红曲霉菌孢子冻干保护剂的研究

以红曲霉菌为真空冷冻干燥菌种,通过单因素试验研究不同保护剂对红曲霉菌孢子存活率的影响,在此基础上,采用正交试验优化筛选出最优保护剂组合为蔗糖添加量14%、乳糖添加量3%、海藻糖添加量7%。验证试验得出,以该配方配制的保护剂冻干后红曲霉菌的存活率达到78.47%。

红曲中桔霉素的薄层层析分析

红曲产品中可能含有桔霉素,已使我国的红曲出口受到很大影响。根据国内外对桔霉素的最新研究报告,采用薄层层析法,对红曲中桔霉素的提取方法和展开剂分别进行研究。结果表明,以酸性水溶液作为提取剂,以甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:3:1)为展开剂,桔霉素的分离检测效果较好。在此基础上对22个红曲样进行了分析,结果显示,大部分红曲都含桔霉素,但含量高低不一,从中获得桔霉素含量低而色价高的红曲霉菌株有3个。

复合酶高产菌株选育的研究

出发菌株黑曲霉 ＦＪ ００８，经紫外线、紫外线和亚硝基胍复合诱变获得一株复合酶高产菌株 ＳＬ２１１１。该菌在基础发酵培养基上，变温培养７２ｈ，每克鲜曲酸性蛋白酶酶活可达４５２５ Ｕ／ｇ、果胶酶７０１５ Ｕ／ｇ、纤维素酶４４９７ Ｕ／ｇ，分别比出发菌株提高９７．９％、７０．１％和 １３．４％。经斜面传代培养 ５代，产酶特性稳定。并运用相关分析法对１７株变株所产的酸性蛋白酶酶活力、纤维素酶酶活力和果胶酶酶活力进行分析，结果表明：酸性蛋白酶酶活力与纤维素酶、果胶酶酶活力的变化呈正相关，因此可以选择酸性蛋白酶酶活力的高低作为复合酶菌种筛选及其特性研究的依据。

红曲霉菌9903发酵工艺条件对色素及桔霉素生产的影响

筛选到一株高产色素、低产桔霉素的红曲霉菌 990 3,并鉴定该菌种为红曲红曲菌 .为提高色素含量、降低桔霉素含量 ,对该菌的发酵培养基成分进行了研究 ,通过三因素三水平正交实验得到了摇瓶最佳培养基配方 ,在 10L的自动发酵罐实验中 ,以玉米淀粉和谷氨酸单钠盐为主要成分的发酵液色价达到 184U /mL ,桔霉素质量浓度低于 1mg/L .发酵动力学的初步研究表明 ,色素及桔霉素的生产与菌体生长有一定的偶联关系 ,而且桔霉素在发酵后期有一定程度的降解 .此外 ,溶氧条件对红曲霉产色素和桔霉素的影响的初步研究表明 。

食品工业用红曲菌株产桔青霉素能力的研究

为筛选出低产或不产桔青霉素的红曲霉菌株 ,选用 3 5株食品发酵工业用红曲霉 ,研究不同的培养条件对其产桔青霉素能力的影响。结果显示 ,所有菌株在大米培养基上均产桔青霉素 ,3 0个株菌 (85 71% )在液体培养基上产毒 ;两种培养基上的产毒范围分别为 0 2 8～ 2 458 80mg kg和 0 0 9～ 55 65mg kg ,毒素产量均数分别为 2 0 1 60mg kg和 11 99mg kg ,中位数分别为 61 99mg kg和 3 51mg kg ,同一菌株在大米培养基上产桔青霉素能力高于液体培养基。色价测定结果表明 ,菌株在大米培养基上的色素产量也高于液体培养基 (3～ 50 9倍 ,平均 93倍 )。本研究筛选出一株在大米培养基上色素产量最高 (113 4U g)而桔青霉素产量较低、适用于食品发酵工业用的红曲霉菌株。研究结果提示 ,用于生产食品或保健食品的红曲菌种在使用前必须进行安全性评价 ,并在全国范围内定期对生产厂家、菌种保藏单位使用和保藏的菌种进行产桔青霉素能力调查 ,对红曲发酵产品中桔青霉素污染水平进行监测 。

双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐他汀(Lovastatin)的含量

：对紫外分光光度计测定组曲中洛伐他汀（Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）的方法进行研究。采用７５％乙醇对红曲中的Ｌｏｖｉｓｔａｔｉｎ超声提取２０ｍｉｎ。离心后用中性氧化铝柱层析吸附上清液中的色素．一定条件下Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ不被吸附而随着洗脱液流出．由于Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ在２４６ｎｍ、 ２５４ｎｍ两波长下其吸光度之差（Ａ２４６—Ａ２５４）正好能够代表一个特征吸收峰的峰高，并且经实验测定与其浓度的关系符合比尔定律．而红曲色素在此波长下△Ａ值极小，因此采用双波长紫外分光光度法能够排除样品经吸附层析分离后残存色素的干扰，完成对样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ含量的定量测定．在本实验条件下６次重复测定加标样品的回收率为９７．５±１．３８％，变异系数为１．４％．样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的最低检测下限为０．６５μｍ／ｍｌ．利用本实验条件成功测定了三种红曲发酵制品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的含量．同时测定加标回收率．结果看到实测样品的回收率都在９５％以上，标准偏差小于０．２．说明该方法具有良好的实用性．适用于中小企业对Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ产品的科研开发及产品质量控制．

应用抑制性消减杂交法筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因

为了筛选与红曲菌产桔霉素相关的基因,应用抑制性消减杂交(SSH)构建了两个红曲菌的cDNA消减文库。利用分子生物学软件从这两个文库中找出八条同源序列,通过Blast软件对这八条序列进行分析,结果显示,它们可能是新的基因片段,递交后被Genbank接收。

RP-HPLC以开环形式测定红曲中总Lovastatin含量

建立用反相高效液相色谱(RP-HPLC)以开环形式测定红曲样品中总Lovatatin含量的方法。红曲样品用0.2mol/LNaOH溶解,50℃超声提取转化60min,使样品中的Lovastatin全部转化为开环形式,再用硅胶吸附层析,初步除去样品中的色素及部分杂质。经过前处理后的样品以磷酸缓冲液-乙腈系统(V/V)65∶35为流动相,在1ml/min流速下用反相高效液相色谱分离去除残余色素及其它杂质干扰,开环Lovastatin用紫外检测器在238nm波长下检测。本方法的最低检测限为0.2μg/ml,在0.2～6μg/ml范围内呈良好的线性关系,γ=0.9991。6次重复测定样品加标回收率为96%±3%,变异系数为3%。采用本实验方法测定5种红曲发酵样品中的总Lovastatin含量均取得满意结果。

紫色红曲霉固态发酵豆渣产红曲色素的工艺研究

探索了以紫色红曲霉(Monascus purpureus)固态发酵豆渣产红曲色素的可行性。从5种不同原料中筛选出豆渣为产红曲色素的最适固态发酵基质;在单因素实验的基础上,采用正交实验优化法得出紫色红曲霉固态发酵豆渣产红曲色素的最佳培养基组成为基质初始含水量50%、甘油6%、NaNO_30. 04%、KH_2PO_40. 3%、MgSO_40. 2%、抗坏血酸2. 2%,最佳培养条件为湿度60%～65%、接种量8%、30℃培养12 d,在此条件下红曲色素的含量为(6. 03±0. 11) mg/g。研究认为,以紫色红曲霉固态发酵豆渣产红曲色素的工艺可行,可实现豆渣的高值化发酵再利用。

酱油种曲培养研究

种曲培养条件对种曲质量有一定的影响。试验以沪酿3.042米曲霉为菌种,研究培养条件与种曲产孢子数的关系,通过正交试验结果显示:培养时间对种曲产孢子数的影响最大,加水量和加硝酸铵量的影响次之,而麸皮质量影响较小。酱油种曲培养优化条件为:麸皮颗粒大小比例为3:7,加水量100%,硝酸铵加量0.3%,培养60h,种曲产孢子数最大。

福建古田红曲生产用红曲霉菌主要种类的鉴别

以购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的5株红曲霉菌为对照,对福建省微生物研究所红曲霉菌资源库中收藏自福建省古田县的60株红曲霉菌(Monascus sp.)进行分类鉴定研究。首先根据不同菌株在麦芽汁琼脂(Wa)、察氏酵母提取物琼脂(CYA)和甘油硝酸盐琼脂(G25N)培养基上的菌落形态特征进行初步分类,进而基于核糖体DNA内转录间隔区(rDNA internal transcribed spacer,rDNA ITS)、核糖体大亚基(28S nuclear ribosomal large subunit rRNA gene,LSU)和核糖体小亚基(18S nuclear ribosomal small subunit r RNA gene,SSU)的基因片段的测序结果,在Gen Bank中通过BLAST进行分子生物学方面的鉴定研究,并用ITS序列构建系统发育树。通过形态特征及3个基因序列的比对,认为所选取的60株古田红曲霉菌分别归属红色红曲霉菌(M.ruber)、丛毛红曲霉菌(M.pilosus)或紫色红曲霉菌(M.purpureus)3个种。

红曲霉总RNA和mRNA的提取与测定

确定了红曲霉总RNA和mRNA的提取方法及测定方法。结果表明,所得到的总RNA和mRNA质优量足,可以满足后续实验的要求。

常压室温等离子诱变选育高产橙、黄色素红曲菌研究

为了提高红曲菌(Monascus sp.)产橙、黄色素的性能,采用新型的常压室温等离子体(ARTP)诱变技术处理红曲菌WM951孢子悬液。结果表明,最佳照射时间为90 s,此时红曲菌突变效果最好,其孢子致死率为78%,形态突变率为14.2%。试验最终从15株突变菌株筛选得到1株高产橙、黄色素的突变菌株WM951M1,对该菌株的发酵产物进行色价检测分析,发现该突变菌株产橙、黄色素能力比出发菌株分别提高136%、43%,30℃培养10d后其固态发酵红曲米中橙、黄色素色价最大值分别为3 620、3300 U·g-1。出发菌和突变菌所产色素的全波长扫面图谱显示,突变菌所产色素最大吸收峰出现在465nm处,并在410 nm处也有吸收峰,说明该菌主要合成橙、黄色素。在传代培养的过程中,该突变菌株表现出良好的遗传稳定性及形态稳定性,不仅可应用于生产橙、黄色素,也可用于生产色调偏橙型红曲米,还能丰富红曲菌菌株库资源。

紫外分光光度法测定红曲中酸式Lovastatin的含量

研究紫外分光光度计测定红曲中酸式Lovastatin的方法。将内酯型Lovastatin全部转化为酸式形式后用硅胶柱层析进行分离,再用双波长紫外分光光度法测定样品中总Lovastatin（以酸式存在）含量,同时用本室报道的实验方法测定内酯型Lovastatin的含量,二者之差为红曲样品中酸式Lovastatin的含量。实验探索了样品中Lovastatin转化和洗脱的最佳条件,对总Lovastatin测定方法的准确度、精密度及最低检测限进行了研究,并且运用这一方法实测了五种红曲样品中酸式Lovastatin的含量。结果表明该方法具有良好的实用性,适用于中小企业对Lovastatin产品的科研开发及质量控制。

红曲霉紫外诱变选育多糖高产菌株

利用紫外线(波长254 nm)对出发菌株红曲霉AS 3.4701进行诱变处理,经过初步筛选确定最佳诱变时间为2.0 min。再经过复筛获得了1株最佳突变株ZH-100,该突变株经连续3次传代,红曲粗多糖的产量分别是4.26,4.69,4.10 g/L,平均4.35 g/L,证明该菌株具有稳定的遗传性,比出发菌株多糖产量提高286%。

红曲霉中Monacolin K的研究进展

本文主要综述了MonacolinK的特性、药理作用及应用价值 。

大曲红曲霉的分离鉴定及其产桔霉素能力的初步研究

采用传统微生物分离手段从浓香型大曲内分离出一株产橘色色素的红曲霉菌株M。通过18S rDNA的PCR扩增及测序分析,结果表明该菌属于红曲霉属。利用高效液相色谱技术检测该红曲霉在不同培养基、是否添加EDTA等条件下桔霉素产量的变化。结果表明该菌在酵母浸膏蔗糖(YES)培养基中桔霉素的产量远高于谷氨酸葡萄糖(MSG)培养基和麦芽汁培养基,达到81.412mg/L;不同发酵时间内的桔霉素产量呈现先升高后降低的变化趋势,且添加微量的EDTA(4×10-5g/L)就能显著影响桔霉素的产生。

不同液态发酵基质对红曲霉产红曲色素及桔霉素的影响

在前期分离纯化出的10株红曲霉基础上,以18种液体培养基对10株红曲霉进行发酵培养,通过分光光度计和质谱分析仪测定各发酵液中红曲色素和桔霉素含量,分析不同地区红曲霉的红曲色素和桔霉素的代谢特性,筛选出高产红曲色素低产桔霉素的红曲霉菌株。结果表明,产红曲色素最适的液体培养基配方为葡萄糖3%、蛋白胨1%,其中新疆地区红曲霉所产红曲色素量最高,为6.81×10-2mg/m L;新疆地区红曲霉仅在18种培养基中的面筋碱性蛋白酶水解液+葡萄糖发酵液中产生了桔霉素,而红曲霉ZBX天津在所有培养基发酵液中均未产生桔霉素。

低产桔霉素红曲霉菌种的选育研究

从16株红曲霉菌种中筛选出HS-9作为诱变育种的出发菌株,选育出的HS-9-125的桔霉素、MonacolinK和色价含量分别为0.65 mg/kg、4.855 mg/g和3580 U/g,该红曲霉菌株可望用于高Monacolin K、高色价红曲的安全生产。

玉米固态发酵产红曲红色素补加营养物的优化

为了优化玉米固态发酵生产红曲红色素的主要补加营养物,采用析因试验设计确定了紫红曲霉M144固态发酵红曲红色素的主要影响因子为葡萄糖、硫酸镁和酵母膏添加量,采用Box-Behnken试验设计和响应面优化分析确定了补加营养物的最佳添加量分别为葡萄糖0.26%(w/w),硫酸镁0.43%(w/w),酵母膏0.25%(w/w),在此条件下红曲红色素红色价为2335.17U/g,色调为1.69,比未补加营养物时分别提高了55.67%和64.08%。通过对玉米固态发酵过程中补加营养物质的系统研究,提高了红曲红色素的产量和质量,可为玉米固态发酵红曲红色素的生产提供技术支持。