Expression of the B7 - related molecule B7 - H1 by glioma cells: a potential mechanism of immune paralysis

Human glioblastoma is a highly lethal tumor that is known for its immune inhibitory capabilities.B7-homologue l(B7-H 1),a recently identified homologue of B7.1/2(CD80/86),has been described to exert costimulatoryand immune regulatory functions.We investigated the expression and the functional activity of B7-H 1 in humanglioma cells in vitro and in vivo.Although lacking B7.1/2(CD80/86),all 12 glioma cel1 1ines constitutivelyexpressed B7-H1 mRNA and protein.Exposure to IFN-gamma strongly enhanced B7-H 1 expression.Im-

MICA/B分子研究进展

MICA/B基因具有高度多态性,所编码的蛋白是NKG2D的主要配体,MICA/B蛋白结合NKG2D后介导NK和T细胞等的活化及细胞杀伤效应。应激条件下,MICA/B蛋白高表达于细胞表面,并以游离的sMICA/B蛋白分子形式进入细胞外液。越来越多的研究证实MICA/B分子与肿瘤、感染、移植排斥、自身免疫病等多种炎性疾病相关,因此对其表达调控的研究是当前的热点。主要从MICA/B分子与疾病相关性、表达调控及其临床应用等方面近年来的研究进展进行综述。

穿梭质粒pCEPmB_7的构建及其对小鼠宫颈癌U_(14)细胞体内生长的影

目的：构建可用于肿瘤基因治疗研究的基因表达载体ｐＣＥＰｍＢ７，并研究该质粒转染小鼠宫颈癌Ｕ１４细胞后的体内致瘤性变化。方法：（１）用限制性核酸内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＸｈｏⅠ分别对质粒ｐＣＥＰ４和ｐＬＸＳＮｍＢ７进行双酶切，分别回收１０．４ｋｂ的线性ｐＣＥＰ４ＤＮＡ片断和０．９ｋｂ的ｍＢ７ｃＤＮＡ片断，将上述两片断混合，在Ｔ４－ＤＮＡ连接酶的作用下连接，连接液转化受体菌ＴＧ－１，琼脂糖凝胶电泳鉴定连接是否正确；（２）用电穿孔法将ｐＣＥＰｍＢ７转染Ｕ１４细胞，转染后的细胞经ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ（２００μｇ／ｍｌ）选择培养２周后得到选择阳性混合克隆细胞Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７，用流式细胞仪检测Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞中Ｂ７表达阳性细胞的百分率；（３）将Ｕ１４和Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞分别以不同的剂量皮下接种昆明鼠，找出两种细胞的最小成瘤剂量（ｍｉｎｉｍａｌｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｄｏｓｅｓ，ＭｉＴＤ）。结果：（１）连接后的新质粒经双酶切和单酶切后，琼脂糖凝胶电泳鉴定连接正确，该质粒即为ｐＣＥＰｍＢ７；（２）流式细胞仪检测结果显示，Ｕ１４细胞的Ｂ７表达阳性率为５．２４％，Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞的Ｂ７表达阳性率为４?

B-7.1转基因细胞株的表达和检测

目的构建B-7.1基因真核表达载体并导入CAK-1肾细胞癌细胞表达,为进一步研究基因的功能做材料准备。方法采用RT-PCR方法,以正常肝脏组织cDNA为模板,扩增B-7.1基因全长读码框架,并构建到真核表达载体pCDNA3.1中,将其导入CAK-1肾细胞瘤细胞,对转染后的细胞进行RT-PCR和Western blot分析。结果经过克隆测序结果证实,我们成功将B-7.1读码框架插入真核表达载体pCDNA3.1的相应位点,并且,与pCDNA3空载体转染对照细胞相比,pCDNA3-B-7载体转染的CAK-1细胞中B-7基因无论是mRNA水平还是蛋白水平均有明显升高。结论 B-7.1转基因细胞株的成功构建和检测,为深入研究B-7.1蛋白的生物学功能奠定了材料基础。

鸡MHCⅠ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达

[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHCⅠ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHCⅠ分子单链三聚体。[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHCⅠ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体p EGFP-HN_(346-353)-B-Fβ2m-α。[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN_(346-353)-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统。Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应。[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性。

全球环境变化使植物体对增强UV-B辐射信号的感受和传导

据国际上的最新研究成果 ,论述了在全球环境变化引起的UV -B辐射过程中 ,植物对UV -B信号的感受和传导机理 ,其中包括细胞中UV -B信号受体 ,各种信号分子 (诸如活性氧、水杨酸、茉莉酸、乙烯和一氧化氮等 )的级联放大传递以及对于基因表达活性的影响 ,提出了UV -B胁迫信号传递的信号分子级联模型 ,从而为有效防护环境变化引起的UV

共刺激分子在慢性HBV感染患者中的表达及对低复制与再活动阶段表达意义的研究

目的探讨共刺激分子在慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染患者中的表达及对低复制与再活动阶段的表达意义。方法选取2016年2月至2017年2月保定市传染病医院收治的慢性HBV感染患者60例为研究组,选取同期健康体检人员60名为对照组,对比共刺激分子在研究对象中的水平及对低复制与再活动阶段的表达意义。结果研究组患者外周血当中CD_3^+、CD_4^+T及CD_4^+/CD_8^+的比值明显低于对照组,同时CD_8^+明显高于对照组(P<0.05);研究组患者的共刺激分子CD_(28)^+及细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)表达量均明显低于对照组(P<0.05),同时程序性死亡因子-1(PD-1)及T细胞球蛋白粘蛋白分子-3(Tim-3)表达明显高于对照组(P<0.05);HBV感染患者中的表达及对低复制与再活动阶段的表达意义方面,三组研究对象共刺激分子CTLA-4、CD_(28)^+、PD-1及Tim-3表达均存在明显区别(P均<0.05),高拷贝组患者的共刺激分子CTLA-4及CD_(28)^+表达均明显低于低拷贝组(P<0.05),同时PD-1及Tim-3表达量均明显高于低拷贝组(P<0.05)。结论借助于检测共刺激分子在慢性HBV感染患者当中的表达,可以准确体现患者免疫功能,对判断患者预后有一定指导价值。

艾拉莫德联合羟氯喹治疗干燥综合征患者的疗效及对B细胞表面分子表达的影响

目的 分析羟氯喹联合艾拉莫德治疗干燥综合征患者的疗效及其对机体B细胞表面分子表达的影响.方法 将82例干燥综合征患者分为2组各41例.对照组患者采用羟氯喹单药治疗,研究组患者采用羟氯喹联合艾拉莫德治疗.比较2组患者治疗效果、B细胞表面分子表达水平.结果 研究组治疗总有效率90.24%,显著高于对照组的68.29% (P<0.05).研究组免疫球蛋白G、血沉、类风湿因子水平显著低于对照组,血小板计数显著高于对照组(P<0.05).研究组人B细胞活化因子受体(BAFF-R)、CD38-IgD的B细胞表达率以及干燥综合征自我感受评分(ESSPRI)、干燥综合征疾病活动度(ESSDAI)评分均显著低于对照组,泪液分泌试验(SIT)值、唾液流率显著高于对照组(P<0.05).结论 艾拉莫德联合羟氯喹治疗干燥综合征患者效果明显,能抑制B细胞活性,防止免疫球蛋白积聚,改善患者症状.

可溶性H-2K^b与绿色荧光蛋白融合基因的构建及其在COS7中的表达

本文应用基因工程技术构建了可溶性H 2Kb 分子与绿色荧光蛋白 (GFP)融合基因sKb GFP。在COS7细胞中表达后 ,在内质网区域呈现明显绿色荧光。RT PCR结果显示融合基因获得了正确表达 ,蛋白印迹分析表明细胞内产生了预期大小的融合蛋白。细胞培养上清经亲和层析柱纯化后 ,获得了预期大小的重组蛋白。