rhEPO通过调节PI3K/AKT信号通路改善大鼠脑出血后神经元损伤

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。方法 SD大鼠构建脑出血(ICH)模型,并给予rhEPO药物治疗,采用TUNEL法和试剂盒检测神经细胞凋亡及凋亡蛋白Caspase 9表达;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测PI3K、AKT的基因和蛋白磷酸化水平的表达。结果与ICH非治疗组相比,rhEPO治疗组中神经元凋亡细胞数和Caspase 9活性表达明显降低(P<0.05);rhEPO治疗组PI3K和AKT的蛋白磷酸化水平表达和mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素rhEPO具有神经保护作用,可以通过调节PI3K/AKT信号来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

目的 :研制抗人促红细胞生成素的特异性单克隆抗体 (mAb) ,对其生物学特性进行初步鉴定 ,并用于转基因羊乳中重组人促红细胞生成素 (rhEPO)的提纯。方法 :以自制的rhEPO粗品免疫BALB/c小鼠 ,制备抗rhEPO的mAb。以Westernblot和间接ELISA法 ,对所获mAb进行初步鉴定。以纯化的mAb同预活化的Sepharose 4B偶联 ,制得mAb亲和层析柱 ,并用于转基因羊乳中rhEPO的提纯。结果 :获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞株 (1E7和 2E6 )。Ig亚类 (型 )的鉴定分别为IgG1和IgG2b ,轻链均为κ型。用Westernblot证实 ,获得的mAb可特异性地识别rhEPO。用自制的免疫亲和层析柱用于转基因羊乳中rhEPO的提纯 ,具有很好的吸附作用 ,回收率达 70 %。结论 :成功地获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞。

RhEPO对脑梗死后缺氧诱导因子-1α作用的研究

目的研究大鼠局灶性脑梗死后,重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,RhEPO)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的相关性及神经保护作用。方法大鼠随机分为假手术组、RhEPO干预组(脑缺血后分别于30 min、3 h、6 h、12 h及24 h加入RhEPO 3000 IU.kg-1.d-1腹腔注射,连用3 d)、盐水对照组,利用神经评分、TTC染色及免疫组化观察RhEPO对脑梗死后HIF-1α蛋白表达影响,及神经保护作用。结果缺血后3 d,RhEPO治疗组与盐水组神经评分相比减少显著(P<0.05),以30 min加药组为著。脑梗死相对体积比与神经评分成正相关。镜下可见假手术组HIF-1α蛋白无表达,盐水对照组HIF-1α蛋白阳性率较RhEPO干预组增高,差异显著(P<0.05);30 min及3 h RhEPO治疗组与组内24 h组相比HIF-1α减低明显(P<0.05)。结论 RhEPO可降低脑缺血性梗死后HIF-1α蛋白表达阳性率,且干预越早,HIF-1α表达越低,神经功能恢复作用越明显。

不同浓度rhEPO对神经干细胞体外培养增殖的影响

目的观察不同浓度rhEPO对神经干细胞体外培养增殖的影响,探讨rhEPO联合神经干细胞移植治疗脊髓损伤修复的影响。方法用不同浓度(5、50、500 U/mL)rhEPO干预从新生SD大鼠(出生24 h以内)取材来的神经干细胞,分别检测每组神经干细胞克隆形成率;在不同时间分别用MTT法检测细胞增殖率;神经干细胞分化的免疫细胞化学染色及计数。结果添加rhEPO各实验组细胞增殖较快最终神经球的数量多于对照组,以50 U/mL rhEPO组作用显著;添加rhEPO各实验组的细胞生长曲线均高于对照组,尤其是50 U/mL rhEPO组显著高于对照组;NSE和GFAP免疫细胞化学染色和计数结果显示,50 U/mL rhEPO组中NSE免疫阳性细胞明显多于对照组(P<0.01)。结论rhEPO对神经干细胞体外培养增殖有促进作用,尤以适中浓度(50 U/mL)作用更加明显。

rhEPO对缺糖缺氧大鼠星形胶质细胞GLT-1和GLAST表达的影响

为了研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对缺糖缺氧(OGD)培养大鼠星形胶质细胞GLT-1和GLAST表达的影响,将缺糖缺氧培养星形胶质细胞分成不同浓度rhEPO处理组:0、20、100U/mL,不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在缺氧缺糖条件下培养6h,用RT-PCR测定GLT-1和GLAST的mRNA表达变化,免疫印迹技术测定GLT-1和GLAST蛋白的表达变化。20、100U/mL rhEPO星形胶质细胞GLT-1的mRNA和蛋白质水平较OGD对照组明显升高(P<0.05),GLAST的mRNA和蛋白质水平变化不明显(P>0.05)。GLT-1水平可能与rhEPO对缺糖缺氧培养大鼠星形胶质细胞的保护作用有关。

rhEPO在自体贮血中的效应研究

目的 评价rhEPO(商品名益比奥 )对健康献血者自身贮血过程中红细胞的动员作用。方法 采用rhE PO 15 0U/kg皮下注射 2次 /周 ,观察自体贮血 6 0 0ml后Hb、Ret、Hct指标的变化。结果 rhEPO用药组较对照组Hb、Hct、Ret都有明显升高。结论 rhEPO在自身贮血过程中可以促进体内红细胞动员 ,增加自身贮血量 。

rhEPO通过调节JAK2/STAT5信号通路减少大鼠脑出血后神经细胞凋亡

目的探讨重组人促红细胞生成素rhEPO是否通过JAK2/STAT5信号通路减少脑出血后神经细胞的凋亡。方法将8周龄的Wistar雄性大鼠30只随机分3组:假手术组、ICH模型组、rhEPO组,每组10只。ICH模型组大鼠进行ICH造模,假手术组除不注血外,其余步骤同ICH模型组,rhEPO组术后5 min给予腹腔注射rhEPO,所有动物24 h后进行神经功能学评分,收集大鼠脑组织,利用原位缺口末端标记法检测神经细胞凋亡的变化;采用免疫组织化学SP法检测凋亡蛋白Caspase3表达;并采用Real-time PCR和Western blot检测磷酸化JAK2、磷酸化STAT5基因和蛋白表达情况。结果手术建立脑出血模型后24 h进行神经功能评分。按Longa5分制标准判定,ICH组4只评价为1分,3只评价为2分,2只评价为3分;rhEPO组治疗后,5只评价为1分,2只评价为2分,1只评价为3分,说明rhEPO可以改善大鼠脑出血后神经元损伤,恢复神经功能。与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中神经元凋亡细胞及Caspase3的蛋白表达阳性细胞数明显增多(P<0.05),而rhEPO组中凋亡细胞与ICH模型组相比明显减少(P<0.05);与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著上升(P<0.05),与ICH模型组相比,rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性rhEPO可以通过调节JAK2/STAT5信号改善大鼠脑出血后神经元损伤,对于神经系统具有保护作用。

用多孔微载体Cytopore高密度培养CHO工程细胞生产rHEPO

在２．２Ｌｃｅｌｉｇｅｎ灌注培养系统中采用Ｃｙｔｏｐｏｒｅ多孔微载体培养产重组人促红细胞生成素（ｒＨＥＰＯ）的细胞Ｃ２。细胞密度达到１×１０７／ｍＬ，ｒＨＥＰＯ最高可达９．７ｍｇ／Ｌ。该载体具有表面积高，使用浓度低，便于扩大培养的特点。

rhEPO治疗非小细胞肺癌伴贫血的效果观察

目的观察促红细胞生成素对非小细胞肺癌合并贫血的治疗效果。方法收集60例合并轻中度贫血的非小细胞肺癌患者,随机分为试验组和对照组,各30例。所有患者均按既定方案继续进行肺癌化疗,试验组同时予促红细胞生成素(rhEPO)治疗,而对照组不予rhEPO治疗。两组均每周记录治疗期间血红蛋白(Hb)水平,治疗开始前和结束后,分别评价两组一般身体状况和生活质量;治疗结束后,评价两组治疗效果。结果治疗8 w后,试验组Hb水平明显提高,且显著高于对照组(P<0.05),而对照组Hb水平则无明显改善;治疗结束后,试验组一般身体状况和生活质量改善者构成比均显著大于对照组(P<0.05)。在肿瘤治疗效果上,两组没有明显差别(P>0.05)。结论 rhEPO能明显改善非小细胞肺癌患者的贫血情况,改善患者身体的一般情况和生活质量,提高患者对治疗的耐受力,可能有助于改善患者远期预后。

不同剂量rhEPO治疗131例癌症贫血的临床疗效评价

目的:对不同剂量的重组人红细胞生成素(rhEPO)治疗癌症贫血的临床疗效进行评价。方法:将符合条件的131例癌症贫血患者随机分入6个研究组,分别为5个rhEPO组(rhEPO剂量各为50U/kg、100U/kg、150U/kg、200U/kg、400U/kg)和1个对照组,共观察8周,每2周进行1次rhEPO的疗效观察和指标检测。结果:①患者Hb值和Hct值在应用rhEPO后呈明显上升趋势,4周～6周后与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。其中50U/kg组在治疗6周后显效,其它剂量组均为4周显效。②rhEPO50U/kg组的有效率低于其它各rhEPO组(P<0.05或P<0.01),其治疗后4周和8周的有效率分别为9.1%(P>0.05)和27.3%(P<0.05);其它各rhEPO组(100U/kg～400U/kg)之间的有效率无统计学差异(P>0.05),其治疗后4周和8周的有效率分别为28.6%～36.8%(P<0.05或P<0.01)和57.1%～68.4%(P<0.01)。各rhEPO组的不良反应发生率和输血需求率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在一定的剂量范围内(50U/kg～400U/kg,每周3次),rhEPO治疗癌症贫血以及预防化疗性贫血具有一定的疗效和相对的安全性。②不同剂量rhEPO治疗癌症贫血的疗效不同。rhEPO50U/kg组的疗效低于其它各剂量组,而在100U/kg～400U/kg的剂量范围内,rhEPO的疗效无统计学差异。

rhEPO、rhG-CSF对芥子气全身吸收中毒犬疗效观察

目的 评价重组人红细胞生成素 (rhEPO)、重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对芥子气全身吸收中毒犬的治疗效果。方法 以成年家犬为中毒模型 ,共 10条 ,中毒剂量为 12mg kg,皮下注射。随机分为中毒对照组 4条 ,治疗组 6条 ,治疗组动物在中毒后 30min即进行相应的药物治疗。中毒前所有犬各测一次血常规的基础值 ,中毒后每日监测血常规的动态变化 ,持续 1周。结果 对照组犬于 3天内死亡 3条 ,治疗组犬全部成活。对照组白细胞计数 (WBC)在中毒后第 3开始剧烈下降 ,红细胞计数 (RBC)在中毒后即有轻度上升 ,之后回落 ;而治疗组WBC、RBC在中毒后 1周内均无显著变化。两组的淋巴细胞计数 (LYM)在中毒后都有显著下降 ,治疗组稍好于对照组。治疗组的网织红细胞计数 (RC)于中毒后第 2天开始显著增长 ,之后维持在高水平 1周左右。治疗组的RC变化不明显。结论 犬芥子气中毒后 ,应用rhEPO、rhG

rhEPO对自身贮血的影响

目的 :评价rhEPO对健康献血者自身贮血过程中红细胞的动员作用 .方法 :rhEPO 15 0U·kg-1,sc,2次·wk-1,观察自体贮血后Hb ,Ret,Hct,PLT及HP等的变化 .结果 :试验组Ret比例明显高于对照组 (P <0 0 1) ,试验组与对照Hb含量 ,Hct在自身贮血后均有不同程度下降 ,但实验组下降幅度明显小于对照组 ,两组间差异十分显著 (P <0 0 1) .结论 :rhEPO在自身贮血过程中可以促进体内红细胞动员 。

RhEPO对脑出血大鼠缺氧诱导因子和细胞凋亡影响的实验研究

目的研究重组人促红细胞生成素(RhEPo) 对大鼠实验性脑出血后凋亡细胞及缺氧诱导因子( hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α) 的影响。方法随机分为脑出血组、脑出血 RhEPO 干预组、假手术组,动物模型采用自体血脑内注射的方法,其中脑出血 RhEPO 干预组为大鼠造模后给予 5 000 U/kgRhEPO腹腔注射,取组织后应用免疫组化方法检测脑出血后不同时间血肿周边脑组织中 HIF-1α蛋白表达情况,应用 TUNEL 法检测凋亡细胞。结果出血后,HIF-1α蛋白阳性表达率随时间进行性增加,并于出血后 72 h 达到高峰,此后 HIF-1α蛋白表达的阳性率逐渐下降,脑出血后不同时间点阳性率比较差异有统计学意义(P <0. 05) ; 脑出血 RhEPO 干预组较脑出血组及假手术组各时间点细胞凋亡数低及 HIF-1α蛋白阳性率低(P <0. 05) 。结论 EPO 能显著降低 HIF-1α表达,并对脑出血后脑组织有良好的保护作用。

rhEPO对大鼠脑创伤后凋亡和炎症反应影响的实验研究

目的研究rhEPO(重组人促红细胞生成素)对大鼠脑创伤后创伤灶周围细胞凋亡、炎症因子释放和炎症细胞浸润的影响。方法动物分为3组:假手术组,对照组,rhEPO组。采用改进的Feeney氏法制作脑创伤模型。各组动物分别于脑创伤后12小时、48小时、5天进行运动神经功能评分,测定创伤灶周围凋亡细胞数、MCP-1阳性及CD68+细胞数。结果各时间点rhEPO组运动神经功能评分明显改善,创伤灶周围凋亡细胞数、MCP-1阳性和CD68+细胞数均比对照组减少。结论rhEPO能显著改善神经功能、减少创伤灶周围细胞凋亡、减轻炎症反应,对创伤性脑损伤有良好的保护作用。

rhEPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用。方法 57只7天龄新生鼠随机分为假手术对照(正常对照组)、缺氧缺血性脑损伤动物模型组(HIBD模型)、rhEPO治疗组。在建立HIBD模型后,rhEPO治疗组立即一次性腹腔注射3 000IU/kg剂量的rhEPO;HIBD模型组注射等量生理盐水;于处置后24h电镜观察脑组织病理形态学变化,流式细胞计检测脑受损局部神经元细胞凋亡情况,实验7天进行短期感觉运动反射评价。结果与正常对照组相比,HIBD模型组光镜下左侧大脑病理损伤明显;HIBD模型组神经细胞凋亡与正常对照组相比增加(28.30±4.80 vs 47.14±6.97,P<0.05),存活细胞减少(72.42±7.93 vs 48.33±8.39,P<0.05);rhEPO治疗组细胞凋亡与HIBD模型组相比减轻(47.14±6.97 vs 36.88±9.43,P<0.05),存活细胞增多(48.33±8.39 vs 60.06±8.32,P<0.05);HIBD模型组悬吊测试、翻正反射、悬崖逃避反射、趋地反射这四项反射与正常对照组相比成绩均较差,提示神经功能受损;rhEPO治疗组翻正反射及悬崖逃避反射时间与HIBD模型组相比缩短,(4.59±0.11 vs 2.84±0.13,10.84±1.26 vs 8.49±1.03,均P<0.05),以上差异均有统计学意义。结论外源性给予rhEPO能够减轻HIBD大鼠脑组织病理损伤,稳定细胞结构,抑制细胞凋亡,改善短期行为学评价,从而发挥其神经保护作用。

rhEPO治疗急性脑梗死20例临床研究

目的观察rhEPO治疗急性脑梗死的疗效。方法选取急性脑梗死患者40例,随机分为rhEPO组和对照组,每组20例。其中rhEPO组于入院后在常规治疗基础上开始使用rhEPO,采用3000IU/次,皮下注射,2次/周,疗程2周。对照组不给予rhEPO,仅给予常规治疗。对所有病例均于治疗开始及治疗14d后进行NIHSS评分、Barthel指数(BI)评分和Fugl-Meyer(FMA)总分评定。结果治疗前两组NIHSS评分、BI及FMA总分评分相近,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗14d后再次评定两组BI及FMA总分评分均有所提高及NIHSS评分明显降低,但rhEPO组患者提高幅度更大,经t检验两组差异有高度统计学意义(P<0.01)。总有效率rhEPO组为90.0%,对照组为80.0%,两组差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论联合rhEPO治疗急性脑梗死比单纯常规治疗疗效好,rhEPO有望为脑梗死的临床治疗提供新的治疗手段。

rhEPO注射液致突变作用研究

本文应用 Ａｍｅｓ 试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，对三家单位提供的３ 个批号ｒｈ Ｅ Ｐ Ｏ 注射液进行了致突变作用研究。 Ａｍｅｓ 试验结果：各受试物的５ 个剂量组（１８ ．７５ ～３００ ．００ Ｉ Ｕ／ 皿） ，在活化及非活化条件下诱发 Ｔ Ａ９７ 、 Ｔ Ａ９８ 、 Ｔ Ａ１００ 、 Ｔ Ａ１０２ 菌株的回变菌落数未见明显增加；微核试验结果：各受试物在１５０００ ～６００００ Ｉ Ｕ／ｋｇ 剂量范围内，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显增加。表明在本试验条件下，３ 个批号ｒｈ Ｅ Ｐ Ｏ 注射液均无明显致突变作用。

丁酸钠对CHO-EPO工程细胞株rhEPO表达量的影响

以稳定整合有ｐＥＤＥＰＯ的ＣＨＯＥＰＯ工程细胞株为研究对象，在无血清条件下，系统观察了０５、１０、２５和５０ｍｍｏｌ／Ｌ４个浓度的丁酸钠作用于该细胞株的情况，结果表明：丁酸钠对ＣＨＯＥＰＯ工程细胞的生长有明显的抑制作用；影响ＣＨＯＥＰＯ工程细胞ＥＰＯ表达，浓度１０ｍｍｏｌ／Ｌ可提高ＥＰＯ表达量２５倍左右，并可持续较长的一段时间；延缓ＣＨＯＥＰＯ工程细胞在无血清培养时的细胞脱落；

薄膜扩散梯度技术与紫外光谱法联合富集、检测rhEPO

以EPO抗体修饰的Fe_(3)O_(4)粉末-聚丙烯酰胺凝胶为结合相,明胶凝胶为扩散层,通过薄膜扩散梯度技术(DGT)与紫外光谱法,对去离子水、人体尿液中的rhEPO进行富集和检测的实验研究。在25℃、常压环境下,DGT中结合相的饱和富集容量为0.0758μg cm^(2),当pH值为5.5~8.0、无机盐浓度为0.3%~1.5%时,rhEPO的检测回收率基本不受影响。对质量浓度为6~15 ng mL的rhEPO水溶液进行检测时,rhEPO检测回收率的平均值为81.9%;对质量浓度为5~20 ng mL的rhEPO人体尿液进行检测时,rhEPO检测回收率的平均值为79.8%。