NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达

旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。

VEGF、b-FGF、NOS_2和NOS_3在非小细胞肺癌的表达及其临床意义

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)、一氧化氮合酶 2 (诱生型 ,NOS2 )、一氧化氮合酶 3(内皮型 ,NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成和淋巴结转移的关系。方法 :用免疫组化 (S -P法 )染色技术对 95例NSCLC石腊组织标本的VEGF、b -FGF、NOS2 和NOS3及肿瘤内微血管密度 (IMVD)进行检测和分析。结果 :VEGF、b FGF表达与TNM分期、IMVD及淋巴结转移有关 (P<0 .0 5) ,两者共表达与IMVD有关 (P <0 .0 1 )。NOS3与组织学分型、IMVD和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5) ;NOS2与IMVD有关 (P <0 .0 5)。相关分析显示促血管形成因子 (VEGF、b FGF)与一氧化氮合酶 (NOS2 、NOS3)的表达呈正相关 (r=0 .30 1 8,P <0 .0 5)。结论 :VEGF和b FGF在促进血管形成和促进肿瘤转移方面可能起到协同作用 ,并且有NO的参与 ;VEGF、b FGF、NOS2

VEGF和NOS2诊断声门上喉癌隐性颈淋巴结转移

探讨声门上喉癌隐性颈淋巴结转移更有价值的预测方法。［方法］应用免疫组化染色检测血管内皮生长因子 （ＶＥＧＦ）和Ⅱ型一氧化氮合酶（ＮＯＳ２）的表达，回顾性分析１２９例声门上喉癌的病例资料。［结果］ＶＥＧＦ和ＮＯＳ２的表达与声门上型 喉癌颈淋巴结转移呈正相关。［结论］ＶＥＧＦ和ＮＯＳ２的表达结果可指导临床对声门上型喉癌Ｎ_０病例应用选择性颈清扫术。

c-Kit和n-NOS2双重染色在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的表达

提要:目的研究c-Kit与n-NOS2在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的共表达情况。方法采用培养成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光双重染色。结果豚鼠膀胱内Cajal样间质细胞体为梭形或卵圆形,常见2～3个细长的突起。c-Kit和n-NOS2免疫荧光双重染色发现两种抗体在Cajal样间质细胞共表达。结论本研究结果提示在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞内c-Kit和n-NOS2共存,Cajal样间质细胞具备产生NO的功能,Cajal样间质细胞存在调节膀胱自律活动的结构基础。

中国汉族NOS2基因多态性与白癜风发病相关性研究

目的:探讨NOS2基因-954G→C位点多态性与白癜风发病的相关性。方法:采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,对749例白癜风患者和763例健康人的NOS2基因-954G→C位点基因型进行分析。结果:白癜风患者NOS2-954G→C位点基因型的分布与正常对照组相比有显著性差异,联合基因型GC+CC及C等位基因在白癜风患者中频率较高,与临床资料结合分析表明联合基因型GC+CC在在发病年龄大于20岁组、活动期患者、皮节型白癜风及伴有自身免疫病和正常对照组之间无显著差异(P>0.05),但在发病年龄小于20岁组、稳定期患者、寻常型白癜风及无自身免疫病组的分布频率与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:NOS2-954G→C位点基因多态性与白癜风有明显的相关性。携带C等位基因可能会增加对白癜风的易感性。

应用组织芯片技术检测HIF-1α、NOS_2、VEGF在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的:检测HIF-1α、NOS2、VEGF在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及其与临床病理行为的关系。方法:收集124例GIST标本,用组织芯片和免疫组织化学法检测HIF-1α、NOS2、VEGF表达。结果:在124例GIST中,HIF-1α阳性表达79例(63.7%);NOS2阳性表达80例(64.5%);VEGF阳性表达72例(58.1%),其表达与GIST侵袭转移、NIH分级、黏膜受侵有相关性(P<0.05),三者之间呈正相关(P<0.05)。结论:HIF-1α、NOS2、VEGF在GIST组织中高表达,这为揭示GIST的发生发展提供了新的理论依据,并为GIST有效治疗提供新思路。应用组织芯片大规模高效检测临床样本是可行的,具有快速、准确、方便、经济的特点。

健脾理气方对功能性消化不良模型大鼠NOS2表达的影响

目的:研究健脾理气方对功能性消化不良(FD)大鼠胃窦组织中一氧化氮合酶(NOS2)表达的影响,探讨该方治疗FD的作用机制。方法:以FD大鼠为实验对象,观察健脾理气方对FD大鼠胃窦组织中NOS2的表达的影响。结果:模型组大鼠胃窦组织中NOS2的表达阳性神经元表达明显减少(P﹤0.01),差异有统计学意义。健脾理气方各剂量组均可不程度地降低模型大鼠胃窦组织中NOS2的表达(P﹤0.05或P﹤0.01),且高剂量组与莫沙比利组作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾理气方能通过降低胃黏膜组织NOS2的表达,抑制了NO的合成而发挥促胃动力作用。

GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白

为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。

重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响

目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。

NFκBp65、NOS2在维生素A缺乏干眼模型兔角膜中的表达及意义

目的检测NFκBp65、NOS2在维生素A缺乏干眼模型兔角膜中的表达和改变,探讨干眼的发病机制。方法实验组6只兔以维生素A完全缺乏饲料喂养6个月制作维生素A缺乏干眼兔模型,正常对照组6只兔喂养正常饲料,采用免疫组织化学SP方法,对模型兔和对照兔角膜组织中NFκBp65、NOS2的表达进行检测。结果与正常对照组相比,实验组维生素A缺乏干眼模型兔角膜组织中NFκBp65、NOS2的表达明显增多(P<0.01),NFκBp65在细胞中表达明显,NOS2在间质中表达明显。结论维生素A缺乏兔角膜组织中的免疫炎症反应可能是导致干眼的主要病理过程,NFκBp65、NOS2在此过程中起重要作用。

胃萎Ⅰ号方对CDX2、NOS2、TFF3在脾虚型CAG中表达的影响及疗效观察

目的:探讨胃萎I号方对CDX2、NOS2、TFF3在脾虚型CAG中表达的影响及疗效观察。方法:选取40例CAG患者病理标本,另取慢性胃炎20例,胃癌16例,检测CDX2、TFF3、NOS2。比较CAG患者与慢性胃炎和胃癌的CDX2、TFF3、NOS2差异。CAG患者64例,随机分为两组,治疗组40例,对照组24例,治疗组予以我科自制剂胃萎I号方,对照组予以雷贝拉唑+莫沙必利或铝镁加混悬液,疗程3个月。比较两组的CDX2、TFF3、NOS2变化情况。结果:(1)与慢性胃炎组相比,CDX2在CAG、胃癌组中的表达明显增高(P<0.05),差异有统计学意义,而萎缩性胃炎与胃癌组之间差异无明显统计学意义(P>0.05)。TFF3、NOS2在萎缩性胃炎及胃癌中表达明显均高于慢性胃炎(P<0.05),且胃癌中的表达高于萎缩性胃炎(P<0.05);(2)与治疗前相比,对照组治疗后的CDX2显著改善(P<0.05),而TFF3、NOS2无明显下降(P>0.05);治疗组治疗后的CDX2、TFF3、NOS2较治疗前均有显著下降(P<0.05),且改善程度明显优于对照组(P<0.05)。结论:胃萎I号治疗萎缩性胃炎上疗效确切。

团头鲂NOS2基因的克隆和组织表达分析

为了探究诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)时发挥的作用,克隆并分析了团头鲂NOS2基因。结果显示,NOS2基因的cDNA序列全长4 215 bp,编码1 080个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,团头鲂NOS2基因与草鱼NOS2基因的相似性最高,达95%。进化关系分析表明,团头鲂NOS2基因与鲤科鱼类NOS2基因聚在一支。实时荧光定量PCR检测的结果表明,在嗜水气单胞菌感染团头鲂后,NOS2基因在肝脏和头肾中被诱导表达;在脾脏中NOS2基因在3 h被诱导表达,其余时间点表达量显著下调;在肠道组织中NOS2基因在3 h下调表达,在6 h有微弱的上调,之后趋于稳定。研究结果为进一步探索NOS2基因在嗜水气单胞菌感染团头鲂后免疫应答中发挥的作用打下基础。

肝硬化门静脉高压症胃左静脉和脾静脉壁的NOS与VEGF表达研究

目的研究肝硬化门静脉高压患者胃左静脉、脾静脉壁标本的一氧化氮合酶(NOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨肝硬化发生机制。方法 34例肝硬化门静脉高压症患者采用手术治疗,30例患者伴严重消化道出血或脾脏功能亢进,采用胃左静脉断流、脾脏切除,4例脾脏增大伴脾脏功能亢进患者单纯脾脏切除,取冠状静脉、脾静脉血管壁(0.5mm×0.5mm)SP法测定,观察NOS、VEGF染色表达情况。结果脾门血管壁免疫组化VEGF表达情况:14例(41.18%)强阳性(++),10例(29.41%)阳性(+),10例(29.41%)弱阳性或阴性(±或-);NOS表达情况:20例(58.8%)脾门血管表达阳性,14例(41.18%)阴性。30例胃左断流手术标本中,胃左静脉VEGF表达:14(46.67%)例强阳性(++),8例(26.67%)阳性(+),8例(26.67%)为弱阳性或阴性(±或-)。14例(46.67%)胃左血管内皮eNOS表达阳性。结论门静脉高压时门静脉系统血管内皮NOS、VEGF呈高表达,证明肝硬化门静脉高压时血管壁结构发生异常改变。

门静脉高压症血流动力学改变及冠状静脉脾静脉壁NOS2、VEGF表达与出血的关系

目的 研究门静脉高压症病人门静脉系统血流动力学改变与食管胃底静脉曲张破裂出血的关系 ,及不同出血史病人门静脉系统血管壁NOS2、VEGF的表达。方法 4 3例门静脉高压症病人依照出血病史分为两组 ,A组 (无上消化道出血史或 1次出血史 ) 2 6例 ,B组 (>1次出血史 ) 17例行门静脉系统超声血流检查 ,术中测压 ,取冠状静脉脾静脉血管壁免疫组化NOS2、VEGF染色 (S P法 )。结果 门静脉主干内径 (PVD) (14 5 6± 1 6 9)mm ,最大血流速度 (PVMAX) (19 4 7± 5 35 )cm/s,血流量(PVBF) (84 0 6 6± 2 11 81)L/min ,门静脉压 (PVP) (33 2± 7 0 7)cmH2 O。A、B两组病人门静脉最大血流速度及门静脉压 (PVP)无统计学意义。A组病人门静脉直径及门静脉血流量显著高于B组。 4 3例中2 8例 (6 5 1% )有冠状静脉逆流 (离肝血流 )。脾静脉血流量 (4 2 2 5± 139 4 )L/min ,脾静脉平均血流量与门静脉平均血流量之比为 0 5 0 3,B组病人脾静脉血流量低于A组。脾静脉NOS2阳性率A组为30 8% ,B组为 5 2 9%。冠状静脉VEGF阳性率A组为 38 5 % ,B组为 5 8 8%。门静脉系统血管内皮的NOS2和VEGF均有高表达。结论 门静脉系统高血流动力学是引起出血的基本条件 ,初期高血流动力学是机体代偿机制 ;多次出血史病人门静脉脾静脉?

NOS2基因多态性与抗结核药物所致肝损伤易感性的相关性研究

目的探讨抗氧化通路酶系NOS2基因多态性与抗结核药物所致肝损伤（anti-tuberculous drug induced liver injury，ATDILI）易感性的相关性。方法采用生物信息统计学方法筛选出NOS2基因16个tagSNP（Hardy-Weinberg平衡P〉0.001，最小等位基因频率〉0.1，r2〉0.8），采用SNPscan？多重SNP分型技术对461例ATDILI患者和466例非ATDILI患者的DNA样本进行基因分型，分析这些位点基因型和单倍型在病例组和对照组之间的频率差异，分析在显性、隐性和加性遗传模型下各个SNP位点与ATDILI易感性的关联性。结果所有位点的等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。NOS2基因rs9906835 G/A基因型、rs944725 T/C基因型、rs3794763 G/A基因型、rs3794764 G/A和A/A基因型以及rs6505469 T/A基因型均可增加ATDILI易感性（均P〈0.05），在显性遗传模型下，rs9906835、rs944725、rs3794763、rs3794764以及rs6505469可增加患者抗结核治疗后发生肝损伤的风险（均P〈0.05）；在加性遗传模型下，rs944725、rs3794763和rs3794764增加ATDILI发生的风险（均P〈0.05）。单倍型分析显示NOS2基因CGCATT、AC和AAA单倍型均可增加ATDILI发生的风险（均P〈0.05）。结论NOS2基因为ATDILI的易感基因。

妊娠期糖尿病患者白细胞NOS2及SFTPD基因表达与糖代谢异常的相关性分析

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者白细胞NOS2及SFTPD基因与糖代谢异常的相关性。方法选择2014年1月至2016年12月,延安市人民医院妇产科收治的125例孕妇为研究对象。根据孕妇是否罹患GDM,将其分别纳入GDM组(n=87)和非GDM组(n=38)。采集2组受试者空腹肘静脉血,并分离白细胞,采用实时荧光定量PCR测定受试者白细胞NOS2和SFTPD mRNA相对表达水平。采集2组受试者孕前、分娩前体重,孕前人体质量指数(BMI),血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP),糖化血红蛋白(HbA1c),空腹血糖,口服葡萄糖耐量试验(OGTT)1、2h血糖,血浆胰岛素,稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),以及稳态模型评估的胰岛β细胞分泌功能指数(HOMA-β)。采用成组t检验,对2组孕妇上述指标进行比较。对于2组受试者白细胞NOS2和SFTPD mRNA相对表达水平与相关临床指标的相关性分析,采用Pearson相关性分析。采用Ingenuity路径分析(IPA)数据库构建与白细胞NOS2、SFTPD基因相关的分子网络,对其相关生物学功能进行分析。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》,征得2组受试者知情同意,并签署临床研究知情同意书。2组受试者年龄、孕前BMI、孕期体重增加值等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结果 (1)GDM组受试者空腹及OGTT 1、2h血糖值与HbA1c值分别为(89.9±18.6)mg/dL、(187.3±30.0)mg/dL、(163.3±22.3)mg/dL、(5.4±0.4)%,均分别显著高于非GDM组的(77.5±7.8)mg/dL、(152.3±36.1)mg/dL、(113.9±21.3)mg/dL、(5.2±0.4)%,并且差异均有统计学意义(t=3.95、P<0.001,t=5.63、P<0.001、t=11.55、P<0.001,t=2.57、P=0.021)。(2)GDM组受试者白细胞NOS2和SFTPD mRNA相对表达水平分别为(0.08±0.05)、(0.16±0.07),均显著高于非GDM组的(0.04±0.03)、(0.06±0.02),并且差异均有统计学意义(t=8.92、3.26,P<0.001)。(3)2组受试者白细胞NOS2和SFTPD mRNA相对表达水平与妊娠期血清CRP均呈弱正相关关系(r=0.23、P=0.022,r=0.34、P<0.001);SFTPD mRNA相对表达水平与空腹血糖、HOMA-IR均呈弱正相关关系(r=0.19、P=0.041,r=0.21、P=0.040)。白细胞NOS2与SFTPD mRNA相对表达水平呈强正相关关系(r=0.77、P<0.001)。(4)在IPA数据库中检索到12种相关因素与白细胞NOS2基因过表达相关,而未检索到与白细胞SFTPD基因过表达相关因素。12种白细胞NOS2基因相关因素与免疫、炎症反应及血管生成相关,可分为4类:细胞/生长因子、趋化因子、酶、转录因子。结论 GDM孕妇葡萄糖代谢受损,可能是其白细胞NOS2和SFTPD基因过表达的主要预测因子。NOS2和SFTPD基因表达异常与孕期葡萄糖代谢功能障碍和(或)炎症有关。本研究确定了12种与NOS2基因相关的调控免疫、炎症反应及血管生成的细胞因子、酶和转录因子。

胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及其意义

目的探讨胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及意义。方法：采用Western印迹法检测P13K、Akt和PTEN在胃肠道间质瘤患者中的表达，同时采用免疫组织化学法检测HIF-1、NOS2和VEGF在胃肠道间质瘤患者中的表达。结果：在胃肠道间质瘤患者中，P13K、Akt表达水平随着NIH分级增高而上调（P〈0．05）；PTEN表达水平随着NIH分级增高而下调（P〈0．05）。而HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系（P〈0．05）：（1）I、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1阳性率分别为43．6％和69．7％，NOS2阳性率分别为44．3％和72．5％．VEGF阳性率分别为47．5％和62．8％；（2）黏膜受侵与无受侵组患者的HIF-1阳性率分别为89．4％和52．1％，NOS2阳性率分别为87．3％和56．2％，VEGF阳性率分别为78．7％和51．8％；（3）有侵袭转移组患者相比于无侵袭转移组阳性率明显升高。此外，HIF-1与NOS2二者阳性表达之间呈正相关；HIF-1与VEGF二者阳性表达之间呈正相关：NOS2与VEGF二者阳性表达之间亦呈正相关。结论：在胃肠道间质瘤患者中。P13K／Akt信号可能通过调控PTEN从而调节HIF-1表达．HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系。

Polymorphisms in oxidative pathway related genes and susceptibility to inflammatory bowel disease

AIM To investigate whether common variants in the oxidative pathway genes influence inflammatory bowel disease(IBD) risk among Moroccan patients. METHODS The distribution of(TAAA)n_rs12720460 and(CCTTT)n_rs3833912 NOS2 A microsatellite repeats, HIF-1 A_rs11549467 and NFKB1-94 ins/delA TTG_rs28362491 was analyzed in 507 subjects grouped in 199 IBD and 308 healthy controls. Genotyping was performed withpolymerase chain reaction-fluorescent method and the TaqMan~? allelic discrimination technology.RESULTS The allele and genotype frequencies of HIF1 A_ rs11549467, NFKB1_rs28362491 and NOS2 A_(TAAA)n did not differ significantly between patients and controls. Analysis of NOS2 A_(CCTTT)n markers evidenced differences between patients and healthy controls. A preferential presence of the(CCTTT)8(P = 0.02; OR = 1.71, 95%CI: 1.07-2.74),(CCTTT)14(P = 0.02; OR = 1.71, 95%CI: 1.06-2.76) alleles in IBD,(CCTTT)8(P = 0.008; OR = 1.95, 95%CI: 1.17-3.23) in CD and(CCTTT)7(P = 0.009; OR = 7.61, 95%CI: 1.25-46.08),(CCTTT)11(P = 0.05; OR = 0.51, 95%CI: 0.25-1.01),(CCTTT)14(P = 0.02; OR = 2.05, 95%CI: 1.07-3.94),(CCTTT)15(P = 0.01; OR = 2.25, 95%CI: 1.16-4.35) repeats in UC patients indicated its possible association with higher disease risk which need to be confirmed in a larger sample size. CONCLUSION Our results suggest that the NOS2 A_(CCTTT)n gene variations may influence IBD susceptibility in the Moroccan population.