北京健康人群AGEs水平测定及其增龄性变化的研究

目的 调查北京地区各年龄段健康人群血清晚期糖基化终末产物（AGEs）水平,分析其与增龄的相关性,比较其与部分老年病人群血清AGEs水平的差异.方法 用F-3000荧光分光光度计测定各年龄段健康人群血清样本荧光值.结果 30～39、40～49、50～59及60～69岁年龄组血清AGEs水平均显著高于20～29岁年龄组（P＜0.05）,在30～69岁区间血清AGEs水平与增龄呈显著正相关（r=0.996,P＜0.000 5）,糖尿病（DM）人群血清AGEs水平显著高于同年龄段健康人群（P＜0.05）.结论 血清AGEs水平可作为北京地区30岁以上健康人群的年龄指征及DM人群初筛的生物学标志.

AGEs及其受体在糖尿病周围神经病变中的作用机制及药物干预研究进展

糖尿病周围神经病变（Diabetic peripheral neuropathy,DPN）是糖尿病最常见的慢性并发症之一,也是引起糖尿病患者致残的最常见原因之一,其发病率与患者血糖控制情况及病程长短有关。然而其发病机制尚未完全阐明,越来越多的研究表明,晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGE）与糖尿病慢性并发症关系密切。本文就AGEs及其受体在糖尿病周围神经病变中的作用及药物干预现状做一综述。

糖网Ⅰ号对老年糖尿病性视网膜病变患者血清AGEs、血脂、视功能等指标的影响

目的目的:研究糖网Ⅰ号治疗糖尿病性视网膜病变(DR)的疗效。方法确诊DR的患者60例(120只眼)随机对照分组,分别接受中药糖网Ⅰ号和导生明治疗,对治疗前后的血清AGEs水平、脂质代谢各项指标以及视功能情况等进行检测分析。结果糖网I号对于降低患者血清蛋白非酶糖基化终末产物(AGEs)水平,降低血脂等方面明显优于导升明对照组(P<0.05)。结论糖网Ⅰ号治疗DR的疗效优于导升明,可能是由于降低血清AGEs水平及血脂途径改善了眼部微循环障碍。

AGEs平台筛选中药及中药有效成分

目的 寻找抑制AGEs形成的中药及中药有效成分。方法 通过分析现有国内报道抑制AGEs形成的化合物的结构特点和作用机制 ,利用体外AGEs形成的模型 ,进行中药及中药有效成分的筛选。结果 川芎素、复方丹参注射液等中药及中药有效成分对体外AGEs形成有很好的抑制作用 ,大蒜素、维生素C等对体外AGEs的形成未见抑制作用 ,而维生素B1、维生素B6、维生素B12 对体外AGEs的形成有一定的促进作用。结论 具有能和AGEs的前体羰基化合物反应的中药及中药有效成分可以抑制体外AGEs的形成。

采用牛血清白蛋白/果糖体系研究荧光性AGEs生成的动力学

为分析荧光性晚期糖基化末端产物(advanced glycation end products,AGEs)生成的动力学,采用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)/果糖模拟反应体系,荧光光谱法测定荧光强度来衡量荧光性AGEs生成量,分别考察了不同BSA质量浓度、果糖浓度、温度及p H值对荧光性AGEs生成量的影响,探究荧光性AGEs生成和底物消耗的反应动力学。结果表明:随着BSA质量浓度、果糖浓度、温度及p H值的增加,荧光性AGEs生成量均呈现增加的趋势。体系反应24 min后,果糖和氨基酸浓度分别减少了1.25×10-2、1.92×10-4 mol/L,果糖消耗量要高于氨基酸消耗量。在此基础上,运用最小二乘法拟合,得出在各反应条件下,荧光性AGEs的生成符合0级反应动力学,最大速率常数为31.57 AU/min,反应活化能为70.58 k J/mol;底物消耗符合1级反应动力学。

溶菌酶及其晚期糖基化终产物(AGEs)与糖尿病并发症的研究

溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶,其广泛分布于自然界各种生物体内,是一种无毒、无害、安全性很高的蛋白酶,被广泛应用于食品、饲料、医药等行业。本文重点介绍其在医药方面的应用,主要介绍溶菌酶如何通过去除晚期糖基化终产物来达到治疗糖尿病并发症效果的研究进展。

基于视网膜Müller细胞的地黄调节AGEs干预下HIF-1α表达的谱效关系研究

目的建立不同来源地黄的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱并研究其与糖基化终末产物(AGEs)干预下视网膜Müller细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达之间的谱效关系,初步阐明地黄防治糖尿病性视网膜病变(DR)的药效物质。方法采用HPLC法建立10批不同来源地黄指纹图谱;采用ELISA法测定地黄对AGEs干预下视网膜Müller细胞中HIF-1α表达的影响;采用偏最小二乘法分析特征峰峰面积与药效值之间的谱效关系。结果 10批样品HPLC指纹图谱共标定了17个特征共有峰,其中4、14、15号峰分别为梓醇、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷。ELISA结果显示10批样品对AGEs干预下视网膜Müller细胞中HIF-1α的表达均有不同程度的抑制作用。偏最小二乘法分析结果显示,肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷及4个尚未确定结构的成分(峰13、5、16、17)可能是地黄防治DR的药效物质。结论谱效关系为初步阐明地黄防治DR药效物质提供了一个有效途径。

梓醇抑制Galectin-3和CD146互作改善AGEs致肝窦内皮细胞的损伤作用

【目的】探讨梓醇通过影响半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和CD146的相互作用改善晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)导致大鼠肝窦内皮细胞(rat liver sinusoidal endothelial cells,RLSECs)的炎性损伤作用。【方法】用不同浓度(0、0.1、1、10μmol/L)梓醇分别孵育RLSECs 48 h后,采用CCK-8法观察细胞增殖情况。用10μmol/L梓醇孵育RLSECs 0、12、24、48、96 h,同上法观察细胞增殖情况。设Control(空白对照组)、AGEs(AGEs处理)、Cat1(1μmol/L梓醇)、Cat10(10μmol/L梓醇)和阳性对照GB1107组(1μmol/L GB1107),Cat1、Cat10和GB1107组加入相应含量的药物培养基孵育30 min后,除Control组外其他组均在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,观察以上各组的RLSECs形态变化,采用乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法检测细胞的损伤程度,采用ELISA法观察各组单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的分泌量。将巨噬细胞RAW264.7种板,同上法分组并给药,48 h后采用Griess法观察各组一氧化氮(nitric oxide,NO)向细胞上清液的释放量。将RAW264.7细胞种于Transwell小室,RLSECs种于孔板底部,设Control、AGEs、Cat10、Cat10+LV-Galectin-3-GFP、Cat10+LV-Galectin-3-shRNA组,后两组先转染慢病毒48 h,再分别给药30 min后,除Control组外在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,48 h后用结晶紫法观察巨噬细胞的透膜细胞数量。将Control、AGEs、Cat10、GB1107组的RLSECs孵育药物48 h后,采用免疫荧光法观察Galectin-3和CD146的共定位情况。将Control、AGEs和Cat10组的蛋白样品通过Western blotting和免疫共沉淀(Co-IP)法检测Galectin-3和CD146的相互作用以及各自的表达量。【结果】与Control组相比,Cat0.1组RLSECs增殖率无显著差异(P>0.05),Cat1和Cat10组RLSECs增殖率显著升高(P<0.05);与孵育0 h组相比,10μmol/L梓醇孵育48 h组RLSECs增殖率显著上升(P<0.05)。因此,后续试验选用10μmol/L梓醇孵育48 h为最适试验条件。与AGEs组相比,Cat1和Cat10组改善AGEs导致的细胞损伤,RLSECs上清液LDH活力及MCP-1、ICAM-1的释放量显著降低(P<0.05)。与AGEs组相比,梓醇组抑制巨噬细胞RAW264.7的激活作用,细胞NO的释放量显著降低(P<0.05)。通过慢病毒载体过表达和敲低RLSECs和RAW264.7的Galectin-3,证明了梓醇通过抑制该分子表达可显著改善巨噬细胞的浸润作用(P<0.05)。与AGEs组相比,Cat10组Galectin-3与CD146的结合被显著抑制(P<0.05),且不影响两种分子的各自表达量(P>0.05)。【结论】梓醇通过促进AGEs致Galectin-3和CD146分子复合物的解偶联作用,改善AGEs致肝窦血管内皮细胞的损伤以及促炎因子的释放,降低巨噬细胞的激活和NO的分泌,发挥肝窦血管内皮的保护作用,通过离体试验初步证明了其发挥改善糖尿病AGEs沉积造成的肝损伤的作用机制。

肾白宁对早期糖尿病肾病大鼠模型蛋白非酶糖化终末产物(AGEs)的影响

目的:通过复方中药肾白宁对早期糖尿病肾病大鼠模型进行干预,观察其对肾脏组织中AGEs生成的影响,探讨肾白宁治疗糖尿病肾病的疗效及作用机理。方法:将实验动物随机分为假手术组,模型组,肾白宁治疗组,洛汀新对照组。采用链脲菌素(STZ)法复制DN大鼠模型[1,2],药物干预后以免疫组织化学法检测肾组织中AGEs的生成。结果与结论:中药肾白宁具有滋补肝肾,益气固精,祛瘀化浊,解毒之功,对早期DN大鼠模型肾组织中AGEs生成有明显的抑制作用。

锌离子络合法快速分离纯化荞麦壳黄酮及其抗AGEs活性

研究锌离子络合法快速分离纯化荞麦壳黄酮工艺,并评价纯化组分对晚期糖基化终末产物(AGEs)生成的抑制活性。根据络合转化率和络合强度,将荞麦壳黄酮提取物(BHF)经过二次锌离子络合,分别获得荞麦壳黄酮中间提取物(IBHF)和荞麦壳高黄酮组分(HBHF)。采用Box-Behnken响应曲面分析法优化获得IBHF组分的最佳工艺参数:乙酸锌与样品质量比2∶1,乙醇体积分数30%,氨水体积分数0.05%,室温反应10 min。在该条件下络合转化率为97.44%。IBHF组分经过二次锌离子络合,分离获得HBHF组分,其总黄酮含量为57.08 g RE/100 g(三氯化铝-乙酸盐比色法),其纯度比分离纯化前提高了6.64倍。高效液相色谱分析(HPLC)表明,HBHF组分含有异荭草素、牡荆素、异牡荆素、芦丁、山奈酚-3-O芸香糖苷5种主要黄酮,其中芦丁占比62.34%。HBHF组分表现出良好的抗AGEs活性,在质量浓度为200μg/mL时,Glu-BSA体系的中的AGEs抑制率为63.16%,MGO-BSA体系中的AGEs抑制率为42.98%,抑制率均显著优于阳性对照氨基胍。

莲原花青素对华夫饼AGEs的抑制及感官品质的影响

本文分析添加莲原花青素(lotus seedpod procyanidins,LSPC)对华夫饼晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的抑制及感官品质的影响。以面粉、鸡蛋等为原料,添加不同浓度LSPC(0、0.5、1、2、4 mg/g)并制备华夫饼(170℃,20 min),通过测量华夫饼中AGEs含量、羧甲基赖氨酸含量(N^(ε)-(Carboxymethyl)lysine,CML)、抗氧化性等指标检测LSPC对华夫饼中AGEs的抑制作用;通过色度,质构,气质,电子鼻等方法检测LSPC对华夫饼感官品质的影响。结果表明,华夫饼中AGEs含量和CML含量随LSPC浓度的增加而显著减少(P<0.05),总酚含量随LSPC浓度的增加而显著增加(P<0.05);华夫饼抗氧化性能随LSPC浓度的增加而显著增加(P<0.05);LSPC的添加也影响了华夫饼的焙烤品质,华夫饼的硬度显著下降(P<0.05),弹性和凝聚性显著性增强(P<0.05);华夫饼的色泽显著加深(P<0.05);风味随莲原花青素的添加显著增加(P<0.05)。本研究表明莲原花青素对华夫饼中AGEs有抑制作用,感官品质上使华夫饼口感更绵软可口,同时本文为深入研究莲原花青素对食品热加工过程中AGEs的抑制作用及感官品质的影响提供理论支撑。

How to Predict AGEs Accumulation Slowdown Effect of a Cosmetic Ingredient? Two Steps <i>In-Vitro</i>System for Evaluating the Anti-AGE Impact of a New Blend

Advanced Glycation End-Products (AGEs), play a crucial part in advancing the process of cellular skin aging and its link to chronological age was re-assessed. AGEs accumulation alters cell structure and function of most types of skin cells, affecting skin’s mechanical and physiological properties, following the molecular transformations. Slowdown AGEs accumulation rate in skin, although a potent anti-aging strategy, is difficult and tricky. The lack of working methods for In-Vitro and In-Vitro measuring AGEs level complicates the evaluation and prediction of active ingredients’ ability to affect cellular AGEs accumulation. A two-step In-Vitro systematic screening method is proposed and three different cosmetic active ingredients were selected for its demonstration, using BSA-Glucose and Collagen-Glucose predicting models. Candidates’ effects on AGEs accumulation were evaluated as standalone, and when formulated in a blend. Additionally, the potency of non-invasive auto-fluorescence in-vivo measurement to detect AGEs levels among subjects of different ages was demonstrated. The results are presented in this work and the potential contribution of the proposed system to assist the desired inhibition of AGEs accumulation in skin is discussed.

热加工食品中晚期糖基化终末产物和5-羟甲基糠醛的形成、检测与控制

食品加工过程中的美拉德反应有助于形成一些热诱导毒性产物,包括晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)和5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)。食源性AGEs在体内的积累和循环与糖尿病并发症的发生有关,同时可能诱发氧化应激、炎症和动脉粥样硬化。5-HMF的代谢物5-磺基氧甲基糠醛(5-sulfooxymethylfurfural,5-SMF)有潜在基因毒性和致癌性。如何控制热加工食品中这些危害物的形成已成为食品行业的关注焦点。本文从美拉德反应和焦糖化反应两条途径探究了AGEs和5-HMF的形成机理,并对近5年二者的检测方法进行了综述,阐述了各类方法的优缺点,以期为建立二者的通用检测方法奠定基础。在此基础上,从削减前体物质的供给、阻断中间体的转化,以及去除已经生成的AGEs和5-HMF这3个方面着手,综述了近年来相应所采用的抑制策略,以期为AGEs和5-HMF在食品中的控制及热加工食品质量与安全管理提供理论依据。

乳酸菌发酵对花生衣抗糖化缓解皮肤衰老功能的影响

糖化会导致晚期糖基化终末产物(AGEs)形成并在体内积累,引起皮肤衰老。体外实验表明花生衣具有抗糖化作用,乳酸菌发酵能否提升花生衣的抗糖能力尚不清楚。本研究采用体外AGEs生成模型和丙酮醛损伤皮肤成纤维细胞(HSF)模型,从10株乳酸菌中筛出植物乳植杆菌CCFM1354,该菌具有很好的抑制AGEs生成能力,能缓解HSF细胞的糖化损伤。高糖细胞模型实验发现,CCFM1354发酵花生衣能显著降低HSF细胞中BAX和NFKB1的mRNA的相对表达量;D-半乳糖诱导的衰老小鼠实验结果表明,口服植物乳植杆菌CCFM1354发酵花生衣能显著降低小鼠血清AGEs含量,提高小鼠皮肤弹性,改善小鼠皮肤萎缩状况,且效果优于未发酵花生衣。由此可见,植物乳植杆菌CCFM1354发酵能显著提升花生衣的抗糖化功能,缓解皮肤衰老。

基于热糖化法体外生化抗糖化评价体系的优化与应用

面对日益增长的抗糖化原料筛选需求,现有的体外生化抗糖化评价体系、抗糖化细胞模型和人体功效评价方法因周期长或成本高等问题,不适用于原料的大规模初筛。实验周期短、成本低、操作简便、重复性好用于抗糖化原料初步筛选的评价方法亟待确立。基于热糖化法对体外生化抗糖化评价体系进行了优化,通过检测阿魏酸、原花青素、芦丁、L-抗坏血酸等8种原料进行了抑制荧光性AGEs(Advanced glycation end products)、降解荧光性AGEs原料筛选适用性探究。并将筛选结果与已发表研究、检测AGEs降解能力的AGEs-胶原蛋白交联破坏能力实验结果进行对比,对体系筛选能力、优势和局限性进行了讨论分析。确立了优化后的反应体系为:20 mg/mL牛血清白蛋白、1 mol/L葡萄糖、0.1 mol/L PBS缓冲液组成的反应体系下,50℃、孵育48 h后,在λ_(ex)/λ_(em)=370/452 nm波长下进行荧光强度的检测。在抑制/降解荧光性AGEs的测试中,测试2%的阿魏酸、原花青素、芦丁溶液抑制率分别达到56%,86%,95%,具有较好的抗糖化效果,阿魏酸、芦丁表现出潜在降解AGEs的趋势。优化后的体系,虽然在降解荧光性AGEs的应用上,相较于AGEs-胶原蛋白交联破坏能力测试的方法,在对照体系设置及实验结果上存在一定的局限性。但在筛选抑制荧光性AGEs的原料方面,结果稳定性、真实性佳,极大缩短了试验周期,为抗糖化功效添加剂的筛选和相应产品的开发提供了快速、稳定、节约经济成本的技术平台。

荔枝皮原花青素对模拟食品体系中糖基化终产物的抑制效果

为控制美拉德反应过程中生成的晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs),该文研究了荔枝皮原花青素(litchi pericarp procyanidins,LPPC)对模拟食品体系中AGEs的抑制作用。采用α-乳糖/L-赖氨酸模拟食品体系,考察了不同反应时间、温度时LPPC对AGEs的抑制效果,并探讨了多种金属离子对抑制作用的干预。结果表明:在80℃加热2.5 h时,1 mg/m L LPPC对模拟食品体系中AGEs的抑制率达到最大,为79.92%±5.21%;而100℃加热30 min时,LPPC的最大抑制率为63.37%±4.12%。当向模拟体系中加入金属离子(Al^(3+)、Ca^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+))时,低浓度金属离子表现出抑制AGEs生成的作用,高浓度下反而促进其生成。与仅添加LPPC相比,金属离子在低浓度时减弱了LPPC对AGEs的抑制能力,在高浓度时则无显著影响(P>0.05)。研究结果为天然AGEs抑制剂LPPC的研发提供了理论参考。

玉竹乙醇提取物和分离部位对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨玉竹乙醇提取物和分离部位对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法单次ip链脲佐菌素(STZ)60mg/kg建立实验性糖尿病大鼠模型,分别ig给予玉竹乙醇提取物和三氯甲烷、正丁醇分离部位。给药80d后测定血清肌酐(Cr)、尿素(Ur)、糖化血红蛋白(GHb)、肾皮质蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)、尿白蛋白(UAL)排泄率,并观察肾组织病理学改变。结果玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位降低糖尿病大鼠血中GHb水平和UAL排泄率,抑制肾皮质AGEs的形成,同时改善肾脏病理改变;正丁醇分离部位降低UAL排泄率。结论玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制可能与抑制AGEs形成有关。

抗氧化中药对蛋白质非酶糖基化反应的影响

目的 观察中药胡黄连和贯叶连翘对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响 ,评价其抗氧化作用与非酶糖基化反应的关系。分析它们治疗糖尿病并发症的可能性。方法 将牛血清白蛋白和葡萄糖在体外共同孵育建立体外蛋白非酶糖基化反应体系 ,并将反应液分成对照组和不同的药物浓度组 ,在 37℃孵厢中孵育 6 0d ,以激发波长 (EX) 370nm/发射波长(EM) 4 4 0nm测定各组荧光值。结果 不同浓度的胡黄连和贯叶连翘以剂量依赖方式明显抑制AGEs的形成。结论 胡黄连和贯叶连翘可以抑制蛋白质的非酶糖基化 ,可能与其抗氧化作用有关。

苦荞麦对糖尿病大鼠血糖 蛋白非酶糖基化反应的影响

目的:研究苦荞麦提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠血糖、蛋白非酶糖基化反应的影响。方法:用链脲左菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,并于第3周开始给予苦荞麦高、中、低(200,100,50mg/kg·d)剂量和氨基胍(100mg/kg·d)剂量处理12周。上述动物于第12周末尾部取血,用血糖仪测定大鼠即时血糖。用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定糖化血红蛋白含量。用荧光分光光度法测定晚期糖基化终末产物含量。计量资料采用SPSS14.0进行方差分析。结果:苦荞麦高、中剂量明显降低糖尿病大鼠血糖、抑制糖基化产物的形成(P<0.01),并且苦荞麦高剂量组的治疗效果优于氨基胍组。结论:中药苦荞麦的提取物具有降低血糖、抑制大鼠体内蛋白非酶糖基化反应的作用。

淡豆豉煎剂对高脂血症大鼠主动脉晚期糖化终末产物的抑制作用

目的:探讨淡豆豉对高脂血症大鼠晚期糖化终末产物(AGEs)和血清脂质过氧化物的影响。方法:高脂饮食制备大鼠高脂血症模型,造型同时给予淡豆豉水煎剂治疗,于第13周末最后一次给药禁食24小时后取血和主动脉,分别测定主动脉AGEs含量、血脂和血清过氧化物含量。结果:与正常组比较,高脂血症模型组主动脉AGEs、血清胆固醇(TC)和丙二醛(MDA)含量均明显升高;高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著降低。淡豆豉各组主动脉AGEs、血清MDA、TC均明显降低;血清HDL-C和SOD活性均显著升高。结论:淡豆豉通过降低高脂血症大鼠主动脉AGEs含量、降低大鼠血清MDA水平、提高SOD活性、调节血脂,预防和减少动脉粥样硬化的发生。