p21^(WAF1/CIP1) Gene DNA Sequence Change and Their Relationship with the Phenotype of Human Osteosarcoma

Objective: To investigate the p21WAF1 /CIP1gene DNA sequence change and their relationship with the phenotype of human osteosarcoma. Methods: p21WAF1 /CIP1gene DNA of 36 osteosarcoma spec- imens was examined by using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR- SSCP) method. The PCR products were sequenced directly. Results: In p21WAF1 /CIP1 gene exon3 of 36 cases of human osteosarcoma, the change of C→T in the p21WAF1 /CIP1gene CDNA sequence of position 609th occurred in 17 cases with the incidence being 44.4%. In 10 normal blood samples, DNA sequence analysis showed the change of C→T in the p21WAF1 /CIP1gene CDNA sequence of position 609th occurred in 8 cases with the incidence being 80%. Conclusion: The novel location of p21WAF1 /CIP1gene polymorphism of osteosarcoma, but not mutation was de?ned, and this location might provide the meaningful reference for the further research of p21WAF1/CIP1 gene.p2lWAF1/CIP1基因DNA序列分析及其与骨肉瘤表型的关系

温石棉对内皮细胞Wnt5a、p16和p21表达的影响

目的探讨温石棉对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法实验组以50、100、200 mg/L温石棉纤维液刺激HUVECs 24、48、72 h,对照组仅加RPMI 1640培养基培养细胞,观察细胞形态变化,β-半乳糖苷酶法分析细胞衰老情况,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Wnt5a、p16和p21 mRNA的表达情况。结果实验组HUVECs多呈梭形,部分呈圆形或不规则形,出现裸核及空泡现象,可见死亡细胞。随温石棉质量浓度及暴露时间的增加,细胞活性逐渐降低,衰老细胞逐渐增多。100 mg/L温石棉处理HUVECs 24 h时,细胞生长较活跃。与对照组相比,实验组Wnt5a、p16和p21 mRNA表达水平均增高(P<0.05)。结论温石棉可促进HUVECs衰老,Wnt5a、p16和p21参与此过程。

Expression of IGF-Ⅱ,p53,p21 and HBxAg in precancerous events of hepatocarcinogenesis induced by AFBI and/or HBV in tree shrews

INTRODUCTIONIn order to study the relationship between oncogeneexpression and HCC generation,we observed theprecancerous hepatic GGT loci,IGF-Ⅱ,p53 andp21 expression during hepatocarcinogenesis of treeshrew induced by hepatitis B virus (HBV) and/oraflatoxin B1 (AFB1).

鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。

VEGF p53和p21 ras在原发性肝细胞癌中的表达及其临床病理意义

目的：研究ＶＥＧＦ，ｐ５３和ｐ２１ｒａｓ在原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）的表达和三者间的相关性及其与ＨＣＣ病理分级，转移行为的关系。方法：应用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法对３４例ＨＣＣ的癌组织中的ＶＥＧＦ，ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３的表达作了研究。结果：ＶＥＧＦ，ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３三者在肝癌和癌旁组织的阳性率均有非常显著的差异（Ｐ＜０．０１），ＶＥＧＦ的表达与ｐ２１ｒａｓ和ｐ５３均呈显著的正相关（Ｐ＜０．０１）。三者间的协同表达亦与ＨＣＣ的病理分级和转移行为有关，而与肿瘤大小，ＡＦＰ水平，ＨＢｓＡｇ阳性无关。结论：ＶＥＧＦ可能在ＨＣＣ的形成，发展和转移中与ｐ５３和ｒａｓ基因协同作用，三者的协同作用可能与ＨＣＣ的病理分级和转移行为有关。

榄香烯抑制p21基因表达逆转肺癌化疗耐药的实验研究

目的:研究榄香烯逆转肺癌化疗耐药的作用,及其对P21基因表达的影响。方法:体内研究:榄香烯、多柔比星及两者联合预处理小鼠5 d后,检测各组小鼠血中P21基因表达情况;复制Lewis肺癌小鼠模型,观察肿瘤直径长至1 cm所耐时间;然后分别予榄香烯、多柔比星及两者联合用药10 d,称瘤重,并检测肿瘤组织中P21基因表达情况。体外研究:采用榄香烯、多柔比星及二者联合预处理的小鼠血清培养A549肺癌细胞,48 h后检测各组细胞的增殖情况。结果:榄香烯联合多柔比星预处理组小鼠血清中P21基因表达水平与二者单用预处理组及正常组无统计学差异;二者联合预处理组小鼠血清培养A549肺腺癌细胞的增殖速度小于二者单用组;榄香烯联合多柔比星的抑瘤率明显高于二者单用,且二者联用组小鼠肿瘤组织中P21基因表达水平低于多柔比星组,但高于榄香烯组。结论:榄香烯具有逆转肺癌化疗耐药的作用,这一作用的可能机理与其抑制P21基因表达相关。

p21^(waf1)、p53和PCNA在肺癌组织中的表达

目的 了解肺癌组织中p2 1waf1、p5 3和PCNA蛋白表达情况 ,研究肺组织良恶性增殖的不同机制。方法 运用免疫组织化学方法 ,检测 76例肺癌组织p2 1waf1、p5 3及PCNA的表达情况 ,分析三种蛋白表达与肺癌临床特征的关系 ,并与 5 9例肺良性疾病组织相关指标进行比较。结果 (1)肺癌组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达阳性率分别为 75 %和47 37% ,PCNALI值为 0 44± 0 32 ,均显著高于肺良性疾病组织 (分别为 35 5 9%、3 39%和 0 0 9± 0 14)。 (2 )肺癌组织p2 1waf1、p5 3和PCNA蛋白表达与肺癌临床分期及细胞分化程度无关。各型肺癌之间p2 1waf1、p5 3蛋白表达也无明显差异。(3)肺鳞癌PCNALI值为 0 5 1± 0 32 ,明显高于小细胞肺癌(0 30± 0 36 )。 (4)肺癌组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达与PCNA无关 ,p2 1waf1和p5 3蛋白表达之间也未发现相关性。而肺良性疾病组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达与PCNA相关。结论 (1)肺癌组织p2 1waf1与p5 3蛋白表达明显上调。 (2 )肺癌细胞增殖程度很高。 (3)肺鳞癌细胞DNA损伤修复能力可能高于小细胞肺癌。 (4)肺良性疾病细胞增殖过程中 ,p2 1waf1、p5 3及PCNA三种蛋白有协调作用 ,而在肺癌细胞则否。

腺病毒介导p21^(WAF1/CIP1)基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的 :探讨 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 ,进一步了解p2 1基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法 :通过腺病毒介导外源性p2 1基因转移到有 p5 3基因突变的人胃癌细胞系SGC 790 1,对 p2 1基因的表达、细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 :外源性 p2 1基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成 ,流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad p2 1对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。 结论 :p2 1基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导 ,使 p2 1基因在肿瘤的基因治疗 ,特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。

dsP21-625通过激活P21基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-stranded RNA-625,ds P21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法:将人工合成的ds P21-625(ds P21-625组)和ds Ctrl质粒(ds Ctrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E(Cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)m RNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果:与ds Ctrl组比较,ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21 m RNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 m RNA表达水平下调(均P<0.01);ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2蛋白表达下调(均P<0.01);ds P21-625组细胞S期和G2/M期的细胞比例减少(均P<0.05),G0/G1期的细胞比例增加(均P<0.01);ds P21-625组细胞增殖活力降低(均P<0.05)、克隆形成数减少(均P<0.05)。结论:ds P21-625上调前列腺癌细胞中P21 m RNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 m RNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。

p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨p21基因转染人胃癌细胞系(BGC)对化疗药物的敏感性。方法:应用MTT摄入方法测定5-氟尿嘧啶、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙对p21基因转染人胃癌细胞增殖抑制作用,并进行72 h观察。结果:p21基因转染人胃癌细胞对5-氟尿嘧啶最敏感,72 h抑制率为77.9%;其次为阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙,其抑制率分别为62.7%、61.1%、59.3%、58.2%及45.9%。其敏感性与对照组相比差异有显著性(P<0.05),随时间延长而逐渐增加。结论:用MTT法检测p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的实验,即可以针对性指导临床对肿瘤敏感性化疗药物的选用,又可避免盲目用药而产生对机体免疫细胞的毒性作用。p21基因可提高对5-氟尿嘧啶的敏感性。

雷氏大疣蛛毒液对人肝癌HepG2细胞p21基因表达的影响(英文)

本文研究了雷氏大疣蛛毒液对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制作用及其分子机制。采用XTT法观察到雷氏大疣蛛毒液剂量依赖抑制HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测发现,经过雷氏大疣蛛毒液作用的HepG2细胞周期发生明显的选择性改变;RT-PCR方法检测到p21基因表达增强;Western blot检测发现,p21蛋白表达增加。结果提示,雷氏大疣蛛毒液抑制人肝癌细胞HepG2增殖的可能机制之一是使p21基因和蛋白表达增加,G2／M细胞周期被阻滞,从而诱导细胞凋亡。

重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞HGC27生长抑制作用的研究

目的:了解重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)对胃癌细胞株HGC27的作用,为进一步研究p21wif1的生物学作用以及肿瘤的基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR技术,构建表达p21蛋白的重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),并将其转染胃癌细胞HGC27,观察细胞形态学改变,用Western blot检测转移基因蛋白在胃癌细胞中的表达,用MTT法检测其对HGC27细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪分析其对细胞周期的影响。结果:成功构建重组细小病毒H-1(rhH1△/p21),所得病毒滴度达到3.5×107PFU/mL,在胃癌HGC27细胞中成功过表达转移基因蛋白p21,使胃癌细胞株细胞周期比例改变,G1期含量明显增加,并抑制其增殖。结论:重组细小病毒H-1(rhH1△/p21)可诱导胃癌细胞株HGC27细胞G1期阻滞,抑制细胞增殖,该基因疗法可有效抑制体外胃癌细胞的生长。。

p16、p21基因表达缺失在原发性肝癌中的临床意义

背景与目的:P16,P21蛋白是调控细胞周期的抑制蛋白,在调节细胞增殖中起非常重要的作用,其基因缺失,失活与多种肿瘤的发生,发展有关,本研究观察原发性肝癌中P16、P21蛋白表达及其基因缺失情况,探讨p16、p21基因表达缺失的临床意义。方法:采用回顾性分析方法,收集原发性肝癌42例,正常肝组织(距离癌组织≥2cm)36例,应用Western印迹试验、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌和正常肝组织中P16、P21蛋白的表达和相应mRNA扩增情况。结果:在癌组织中,P16蛋白缺失率为24例(24/42,57.1%),正常肝组织中P16蛋白缺失率为13.9%(5/36);而相应组织中P21蛋白缺失率分别为45.2%(19/42)和19.4%(7/36)。两者在癌和正常肝组织中缺失差异均有显著性(P<0.05)。14例癌组织(38.9%,14/36)仅p16mRNA转录而未表达蛋白。P16、P21蛋白的低表达与肝癌大小、分化程度关系密切(P<0.05),而与是否有包膜、是否肝硬化等无关。结论:P16、P21蛋白的表达缺失与肝癌发生发展密切相关,两者可作为判断肝癌恶性程度的参考指标。

p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建

本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体。首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达。构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位。p21-venus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

胃癌中p21^(WAF1)与p53基因的相关性研究

目的 探讨胃癌中 p2 1WAF 1与 p5 3基因的关系。方法 采用 S- P法检测 p2 1WAF 1和 p5 3在胃癌中的表达。结果 p2 1与 p5 3在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌中的阳性表达率分别为 10 0 .0 %与 0 %、92 .5 %与 15 .0 %、39.8%与 5 6 .5 % ;40例不典型增生 ,p5 3阳性而 p2 1阴性者为 5 .0 % ,p5 3阴性而 p2 1阳性为 82 .5 % (P<0 .0 5 ) ;p2 1、p5 3阳性高分化腺癌各为 6 3.3%与 36 .7% ,与低分化腺癌 32 .7%与 78.2 %比较 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;48.1%的胃癌 p2 1、p5 3蛋白表达相反 (P>0 .0 5 ) ;p2 1表达在侵犯浅肌层为 6 0 .0 %显著高于深肌层的 35 .2 % (P<0 .0 5 ) ;p2 1、p5 3在原发与转移癌中一致表达为 35 .3%与 70 .6 % ,皆与未转移癌 6 2 .5 %与 42 .5 %有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;p2 1在 TNM 期 6 0 .0 %、 期 5 6 .2 %显著高于 期 2 7.8%、 期 2 2 .2 % (P<0 .0 5 )。结论 正常胃黏膜和不典型增生 p2 1蛋白表达大部分依赖 p5 3蛋白 ,而胃癌在相当程度上不依赖。p2 1失表达和 p5 3异常表达与胃癌发生、分化程度、转移有关 ,而 p2 1失表达还与侵袭。

银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成及p21基因启动子甲基化的研究

目的:研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)集落形成能力及集落细胞p21基因启动子甲基化状态,探讨银屑病患者骨髓造血前体细胞的活性。方法:密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含SCF+GM-CSF+IL-3+IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14天时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测HPP-CFC集落细胞p21基因启动子甲基化状态。结果:(1)在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;(2)正常对照骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率较高,而银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率低于正常对照组。结论:银屑病患者骨髓造血前体细胞活性有异常;银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因甲基化降低可能与其相对较低的HPP-CFC集落形成能力密切相关。

p21^(WAF1)基因介导诱发的人肝癌细胞系的细胞凋亡研究

目的研究外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因超表达对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法通过脂质体介导方式将带有人全长ｐ２１ＷＡＦ１ｃＤＮＡ和潮霉素抗性基因的真核表达载体ＰＣＥＰ转入肝癌细胞中，用潮霉素筛选后，酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法检测ｐ２１蛋白的表达情况，使用流式细胞仪检测细胞周期并判定有无细胞凋亡及程度。通过透射电镜进一步观察细胞的超微结构。结果ＥＬＩＳＡ法测定ｐ２１蛋白表达结果，对照组、空载体组和ＷＡＦ１组的吸光度（Ａ）值分别为０．１７５±０．０２、０．１８３±０．０３和０．３３±０．０４，提示转基因后ｐ２１蛋白量却明显增加（Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测细胞周期表明Ｇ１期细胞显著增加，并在Ｇ１期前出现一凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数的２２．５％。透射电镜可见ＷＡＦ１组部分细胞体积缩小，细胞完整，有出芽现象，细胞器结构完整，致密的染色体边集于核膜内侧，呈明显的凋亡细胞的形态。结论本实验成功地将ｐ２１ＷＡＦ１基因转入到培养的肝细胞中，获得了稳定表达ｐ２１蛋白的细胞株；外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因的超表达可引起肝癌细胞自发凋亡。通过对该基因的进一步研究可为肝癌防治提供理论依据。

p53Arg72Pro、p21Ser31 Arg多态性与新疆维吾尔族宫颈癌的相关性

运用PCR及PCR-RFLP技术检测p53Arg72Pro和p21Ser31Arg多态性在新疆维吾尔族(维族)宫颈癌中的分布,探讨其与维族宫颈癌发生的相关性。结果显示:p53基因型Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro在维族宫颈癌中的分布为46.0%、13.2%、40.8%,对照组为30.0%、14.5%、55.5%,两组构成比差异有显著性(χ2=7.196,P<0.05);p21基因型Arg/Arg、Ser/Ser、Arg/Ser在维族宫颈癌中的分布为13.0%、38.0%、49.0%,对照组为10.0%、39.0%、51.0%,两组构成比差异无显著性(χ2=0.444,P>0.05)。提示p53Arg/Arg基因型可能是维族宫颈癌发生的遗传易感因素;p21Ser31Arg多态性可能与维族宫颈癌的遗传易感性无关。

肝细胞肝癌p21^(WAF1)与p53的表达及其意义

目的 探讨HCC中p2 1WAF1与p5 3的表达及其意义。方法 应用免疫组化法检测 38例手术切取的HCC及其配对癌旁肝组织、5例正常肝组织中p2 1WAF1和p5 3的表达 ,并分析它们与病理形态的关系。结果 p2 1WAF1、p5 3在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织 ,p2 1WAF1阳性 14例 (36 8% ) ,p5 3阳性 2 8例 (73 7% ) ,其中两者表达一致 (均阳或均阴 )的 18例 ,表达不一致的 2 0例。癌旁肝组织 1例 (2 6% )、正常肝组织 2例p2 1WAF1呈阳性表达 ,所有癌旁及正常肝组织中均未见p5 3表达。HCC中p2 1WAF1表达与p5 3表达无明显关系 (P >0 0 5 )。在不同组织学分级、有无肝内转移或门脉癌栓之间p2 1WAF1、p5 3表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 p2 1WAF1与p5 3在癌内表达均高于癌旁 ,但两者间并无相关性 ,提示p2 1WAF1表达可能受p5 3依赖和p5