一株大黄鱼虹彩病毒的分离鉴定及多克隆抗体的制备

2021年7月,浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼(Larimichthys crocea)出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法,从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞(EPC)后出现空斑、脱落的细胞病变症状。根据虹彩病毒MCP和ATPase基因保守序列设计特异性引物对病毒组织样本进行PCR扩增,得到分别为1 367 bp和740 bp的目的基因片段。将MCP基因扩增片段测序,经BLAST对比及系统发育树聚类分析,确定该分离的病毒属虹彩病毒科细胞肿大病毒属。通过蔗糖密度梯度离心纯化,用透射电镜观察该病毒粒子呈正六边形,直径为120~150 nm。用纯化病毒作为抗原免疫小鼠获得抗大黄鱼虹彩病毒的多克隆抗体,效价为1∶7 000;通过SDS-PAGE和Western blotting初步确定3个免疫蛋白。本研究为大黄鱼虹彩病毒纯化提供一种新方法,并初步分离出免疫蛋白,为该病毒相关分子生物学研究、蛋白研究以及疫苗制备等提供理论依据。

室内大黄鱼成鱼优化养殖技术

近年来,随着产业的快速发展,大黄鱼因种质退化、养殖方式不当、养殖环境恶化等原因导致的成鱼生长速度慢、病害多、体色差、体形短、肉质差等问题日渐明显,严重影响大黄鱼的销售。锁掷酵母富含油脂、蛋白质、糖类、维生素、类胡萝卜素等,具有促生长、强免疫、提颜亮色的作用,是极具潜力的水产用益生菌。笔者通过添加投喂锁掷酵母对大黄鱼成鱼进行优化养殖,取得了一些较好成效。现将养殖情况介绍如下,供养殖业者参考。

养殖大黄鱼3种主要病害及其防治的研究进展

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)是中国主要的海水鱼类养殖品种,但当前严重的病害问题已成为制约该产业健康发展的重要因素。文章针对养殖大黄鱼的3种病害,即刺激隐核虫病、眼点淀粉卵涡鞭虫病和虹彩病毒病,从病原、发病症状及防控措施等角度,综述了病理及其防治的研究情况,以期为大黄鱼养殖产业可持续发展提供参考。

大黄鱼PPAR基因家族特征及其在饥饿和温度胁迫中的功能分析

分析了大黄鱼PPAR基因家族的序列结构及其在饥饿和温度胁迫下的表达特征。结果显示,除PPARg同时具有PPARg_N和PPARg_N_superfamily这2种结构域外,大黄鱼PPAR基因家族在结构上基本一致。此外,PPAR基因家族基因存在组织特异性表达,在饥饿胁迫下,随着饥饿胁迫时间推移,PPAR基因家族的表达量皆呈增长趋势,其中,PPARg在肌肉中表达量最高,推测PPAR基因家族在大黄鱼脂质代谢中发挥了作用。在温度胁迫下,PPAR基因家族在肝脏中的表达都呈波动变化趋势,而PPARg的表达量则随着胁迫时间的延长而显著上升。该研究为了解PPAR基因家族在调节大黄鱼脂质代谢中的作用提供了基础资料。

养殖密度对大黄鱼生长、血清生化、营养成分、消化酶和代谢酶活力的影响

为研究工厂化流水养殖系统中不同养殖密度对大黄鱼养殖的影响,以初始体质量为(120±5)g的大黄鱼为试验对象,设置了低密度组(4.92 kg/m^(3))、中密度组(7.56 kg/m^(3))和高密度组(10.08 kg/m^(3))3个初始密度组进行为期150 d的养殖生产试验,检测了试验结束时不同密度组大黄鱼的生长指标、营养成分、血清生化、消化酶和能量代谢酶活力水平。结果显示:高密度组大黄鱼终末增重率显著低于中密度组和低密度组,各密度组试验鱼的存活率和肥满度无显著差异;鱼体肌肉水分和灰分含量随着养殖密度的增加而增加,存在显著差异,粗蛋白与养殖密度呈负相关,也存在显著性差异,粗脂肪未出现显著差异;肝脏4种代谢酶的活性在试验末期,低、中密度组显著低于高密度组;随着养殖密度的增加,大黄鱼胃、肠道5种消化酶活性降低,中、高密度组与低密度组相比出现明显的差异。研究表明,高密度养殖可通过增加机体营养代谢和减弱的消化吸收能力影响能量的收支,从而对大黄鱼的生长、肌肉营养品质和生理健康水平产生不利影响。

大黄鱼专题系列讲座 大黄鱼精准投喂策略

目前,大黄鱼养殖过程中主要投喂冰鲜杂鱼和人工配合饲料,且以冰鲜杂鱼为主。然而,大多数冰鲜杂鱼存在质量低下、携带病原菌、饵料系数高、投喂成本高、易造成养殖水体水质恶化和引发病害等问题。此外,低质量的冰鲜杂鱼还会引起大黄鱼肝脏脂代谢紊乱,降低抗病力,危害鱼体健康。因此,使用人工配合饲料全面替代冰鲜杂鱼势在必行。

不同养殖模式下大黄鱼肌肉营养成分比较分析

大黄鱼在我国主要分布于黄海南部、东海以及南海雷州半岛东侧(徐开达等,2007)。根据2023年中国渔业统计年鉴数据统计,我国大黄鱼总产量逐年上升,2022年总产量为25.7万吨,稳居海水养殖鱼产量榜首。大黄鱼肉质细嫩、鲜美,是一种优质蛋白质源食品,深受消费者喜爱(吴靖娜等,2013)。

MS-222对大黄鱼幼鱼麻醉效果、组织结构及抗氧化酶活性的影响

为探究MS-222长时间麻醉对大黄鱼(Larimichthys crocea)幼鱼机体的影响,采用不同质量浓度(10、20、30、40、50、60、70 mg/L)的MS-222,对体质量为(97.97±9.56)g的大黄鱼幼鱼进行24 h麻醉试验,通过对肝脏、鳃丝和脑的组织形态及超微结构变化进行显微和电镜观察,评估长时间麻醉对幼鱼机体的影响;通过对肝脏抗氧化酶活性和血清皮质醇浓度的检测,分析麻醉对机体抗逆性的影响。结果表明:在(16±1)℃条件下,用质量浓度为40 mg/L的MS-222麻醉时,幼鱼可进入深度镇静期,用60~70 mg/L的MS-222麻醉时,幼鱼可进入深度麻醉期,但用70 mg/L的MS-222麻醉24 h后,幼鱼的复苏率仅为50%;组织切片观察显示,用40 mg/L的MS-222麻醉24 h时,对机体可能存在轻微损伤;生理生化试验显示,用20 mg/L的MS-222麻醉时,幼鱼血清皮质醇浓度在1.5 h时显著上升(P<0.05),用20、40 mg/L的MS-222麻醉时,总体上能增强幼鱼肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,在清水中复苏6 h后,SOD、CAT、GSH-Px活力基本能恢复至空白组水平。研究表明,40 mg/L的MS-222可作为本试验条件下大黄鱼幼鱼长时间运输的适宜质量浓度。

低频振动刺激对大黄鱼行为及生理影响

为了解低频振动刺激对大黄鱼行为及生理的影响,通过自制钢制水槽及作动器模拟养殖舱振动125 Hz(150 dB)、200 Hz(150 dB)分别对250 g组和500 g组大黄鱼进行连续1 h振动刺激试验,以此确定大黄鱼行为反应及生理生化指标变化(皮质醇、肾上腺素、甲状腺素)。结果显示:在振动刺激过程中,试验鱼未出现明显惊扰反应现象;250 g试验组,125 Hz频率条件下肾上腺素变化(增长约40.93%)最为显著(P<0.05),200 Hz频率条件下甲状腺素(增长约41.08%)变化最为显著(P<0.05);500 g试验组,125 Hz频率条件下甲状腺素(增长约28.68%)变化最为显著(P<0.05),200 Hz频率条件下也是甲状腺素(增长约41.79%)变化最为显著(P<0.05)且高于125 Hz频率组,故认为两组试验鱼均对200 Hz振动刺激更为敏感。本研究为提升大黄鱼的生长率、存活率以及深远海养殖新空间的新型海上养殖平台建设与发展提供参考。

大黄鱼专题系列讲座 中草药添加剂在大黄鱼饲料中的应用

大黄鱼养殖业发展迅猛,但在不断发展的同时,也面临诸多挑战,如生长缓慢、养殖水环境恶化、水产病害频发、鱼体代谢异常等。其中,水产病害频发问题严重影响了养成率。抗生素的使用对渔病防治有着明显的效果,在一定程度上抑制了病原菌的感染,然而长期和过量使用抗生素不仅会导致鱼产生耐药性,还会导致水产品中残留的抗生素超标,威胁水产品的食品安全。

大黄鱼生长速率差异个体肌肉组织的转录组比较分析

为了探究大黄鱼生长性状的分子调控机制,实验从同一个网箱内养殖的大黄鱼中选取生长速率较快的体重均值为(527.1±83.6)g的个体182尾、生长速率较慢的体重均值为(238.4±52.3)g的个体230尾,共412尾进行研究。对其肌肉组织进行总RNA提取和转录组测序,并对2组进行基因差异表达分析。以Padj<0.05、abs[log2(FoldChange)]>1为标准,共筛选到227个差异表达基因,包括125个上调基因、102个下调基因。差异表达基因在NCBI-nr和Uniprot(Swiss-Prot)数据库的注释率分别为99.12%、81.94%。通过差异表达基因的功能注释结果,初步筛选出了可能与肌肉生长相关的候选功能基因,如gdf9、ckm、tnni2和des等。GO和KEGG分析预测出部分与肌肉生长相关的信息,如GO term有肌动蛋白丝组织、肌动蛋白细胞骨架组织、肌动蛋白丝基过程、微管组织中心和发育生长等,KEGG通路有细胞和生长因子、脂肪酸生物合成、转化生长因子-β信号通路(TGF-β信号通路)、胰岛素信号通路和肌动蛋白细胞骨架的调控等。加权基因共表达网络分析(WGCNA)分析发现,purple模块与体重性状相关性较强,其核心基因myoz1、tpm1和tnni2可能与肌肉生长相关。本研究结果可以为后续相关基因功能的深度挖掘验证以及大黄鱼生长性状的分子调控机制解析提供参考。

基于代谢组解析大黄鱼对低温和饥饿胁迫的适应机制

为探讨大黄鱼对低温和饥饿氧化损伤的响应机制,实验将体重为(21.38±2.46)g的大黄鱼在低温(8℃)或/和禁食条件下饲养。实验组可分为4个处理组:对照组(C组)、低温组(CC组)、饥饿组(F组)和饥饿+低温组(CF组),每组3个平行。低温和饥饿胁迫30 d后,计算成活率;采取肝脏样本,进行组织学观察,并利用化学荧光法和LC-MS非靶向代谢组学技术分析处理组间活性氧(ROS)和代谢产物的差异。结果显示,与C组相比,CC组、F组和CF组的成活率显著降低,而ROS含量显著升高,且肝细胞均出现不同程度的空泡和核萎缩现象,表明低温和饥饿胁迫对大黄鱼产生了氧化损伤。大黄鱼低温应激后,从CC vs.C和CF vs.F组中分别筛选出84种和154种差异代谢物,有5种重要的重叠代谢途径:甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚生物合成和自噬等,表明细胞膜流动性和自噬在大黄鱼低温适应过程中发挥重要作用。大黄鱼饥饿应激后,从F vs.C和CF vs.CC组中分别筛选出184种和50种差异代谢物,有4种重要的重叠代谢途径:甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚生物合成、ABC运输体和自噬等,表明能量代谢和自噬在大黄鱼饥饿过程中发挥重要作用。从CF vs.C组中筛选出差异代谢物126种,主要富集在糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚生物合成、甘油磷脂代谢、氧化磷酸化、淀粉和蔗糖代谢、FoxO信号通路、自噬和谷胱甘肽代谢等,表明细胞膜流动性、能量代谢、自噬和抗氧化系统在大黄鱼适应低温和饥饿联合胁迫过程中发挥重要作用。本研究结果为深入研究低温及其诱导的饥饿对大黄鱼生理功能的影响提供科学依据。

大黄鱼网箱筏架吊笼养殖长牡蛎试验

大黄鱼(Larimichthys crocea),隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes),鲈形目(Perciformes),石首鱼科(Sciaenidae),黄鱼属(Larimichthys),是近海集群暖温性洄游鱼类,素有海水“国鱼”的美誉,主要分布于我国黄海南部、东海和南海等海域。20世纪80年代后期,随着养殖技术的突破,大黄鱼养殖业在我国福建、浙江、广东、江苏等沿海省份相继发展起来,象山港作为浙江省最早的大黄鱼养殖区域,网箱养殖是其最主要的养殖方式。

人工育苗条件下大黄鱼仔、稚、幼鱼的摄食与生长

在人工育苗条件下,对0到40日龄大黄鱼(Pseudosciaenacrocea,Richardson)仔、稚鱼及早期幼鱼的摄食习性与生长特性进行研究。水温(24±1)℃时,孵化后0～5d属于仔鱼期,6～20d为稚鱼期,第21天起转为幼鱼期。大黄鱼仔鱼孵化3d后开口摄食;开口时平均口径为240μm,40日龄达2480μm;口径的大小变化与日龄的关系是:y=0.2327e0.0682x,R2=0.9492。试验用的生物饵料与实际生产一致,包括轮虫、丰年虫无节幼体、活桡足类和冷藏桡足类。不同生长期的大黄鱼鱼苗的摄食活动具有明显的昼夜节律:在1昼夜(24h)中,仔鱼仅在18:00左右出现1个摄食高峰,而稚鱼和幼鱼除了在18:00左右出现1个显著的摄食高峰外,在10:00左右还有1个相对小的摄食高峰。仔、稚、幼鱼夜间基本不摄食。大黄鱼鱼苗具有较高的摄食率和饱食率,随着生长而迅速升高。仔、稚、幼鱼的生长速度具有明显的阶段性,1～2日龄仔鱼生长较快,5～9日龄生长减慢,21～30日龄生长加快,31～40日龄生长减慢。这与鱼苗的食物转换和饵料生物的营养变化有关:5～9日龄生长减慢是由于鱼苗由混合营养转变为外源性营养所致;31～40日龄生长减慢是因为冷藏桡足类的营养价值较低。鱼体全长与日龄的关系式为y=3.2552e0.0472x,R2=0.9710;体长与日龄的关系式为y=3.3205e0.0374x,R2=0.9777;?

海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的流行病学研究

2000年5月～2003年11月,采用实地调查、取样及从各县水产技术推广站获取流行病学资料等方法,跟踪调查了浙江省沿海12个海水网箱养殖场大黄鱼弧菌病的发病情况,并对患病濒死大黄鱼进行了病原菌的分离及病理学观察。研究结果表明:该病发病率高、发病范围广,流行时间为6～10月份,7～8月份为高峰期,一般死亡率为30%～40%,最高可达80%以上。主要病原为溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)和哈氏弧菌(V harveyi),可引起大黄鱼肝、肾、脾等组织严重病变。发病原因主要是由于养殖密度过高、养殖环境条件恶化,夏季高温使得弧菌大量繁殖,在鱼体由于各种原因造成损伤时,诱发了疾病的爆发。

大黄鱼养殖群体遗传多样性的同工酶

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）法对取自厦门市火烧屿养殖大黄鱼的９种同工酶１５个基因座位进行分析，结果表明：大黄鱼眼球中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）酶谱表现为ＬＤＨ的经典模式．在所研究的大黄鱼养殖群体中，多态位点比例（Ｐ）为０．０６７，平均杂合度的观测值（Ｈｏ′）为０．０１３，预期值（Ｈｅ）为０．０１２，位点有效等位基因数（Ｎｅ）为１．０６７，Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传偏离指数（Ｄ）为０．０８３．该养殖群体的遗传多样性水平较低。

海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的病原菌

从网箱养殖患病的大黄鱼（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａ ｃｒｏｃｅａ）肝、肾、脾等组织分离两株病原菌，进行纯化培养、人工感染、药敏试验及菌种鉴定等研究，根据形态及生理生化特征，致病菌定为溶藻弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）。药敏实验的结果表明，氯霉素、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明等对致病菌有较强的抑制作用。

免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响

采用低聚糖益力素、稳定型维生素Ｃ、渔用多维等免疫、营养添加物定期投喂大黄鱼， 以粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、吞噬百分率、吞噬指数等为指标，跟踪检测试验大黄鱼血液中 白细胞组成数量和吞噬细胞吞噬能力的变化。研究结果表明，免疫添加物可以提高大黄鱼血 液中白细胞数量和吞噬细胞的吞噬能力，增强大黄鱼的非特异性免疫功能，促进大黄鱼的健 康生长。

大黄鱼三倍体诱导的初步研究

以温度休克方法研究了养殖大黄鱼 (Pseudosciaena crocea)三倍体诱导的处理条件 .结果表明 :1)采用冷体克和热休克方法均可诱导出三倍体大黄鱼 ,三倍体诱导率明显受处理温度、处理起始时间以及处理持续时间等因子的影响 ;2 ) 4℃冷休克条件下 ,处理起始时间为受精后 2 min,处理持续时间为 10 min有较高的孵化率和三倍体诱导率 ;3) 37℃热休克条件下 ,处理起始时间为受精后2 .5 min,处理持续时间为 5

大黄鱼微卫星标记的富集与筛选

根据生物素与链霉亲和素的亲和原理,采用生物素-磁珠富集微卫星,与传统放射性同位素杂交法相结合,构建筛选大黄鱼的微卫星文库。用生物素-微卫星捕捉单链限制性酶切片段(含有接头和大黄鱼微卫星序列),经PCR扩增单链目的片段形成双链,然后连接至T载体上,转化感受态细胞。将移至硝酸纤维素膜的重组菌用32P标记的放射性同位素探针5′-[γ-32PATP(CA)15筛选出阳性克隆菌。测序结果发现,阳性克隆率为71.9%,105个微卫星位点。其中选取设计合成30对并筛选出22对可用引物。说明所建大黄鱼微卫星文库是一个高质量的文库,可为大黄鱼基因组结构分析、大黄鱼精密微卫星连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究、分子标记辅助育种以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记。