稀土离子与乳铁蛋白结合的光谱研究

用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了 Tb3+ 和 Eu3+ 在 p H 7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用 .结果表明 ,Tb3+及 Eu3+可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个 Fe3+结合部位 ,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把铁置换出来 .测得 Tb3+与这两个部位结合的条件平衡常数为 lg K1 =8.4 8± 0 .2 4和 lg K2 =6.72± 0 .1 8( 2 5℃ ,0 .1 0 mol/L Na Cl,0 .1 0 mol/L Hepes,p H=7.4 ) . Tb3+ 在这两个位点结合时 ,蛋白质的构象发生变化 .在 Tb3+ 与蛋白质的浓度比低时 ,构象趋于紧缩 ,色氨酸残基进入疏水的环境 ;当 Tb3+ 结合得较多时 ,构象转而开放 ,色氨酸残基转向亲水性环境 .但无论哪种情况 ,Tb3+ 与脱铁乳铁蛋白的结合都不影响蛋白的二级结构 .

铁饱和度对乳铁蛋白抑菌活性的影响

本试验通过制备不同铁饱和度的猪乳铁蛋白(lactoferrin,Lf),探讨其对细菌生长的影响。根据铁饱和度将试验分为3组,对照组(不添加任何Lf)、铁不饱和乳铁蛋白处理组(Apo-Lf,铁饱和度为6.9%)和铁饱和乳铁蛋白处理组(Holo-Lf,铁饱和度为100.0%),分别处理大肠埃希菌K88、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门菌。结果表明:(1)天然Lf和Apo-Lf能显著抑制大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的生长,而Holo-Lf没有表现出抑菌活性。(2)补铁可以消除Apo-Lf对大肠埃希菌K88的抑制作用,说明Apo-Lf是通过螯合铁发挥抑菌功能的。(3)扫描电镜观察结果显示,Apo-Lf破坏了大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的细菌膜结构,但Holo-Lf对所有被测细菌都没有影响。(4)三维结构预测结果提示,Apo-pLf和Holo-pLf的三维结构开放程度明显不同,Apo-pLf的活性位点可能更容易与细菌直接作用。综上所述,猪乳铁蛋白的抑菌活性依赖于其铁饱和度,Apo-Lf既可以通过螯合铁的方式抑制细菌生长,也可以通过破坏细菌膜结构方式抑制大肠埃希菌K88和金黄色葡萄球菌的生长。

缺铁乳铁蛋白体外抗HBsAg分泌的研究

研究缺铁乳铁蛋白体外抑制HBsAg作用,为乳铁蛋白应用于临床治疗乙肝病毒感染提供理论和实验依据。以天然HBV感染HepG2细胞为模型,通过应用ELISA法测定细胞上清中的HBsAg水平来检测缺铁乳铁蛋白抗HBsAg分泌效果,并用MTT法进行缺铁乳铁蛋白对HepG2细胞毒性研究。结果表明,缺铁乳铁蛋白对细胞的半数中毒剂量(TD50)为8.312 g/L,最大无毒剂量(TD0)为1.5 g/L;用乙肝病毒对HepG2细胞进行感染,分别加入不同浓度的缺铁乳铁蛋白,24,36,48 h测定HBsAg水平,各实验组蛋白对HBsAg分泌几乎没有抑制作用。当HepG2细胞感染乙肝病毒后,缺铁乳铁蛋白不能抑制HBsAg分泌,乳铁蛋白抗HBsAg分泌与其铁饱和度有关,但其机理有待进一步深入研究。