SOX5和PrPc在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中,性别决定区Y框蛋白5(SOX5)及细胞型朊病毒蛋白(PrPc)的表达和临床意义。方法:采用免疫组化法检测94例OSCC组织芯片及30例癌旁组织芯片中SOX5及PrPc的表达情况。结果:OSCC组织中SOX5和PrPc表达阳性率分别为69.15%和68.09%,明显高于癌旁组织中的表达(30.00%和20.00%)(P<0.05)。SOX5的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄、浸润深度、TNM分期、分化程度无关(P>0.05);PrPc的表达与肿瘤分化程度、患者年龄相关(P<0.05),与性别、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。SOX5与PrPc的表达呈正相关(r=0.432,P<0.01)。结论:SOX5和PrPc有可能作为OSCC早期诊断的生物标志物。

鸡毒支原体磷酸酶PrpC活性检测

HPr激酶/磷酸酶(PrkC/PrpC)系统在细菌和支原体中高度保守,不仅参与糖酵解酶类的磷酸化/去磷酸化,也与毒力、生物被膜等生命活动相关。克隆并突变获得编码鸡毒支原体磷酸酶PrpC的ptc1基因,经原核表达纯化后,利用底物PNPP体外检测其酶活性,并对影响该酶活性的pH、金属离子、温度等影响因子进行分析。结果表明,Ptc1蛋白具有磷酸酶活性,Mn2+为该酶辅因子,最适离子浓度为2mol/L,最适pH为8.5,最适温度为37℃。相同浓度的Li+、Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Al 3+、Hg2+等金属离子均对表达产物具有不同程度的抑制活性。初步建立了PrpC功能检测体系,为进一步深入研究PrkC/PrpC调节系统奠定基础。

N-乙酰基转移酶10蛋白和朊蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及相关性研究

目的:检测N-乙酰基转移酶10蛋白(Naa10p)和朊蛋白(PrPc)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)、白斑、口腔正常黏膜中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化EnvisionTM法检测OSCC(112例)、白斑(42例)及正常黏膜组织(11例)中Naa10p和PrPc的表达情况,并分析其与临床病理特征相关性。结果:Naa10p和PrPc在OSCC表达最高,白斑次之,正常黏膜组织中表达最低。Naa10p在3种不同组织中的表达两两比较均有显著统计学差异(P<0.05),PrPc分别在白斑和OSCC组织,正常口腔黏膜与OSCC组织中的表达有统计学差异(P<0.05)。Naa10p的表达水平与OSCC的TNM分期、淋巴结转移、组织学分化程度密切相关(P<0.05),与性别、年龄无关。PrPc表达仅与组织学分化程度密切相关(P<0.05)。PrPc在OSCC中的表达强度随组织学分化程度下降而明显升高(P<0.05),而Naa10p的表达强度随组织学分化程度下降而明显下降(P<0.05)。结论:Naa10p和PrPc与OSCC的发生和转移相关。

中国牛朊病毒基因的克隆和序列分析

从中国牛外周血中分离淋巴细胞,提取基因组DNA.用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出不致病的朊病毒蛋白(PrP^c)基因,并克隆到pGEM-TEasy Vector.序列分析表明所克隆的牛PrP^c的片段大小为795bp,包含了牛朊病毒基因的完整编码区序列.该基因无内含子,同国外报道的已知序列完全相同.

朊蛋白(PrP^C)在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨朊蛋白(PrPC)在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测PrPC在胰腺癌及其对应正常胰腺组织的表达,分析其表达强度与性别、分化、临床分期及转移等临床病理资料之间的关系。结果PrPC在胰腺癌组织中和正常胰腺组织中的表达有显著差异;在高分化胰腺癌组织中表达明显低于中、低分化肿瘤组织,在转移组阳性表达高于非转移组(P<0.05),但在性别间差异没有统计学意义。结论PrPC在胰腺癌中表达与其发生、临床分期及转移密切相关,在其发生发展中可能起着重要作用,有望作为早期诊断及靶向治疗的分子标记。

朊病毒研究进展

朊病毒是一种不含核酸的蛋白浸染子,主要引起人和动物的中枢神经疾病。目前,由其引起的朊病毒病在世界多国已有发生,危害严重,经济损失巨大,并对人类的健康构成很大威胁。该病毒蛋白是一种膜糖蛋白,至少有两种基本形式,即PrPc与PrPsc,PrPsc对紫外线及消毒剂有很强的抵抗力;朊蛋白基因是单拷贝基因,高度保守,但在物种间可能存在易感性相关基因。病毒的复制呈指数增长过程,需朊病毒结合因子参与。病毒的致病性在于正常的朊病毒蛋白PrPc转变为PrPsc,PrPsc是发病的直接原因。另外,对其检测和防治目前也有了新的方法及措施。文章就朊病毒概念、蛋白、基因、复制、致病机理及检测与防治作了综述。

PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100、200nmol·L-1渥曼青霉素处理以抑制PI3K/Akt信号通路,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因转录量。结果显示,随着渥曼青霉素浓度的增加,DF-1-PrP、DF-1-NC和DF-1细胞的PRNP基因转录量均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在低于100nmol·L-1的同一渥曼青霉素浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于对照组,而总凋亡率均低于对照组。本研究表明ChPrPC的过量表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,在以上过程中,PI3K/Akt信号通路可能具有重要的作用,渥曼青霉素能有效阻断这一通路,但PI3K/Akt信号通路并不是ChPrPC调节细胞凋亡的唯一途径。

蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响

为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处理以抑制CK2,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因mRNA转录。结果显示,DF-1-PrP、DF-1-SiRNA-3和DF-1细胞的PRNP基因mRNA转录量随着米托蒽醌浓度的增加均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在同一米托蒽醌浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于DF-1细胞,总凋亡率均低于DF-1细胞;DF-1-SiRNA-3细胞则相反。表明ChPrP^C的高表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,而ChPrP^C的低表达则相反;CK2在ChPrP^C介导DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中具有重要的作用。本研究结果为进一步阐明ChPrP^C生理功能的分子机制奠定基础。

埕岛油田海底管线拖管技术

介绍了埕岛油田海底管线的陆地发送技术 ,对拖管施工工艺进行了计算和受力分析 ,结合实际 ,采用多种拖管方法完善了适应滩海和极浅海海域海管铺设工艺。

鸡朊样蛋白Doppel基因的克隆及其与PrP^C相互关系分析

克隆鸡Doppel蛋白(ChDpl)基因(PRND)并初步分析其与正常细胞型朊蛋白(PrPC)的相互关系,为禽源Dpl结构与功能、Dpl与PrPC互作关系机制的研究提供理论依据与分子基础;以多物种Dpl氨基酸序列为基础,通过比对找到Dpl氨基酸序列保守区,设计简并引物并依据鸡的密码子偏好性对引物进行优化,以逐步降低其简并性。用此特异性引物以聚合酶链式反应(PCR)扩增鸡PRND基因,并将其克隆到pMD-18-T载体,鉴定后将序列上传GenBank数据库。结合Dpl与PrPC相关研究初步分析两者的相互关系;多物种Dpl氨基酸序列比对发现,第11—150位(139个氨基酸残基)为Dpl氨基酸序列保守区,以此区域设计引物并进行PCR扩增,得到约417bp的目的条带,GenBank登录号为KP140962。综合分析PrPC与Dpl相关研究发现,尽管Dpl与PrPC具有相似的翻译后修饰和空间结构,但两者多表现为拮抗作用,即PrPC能够拮抗Dpl的神经毒作用,尤其是其N-端包含八肽重复区的第23—88位残基对于保护Purkinje细胞免受Dpl诱导的神经退化作用至关重要。禽源Dpl的成功克隆不仅填补了目前研究的空白,更在分子水平为后续研究Dpl结构与功能及其与PrPC的拮抗机制奠定了基础。

细胞型朊蛋白(PrP^C)在消化道恶性肿瘤中的表达及其临床意义

肿瘤的发生发展、侵袭转移都是由多种基因、多个蛋白信号转导通路调控及多步骤协同发生的生物学过程,近年来消化道恶性肿瘤发病率有逐渐上升趋势,且死亡人数增加,因此,寻找新的消化系统肿瘤标志物以及控制恶性肿瘤的恶化及转移,对其早期发现、诊断、治疗及预后判断有重要意义。近几年的研究表明细胞型朊蛋白对癌症细胞的生长、爬行和抗药性都有作用,提示细胞型朊蛋白可能与恶性肿瘤的发生、发展、侵袭以及转移等有着密切的关系。

中国黄牛重组PrP^c成熟蛋白单克隆抗体的研制

将纯化的牛重组PrPc 成熟蛋白免疫PrPc 基因敲除小鼠 (PrPc-nullmice) ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,经一次融合 ,共筛选出3株能稳定分泌针对中国黄牛PrPc 成熟蛋白特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株4D5、5C10和3F3。免疫印迹试验表明 :腹水单抗4D5、5C10和3F3均可特异识别重组中国黄牛PrPc

朊病毒和朊病毒疾病治疗的研究进展

介绍了朊病毒的基本特征、化学结构以及可能具有的生理功能 :参与神经系统功能的维持 ;通过抗氧化途径而保护神经系统细胞免受氧化损伤 ;参与淋巴细胞的信号转导 ;参与核酸代谢 .给出了朊病毒治疗的几种方法 ,并分析了这些方法的利弊 .提出了朊病毒研究拟待解决的

铜离子对绵羊PrP^C重组蛋白结构转化的影响

为探明铜离子在朊蛋白构象转化中的作用机制,进一步研究构象病发生机制提供基础数据,利用DNA重组技术,绵羊朊病毒蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得绵羊PrPC重组蛋白(OvPrPC),与氯化铜在体外结合。对CuCl2处理后的蛋白进行圆二色谱(CD)和蛋白酶K(PK)消化试验进行转化调节后蛋白抗性分析。结果表明,OvPrPC分子量为25172.80u,其二级结构主要由α-螺旋构成,含少量β-折叠。经过CuCl2体外调节后,OvPrPC结构中α-螺旋减少,β-折叠增加。而蛋白酶K消化后,CuCl2作用后的蛋白产生了PK抗性。为进一步的神经细胞毒性试验提供了宝贵的材料,进而为探讨构象病发生机理提供有力的科学依据。

感染性朊蛋白的毒性与糖磷脂酰肌醇(GPI)的相关性

海绵状脑病(朊病)是一类神经退行性脑病,目前是世界上研究的热点问题之一。引起该病的病原是一种朊蛋白质,它与宿主自身的正常朊蛋白的一级结构相同,只是二级结构的构象有所不同。对海绵状脑病的致病机理至今仍不太清楚,作者针对目前研究的朊蛋白的致病性与GPI的关系作一综述。

蛋白质感染颗粒与二价铜离子

蛋白质感染颗粒 (PrP)的错误折叠被认为是引起一些神经退化性疾病的主因 ,但其正常构象 (PrPC)的功能却一直不为人所知 .近年来研究发现 ,在正常细胞中 ,尤其是脑细胞中 ,细胞膜PrPC 可通过内吞作用进入细胞质而将Cu2 + 载运至SOD1,从而参与调节SOD1的活性及细胞铜代谢 .另有研究表明 ,Cu2 + 对于PrPSc (错误构象 )的蛋白水解酶K抗性的恢复及不同“病株”

朊蛋白生理功能的研究进展

朊蛋白(prion protein,PrPC)作为朊病的主要相关致病因子而受到广泛关注,虽然PrPC在疾病过程中的作用已有很多了解,但关于PrPC的正常生理功能还不是很清楚。就目前的研究而言,PrPC存在细胞核亚型和细胞质亚型两种形式,可与相应的配体及铜离子作用,并且通过细胞内吞或内陷方式被细胞膜获取;主要生理功能表现为保护神经系统,协助细胞的凋亡和分化、黏附,以及参与信号转导等。因此,文章对朊蛋白的生理功能作一总结,为朊病的治疗和朊蛋白的进一步研究提供了理论基础。

中国黄牛PrP^c成熟蛋白基因的克隆和序列分析

根据已发表的牛PrPc蛋白基因序列 ,设计合成一对引物 ,并在2个引物的两端分别加入BamHI和NdeI酶切位点。以从中国黄牛肝脏中提取的基因组DNA为模板 ,经PCR扩增出一约640bp的目的基因片段 ,将此基因克隆于 pET11a载体 ,构建了PrPc蛋白基因重组质粒b-pET11a -PrPc ,转化DH -5α并进行序列测定。同源性分析表明 :中国黄牛PrPc成熟蛋白基因与目前国外发表牛的成熟蛋白PrPc基因相比 ,有较大差异 ,发现了一个新的NdeI酶切位点 ;推导的氨基酸序列有4个氨基酸差异 。

免疫治疗朊病的前景

神经元的死亡被认为是朊病的特点,这是由于细胞表面的唾液酸糖蛋白由正常的含有大量α螺旋的结构变成了异常的β折叠丰富的、具有蛋白酶抗性的结构。最近的研究结果表明,朊病的复制可以被抗PrP的单克隆抗体所抑制,能延长朊病毒的潜伏期,这增加了人们用抗体来治疗朊病的信心。

CdSe/ZnS核壳型量子点标记朊蛋白的研究

利用组氨酸与锌离子的特异性结合,用水溶性CdSe/ZnS核壳型量子点标记朊蛋白(PrPC).研究了量子点标记朊蛋白的荧光光谱、琼脂糖凝胶电泳以及二者结合比.标记后荧光强度增加两倍多,二者结合比为3∶1.这种方法能快速简便地实现朊蛋白的定位点标记,为进一步深入研究朊蛋白提供了一种新的标记手段.