺沙星进行了治疗对比试验。结果，高免血清治疗自然病甲鱼１０９只，全部治愈；庆大霉素、恩诺沙星分别治疗自然病甲鱼７２只和８４只，平均治愈率分别为８８％和８４％。

黄沙鳖疖疮病的病原菌分离鉴定及药敏试验

【目的】对广西崇左市某养鳖场患疖疮病的黄沙鳖(Trionyx sinensis)进行病原菌分离鉴定及药敏试验,为今后生产中有效防治黄沙鳖疖疮病提供参考。【方法】以常规方法从患病黄沙鳖肝脏和心脏取样进行细菌分离,经人工感染试验确定病原菌的致病性,用API20NE细菌鉴定系统和16SrRNA基因序列分析鉴定病原菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,并根据药敏试验结果选用高度敏感药物进行治疗。【结果】分离获得两株病原菌(X0805A和X0805B),经鉴定均为温和气单胞菌(Aeromonas sobria);在构建的系统发育进化树中,两株病原菌与Aeromonas sobri NCIMB12065(X60412)菌株亲源关系最近,相似性达99.9%,与Aeromonas sobri ATCC 43979(X74683)的相似性为99.6%;两株病原菌的药敏试验结果基本一致,对先锋必、复达欣、头孢呋肟、氧氟沙星、菌必治、呋喃妥因等6种药物极度敏感,对阿米卡星、卡那霉素、链霉素、利福平、氟哌酸、庆大霉素等6种高度敏感,对苯唑青霉素、万古霉素、环丙沙星、复方新诺明、氨苄青霉素、先锋霉素Ⅴ、四环素、妥布霉素、先锋霉素Ⅵ及青霉素G等药物已产生耐药性。【结论】引起广西崇左市某养殖场黄沙鳖疖疮病的病原菌为温和气单胞菌,以先锋必拌料投喂并结合全塘泼洒二氧化氯进行防治可获得良好的效果。

嗜水气单胞菌BA-ELISA的建立及其在病原检测中的应用

从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608经福尔马林灭活后,注射免疫新西兰兔,制备了高价免疫血清,血清的菌体凝集效价可达1/1 280;G蛋白亲和层析纯化兔IgG,将IgG用生物素标记,建立了生物素-亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA-ELISA);其最低检出限为2.5×103cfu,相当于0.5 ng菌体蛋白,其检测灵敏度为ABC-ELISA(4.0×104cfu)和间接ELISA(4.0×104cfu)的16倍;特异性试验结果表明,本法与鱼类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应。BA-ELISA可不经细菌培养直接检测人工感染48 h中华鳖的肝、肠道组织中的嗜水气单胞菌。用该方法对湖州市龟鳖养殖场的水样、中华鳖和巴西龟肝、肠道内容物进行检测,结果表明该方法可较好地应用于发病中华鳖的病原早期诊断及养殖中华鳖的病原检测。

嗜水气单胞菌对中华鳖致病力的研究

嗜水气单胞菌菌株Ｔ３、４０１４２Ｇ，５１６１３－１，７０６Ｃ，ＲＴＬ５３１，Ｒ４０２Ｌ，ＲＫ１１１９等分别从患有红底板、腐皮、洞穴及其它症状的病鳖中分离。银鲫对Ｔ３与４０１４２Ｇ的易感性最强，而中华鳖（与小白鼠、青蛙等一样）稍差。各嗜水气单胞菌菌株中，Ｔ３的致病力最强，其致病性随水温升高而增强，随其连续传代而减弱。该菌在用橡皮塞密封的试管中４℃存放时，４００ｄ内致病力基本保持稳定。

中华鳖对温和气单胞菌体液免疫应答规律的研究

从健康中华鳖血清中提取抗体并用Sephadex及DEAE 5 2进行了纯化 ,再免疫新西兰白兔制备兔抗鳖抗体的抗血清 ,纯化后以辣根过氧化物酶 (HRP)标记酶标复合物 ,方阵滴定法确定酶标复合物的最适稀释度为 1/ 32 0 0。用温和气单胞菌TL970 42 4株制成铝胶佐剂灭活苗免疫健康中华鳖 ,经一次免疫和二次免疫后 ,分别在不同时间采集血清 ,用ELISA法测定血清抗体变化规律 ,结果表明中华鳖对该菌苗产生良好的体液免疫应答 ,免疫后 2 0d抗体水平达到高峰 ,在测定期间内二次免疫组的抗体水平高于一次免疫组 ,表明中华鳖存在着二次免疫应答 ,但与哺乳类相比 ,中华鳖的二次应答则相对较弱。免疫后 90d对一次免疫组的鳖进行了攻毒试验 ,10d后免疫鳖 10 0 %存活 ,而非免疫对照组鳖则 10 0 %死亡 ,表明温和气单胞菌TL970 42 4株灭活苗免疫效果良好。

雷氏普罗威登菌引致中华鳖脏器脓肿

江苏省某养殖场饲养的中华鳖发生败血症 ,特征为肺脏、脾脏等内脏广泛形成干酪样结节。从病鳖内脏分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,兼性厌氧 ,丙氨酸脱羧酶阳性 ,利用柠檬酸盐、吲哚和甲基红反应均为阳性 ,发酵甘露醇、肌醇、甘露糖 ,产酸。经鉴定为雷氏普罗威登菌 (Providenciarettgeri)。药敏试验表明 ,该菌对羧苄青霉素、先锋霉素、SMZ +TMP、氟哌酸、恩诺沙星敏感。以分离菌腹腔注射感染健康中华鳖 ,接种鳖 1周后陆续发病死亡 ,并从其体内分离到同种细菌。

■爱德华氏菌变异株C9605及对鳖的致病性研究

从患白板综合症的病鳖分离到一株细菌（C9605），该菌为革兰氏阴性，直杆状，周生鞭毛。接触酶阳性，氧化酶阴性，还原硝酸盐，对多粘菌素不敏感，不利用柠檬酸盐和丙二酸盐作唯一碳源，不从甘露醇、蔗糖、海藻糖、L-阿拉伯糖产酸。根据这些特性，菌株可归于爱德华氏菌。但是该菌发酵木糖产酸，产生H2S，耐青霉素，故鉴定为爱德华氏菌变异株（Edwardsiellaictalurivariationstrain）。人工感染实验证实，该菌株是鳖白板综合症的病原菌。

鳖嗜水气单胞菌败血症的研究

将病鳖进行细菌分离，获得的菌株经细菌学鉴定，致病菌为嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）。病鳖食欲减退以至不吃食，反应迟钝；颈部充血，腹甲严重充血，甚至出血、溃疡，体表可见形成的疤痕；口腔、舌尖和鼻孔充血，甚至口、鼻孔中流出血水；肝脏、肾脏、脾脏肿大，有坏死病灶。组织病理观察表明：大量细菌侵入肺、肾、脾、血液、心脏和肌肉等器官组织，造成出血以及全身性组织损害，组织细胞出现肿胀、颗粒变性、玻璃样变和坏死崩解；血管壁严重受损，内皮细胞坏死脱落。血管内以及器官组织血液中大量红细胞变形、碎裂、溶解，呈现溶血性贫血，血液中白细胞数量极少，病变区无白细胞浸润现象。病鳖由于血细胞广泛受损、心脏病变、肺组织严重坏死，影响气体交换，最终因呼吸困难而窒息死亡。肝、肾和脾等器官组织坏死，失去应有的功能，更加速病鳖的死亡进程。疾病的病理变化表明本病为败血症。鳖病的治疗方法：重病鳖体表病灶处涂抹鱼泰８号药，后腿肌肉注射治鳖灵２号药以及轻病鳖口服治鳖灵１号药，并改善水环境等措施后，治愈率在９０％以上。此外。

中华鳖嗜水气单胞菌灭活方法的研究

不同的温度、福尔马林浓度、灭活的时间以及灭活菌液的浓度均可影响中华鳖嗜水气单胞菌的灭活。本研究得到了菌液浓度为６０×１０８ｃｆｕ／ｍｌ时的９种灭活方法。通过琼脂双扩散试验对灭活菌液抗原性比较，认为２８℃、０．２％的福尔马林灭活２ｄ为鳖嗜水气单胞菌较理想的灭活方法。

养殖鳖主要细菌性疾病病原的初步研究

养殖鳖细菌性疾病是全国养鳖业的主要疾病，危害对象从稚鳖到成鳖、亲鳖。从1996-1998年对养殖鳖主要几种细菌性疾病如肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的病原进行研究。结果表明：经细菌学鉴定这四种病的病原菌均为温和气单胞菌（Aeromonassobria）；用9×107，个／ml细菌人工感染稚鳖，死亡率达100％，6×106个／ml细菌感染小白鼠，死亡率也达100％；29株细菌对28种药物的敏感性有明显差异。

中华鳖肺炎克雷伯氏菌病的病原研究

从患病中华鳖血液、肝脏、腹水、肌肉中共分离到2株细菌,腹腔注射感染试验均出现与自然发病相似的症状,死亡率为100%.此2株细菌的形态特征及生理生化反应完全一致:革兰氏阴性杆菌,无鞭毛,不运动,兼性厌氧,发酵葡萄糖产酸产气,过氧化氢酶、七叶苷、VP、赖氨酸脱羧酶、ONPG反应、脲酶均为阳性,发酵肌醇、甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、乳糖、麦芽糖、蕈糖、鼠李糖、蜜二糖、木糖、棉子糖、纤维二糖产酸,氧化酶、精氨酸双水解酶、吲哚、鸟氨酸脱羧酶、苯丙氨酸脱氨酶、明胶酶、H2S均为阴性,能还原硝酸盐等,其形态特征及生理生化反应同肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种基本相同,故鉴定为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种.该菌对先锋霉素VI、复达欣、头孢呋肟、菌必治等药物高度敏感.

口服甘草素对中华鳖稚鳖抗嗜水气单胞菌感染的作用

在中华鳖 (Pelodiscussinensis)稚鳖饲料中添加定量的甘草素 ,投喂经福尔马林灭活嗜水气单胞菌(FKC)免疫接种的中华鳖稚鳖 2 8d后 ,通过测定增重量 ,血液比容值 ,血清中补体价 ,抗体价 ,溶菌酶活性 ,GOT、GPT值 ,白细胞的吞噬活性以及活菌攻毒的方法 ,探讨了口服甘草素对中华鳖稚鳖抗嗜水气单胞菌感染的作用。结果表明 ,在中华鳖稚鳖饲料中添加 35mg kg·d的甘草素 ,不仅具有提高供试中华鳖免疫应答水平 ,改善肝功能 ,增强抗嗜水气单胞菌感染的能力 。

中华鳖几种常见疾病病原的分离鉴定及药敏试验

从患“穿孔病”、“腐皮病”、“溶血性腹水病”等濒死鳖的肝、心血和腹水中分离到 2 0株细菌 ,其中温和气单胞菌(Aeromonas sobria) 5株、豚鼠气单胞菌 (A.caviae) 3株、凡隆气单胞菌 (A.veronii) 2株、奇异变形杆菌 (Proteusmirabilis) 2株、产碱假单胞菌 (Pseudomonas alcaligene) 2株、无色杆菌 (Achro sp.) 3株、不动杆菌 (Acinetobactersp.) 2株、黄杆菌 (Flavobacterium sp.) 1株。人工感染试验证实 ,运动型气单胞菌的温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌是其主要病原菌。药敏试验结果表明 ,分离菌株对新霉素、菌必治、丁胺卡那、庆大霉素、环丙沙星高度敏感。

黄喉拟水龟一种慢性传染病的病原鉴定与防治

从发生慢性致死性传染病的黄喉拟水龟肝、肺分离到一革兰氏阴性的菌株,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌进行生理生化指标检验分析,结果与报道的摩根氏菌一致。采用BIOLOG自动微生物鉴定系统对该菌进行鉴定,结果显示为摩氏摩根氏菌摩根氏亚种(Morganella morganii ss morganii),可能性(PROB)为99%,相似性(SIM)和位距(DIS)分别达0.742和3.90。纸片扩散法药敏试验结果表明该菌对先锋必高度敏感,对氧氟沙星、恩诺沙星、阿米卡星中度敏感,对大多数药物存在耐药性。综合对该病病原的形态观察、生理生化特征及微生物鉴定系统鉴定结果,确定该病原是摩根氏菌,并根据药敏试验结果选用先锋必对病龟进行治疗,病情得到控制,病龟一周内康复。

鳖穿孔病的病原研究

鳖穿孔病是我国养鳖业的主要疾病之一，其发病对象主要是稚鳖。从垂死的鳖体中分离到Ｍ－Ⅱ－３、Ｍ－５、Ｍ－Ⅰ－３和Ｍ－Ⅱ－２四株细菌。经人工感染试验均对健康稚鳖表现出较强的致病力，出现与自然病鳖相同的症状。由此证实这四菌株是鳖穿孔病的病原菌。对菌体形态特征、培养特性和生理生化反应的鉴定证明致病菌为嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉａ）和普通变形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓｕｕｌｇａｒｉｓ）。