预防刺参腐皮综合征复方中药的筛选及体内药效评价

为开发防治刺参腐皮综合征的复方中药,从14种中药中筛选出对灿烂弧菌(Vibrio splendidus)有明显抑制作用的单味中药,并通过正交实验确定最佳抗菌复方FF-Z(诃子﹕五倍子﹕穿心莲﹕川芎=15 g﹕2 g﹕10 g﹕5 g)。在饲料中分别添加10、20、30和40 g/kg的复方FF-Z作为试验组,不含复方FF-Z的饲料为对照组,并以含恩诺沙星粉20 g/kg的饲料为药物对照组,连续投喂刺参10d,继而用终浓度为10^(7) CFU/mL的灿烂弧菌进行浸浴攻毒,以观察预防保护效果。结果显示,灿烂弧菌对复方FF-Z极敏感,抑菌圈直径可达(23.10±0.62)mm,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)值分别为7.81和15.63 mg/mL;与阴性对照组相比,复方FF-Z各剂量组刺参的SOD、ACP和AKP活性显著提高,且优于药物对照组。在灿烂弧菌感染后,复方FF-Z各剂量组处理的刺参发病时间比阳性对照组推迟2d,其中复方FF-Z 20 g/kg组、FF-Z 30 g/kg组和FF-Z 40 g/kg组刺参的20d发病率分别为22.08%、22.14%和14.58%,显著低于阳性对照组的84.45%。组织病理学观察结果表明,添加30 g/kg复方FF-Z的饲料能够有效减轻灿烂弧菌入侵引起的刺参组织炎症反应,从而起到保护作用。研究证明,复方FF-Z能够显著提高刺参的免疫和抗病力,对灿烂弧菌引起的腐皮综合征具有良好的预防保护效果,能延缓该病的发病进程并降低发病率。

棘皮动物弧菌诱导中间球海胆免疫致敏现象分析

为探究中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)是否存在免疫致敏现象,使用棘皮动物弧菌(Vibrio echinoideorum)对中间球海胆进行重复感染(首次、二次菌浓度分别为10^(3)、10^(4) CFU/mL),检测并比较了两次注射感染后不同时间点中间球海胆体腔细胞密度、吞噬能力、酸性磷酸酶(ACP)活力、活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)等相关免疫指标的变化,以及二次感染后免疫致敏组和对照组间成活率的差异。结果表明:与首次感染相比,二次感染时诱导致敏组的体腔细胞总密度、吞噬细胞密度、ACP、ROS和T-AOC等均出现显著上升(P<0.05),且响应时间明显缩短,达到峰值的时间分别提前了36、36、84、12、36 h,且各指标的峰值均显著高于首次感染(P<0.05);二次感染后,诱导致敏组在6 h时的吞噬率(45.41%±6.39%)显著高于对照组(33.17%±1.94%);经过棘皮动物弧菌低浓度诱导后,诱导致敏组存活率(43.33%±10.00%)显著高于未经诱导的阳性对照组(7.78%±10.71%)(P<0.05)。研究表明,低浓度棘皮动物弧菌能诱导中间球海胆产生免疫致敏现象,此结果可为中间球海胆的疾病防控提供新思路。

唐山市刺参(Apostichopus japonicus)养殖情况和主要病害防治

刺参(Apostichopus japonicus)是唐山市重要的水产养殖品种,2022年养殖面积已超过5100 hm2,年产量超过7700 t。本文基于唐山地区多年的刺参苗种繁育和成参养殖的实践经验,总结了几种唐山地区常见的高温、细菌性疾病、霉菌病、寄生虫病的预防和治疗措施。

加州鲈维氏气单胞菌拮抗菌的筛选

为筛选出对维氏气单胞菌(Aeromonas Veronii)有拮抗效果的最优菌株,本试验从湖北荆州太湖加州鲈池塘底泥中分离获得一株细菌C2-1,对其进行全基因组测序,并研究其生防作用机制。结果表明,细菌C2-1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),具有广谱抑菌性,对希瓦氏菌(Shiva's bacteria)、溶血链球菌(Streptococcus hemolysis)等多种水产病原菌的抑菌直径达18.57~25.28 mm。菌株C2-1具有较高的酸碱稳定性且对温度适应范围较为广泛。扫描电子显微镜镜观察发现细菌C2-1的发酵产物对维氏气单胞菌具有破坏效果。液质联用(LC-MS)分析该细菌包含多种不同的脂肽类活性物质,如伊枯草菌素等。研究发现,贝莱斯芽孢杆菌C2-1是防治维氏气单胞菌的潜力菌株,对维氏气单胞菌具有较好的抑制作用,且应用前景良好。

鳗弧菌感染单环刺螠体腔细胞转录组分析

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是水产养殖中常见病原菌之一。为探究鳗弧菌感染海洋经济动物单环刺螠(Urechis unicinctus)后宿主基因表达水平的变化和应答细菌感染的分子机制,运用高通量测序技术对感染鳗弧菌的单环刺螠对照组、易感组和抗感组体腔细胞进行了转录组测序,并对比分析其差异表达基因(DEGs)及信号通路。结果显示,鳗弧菌感染单环刺螠后,易感组体腔细胞差异表达基因数目为2309个,其中1451个基因表达上调,858个基因表达下调;抗感组中DEGs数目为1955个,其中1311个基因表达上调,644个基因表达下调。KEGG通路富集分析显示,与免疫相关的通路主要有MAPK信号通路、过氧化物酶体、内吞作用、溶酶体、氨基酸生物合成等,筛选出的潜在抗感基因主要有牛磺酸分解代谢双加氧酶(Taurine catabolism dioxygenase,TauD)、细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)、Casitas B细胞淋巴瘤B(Casitas B lymphoma-b,Cbl-b)、肌动蛋白相关蛋白3(Actin-related protein 3,ACTR3)、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、氨基酸通透酶(Amino acid permease,AAPs)、编码葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK)、乙醛酸和羟基丙酮酸还原酶(Glyoxylate reductase/hydroxy pyruvate reductase,GRHPR)、胱硫醚β-合酶(Cystathionine beta-synthase,CBS)、组氨酸磷酸酶(Histidine phosphatase,LHPP)、谷草酰乙酸转氨酶2(Glutamic-oxaloacetic transaminase 2,GOT2)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)和细胞分裂周期42(Cell division control protein 42,CDC42),易感基因主要有ADP核糖激化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)、细胞粘附素(Cytohesin,CYTH)、EH结构域蛋白1(EH domain-containing protein 1,EHD1)、Ras相关蛋白Rab-8A(Ras-related protein Rab-8A,Rab8A)、钙网蛋白(Calreticulin,CALR)和Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)。实验结果可为鳗弧菌对水产养殖动物的感染机制及单环刺螠对病原菌的免疫应答研究提供数据参考。

葛洲坝至古老背江段鱼类的水声学调查

2004年10月～2006年5月利用Bisonics DT—X科学回声探测仪（200kHz）对葛洲坝至古老背-葛洲坝下游中华鲟（Acipenser sinensis Gray）自然保护区核心江段（30km）的鱼类进行了5次水声学调查。结果表明：鱼类在该江段中分布呈现不均一性，深潭处分布集中，而急流处分布很少，葛洲坝至艾家河江段鱼的密度明显大于艾家河至古老背江段；在中华鲟产卵日，鱼类在葛洲坝至庙咀江段高度密集，2004年的平均密度达到62．62±24．77尾／1000m^3，2005年的平均密度达到70．58±37．45尾／1000m^3；整个江段中，体长60～106mm的鱼类占有较高比例，约7．0％以上，53mm以下的鱼类和750mm以上的鱼类占较低比例，均小于2．0％；调查期间，探测到中华鲟产卵亲鱼，初步估算2004年的资源量约为1453尾，2005年的资源量约为789尾；95％置信度下分别为1370～1537尾、775～803尾。

海参疾病学研究进展

海参具有极高的营养和药用价值,历来被视为海珍奇品。近年来,海参价格不断上涨,市场需求量迅速增加,随着采捕强度的增大,导致自然资源量急剧减少。为解决市场膨胀和资源缩减问题,海参主要是仿刺参（Apostichopusjaponicus）]养殖在我国北方沿海迅猛发展，并成为海水养殖的新兴支柱产业。然而，养殖的过速发展及集约化养殖模式下的不规范运作，病害问题日趋严重，给仿刺参养殖业造成巨大经济损失。

刺参池塘底质微生物群落功能多样性的季节变化

利用BIOLOG技术和冗余分析(Redundancy analysis,RDA)方法对刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘底质环境(底泥、附着基)微生物群落功能多样性的季节变化及其与环境因子的关系进行了研究。结果表明:(1)刺参池塘底泥和附着基微生物对碳源总量和单类碳源的利用均具有显著的季节变化,总体表现为春、夏、秋季节高于冬季,其中,底泥微生物利用比例较高的碳源类型为聚合物、糖类、羧酸和氨基酸,附着基微生物利用比例较高的碳源类型为聚合物、糖类、氨基酸和胺。(2)主成分分析表明,刺参池塘底泥和附着基微生物碳代谢方式均具有显著的季节变化。底泥中,与主成分显著相关的碳源有18种,其中与主成分1显著相关的主要是糖类、羧酸和氨基酸,与主成分2显著相关的主要是聚合物和糖类;附着基中,与主成分显著相关的碳源有22种,其中与主成分1显著相关的主要是聚合物、糖类、羧酸和氨基酸,与主成分2显著相关的是羧酸。(3)刺参池塘底泥和附着基微生物多样性指数Shannon、McIntosh、Simpson和S-E均匀度均存在显著的季节变化,但不同指数之间的变化有较大差异。(4)RDA分析表明,TP、NO3-N和PO4-P是影响底泥微生物功能多样性季节变化的主要因素,SOM、NO3-N和TN是影响附着基微生物功能多样性季节变化的主要因素。结论认为,刺参池塘底泥和附着基微生物功能多样性具有显著的不同的季节变化,这些变化与环境因子具有很好的相关性。

锯缘青蟹混合感染症致病菌的分离鉴定与感染治疗

从汕头市牛田洋水产养殖区的患病锯缘青蟹Scylla serrata中分离纯化到2株优势细菌,在TCBS培养基上生长,颜色呈黄色的命名为HY,呈绿色的命名为HG,两者都是革兰氏阴性杆菌。人工感染此两株细菌的健康青蟹均产生与自然病蟹相同的症状和组织病理变化,并导致死亡,说明它们都是青蟹的病原菌。以这两种细菌的DNA为模板,采用细菌16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,测序后分别获得HY的1509bp和HG的1532bp核苷酸序列。通过基因序列同源性比对和系统发育树分析,结合细菌生理生化特性分析,HY和HG分别被鉴定为嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus。这是首次报道嗜水气单胞菌为青蟹的病原菌。两种病原菌均对阿莫西林、氧氟沙星、庆大霉素、链霉素高度敏感,对磺胺嘧啶、甲砜霉素中度敏感,对青霉素钠不敏感。采用嗜水气单胞菌浸泡感染或注射感染青蟹,发病后进行阿莫西林药浴3天,均获得100%的治疗效果。

黄喉拟水龟摩氏摩根菌的分离鉴定及药敏试验

黄喉拟水龟(Mauremys mutica),俗称石龟、石金钱龟、黄板龟等,为龟科拟水龟属,主要分布于中国江苏、安徽、福建以及越南、日本等。黄喉拟水龟具有食用、药用和观赏价值,近年来野生资源日趋减少,人工养殖发展迅速。细菌性病原感染是黄喉拟水龟养殖过程中常见疾病,目前已报道黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)[1]、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)[2]、摩氏摩根菌(Morganella morganii)[3]。

池塘养殖刺参病原菌塔式弧菌的分离与鉴定

2013年春季,福建漳州地区池塘养殖刺参(Apostichopus japonicus)感染不明病原而患病。病参表现出排脏、身体萎缩、体表溃烂等症状,俗称为"腐皮综合征"。为确定引起该病的病原菌,从患病刺参病灶部位分离得到1株优势菌FJY001,经回接感染试验,证实所分离的细菌为刺参的病原菌。经形态、生理生化、16S rRNA序列分析和Biolog微生物自动鉴定系统等多项指标鉴定,确定该病原菌为塔式弧菌(Vibrio tubiashii)。

中间球海胆“红斑病”病原弧菌致病机理的研究

用平板玻璃纸覆盖技术获得中间球海胆Strongylocentroyusintermedius“红斑病”致病弧菌的胞外产物 (ECP), 并分析了其主要成分。结果表明, 胞外产物中淀粉酶、酪蛋白酶、明胶酶、卵磷脂酶具有活性, 并经感染试验证实, 该胞外产物对海胆有与菌体相同的致病性; 温度可影响胞外产物的蛋白质总含量和酶活性; 胞外产物的剂量对海胆感染率影响显著 (P<0 05 ), 而作用时间对感染率的影响不显著。

大连地区刺参幼参溃烂病细菌性病原的初步研究

2003年以来,大连地区养殖的刺参Apostichopus japonicus幼参出现溃烂病,其症状是刺参表皮某部位先出现白色斑点,继而开始溃烂,严重时全身溃烂、自溶。解剖观察发现,呼吸树水肿严重,有的甚至糜烂。从患病刺参的表皮溃烂组织和呼吸树中分离出优势菌,经人工感染试验证实,其中菌株HXS31、HXS32、HXS34、HXS22和BP12是引起刺参溃烂病的病原菌。对5株病原菌进行16SrRNA基因序列同源性分析的结果表明,菌株HXS31、HXS32、HXS34、HXS22属于弧菌属Vibriosp.。用常规细菌学方法对菌株BP12的鉴定结果表明,菌株BP12为假单胞菌属。5株病原菌均为革兰氏阴性菌,经常规负染方法染色后用电镜观察,菌株HXS31、HXS32、HXS22呈卵圆形;菌株HXS34和BP12分别为圆形和弯杆状,且都具有单极生鞭毛。药物敏感试验结果表明,呋喃妥因对5株菌有较强的抑菌作用。

刺参表皮溃烂病病原菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定刺参表皮溃烂病的病原菌,从山东省烟台和日照两个地区人工饲养的刺参中挑取具有明显症状的幼参,从体表病灶和体内组织中共分离得到15株细菌,利用人工感染试验、细菌形态观察及生理生化试验对其进行了鉴定。结果表明,引起山东省日照地区养殖场刺参表皮溃烂病的病原菌R-2为杀鲑气单胞菌(Aeromonas.salmonida);烟台地区养殖场的病原菌Y-1为中间气单胞菌(Aeromonas.media),Y-8为弧菌属的海弧菌生物变种I(Vibro.pelagius biovarI)。药敏试验结果表明,R-2对蒽诺沙星、氟苯尼考、硫酸庆大霉素敏感,对氧氟沙星、硫酸阿米卡星等8种抗生素不敏感;Y-1和Y-8仅对氟苯尼考敏感。

渤海水母体细菌的微生态分布及弧菌生物学特性

采用稀释平板法对我国辽宁渤海海域水母体中细菌的微生态分布进行了考察 .结果表明 ,在渤海水母体中各部位均有腐生性细菌及弧菌生长 ,其中腐生性细菌主要存在于水母体表 ,而弧菌除存在于水母体表外 ,有的则能在水母体内深层生长 .水母体细菌微生态研究结果表明 ,弧菌约占细菌总数的 90 %以上 .通过改进TCBS培养基 ,从水母体中分离得到 6株优势类群的细菌 ,对其菌落特征、菌体形态、生理生化特性进行了研究 ,它们都具备弧菌属的共同特点 :革兰氏阴性 ,氧化酶阳性 ,兼性厌氧 ,TCBS培养基上能生长 ,对O/12 9敏感 ,初步鉴定为弧菌属 .研究还发现 ,这几株菌都能产蛋白酶 ,其中JF2、JF4、JF5、JF6产蛋白酶的能力明显较强 ,它们极有可能是导致水母捕捞后快速解体腐败的主要原因 .

黄喉拟水龟致病菌——松鼠葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

从患病的黄喉拟水龟Mauremys mutica肝、肾中分离得到一株革兰氏阳性菌株，经人工感染试验证实，该菌为致病菌。对该菌的生理生化指标进行了分析，结果表明：该菌具有氧化酶、触酶、葡萄糖呈阳性，凝固酶、鸟氨酸脱羧酶、密二糖呈阴性，M—R为阳性，VP反应为阴性等特征，与报道的松鼠葡萄球菌特征一致。采用BIOLOG自动微生物鉴定系统对该菌进行鉴定，将适当浊度的细菌悬液接种GP2板条培养16—24h后读出结果，并将结果输入计算机，经Biolog Microlog24．2软件分析鉴定，结果显示为松鼠葡萄球菌Staphylococcus sciuri，可能性为99％，相似性和位距分别为0．913和1．30。结合形态和生理生化特点，将其鉴定为松鼠葡萄球菌。纸片扩散法药敏试验结果表明，该菌仅对头孢拉定和阿米卡星敏感，对头孢哌酮中度敏感，对其他抗生素均存在不同程度的耐药性。

仿刺参及养殖环境中溶藻弧菌和灿烂弧菌的PCR快速检测

溶藻弧菌和灿烂弧菌是水产养殖中常见的致病菌,给水产动物的养殖带来巨大的损失,建立一种简便、快速、有效的检测方法十分必要。根据溶藻弧菌和灿烂弧菌gyrB基因序列的保守区序列分别设计引物,对9株溶藻弧菌和6株灿烂弧菌进行了PCR扩增。结果表明两对引物能特异地检测溶藻弧菌和灿烂弧菌,而与其他细菌没有交叉反应;检测溶藻弧菌的每个PCR反应的敏感度为0.13pg的DNA和103cfu/mL细菌,检测灿烂弧菌的每个PCR反应的敏感度为0.34pg的DNA和103cfu/mL细菌。该PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,可用于对感染溶藻弧菌和灿烂弧菌的仿刺参及其养殖水体中的细菌性病原进行快速检测。

锯缘青蟹常见病害及其防治技术

综合报道了由细菌、真菌、寄生虫和环境变化引起的锯缘青蟹常见病害及防治措施。由细菌引起的病害有弧菌病、丝状细菌病、甲壳溃疡病和黑鳃病 ;由真菌引起的病害有霉菌病 ;由寄生虫引起的病害有蟹奴病、纤毛虫病、藤壶病 ;由环境变化引起的病害有白芒病、黄斑病。

利氏才女虫幼虫对轮虫和河蟹溞状幼体的影响

试验结果表明 ,利氏才女虫 (Polydoraligni)幼虫对褶皱臂尾轮虫 (Brachionusplicatilis)的存活有严重危害 ,其密度与轮虫的存活率负相关 ;利氏才女虫幼虫对中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis河蟹 )Ⅰ期和Ⅱ期状幼体 (Z1和Z2 )的变态也存在严重危害 ,其密度与Z1和Z2 的变态率亦呈负相关 。

宽体金线蛭嗜水气单胞菌感染的病原检验

对河北某宽体金线蛭(Whitmania pigraW h itm an)养殖场所养殖的宽体金线蛭发生的病害,进行了发病情况、临床表现、病理变化等方面的检验。同时,择代表菌株进行了16S rRNA基因的分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列、分析了相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树。结果表明所检病例为由嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)所引起的感染。分离后做纯培养的10株嗜水气单胞菌均为同种血清型菌株;代表菌株对健康宽体金线蛭的人工感染试验表明了相应的原发病原学意义;药敏试验结果显示,对供试37种抗菌药物中的头孢噻肟等高度敏感、对链霉素等敏感、对苯唑青霉素等耐药。