4种食源性致病菌多重PCR检测体系的建立及其在乳品检测中的应用

食源性致病菌是通过食物进入人体引起食物中毒和诱发疾病的有害微生物,严重威胁着人类健康和环境安全,为了预防和控制食源性疾病的发生,有效对策之一是对食品中的病原微生物进行安全检测。本研究采用一种多重聚合酶链式反应法(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)快速检测乳品中4种食源性致病菌,结果表明,选取单核细胞增生李斯特氏菌prfA基因、蜡样芽胞杆菌gyrB基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因、大肠埃希氏菌O157∶H7 stx2A基因的保守序列设计4对引物,在优化的PCR反应体系和退火温度58℃下,PCR扩增表现出良好的特异性,分别扩增出274、221、482、108 bp条带,无非特异性扩增,4种病原菌检出限达到10~100 CFU/mL;对17份人工染菌牛奶样品进行检测,检出结果与国标培养法完全一致。该研究结果为快速、高效、准确地检测出乳品中单核细胞增生李斯特氏菌、蜡样芽胞杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7提供了一种实用方法,也为其他食源性致病菌的快速检测提供了思路。

电化学检测技术与生物识别元件联用在食品安全检测中的应用进展

食品安全与国民健康息息相关,如何实现对食品中有害物质的精准及快速检出仍然是科研工作者研究的热点问题。电化学传感技术由于其检测快速、灵敏度高及化学稳定性良好在食品检测领域被越来越广泛地应用。本文对电化学检测与多种生物识别元件的联用技术及其对食品中有害物质的检测进行了综述,并对其存在的问题和进一步的发展进行了探讨。

RP/NP-HPLC法检测婴幼儿配方食品中维生素A和维生素E研究

优化婴幼儿配方食品中维生素A和维生素E含量检测的皂化-RPHPLC法和酶解-NPHPLC法,并对检验结果进行对比研究。结果表明:将婴幼儿配方食品样本复溶后再检测其中的维生素A和维生素E含量,提高了检测结果代表性,有利于批量化检测;乙酸乙酯-正己烷溶液(3∶2,v/v)为提取剂时,提取效果好且环保。维生素A和维生素E含量的检测结果分别在各自对应的浓度范围内呈良好线性关系,相关系数R2≥0.999,皂化-RPHPLC法中维生素A和维生素E定量限在27.3~142μg/100g之间,酶解-NPHPLC法中维生素A和维生素E定量限在10.8~112μg/100g之间,酶解-NPHPLC法灵敏度更高。在低中高三个添加水平下,维生素A加标回收率在82.2%~96.8%之间,RSD在1.0%~4.6%之间;维生素E加标回收率在83.5%~100.6%之间,RSD在1.9%~9.7%之间。皂化-RPHPLC法和酶解-NPHPLC法检验结果无显著性差异。优化后的检测方法简单高效,样品代表性好。

婴幼儿配方粉中反式脂肪酸在总脂肪酸中占比测定研究

本文建立了气相色谱测定婴幼儿配方粉中反式脂肪酸在总脂肪酸中所占比例的分析方法。样品经乙酰氯-甲醇法甲酯化,离心,取上清液经毛细管色谱柱分离后,采用气相色谱-氢火焰离子化检测器检测,面积归一化法定量。结果表明,在优化的色谱条件下,采用实际样品对检测方法进行验证,12批次婴幼儿配方粉样品平行测定6次,相对标准偏差在1.95%~5.13%之间,实际样品测定结果符合相关标准要求。方法结果准确、重复性好、操作简单,适用于婴幼儿配方粉中反式脂肪酸占总脂肪酸的占比的测定。

2023年湖南省市售婴幼儿配方乳粉中丙烯酰胺污染状况及暴露风险初步评估

目的:调查2023年湖南省市售婴幼儿配方乳粉中丙烯酰胺污染状况,并对0~36月龄婴幼儿经乳粉摄入丙烯酰胺的暴露风险进行评估。方法:随机采集湖南省市售婴幼儿配方乳粉23份,采用稳定同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定样品中丙烯酰胺含量,结合婴幼儿配方乳粉推荐消费量,估算0~36月龄婴幼儿丙烯酰胺暴露量。结果:23份样品中丙烯酰胺的检出率为60.9%(检出限为0.3μg·kg^(-1)),均值2.4±2.4μg·kg^(-1),各月龄婴幼儿每日经婴幼儿配方乳粉摄入的丙烯酰胺为0.021~0.025μg·kg^(-1)bw,其暴露限值均高于10000。结论:2023年湖南省市售婴幼儿配方乳粉中丙烯酰胺污染较轻,对婴幼儿健康影响有限。

改良碱水解法测定特殊医学用途婴儿配方奶粉中脂肪含量

文章选定最佳水浴加热时间、混合醚使用量和抽提次数,对GB 5009.6—2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》中碱水解法进行改良。通过质控样品测定、加标回收试验、精密度试验和实际样品检测,探讨改良碱水解法测定特殊医学用途婴儿配方奶粉中脂肪适用性。结果表明,质控样脂肪含量理论值为22.0 g/100g,测定值为21.9 g/100g,测定结果在允许误差范围内,试验结果可靠;特殊医学用途婴儿配方奶粉和质控样加标回收率为95.9%~98.6%,相对标准偏差为1.10%~1.16%,改良碱水解法准确度高,精密度好;23批次市售特殊医学用途婴儿配方奶粉的脂肪含量均符合国家标准,改良碱水解法适合检测特殊医学用途婴儿配方奶粉中脂肪。

高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯

建立了婴幼儿配方乳粉中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(1,3-dioleyl-2-palmitoyl-glycerol,OPO)的检测方法。样品经氨水水解,用有机溶剂提取脂肪,氨基固相萃取柱净化,使用银离子色谱柱分离,以0.55%乙腈-正己烷为流动相洗脱,用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测。该方法实现了OPO和1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯的基线分离,可对OPO进行准确定性定量分析;方法在25~500μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,决定系数R2=0.999 6,检出限和定量限分别为0.30、0.90 g/kg,加标含量为1~96 g/kg的范围内,OPO的平均回收率在97.1%~104.2%之间,相对标准偏差为1.2%~2.9%,精密度和正确度等方法学指标均符合要求;还通过了实验室间的协同性验证。调查分析了我国39份市售OPO强化婴幼儿配方奶粉,OPO含量仅为标签标示量的28.4%~59.7%,这主要是因为检测方法不一致。

乳及乳制品中抗寄生虫药检测方法研究进展

抗寄生虫药是牛羊等产奶动物养殖过程中必不可少的投入品。这些药物经牛羊吸收代谢后,容易残留在牛羊奶及其他动物组织中,给消费者造成安全隐患。我国食品安全国家标准规定了牛羊奶中21种抗寄生虫药的最大残留限量值,科研工作者们也建立了多种检测方法。本文对2018—2023年牛羊奶中抗寄生虫药的检测方法进行综述,简要对比电化学传感器法、表面增强拉曼光谱法、胶体金免疫试纸条法、液相色谱-质谱法、液相色谱-高分辨质谱法的优缺点,并对抗寄生虫药检测方法的发展方向进行了讨论和展望,为乳及乳制品中抗寄生虫药的定性筛查和定量检测提供技术参考。

乳制品中有害微生物检测新技术研究进展

乳及乳制品因营养丰富而成为沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、克罗诺杆菌(Cronobacter)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)等多种有害微生物的天然培养基,近年来,乳制品安全事件屡见不鲜,已成为食品安全研究热点。传统检测技术因检测周期长且准确率低,无法满足乳制品安全检测高通量、时间短的需求。随着分子生物学和免疫学的发展,重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification,RAA)技术、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术、纳米探针技术和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)发光技术等因灵敏度高、检测时间短被逐渐应用于乳品安全检测。鉴于此,本文结合国内外相关研究,从乳制品安全角度出发,重点介绍了上述技术在乳制品安全检测中的研究现状,并进行了分析讨论,以期对未来乳制品有害微生物快速检测技术的发展提供思路。

基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应法的A1/A2牛奶鉴别试剂盒的开发及应用

目的基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术,开发A1A2牛奶鉴别试剂盒,并对市场上A2牛奶产品进行检测应用,实现对A2牛奶的鉴别检测。方法本研究先利用D-loop基因片段设计了牛内参基因引物探针组(标记FAM荧光)。随后,在β-酪蛋白基因突变位点分别设计了A1基因引物探针组和A2基因引物探针组(均标记VIC荧光)。基于ARMS-PCR技术构建了双通道ARMS-PCR反应体系与程序,进而成功开发了A1A2牛奶实时荧光ARMS-PCR试剂盒。为进一步验证试剂盒性能,将其应用于市场上A2牛奶的检测,并将检测结果与DNA测序法结果对比。结果本试剂盒特异性强,检测DNA灵敏度为0.1 ng/L;10份市售实际样品的应用检测结果与测序结果一致。结论本试剂盒特异性好,灵敏度高、准度度高,适用于A2牛奶的真实性鉴别。

我国原奶及乳制品质量安全管理措施

新时代背景下,营养补充和食品健康问题受到人们的高度重视。不断提高了对原奶和乳制品的需求,通常原奶和乳制品的应用人群都是婴儿和老人。尤其是婴儿对乳制品的需求最大。原奶和乳制品的质量与下一代的成长息息相关。但近年,原奶和乳制品的安全事故被媒体频频曝光,严重影响了乳制品市场的发展。该文主要对我国原奶及乳制品质量安全管理措施进行了探讨,以供参考。

基于近红外光谱模型转移的牛奶蛋白检测方法研究

目的研究基于近红外光谱模型转移的牛奶蛋白检测方法。方法分别采用实验室与在线检测近红外光谱仪采集生产过程中原料奶样品的近红外光谱,研究斜率截距法(slope/bias,S/B)、分段直接标准化(piecewise direct standardization,PDS)算法、Shenk’s方法在不同仪器测量光谱之间模型转移应用,优化模型参数,提高实验室仪器建立的校正模型应用于在线光谱仪器的预测精度。结果经过Shenk’s算法转移,主从机的光谱平均差异降低为0.0075,光谱校正率达到98.95%。利用模型转移方法与偏最小二乘模型结合,将实验室分析光谱仪建立的模型用于生产在线光谱仪测量光谱预测,显著提高了牛奶中蛋白质含量预测准确度,不同仪器之间模型预测相对均方根误差从5.52%下降到2.03%。结论本研究的方法实现了实验室分析与在线检测仪器测量光谱及定量分析模型转移共享,为近红外在线检测的智能化改进提供了基础。

基于电子鼻和一维拉普拉斯卷积核的奶粉基粉产地鉴别

奶粉基粉是配方奶粉的基础原材料,其产地影响到终端乳制品的品质。本文提出了一种电子鼻技术与一维拉普拉斯卷积核相结合的基粉奶源地判别方法。通过电子鼻采集样本数据,经过时域信号对齐,尝试使用不同阶数的一维拉普拉斯卷积核进行特征提取,并对比了统计数字特征、快速傅里叶变换、离散余弦变换等其他特征提取方法,最后使用偏最小二乘及可视化进行可分性分析。实验结果发现快速傅里叶变换、离散余弦变换、二阶的一维拉普拉斯卷积核相对于原始特征均有效提升了可分性,偏最小二乘的R2效应量从0.61分别提升到0.95、0.96和1.00。一维拉普拉斯卷积核特征提取方法能够准确区分产自国内和国外(澳大利亚)的基粉,在案例研究中取得了最优判别效果,说明其能够有效提取到电子鼻各通道序列信号的时间响应特征。该方法能够完成中澳两国奶粉基粉样本的区分工作,为快速鉴定奶粉基粉来源提供技术支撑。

乳及乳制品中真菌毒素检测技术研究进展

乳及乳制品在人类的营养保障中有重要作用,真菌毒素在霉变农作物及畜牧饲料中广泛存在,通过血-乳屏障进入动物乳汁进而传入食物链,乳制品在生产加工、运输及储存过程中再次存在真菌毒素污染风险,因此对乳及乳制品中真菌毒素检测分析有利于确保其安全性和真实性。文章围绕乳及乳制品中真菌毒素概况、前处理技术、测定方法等进行综述,比较其方法优缺点,展望真菌毒素的检测技术与趋势,探讨检测新技术开发及应用,为乳及乳制品质量把控提供技术依据。

人乳铁蛋白胶体金免疫层析检测试剂卡的研制

文章建立一种快速定量检测人乳铁蛋白的方法。该方法基于胶体金免疫层析技术,通过对标记和包被条件等工艺进行优化筛选,研制一种双抗体夹心法检测人乳中乳铁蛋白的检测试剂卡,并对该试剂卡的性能进行了评估。结果表明,空白限可低至0.014 mg/mL,与高效液相色谱法对比测试人乳的样本检测相关系数为0.92,与牛乳铁蛋白、酪蛋白和β-乳球蛋白均无交叉反应,为人乳铁蛋白的检测提供了一种快速、简便、易于操作的方法。

复原乳检测方法研究进展

近年来,我国乳制品销售量稳步上升,国内奶类产量快速增长,但生乳仍供应不足,复原乳依然存在。严格复原乳监管,对提高我国乳及乳制品的品质有重要意义。文章主要介绍了国内外复原乳的重要检测技术,包括色谱法(高效液相色谱法、超高效液相色谱法)、液相色谱质谱联用、光谱法(近红外光谱法、荧光光谱法、紫外分光光度法)及其他检测方法的研究进展,并讨论了各类方法的基本原理、优缺点、检出限,以期为复原乳检测方法的选择提供参考。

人乳中叶黄素及叶黄素酯的测定

人乳中的叶黄素对婴幼儿视力和认知功能的发育起着至关重要的作用。该研究利用超高效液相色谱串联质谱对不同分娩年龄和泌乳阶段的人乳中叶黄素及叶黄素酯的组成和含量进行测定,最终实现定性定量分析人乳中的叶黄素和16种叶黄素酯。研究发现人乳中叶黄素与叶黄素酯的含量呈较强的正相关关系(皮尔逊相关系数为0.721),适龄组(分娩年龄<35岁)乳汁中叶黄素和叶黄素酯的含量与高龄组(分娩年龄≥35岁)相近,两者之间的差异并不显著(P>0.05),可知分娩年龄对人乳中叶黄素及叶黄素酯含量的影响较小。叶黄素与叶黄素酯的含量均随着泌乳期的延长而逐渐降低,初乳中两者的含量均最高,其中叶黄素的平均含量达183.78μg/L,叶黄素酯的平均含量达45.89μg/L。分别从初乳、过渡乳、成熟乳中检出了10、14、6种叶黄素酯,其中叶黄素棕榈酸-硬脂酸酯的含量在整个泌乳期中最高,叶黄素二硬脂酸酯的含量次之。研究结果可为人乳成分的研究及婴配食品的研发提供一定的实验和理论基础。

基于纳米抗体建立icELISA检测乳制品中黄曲霉毒素M1

纳米抗体(nanobody,Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势,已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况,以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对象,评估其理化性质并建立间接竞争酶联免疫吸附测定法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。优化反应体系中封闭方法、甲醇溶液、pH值和离子强度等参数后,建立竞争抑制标准曲线,并进行方法学验证特异性和准确性。结果表明,Nb-M6具有良好的亲和力和热稳定性;Nb-icELISA的检测限(limit of detection,LOD)为0.111 ng/mL,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为1.498 ng/mL,乳制品加标回收率为89.8%~104.1%,与高效液相色谱法的检测结果趋于一致。该方法操作简单、便捷,可应用于乳制品中AFM1的初步批量筛查。

牛奶罐装运输全过程质量控制研究

文章探讨了牛奶从奶牛场到加工厂的全程质量检测过程,重点分析各个环节的关键检测技术及其重要性。研究表明,从奶牛场开始,通过监控饲养环境、饲料质量和挤奶过程的卫生条件,确保了牛奶初期质量。挤奶后,通过初步冷却和细菌、农药残留检测,进一步保障牛奶安全。罐装运输过程需保持适当温度,并通过实时监控和定期抽样检测防止牛奶变质。到达加工厂后,牛奶需进行全面检测,包括微生物检测、理化检测和感官评定,确保最终产品符合食品安全标准。文章还讨论了牛奶质量安全检测中的挑战,如样品前处理的复杂性、检测设备的灵敏度与准确性以及质量安全管理体系与标准,并提出了基于物联网、区块链和人工智能技术的改进措施。

我国驼乳品质产地差异及相关标准研究进展

近年来,驼乳产业发展迅速,但质量安全、产品掺伪掺假、竞争力低等产业问题也随之出现,因此完善相关标准,对驼乳产业发展具有重要意义。本文从产地环境对驼乳品质影响的角度出发,梳理分析驼乳品质形成因素及差异,对我国现行的驼乳相关标准的现状进行了对比总结,根据驼乳产业发展现状,针对现存不足提出建议措施。本文对新疆和内蒙古驼乳品质进行对比分析发现,驼乳中脂肪、氨基酸、蛋白质和维生素等成分在不同环境、不同季节、不同气候和不同种品种间存在较大差异;现行生驼乳、巴氏杀菌驼乳和灭菌驼乳相关标准较为相似,未充分考虑产地环境差异和地方驼乳产业发展情况;根据驼乳产业发展现状,建议完善驼乳全产业链标准,并制定国家标准和完善驼乳品质及分级标准。期望本文可为驼乳标准完善和制定提供参考,为驼乳产业高质量发展提供科学依据。