植物对重金属的吸收和转运途径及调控机制研究进展

论述了重金属进入植物根表皮层的途径,通过共质体与质外体水平运输的短程运输途径,以及木质部与韧皮部进行装卸的长程运输途径。共质体途径对重金属离子的转运速度慢,而质外体途径转运重金属离子的迁移阻力小、速率快。细胞壁吸附解析作用是影响重金属离子通过细胞质外体途径传入根木质部的内因,但根系皮层内凯氏带及软木脂发育,构成质外体屏障,能阻断重金属离子向木质部迁移的质外体途径。植物蒸腾作用及根压为木质部重金属离子的长距离运输提供驱动力,和植物的蒸腾速度有关。植物对重金属解毒与耐性的机理主要是诱导植物产生金属硫蛋白、胁迫植物形成植物螯合肽(PCs)和液泡对重金属的区域化作用。

微量样本泛素化蛋白质组学研究前处理方法优化

目的:对影响泛素化肽段富集的因素进行系统评估,以提升基于串联质谱的蛋白质组学方法检测微量样本泛素化修饰位点的能力,增加泛素化修饰鉴定覆盖度,进而为微量临床样本的泛素组学研究提供参考方法。方法:本研究中运用100μg HeLa全蛋白酶解肽段系统评估了在泛素化富集过程中不同抗体用量(9.375μg、15.625μg、31.25μg)、不同富集体积(300μL、600μL、1000μL)中鉴定泛素化肽段和位点的能力,以及对比冻干前加入二甲亚砜能否提升泛素化肽段鉴定能力。结果:不同富集条件对泛素化肽段的富集和鉴定效率有所不同。在不同的抗体输入量的评估中,使用15.625μg抗体珠能使富集效率达到57%且获得较理想的泛素化肽和位点鉴定量;在不同体积的对比中,使用600μL富集缓冲液能使单针检测出的泛素化肽段和位点超过10000且两次重复实验泛素化位点的定量相关系数达到0.95;冻干前加入二甲亚砜提高了疏水肽段的鉴定能力,使泛素化位点增加4.59%。结论:通过系统优化,对于100μg肽段的富集推荐使用15.625μg抗体量以及600μL富集体积,在样本冻干前加入二甲亚砜可以有效增加疏水性肽段的鉴定。

几种淀粉样短肽自组装过程的傅里叶变换红外光谱研究

对多种衍生于β-淀粉样蛋白的淀粉样短肽体系的自组装过程进行了研究。研究发现,这几种淀粉样短肽体系能够形成多种纳米结构,包括纳米管、纳米片、纳米球、和纳米纤维。利用傅里叶变换红外光谱技术对这些淀粉样短肽体系的自组装过程进行了实时跟踪,通过对多肽酰胺Ⅰ带和侧链红外吸收区域的精细分析并结合原子力显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等微观形貌表征,深入探究了这些淀粉样短肽的自组装机制。

pH/葡萄糖双响应载药胶束的制备及性能研究

针对肿瘤部位低pH值、高葡萄糖浓度的微环境特点,设计并制备了pH/葡萄糖双响应载药胶束对葡聚糖进行改性,先通过酯化反应与苯硼酸结合,再通过葡萄糖响应的苯硼酸酯键与具有二醇结构的维生素B2偶联,形成两亲性聚合物,该聚合物在水溶液中能够自组装形成胶束,包封疏水药物阿霉素.用核磁共振氢谱和动态光散射等对该载药胶束进行表征,并模拟人体生理环境进行药物体外释放行为研究.结果表明,阿霉素在载药胶束内能够持续释放,且能降低环境pH值、增大葡萄糖浓度,从而加快药物释放速度.由于肿瘤部位的pH值低于正常组织、葡萄糖浓度高于正常组织,而具有四面体结构的苯硼酸可以与顺式二醇化合物(如葡萄糖)形成稳定的苯硼酸酯,使平衡向亲水形式增加、疏水形式减少的方向改变.因此,以苯硼酸为基底的材料具有葡萄糖响应性,使其成为治疗肿瘤相关疾病的理想材料.

蛋白质检测技术在食品真伪鉴别中的应用

随着科学技术的不断进步,食品掺假现象层出不穷,不断打击消费者对食品安全的信心。目前蛋白质检测技术已广泛应用于食品检测和食品掺假鉴定等领域,并展现出巨大的发展潜力。本文综述了蛋白质检测技术在食品掺伪鉴别方面的应用,以期为蛋白质检测技术在食品鉴伪中的应用提供有益的参考。

壳聚糖-乳清蛋白双层涂膜对西红柿的保鲜研究

由于水果保鲜时间有限,常温果蔬保鲜技术落后,每年浪费和损失数量巨大,迫切需要用常温保鲜技术解决西红柿的储藏问题。可食涂膜是一种有效的常温保鲜方法,能有效缓解水果水分流失,延长保质期。以西红柿为研究对象,采用乳清蛋白单层膜和壳聚糖-乳清蛋白双层膜对其进行涂膜,测定单层乳清蛋白膜和乳清蛋白-壳聚糖双层膜对西红柿的保鲜作用,同时测定双层膜最佳成膜条件。通过感官评价确定壳聚糖浓度、温度和pH值实验条件,结果表明,最佳成膜条件壳聚糖浓度为3%,反应温度为80℃,pH为5。同时对比未涂膜、涂乳清蛋白单层膜和乳清蛋白-壳聚糖双层膜西红柿外观,双层膜具有更好的保鲜作用。

不同SDS-PAGE分离胶浓度条件下大豆贮藏蛋白亚基的分辨效果

采用SDS-PAGE浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度分别为9%、10%、11%、12%、13%的凝胶系统,探讨不同分离胶浓度条件下大豆籽粒主要贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基的分辨效果。结果表明,分离胶浓度大小对大豆贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基电泳图谱分辨率的影响非常明显。分离胶浓度为9%和10%时,7S组分亚基(α′、α和β)分辨效果较好;分离胶浓度为13%时,11S组分各亚基(A3、A4A2、A1aA1b、A5、B3、B1aB1bB2和B4)分辨效果较好。如需获得较好的7S和11组分亚基综合分辨效果,以分离胶浓度为12%的凝胶系统为佳。

大豆分离蛋白及超高压对鸡肉凝胶色泽、保水和质构的影响

添加大豆分离蛋白(SPI)与超高压处理可以改善肉制品保水性、质构等品质。本研究侧重调查0～3.0%大豆分离蛋白添加水平、300MPa压力对鸡肉糜凝胶色泽、保水和质构的影响。结果表明,对于非受压鸡肉凝胶,其亮度与持水性随SPI添加浓度的增大总体上分别呈下降与上升趋势,并在大于等于2.5%时这种下降或上升程度显著;添加高于1.5%的SPI还可显著提高凝胶的硬度、弹性、黏结性与咀嚼性。对于300MPa的受压鸡肉凝胶,在低于2.0%的SPI添加浓度下,加压处理可以显著提高受压鸡肉凝胶的硬度、弹性、黏结性和咀嚼性;且能够降低凝胶的蒸煮损失率,从而提高产品的出品率。但此超高压也会导致受压鸡肉凝胶亮度值的减小。

牛奶抗生素残留快速检测技术进展及应用现状

综述了商品化牛奶中抗生素残留的快速检测方法和试剂盒。主要的检测方法有微生物抑制法和酶联免疫法。微生物抑制法的主要试剂盒有DELVOTEST、CHARMSCIENCE、BRILLIANTBLACKREDUCTION等;以免疫法为基础的主要有β-LACTAMS、DEVLX-PRESS、BETASCREEN、CHARM ASSAY、β-STAR、CHARM-MRL、PENZYM、PARALLUX等。文章列出了这些方法的检测极限,对一些新的检测方法和方向进行了讨论,同时提出了牛奶抗生素残留快速筛选方法的问题和今后的发展方向。

大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性相关性研究

以6个具有代表性的大豆品种制备的7S球蛋白为实验对象,采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,采用差示扫描量热法分析热力学特性,采用体积排阻-凝胶色谱法分析溶液的相对分子质量及其分布,采用Zeta Plus电位及激光粒度分析仪分析流体动力学粒径及其分布并测定ξ-电位,研究大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性的关系。结果表明:大豆7S球蛋白的表面疏水性与变性温度、变性焓、ξ-电位绝对值均呈显著负相关;大豆7S球蛋白的溶解性与表面疏水性呈极显著负相关;大豆7S球蛋白溶液可溶性聚集物的平均相对分子质量、平均粒径与表面疏水性呈显著正相关。

核酸适配体在生化分离及检测领域中的研究进展

核酸适配体是一种能够特异性地识别目标物的寡聚核苷酸,可以是RNA也可以是DNA。较其他识别分子而言,适配体具有性质稳定、易合成、易标记、分子量较小和目标分子广泛等优势。目前核酸适配体主要被应用在检测、分离纯化和医疗三大领域,本文主要论述了适配体在生化分离及检测领域中的研究进展。

Alcalase水解丝素蛋白的特性

研究了Alcalase水解丝素蛋白的特性。结果表明,Alcalase水解丝素蛋白的最佳条件是:丝素蛋白质量浓度50 mg/mL,pH值9.0,温度60℃;丝素肽中主要氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和酪氨酸)的含量之和占其氨基酸总量的85%左右;水解度为17%的丝素蛋白水解产物中主要组分的相对分子质量分别为249 Da和762 Da,含量分别约占72.9%和15.5%,水解度为21%的丝素蛋白水解产物中主要组分的相对分子质量分别为209 Da和668 Da,含量分别约占84.4%和7.2%。

芘荧光探针法研究狭鳕鱼皮胶原蛋白临界聚集质量浓度

芘荧光发射光谱的第一振动带和第三振动带强度比值(I1/I3)能够反映周围微环境的极性水平,并且芘荧光光谱不受胶原蛋白内源荧光的干扰,作者用芘荧光探针考察了狭鳕鱼皮胶原蛋白在pH=7.2的磷酸缓冲液中的聚集行为。结果表明:当胶原蛋白质量浓度增大到一定程度时,芘荧光探针的I1/I3值有一突变,继续增大其质量浓度,I1/I3值趋向于定值,证明胶原蛋白在pH=7.2的磷酸缓冲液中,随质量浓度增大有明显的聚集行为。运用芘I1/I3值与胶原蛋白质量浓度对数的关系,通过作图法确定胶原蛋白的临界聚集质量浓度(CAMC)为0.138 g/L和0.48 g/L,结合不同质量浓度胶原蛋白溶液的聚集动力学曲线,故胶原蛋白的CAMC为0.48 g/L。由于胶原蛋白聚集过程在动力学上分为两个阶段,作者认为该胶原蛋白的聚集机理可能为协同成核生长机理。

大豆特征蛋白的SDS-PAGE研究

大豆蛋白作为乳品中的主要掺假蛋白,对其进行鉴别并建立相应的检测和分析方法,对于健全乳制品安全监管体制,确保消费者的合法权益具有重要的意义。该文利用SDS-PAGE方法对12种不同来源大豆均质浆液中的可溶性蛋白进行分析,并与两种商品大豆蛋白进行比较。经SDS-PAGE电泳分析,这14种大豆蛋白主要包含相对分子质量（简称分子量）为1.90×10^4～8.50×10^4的9组蛋白。每组蛋白的分子量差异较小,相对差值不大于3.3%,而且蛋白条带的相对含量基本相同。发现大豆中蛋白分子量为4.97×10^4、4.17×10^4、3.57×10^4以及1.98×10^4的可溶性蛋白组分,可作为SDS-PAGE鉴别牛乳中掺杂大豆蛋白的特征识别标记,其中4.96×10^4和3.57×10^4的最低检出限可达0.2 g/L。使用光密度仪测定,在大豆浆液蛋白含量0.1～10 g/L范围,定量工作曲线的线性关系较好,R=0.998 1,应用于0.60～8.0 g/L范围测量,相对误差为0.63%～13.3%。

酪蛋白酶解产物阿片样活性的细胞生物学鉴定

以富含δ 阿片受体的NG1 0 8-1 5杂交瘤细胞株 ,在有和无阿片特异性拮抗剂纳洛酮存在的情况下 ,与酪蛋白及其胃蛋白酶酶解消化液共同孵育。其细胞抽提液用 1 2 5I标记cAMP试剂盒进行放免测定 ,观察对细胞腺苷酸环化酶活性的影响。结果证明 ,酪蛋白经胃蛋白酶处理后有阿片样活性物质释放。

用谷朊粉溶涨指数法测定谷朊粉品质

开发了一种新的谷朊粉品质检测方法。对小麦谷蛋白溶涨指数法的参数进行调整,在9种不同离心力条件下,测定从16个小麦品种中分离出的谷朊粉的溶涨指数,根据谷朊粉溶涨指数、面筋吸水率及面粉的蛋白质组分含量之间的关系,提出了用谷朊粉溶涨指数法测定谷朊粉品质的步骤及评价标准。结果认为:加入0.9mL蒸馏水水化10min,再加入0.9mL0.3%十二烷基磺酸钠(SDS)-乳酸溶液混合30min,最后用5000×g离心力进行离心是谷朊粉品质测定的最佳技术参数,在此条件下的谷朊粉溶涨指数与面筋吸水率、小麦谷蛋白溶涨指数呈显著正相关(r=0.541,0.547;P<0.05),与面筋指数、不溶性谷蛋白含量呈极显著正相关(r=0.608,0.589;P<0.01),与单体蛋白含量呈显著负相关(r=-0.573;P<0.05)。与测定谷朊粉品质的国家标准方法吸水率法相比,谷朊粉溶涨指数法能快速、稳定地反应小麦谷朊粉品质差异。

关于几种蛋白氧化后羰基含量的对比研究

羰基含量的测定一直是反应蛋白质氧化程度的重要理化指标,近年来,蛋白中的羰基含量往往采用较简便的DNPH比色法进行检测,但在实际测定过程中存在着蛋白含量不好精确定量、不同种类蛋白紫外吸收波长不统一等问题。且以往研究均是针对单一蛋白的氧化程度进行,鲜有系统性的针对不同种类的蛋白质进行氧化程度与羰基含量相关性研究的报道。针对此问题分别对牛肌原纤维蛋白、牛血清白蛋白以及豌豆蛋白进行了一系列氧化实验及其羰基含量测定,并且在蛋白羰基含量测定方面优化了DNPH比色法,使其可操作性更强,数据稳定性更高。

金属鳌合亲和层析填料的制备及其在重组六聚组氨酸融合蛋白中的应用

目的:制备Ni2+螯合金属层析填料,分离HSP65-MUC1-histag基因工程蛋白质。方法:应用Sepharose4B作为载体,亚氨基二乙酸(IDA)为起始材料合成金属鳌合层析填料,同时应用5-Br-PADAP一阶导数光度法对Ni2+的吸收峰进行鉴定和定量。最后应用制备的Ni2+-Sepharose4B纯化HSP65-MUC1-histag。结果:Ni2+最佳吸收峰为574nm,凝胶中螯合的Ni2+为5.2mg.g-1,Ni2+-Sepharose4B金属螯合亲和层析纯化重组蛋白纯度≥98%,回收率≥90%。结论:制备了能应用于蛋白质亲和层析的高效金属鳌合层析填料。

预测蛋白质三维结构的拟物算法

研究了生物信息学中的一个重要问题,即蛋白质结构预测.并受物理世界的物体间相互作用的规律的启发,给出了该问题一个三维欧氏空间连续模型,它比离散模型有一定的优越性,使计算很自然地利用到了一个客观存在的"天然导引",这个"天然导引"即是疏水氨基酸之间的引力,然后根据这个连续模型找到了相应的拟物算法,最后还给出了实验结果,结果也证明了这个拟物算法在计算速度方面的优越性.

肺炎链球菌蛋白质组双向电泳技术的建立及优化

为了建立适合肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)蛋白质组的双向电泳技术,对蛋白样品提取、裂解、上样量、IEF和银染等关键步骤进行了优化,探索出一套有效的肺炎链球菌蛋白分析的双向电泳方法,即以裂解液[15 mmol/L Tris-HCl、7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%(m/v)CHAPS,使用前现加2%(v/v)IPG缓冲液、1%(m/v)二硫苏糖醇(DTT)和1%(m/v)蛋白酶抑制剂混合物]结合反复冻融和超声裂解菌体的方法来提取蛋白质样品,按80μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得蛋白分辨率高、重复性较好的双向电泳图谱。