Bacillussp.HA-1产环糊精葡萄糖基转移酶发酵工艺研究

在10 L 发酵罐中,研究了环糊精葡萄糖基转移酶产生菌 Bacillus sp．HA-1的发酵规律,结果表明,在菌体对数增长期,发酵液溶氧处于较低状态,发酵液 pH 在对数增长前期持续下降,中期后回升,菌体产酶呈增长趋势；当菌体增长进入稳定期,发酵液溶氧迅速回升至初始状态,pH 也回升至起始值,菌体产酶接近峰值。根据发酵规律优化发酵工艺,通过有效增加菌体对数增长期发酵液溶氧,使菌株产酶到达高峰的时间缩短了 50%以上。应用该菌株在5 m^3生产罐中发酵,24 h 产酶水平达到6 800 IU/mL。

不同菌种发酵豆渣产α-葡萄糖苷酶抑制因子的研究

为了提高豆渣的利用价值,采用不同微生物以豆渣为培养基进行发酵,测定发酵豆渣甲醇/水提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性,结果表明:少孢根霉、雅致放射毛霉、枯草芽孢杆菌及纳豆菌发酵的豆渣口感比较细腻,同时枯草芽孢杆菌发酵豆渣具有酱香味,可以作为豆渣发酵良好的初始菌种。不同菌种发酵后的豆渣甲醇/水提取率均比非发酵豆渣高,枯草芽孢杆菌发酵豆渣水提取率最高,达到35.5%。枯草芽孢杆菌发酵豆渣的α-葡萄糖苷酶抑制活性很高,其醇/水提物浓度分别为0.625 mg/mL、0.312 5 mg/mL时抑制率达到90%以上。斜率法测得的抑制活性很高,其醇/水提物的斜率值分别为10.2、25.3。将枯草芽孢杆菌发酵的豆渣开发成降血糖食品,可以大大提高豆渣的利用价值,为豆渣的开发利用开辟新途径。

离子交换树脂固定化葡萄糖异构酶

世界上不少国家为寻找新的甜味剂,开辟新糖源,满足人们日益增长的食糖用量,进行了许多探索和研究,并找到了高果糖浆这一营养可口的甜味剂。随着固定化技术的发展,高果糖浆的生产发展迅速。由于葡萄糖-果糖间存在热力学平衡,平衡时果糖浓度为42％左右,从而影响葡萄糖的转化率。据文献报导,硼酸盐与果糖间的络合稳定性比它与葡萄糖间的大,从而能打破葡萄糖-果糖间的可逆平衡,增加果糖的产量;而硼酸盐易通过化学方法接到离子交换树脂上。因而本实验采用离子交换树脂作为载体,并将其转变为硼酸型树脂,通过物理吸附及离子交换作用制备固定化酶。此法简便,而且所用离子交换树脂合成工艺成熟、成本低。

里氏木霉产纤维素酶的条件优化及酶学性质研究

本文对里氏木霉产纤维素酶发酵培养条件及对其所产纤维素酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,里氏木霉发酵产酶的最佳培养基为:麦麸1.8%、硝酸钠1.3%、碳酸钙0.3%、氯化钠0.2%、磷酸二氢钾0.3%;里氏木霉所产纤维素酶的最适反应条件为:pH 4.0、50℃,金属离子Fe2+、Co2+、Mn2+、Ca2+对酶活有促进作用,而Fe3+、Ag+对酶有抑制作用。经培养基优化后,发酵液上清中的最终酶活为116.64U/mL,是优化前的3.5倍。

丝素膜固定 β-葡萄糖苷酶性质的研究

以废蚕丝为原料，研究了蚕丝固定β－葡萄糖苷酶的方法。采用共价法和包埋法将酶固定在丝素蛋白膜上，操作简便易行，制造的酶膜稳定，机械性能好，热稳定性提高，７０℃保存１小时活力几乎不降低，同时ｐＨ值稳定性也有所提高。该方法对果酒增香具有实用价值。

β-葡萄糖苷酶产酶发酵条件的优化研究

通过单因子及正交试验，对培养基优化后，酶活由５１．５μ／ｍｌ增加到９６．５μ／ｍｌ，提高了近一倍，最终得到了β－葡萄糖苷酶发酵的最适条件。

α-葡萄糖苷酶性质、制备及其应用研究

对α-葡萄糖苷酶的主要性质以及当前已知的该酶的提取、纯化、活性测定方法及其应用进行综述,以便对其今后的研究提供方便。

山西老陈醋发酵过程中高产蛋白酶芽孢杆菌的筛选与鉴定

以山西老陈醋发酵过程中不同发酵天数的酒醪和醋醅为样品,采用水解圈法和林酚法筛选高产蛋白酶的芽孢杆菌。得到一株产中性蛋白酶和酸性蛋白酶能力相对较高菌株CD92-3,其中性蛋白酶活力达到914.22U/mL,酸性蛋白酶活力达到92.11U/mL。环境耐受性分析表明:该菌株能耐受老陈醋发酵环境中乙醇浓度、pH及温度。通过形态学观察、生理生化试验及16S rDNA鉴定,菌株CD92-3初步确定为Bacillus siamens。

假单胞菌属No.2120生产D-甘露糖异构酶发酵培养基的优化

通过单因子实验、Plackett-Burman实验设计、响应面分析法对假单胞菌属No.2120产D-甘露糖异构酶的培养基进行优化,确定发酵优化条件:果糖15.26 g/L,牛肉膏20 g/L,酵母膏2 g/L,K2HPO42 g/L,MgSO4.7H2O0.5 g/L,NaCl 0.5 g/L,Tween-80 1.54 g/L。采用优化配方异构酶比酶活可以达到68.28 U/mL。

耐高温葡萄糖异构酶的全细胞固定化条件研究

对三羟甲基磷交联Thermus oshimai葡萄糖异构酶重组菌的固定化工艺进行研究。确定所用硅藻土载体粒径36.8μm、聚凝剂聚乙烯亚胺分子质量为70 000 Da、交联剂合成前体为四羟甲基硫酸磷;运用最优的固定化条件:0.3 g硅藻土、5 mmol/L Mn^(2+)、0.12%(体积分数)聚乙烯亚胺絮凝1 h、1.5%(体积分数)三羟甲基硫酸磷交联1.5 h,所制备的固定化细胞酶活可达138.4 U/g。应用该催化剂于85℃和1 100 mmol/L D-葡萄糖底物条件下连续催化10批次,催化剂仍保留91%以上酶活,D-果糖转化率始终维持在51.7%以上。该工艺可以连续生产高果糖浓度高果糖浆,有效简化后续分离提取工艺,为进一步使用符合食品工业要求的表达系统连续制备高果糖浆奠定基础。

葡萄糖异构酶高产菌株的诱变选育

以产胞内葡萄糖异构酶的树状黄杆菌（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｒａｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＮＲＲＬ１１０２２为出发菌株，用紫外线对其进行诱变，经筛选得到一株葡萄糖异构酶的高产菌株Ｕ—６１６，其葡萄糖异构酶活力较出发菌株提高３１％，经保存２年和多次传代复测，其酶活力保持稳定．对诱变株Ｕ一６１６进行产酶条件测试，结果发现其生长和产酶需较高的溶氧水平，最适产酶温度为３０℃，最适产酶ｐＨ为７．３～７．５，铁离子对其生长和产酶无明显的影响，说明树状黄杆菌ＮＲＲＬ１１０２２的诱变株Ｕ—６１６具有相当高的工业应用价值．

栖热袍菌α-葡糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质

用分子克隆手段获得栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以Thermotoga neapolitana DSM 4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,并连接至表达载体中,构建重组质粒pET-28a-glu,然后转化到大肠杆菌中,加IPTG诱导获得重组蛋白。提取粗酶,用葡萄糖测定试剂盒测酶活。序列分析结果表明,该基因的读码框碱基长度为2166bp,编码722个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,α-葡糖苷酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,蛋白分子量约为62KDa;酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0。

葡萄糖异构酶固定化细胞的制备方法优化及应用

本研究比较了壳聚糖微球法、聚乙烯醇-海藻酸钠包埋法、微晶纤维素法及壳聚糖絮凝-戊二醛交联法对含有葡萄糖异构酶细胞的固定化效果,发现壳聚糖絮凝-戊二醛交联法效果最好。最佳固定化条件为:壳聚糖浓度为0.015%(m/v),戊二醛浓度为0.05%(v/v),交联时间为3 h。采用该方法制备的固定化细胞的酶活为2579 U·g-1,酶活回收率为70.5%,机械强度为1797 g。在分批转化方面,固定化细胞在70℃下重复使用8批次后,转化率仍保持在42.1%以上。此外,固定化细胞在连续柱式转化反应器中连续转化19天,转化得到了约5.7 kg果糖。

固定化葡萄糖异构化酶—氧化铝载体的浅析

介绍了一种以氧化铝作载体制备生物酶的新技术。通过与过去一些以有机材料作载体的酶对比，其生产能力及物化性能均有突破性进展。

酶法辅助提取猴头菇中硒多糖工艺中复合酶用量的优化

以安康富硒猴头菇为原料,运用单因素和正交试验设计,对酶法辅助提取猴头菇硒多糖工艺中复合酶(纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶)的添加量进行优化。结果表明:各酶的最优添加量为纤维素酶0.5%,果胶酶0.6%,木瓜蛋白酶0.4%。在酶的最优添加量下,硒多糖的提取率可达17.52%,硒多糖中硒含量为0.282mg/kg。

薄层层析法在产海藻糖合酶菌株筛选中的应用研究

研究了采用薄层层析法筛选产海藻糖合酶菌株。采用单因素实验确定了薄层层析法分析海藻糖合酶酶反应产物的最佳调浆剂、展开剂和显色剂,本方法的检出灵敏度可达0.2μg。利用该方法初步从土样中筛选出5株海藻糖合酶产生菌,分别命名为T005、T007、T010、T062、T064、T101。

阳离子交换树脂分离纯化葡甘露低聚糖工艺研究

采用阳离子交换树脂分离纯化葡甘露低聚糖,通过实验得到分离纯化的最佳条件为:洗脱流速为2mL/min,分离纯化温度为60℃,上样量为10mL,树脂装柱高度为600mm,在此条件下能较好的分离去除掉糖浆中的单糖和多糖,葡甘露低聚糖含量可达到62.1%。

糖苷酶及其改造策略研究概况

糖苷酶作为水解酶家族一员,其性质和功能是近年研究热点。该文主要阐述α-甘露糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、β-木糖苷酶、β-D-葡萄糖醛酸苷酶、日本曲霉产β-呋喃果糖苷酶、壳三糖苷酶、耐高温β-甘露糖苷酶及硫代糖苷酶八种常见糖苷酶及其基本性质;并综述近年对糖苷酶改造、糖基化合物生物改性及糖苷酶作用机理研究方法。

放线菌异构酶菌种分离和诱变选育

从广东、海南两省９个县（市），采集不同海拔高度、不同植被、不同土壤及不同作物农田的土样中，分离、挑选放线菌，测定各菌株葡萄糖异构酶活力。由测定的２７０５株菌株中，选出了酶活力最高的２６４４菌株。经复壮分离后，通过物理、化学因子诱变处理和筛选，活力提高８３％，酶活高达５５０μ／ｍｌ。

突变株 U-616 葡萄糖异构酶及其固定化研究

树状黄杆菌ＮＲＲＬ１１０２２的诱变株Ｕ－６１６所产葡萄糖异构酶在６０℃～８０℃范围有较高活性，最适ｐＨ为７．５～８．５。对其固定化异构酶的理化性质进行了实验性探索。实验结果表明：固定化酶保留了８３％的游离酶的活力，在５５℃～８５℃范围有较高活性，最适ｐＨ为７．０～８．０；在６０℃，底物ｐＨ值为８．０及含有１．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ钴、镁离子时，固定化异构酶的酶活达到最高。此异构酶及其固定化酶均对金属离子耐受性较强，Ｃｏ２＋和Ｍｇ２＋有激活作用，对Ｃａ２＋不敏感，热稳定性较好。树状黄杆菌变株Ｕ－６１６所产葡萄糖异构酶及其固定化异构酶具有较大的工业应用价值。