肠道微生物与细菌性肺炎易感性的因果关系:双样本双向孟德尔随机化研究及cML-MA的应用

目的通过孟德尔随机化研究方法探究肠道菌群与细菌性肺炎易感性之间的因果关系。方法使用三种不同的孟德尔随机化分析方法,对211个肠道菌群类群与细菌性肺炎之间的关系进行211次双样本分析,并进行反向孟德尔随机化分析。以随机效应逆方差加权法(IVW)作为主要结果,并采用其他方法作为补充参考。结果柔膜菌纲(OR=1.14,95%CI 1.02~1.27,P=0.02)、放线菌科(OR=1.17,95%CI 1.02~1.35,P=0.03)、放线菌目(OR=1.17,95%CI 1.01~1.35,P=0.03)以及软壁菌门(OR=1.14,95%CI 1.02~1.27,P=0.02)的丰度升高与细菌性肺炎易感性的增加有关;消化球菌科(OR=0.88,95%CI 0.78~0.98,P=0.02)、直肠拟梭菌群(OR=0.85,95%CI 0.75~0.97,P=0.02)和鞘螺菌科UCG001(OR=0.90,95%CI 0.83~0.99,P=0.03)的丰度升高与细菌性肺炎的发病风险降低相关。一系列敏感性分析以及条件孟德尔随机化分析(cML-MA)的结果表示该研究结果可靠。反向孟德尔随机化未发现反向因果关联。结论肠道微生物的丰度升高与细菌性肺炎的易感性增加或降低相关,肠道菌群在细菌性肺炎发病机制中有重要作用,提供了潜在干预措施的新思路。

Ph^+和Ph^-CML病人外周血TCR Vβ T细胞分布特点

为了解Ph+ 和Ph-慢性粒细胞白血病 (CML)病人外周血TCRVβ亚家族T细胞的分布特点 ,利用RT PCR分别扩增 13例CML病人 (Ph+ b3a2型 5例 ,Ph+ b2a2型 5例 ,Ph-型 3例 )外周血单个核细胞的TCRVβ的2 4个亚家族基因片段 ,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。研究结果 :发现与正常人有所不同 ,病人仅存在部分TCRVβ亚家族T细胞 ,Ph+ b3a2型CML表达 4 - 16 (平均 10 .2 )个Vβ亚家族 ,Ph+ b2a2型CML表达 8- 11(平均8.8)个Vβ亚家族 ,而Ph-者表达 5 - 6 (平均 5 .7)个Vβ亚家族。各病人表达的Vβ亚家族分布有所不同 ,在Ph+(b3a2型 )全部病人表达Vβ10和Vβ16 ,其次为Vβ9和Vβ2 2 ;Ph+ (b2a2型 )除与Ph+ (b3a2型 )相同全部病人表达Vβ10和Vβ16外 ,还全部表达Vβ2 4 ,其次为Vβ8;而Ph-者全部表达Vβ2 4 ,其次为Vβ3,Vβ10 ,Vβ13和Vβ2 2。结论 :提示Ph+ 和Ph-CML病人外周血的TCRVβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象 ,不同类型CML病人T细胞的TCRVβ选择性利用有所不同 。

结球甘蓝类钙调蛋白基因CML48和CML50在不同胁迫下的表达分析

为探究结球甘蓝类钙调蛋白(CMLs)响应不同胁迫时的功能,丰富CMLs参与钙信号网络调控,为CMLs参与植物逆境途径及其功能的研究提供依据。以结球甘蓝ZG为材料,克隆得到CML48和CML50基因,序列分析表明CML48开放阅读框(ORF)为672 bp,含4个内含子,编码223 aa,分子量为25.28 ku;CML50开放阅读框ORF为1095 bp,编码364 aa,分子量为38.06 ku,含3个内含子;均为亲水蛋白,均含有2个EF-hand结构域;系统发育树表明CML48和CML50均与甘蓝处于同一进化枝,与白菜、油菜的亲缘关系最近。qPCR表明CML48和CML50在干旱(PEG6000)、盐胁迫(NaCl)、低温(4℃)、高温(37℃)、H_(2)O_(2)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)等不同胁迫处理下,在叶和根中的表达均有上调,且CML50的表达量均显著高于CML48,CML48在茎尖中高度响应高温胁迫,而在根中不响应高温和H_(2)O_(2)胁迫。初步说明CML48和CML50在根和叶中均可响应上述8种非生物胁迫。

大豆CML家族基因的生物信息学分析

CMLs蛋白是一类具有Ca2＋结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的基本特性;通过与拟南芥CMLs基因的进化树分析表明,GmCML家族基因属于8个亚类;对GmCML家族基因进行了染色体定位与重复基因进化关系分析,发现其具有较高的进化速率;序列比对发现GmCML类蛋白含有2~4个保守的EF-hand结构域;利用芯片数据对野生大豆在碱胁迫下的叶和根中的CMLs基因表达模式进行了分析,得到26个GsCML基因在碱胁迫下有显著的差异表达,且在根和叶中的差异表达模式不同,表明这些基因参与植物碱胁迫应答,且具组织表达特异性。

未知环境中移动机器人并发建图与定位(CML)的研究进展

综述了近年较流行的CML方法 ,侧重比较各自估计与增量式建造地图的过程以及如何处理不确定信息、如何表示地图 .还对CML问题的难点进行了分析 。

CML患者骨髓单个核细胞基因表达谱分析

目的探讨慢性髓细胞性白血病(CML)的基因表达变化。方法分别从正常人和CML患者骨髓样品中抽取骨髓单个核细胞,分离出cDNA片段,然后再逆转录成cRNA并标记后,与人的全基因组表达谱芯片杂交,ABI1700芯片分析系统进行分析基因表达谱的差异。结果总共发现差异表达的基因有6706个,其中与CML相关的差异基因有75个(上调19个,下调56个)。结论全基因组寡核苷酸基因芯片在分析基因表达谱差异研究中具有广泛的应用价值。

植物免疫应答过程中Ca^(2+)及CaM/CML的功能

钙离子是一个多功能的第二信使,在植物响应各种生理刺激时,Ca2+参与调节植物的多种生长发育和胁迫适应过程。在这些过程中,Ca2+信号带有特异性标签,通过Ca2+结合蛋白及其下游靶蛋白感知不同刺激并翻译成响应的细胞反应。钙调素(CaM)和钙调素类蛋白(CML)是Ca2+主要的感受器,通过调节不同靶蛋白的活性调控多种细胞功能。最近在植物对抗病原菌的防卫反应中有关Ca2+/CaM信号转导系统的研究取得了一定进展。重点关注植物免疫应答过程中受CaM/CML调控的信号组分的研究,包括参与Ca2+信号产生和Ca2+依赖的表达基因组分调控。

CML28树突状细胞核酸疫苗的构建及其表达研究(英文)

为了构建负载CML28的核酸疫苗,并在树突状细胞中进行表达,用分子克隆的方法,从K562细胞中克隆出CML28的cDNA全长,将其亚克隆至pGEM-T载体,经测序后酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1HisA,将重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28进行酶切分析和测序鉴定;从正常人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMC),在IL-4和GM-CSF条件下诱导分化为树突状细胞(DC),并进行鉴定;用电穿孔的方法将重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28导入到DC中,WesternBlot检测His-CML28融合蛋白的表达。结果表明:经酶切分析和测序鉴定,重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28含有正确的CML28全长序列;经电穿孔导入DC后,重组质粒能表达His-CML28蛋白。结论:成功构建了CML28树突状细胞核酸疫苗。

实时定量RT-PCR监测造血干细胞移植前后CML28mRNA表达

本研究的目的在于建立检测CML28mRNA的SYBRGreenI实时定量PCR(RQPCR)的方法,并探讨CML28表达水平与异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后白血病复发之间的相关性,为此构建了pcDNA3.1HisACML28质粒作为定量模板,选择14例白血病患者进行研究。14例患者包括:10例慢性髓系白血病(CML),3例急性髓系白血病(AML),1例Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)。应用RocheLightCyclerPCR仪动态监测患者移植前后不同时间段的50份骨髓单个核细胞中CML28表达水平。研究结果表明:RQPCR的灵敏度为10-4(0.05ng)水平,标准品日间差及日内差均小于10%,重复性好。初治组中AML和CML加速期(CMLAP)与急变期(CMLBC)患者CML28呈高表达(6.58±2.34)×10-2,预处理前组CML28水平为(2.19±0.32)×10-2,移植后1月组CML28水平为(1.35±1.28)×10-2,移植后3月及以后组(以下简称移植后3月组)CML28水平为(4.57±6.39)×10-3。定期随访表明,3例CMLAP或BC患者与1例CML慢性期(CMLCP)患者,在AlloHSCT3个月后检测仍呈阳性,其中2例CML28mRNA的水平<2×10-2,获无病生存;2例CML28水平>2×10-2者,一年内均出现复发,其中1例死亡,另1例行第2次AlloHSCT后CML28水平虽然迅速下降,但仍>2×10-2,2个月后再次复发。结论:CML28水平与疾病的演变过程存在良好的相关性,对于造血干细胞移植受者,动态监测CML28水平比单一的结果价值更大,实时定量检测移植后CML28水平对预测白血病复发有一定的意义。

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病 (CML)细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况 ,及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞 肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖 ,用RT PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达 8～ 11个TCRVβ亚家族 ,经MLTC后 ,2～ 3个Vβ亚家族呈克隆性增殖 ,CML细胞诱导的自体T细胞的TCRVβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCRVβ优势利用和克隆性增殖 ,诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。

姜黄素在CML原代细胞STAT5信号途径中的作用

为了研究姜黄素对慢性粒细胞白血病 (CML)原代细胞信号转导和转录激活因子 5 (signaltransducersandactivatorsoftranscription5 ,STAT5 )信号途径的影响 ,并探讨姜黄素治疗CML的临床意义 ,将实验分为三组 :正常对照组 ,CML细胞组和姜黄素组。运用噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞的增殖活性 ,运用半定量逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测细胞STAT5mRNA的变化 ,运用电泳迁移率改变分析法 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测细胞STAT5活化水平。结果表明 :姜黄素组细胞增殖活性 (OD值 0 .6 4 0± 0 .0 73)低于CML细胞组(0 85 6± 0 .0 83) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。CML细胞组STAT5mRNA(光密度积分比值 1.782± 0 .15 6 )较正常对照组 (光密度积分比值 0 .2 89± 0 .0 2 5 )明显增高 (P <0 .0 1) ,姜黄素组细胞STAT5mRNA(光密度积分比值1.398± 0 .12 6 )低于CML细胞组 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。CML细胞组STAT5活化水平 (灰度面积值5 32 3.375± 5 15 .6 4 0 )明显高于正常对照组 (灰度面积值 2 94 3.0 0 0± 2 73.377) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。姜黄素组细胞STAT5活化水平 (灰度面积值 4 331.75 0± 398.0 35 )低于CML细胞组 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 :CML原?

用RT-PCR和Genescan分析CML急变期病人TCRVβT细胞的表达和克隆性

目的：了解CML急变期的TCRVβ亚家族T细胞的表达及其克隆性。方法：采用RT－PCR扩增4例CML急变期病人的外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族的互补决定区3（CDR3），产物进一步经基因扫描分析确定T细胞的克隆性。结果：病人外周血仅表达4～9个Vβ亚家族T细胞，主要为Vβ1，Vβ2，Vβ3，Vβ5，Vβ15和Vβ17；基因扫描分析显示2例CML急粒变的部分产物为寡克隆性，而2例CML急淋变者的产物均为多克隆性。结论：CML急变期外周血仅选择性表达部分Vβ亚家族T细胞；CML急粒变存在克隆性增殖T细胞，这可能是机体对白血病细胞相关抗原的一种直接反应。该方法可用于检测微小残留病变和判断疾病复发。

血清糖基化终产物CML与2型糖尿病血瘀证患者微血管病变危险因素的相关性研究

目的:探讨糖基化代谢终产物(AGEs)与2型糖尿病血瘀证的关系,并通过对血瘀证组和非血瘀证组患者血清羧甲基赖氨酸(CML)水平的比较,进一步加深对中医血瘀证的认识。方法:50～75周岁无明确并发症的2型糖尿病人140例分为血瘀证组34例、非血瘀证组106例。比较2组证型尿微量白蛋白(mAlb)、体重指数(BMI)、糖脂代谢指标(FBG、PBG、HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C)、血压(SBP、DBP)及性别、年龄、病程等相关因素的差异。应用酶联免疫方法(ELISA)测定2组人群羧甲基赖氨酸(CML)和可溶性糖基化终产物受体(sRAGE)水平。结果:糖尿病血瘀证组患者尿m-Alb和血清CML均显著高于非血瘀证组,而2组其余指标未见明显差异;CML与尿m-Alb和sRAGE呈显著正相关。结论:糖尿病血瘀证组患者血清CML水平和尿m-Alb明显高于非血瘀证组,血清CML可作为血瘀证相关的客观指标,对糖尿病肾病的早期发生可能具有预测价值。

高三尖杉酯碱诱导K562和CML细胞凋亡及分化的实验研究

目的 明确高三尖杉酯碱 (HHT)治疗慢性粒细胞性白血病 (CML)的机理。方法 应用细胞生长曲线、克隆形成能力、细胞内血红蛋白含量测定、细胞形态 ,结合DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法 ,观察HHT对K5 6 2细胞株及CML慢性期细胞的作用方式。进一步用RT PCR方法研究bcr abl、c myc、max基因在转录水平的改变。结果 低浓度HHT抑制K5 6 2细胞的克隆形成能力并使K5 6 2细胞内血红蛋白含量增加 ;0 .1μmol/L及以上浓度HHT可诱导K5 6 2细胞及CML细胞凋亡 ;细胞周期分析发现细胞阻滞于G1期。c myc基因在加药 2 4h开始下调 ;bcr abl和max基因的表达未见明显改变。结论 低浓度HHT可抑制K5 6 2细胞增殖并诱导其向红系分化 ;超过一定“阈浓度”HHT可诱导K5 6 2细胞和CML慢性期细胞凋亡 ;HHT可通过抑制c

CMLs参与调控植物花粉授粉竞争的作用

【目的】在显花植物生殖过程中花粉萌发和花粉管生长起着至关重要的作用,这一过程受许多因素的影响,其中钙调素类似蛋白(calmodulin-like proteins,CMLs)通过直接或间接的作用机制调控花粉萌发及花粉管生长。然而,迄今人们对CMLs的功能研究尚少。本文旨在初步了解CMLs蛋白在花粉竞争优势中的作用,为深入探究CMLs蛋白在植物花粉竞争优势中的分子机制奠定理论基础。【方法】本文主要通过对参与调控花粉萌发以及花粉管生长过程的CMLs蛋白的结构、表达水平、细胞定位及其作用机理的归纳,结合不同植物中出现的花粉竞争现象,综合分析并总结国内外相关研究结果。【结果】CMLs蛋白约有4个保守的EF手性结构域,当CMLs蛋白结合Ca^(2+)时,其构象发生变化,增强与下游受体蛋白的结合能力,并启动Ca^(2+)依赖的级联信号放大效应,引起花粉管中Ca^(2+)的浓度变化,影响从萌发孔到花粉管顶端Ca^(2+)浓度梯度的形成,从而调控花粉管的正常生长。CMLs蛋白的表达还可以影响Mg^(2+)、NO等离子的浓度变化,影响Ca^(2+)与EF手性结构域的结合及花粉管生长的导向。不同CMLs蛋白具有不同生理功能,其中参与花粉萌发及花粉管生长的CMLs蛋白主要在植物花器官中表达;部分显花植物在受精过程中,不同倍性花粉之间可能由于基因组大小或者营养物质含量的差异,导致萌发率及生长速率的不同。【结论】CMLs蛋白可能通过在不同倍性花粉中的差异表达,影响花粉在体内萌发的进程,使其在某一时期表现出竞争优势。

α干扰素联合化疗治疗CML的分子水平疗效观察

目的 :分析 bcr/ abl融合基因表达水平与α干扰素 (IFNα)治疗慢性粒细胞白血病 (CML )疗效及预后的关系。方法 :应用半定量 RT- PCR方法 ,分析 6例α干扰素治疗的 CML患者不同时期骨髓细胞 bcr/ abl融合基因表达水平。结果 :5例患者 bcr/ abl融合基因表达水平减低 ,临床获得持久完全血液学缓解。结论 :半定量 RT- PCR有助于α干扰素治疗 CML的疗效观察及预后判断。

结球甘蓝类钙调蛋白CMLs与花粉萌发NPG1及NPGRs相互作用研究

类钙调蛋白作为钙调蛋白的家族之一,调控植物生长发育、激素调控及各种胁迫,对类钙调蛋白对参与花粉萌发及伸长的深入研究具有重要意义。为研究结球甘蓝花粉CMLs与NPG1及相关蛋白互作关系,探索CMLs在花粉发育及萌发过程的功能,本研究以结球甘蓝ZG为材料,克隆到12个花粉发育及萌发相关CMLs基因,及花粉萌发基因NPG1、NPGR1和NPGR2,通过酵母双杂交试验检测编码蛋白相互之间的互作关系,并检测NPG1、NPGR1和NPGR2在不同授粉时间后的表达水平。结果表明, 12个CMLs基因开放阅读框(open reading frame, ORF)在447~1095bp之间,其中CML20、CML48、CML49、CML50均含有4个内含子, CML21含有2个内含子,其余均不含内含子;编码蛋白均不含信号肽和跨膜域,均为胞外蛋白,且均为亲水性蛋白;分别含有2~4个EF-Hands结构域,氨基酸数目在148~364个氨基酸之间,亚细胞定位预测主要定位于细胞膜、液泡及细胞核中;结球甘蓝NPG1、NPGR1、NPGR2分别聚类到不同的进化枝上,与油菜、白菜的亲缘关系最近,与拟南芥亲缘关系较近;酵母双杂交试验表明, CML13、CML21、CML24、CML42不能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML15、CML20、CML25、CML39、CML41、CML48、CML49均能与NPG1、NPGR1及NPGR2在体外发生相互作用, CML50可与NPGR1、NPGR2互作,而不能与NPG1发生互作。表达分析表明, NPG1表达量在授粉后的柱头中呈显著上升趋势, NPGR1、NPGR2表达量变化均不显著;CMLs在不同授粉时间均有不同的表达量变化,其中CML15、CML20、CML39、CML41、CML49均呈现出先升高后下降的趋势。本研究在结球甘蓝中筛选得到能与NPG1、NPGRs互作的CMLs蛋白,说明多个CMLs能参与花粉萌发及花粉管伸长过程,期望为Ca^(2+)信号系统参与花粉萌发及花粉管伸长的机制研究提供参考。

吲哚美辛对CML细胞增殖抑制效应与STAT信号转导途径抑制相关

本研究的目的是观察吲哚美辛作用下慢性粒细胞白血病 (CML)细胞增殖抑制过程中JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达水平的变化及细胞内分布 ,揭示吲哚美辛抑制CML细胞增殖的分子机制。采用MTT及台盼蓝拒染法检测吲哚美辛对CML细胞的增殖抑制作用 ,用Westernblot分析CML细胞JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达 ,用间接免疫荧光技术观察STAT1和STAT5在吲哚美辛干预的CML细胞中的定位及变化。结果表明 :4 0 0 μmol/L浓度的吲哚美辛能明显抑制CML细胞增殖及STAT1、STAT5蛋白质表达 ,但对JAK2蛋白无影响 ;STAT1和STAT5主要分布于细胞胞浆中。结论 :吲哚美辛可抑制CML细胞增殖 ,其机制可能与药物下调STAT1、STAT5蛋白质表达或与阻断细胞生长信号传导有关。

CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

目的:获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术从睾丸中获得cML66的cDNA,亚克隆至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE、Westernblot鉴定后,应用纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列 一致。用纯化的目的蛋白免疫家兔后,获得高滴度的特异性兔抗血清。结论:成功地克隆CML66基因,建立了原核表达、纯化体系。制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清。