胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性

目的探讨胃癌模型大鼠胃黏膜组织细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性。方法选择48只健康成年雌性大鼠,按照随机数字表法将其分为对照组、研究1组、研究2组、研究3组,每组各12只。研究1组、研究2组、研究3组均制备成胃癌模型。对照组给予等量0.9%氯化钠溶液,第24周处死取材;研究1组、研究2组、研究3组制备成胃癌大鼠后分别于第8、16、24周取材。分析各组大鼠一般情况及胃黏膜组织病理切片,采用蛋白质印迹法检测胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA的表达,采用Spearman分析法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度相关性。结果对照组大鼠胃黏膜完整正常,外膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层等结构清晰,且无炎症细胞浸润;研究1组大鼠胃黏膜组织与对照组大鼠接近,不存在炎症细胞,且黏膜腺体结构基本正常;研究2组大鼠胃黏膜组织存在破损,细胞核变大,基底部部分腺体细胞形态异常,存在轻度异型性,为早期胃癌;研究3组大鼠胃黏膜组织增加破损,核质比变大,细胞形态不规则,部分腺体存在扩张,黏膜下层及肌层存在炎症细胞浸润,为胃癌进展期。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。采用Spearman相关性结果分析显示,胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度呈正相关(r=0.382、0.781、0.993,均P<0.001)。结论胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT呈高表达,其与胃癌病变程度密切相关。

Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平预测慢性鼻窦炎-鼻息肉术后复发的临床研究

目的探究Cyclin D1、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达含量联合中性粒细胞/淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte Ratio,NLR)和血小板/淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte Ratio,PLR)水平预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronic Rhinosinusitis with Nasal Polyps,CRSwNP)复发的临床加价值。方法选取广东省韶关市粤北人民医院耳鼻喉科于2021年1月—2022年6月收治的333例CRSwNP患者为研究对象,均行慢性鼻窦炎-鼻息肉术治疗,根据术后复发情况分为复发组(138例)和未复发组(195例),比较两组患者一般资料、Cyclin D1、VEG、NLR、PLR水平,采用受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析Cyclin D1、VEGF联合NLR、PLR水平对CRSwNP者术后1年复发的预测效能。结果两组Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平对比,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CRSwNP患者复发的影响因素包括Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平(OR=1.521、1.483、1.365、1.403,P均<0.05)。ROC曲线结果显示Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR四者联合检测的灵敏度、特异度及曲线下面积均高于单独检测(P均<0.05)。结论Cyclin D1、VEGF、NLR、PLR水平是诱发CRSwNP患者术后复发的相关因素,也是预测CRSwNP患者术后复发的可靠性指标。

Cyclin D1在黄芪甲苷诱导BMSCs向神经元样细胞分化中的表达

目的:研究黄芪甲苷诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分化的特点和诱导过程中Cyclin D1的表达特点。方法:采用100 mg·L^(-1)黄芪甲苷诱导BMSCs分化,在1、12、24 h倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法观察巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、Cyclin D1的表达,RT-PCR检测Cyclin D1 mRNA的表达。结果:收集获得的骨髓细胞采用原代和传代培养,至第3代BMSCs细胞基本纯化。经100 mg·L^(-1)黄芪甲苷作用后,部分细胞自胞体长出突起,形态似神经元样细胞且表达Nestin和NSE抗体,Nestin的表达时相早于NSE且表达强度高于NSE(P<0.05)。在药物作用1 h后,BMSCs细胞Cyclin D1不论在基因转录水平还是在蛋白表达水平均出现大幅度下调,此时BMSCs开始有Nestin的表达;药物作用12、24 h,BMSCs细胞Cyclin D1表达与药物作用前表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:黄芪甲苷可能首先通过调整细胞周期,延长了G1期向S期转变的时间,从而启动了BMSCs的分化程序,诱导BMSCs向神经干细胞分化。在黄芪甲苷的营养作用下,细胞的突起进一步生长并向神经元分化。

“乳香-没药”药对对乳腺增生大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERα表达的影响

目的观察乳香-没药药对对乳腺增生模型大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2及ERα表达的影响,探讨乳香-没药药对干预乳腺增生症的作用机制。方法选取70只未孕雌性SD大鼠,随机筛选10只作为正常对照组,剩余60只大鼠作为模型制备组。行传统激素法造模,常规饲养30d后,分别于正常对照组及模型制备组随机选取1只及6只大鼠处死,取大鼠第二、三对乳腺组织行病理检查。造模成功后,将模型制备组余下54只大鼠随机分为模型组、乳香-没药组、乳香组、没药组、乳癖散结颗粒组、他莫昔芬组,加正常对照组共7组,每组大鼠各9只。行药物灌胃干预,总干预时间为20d。干预结束后,用游标卡尺测量大鼠乳房直径及乳头高度;取大鼠第二、三对乳腺组织,采用HE染色行大鼠乳腺组织形态学检测;应用Real-time PCR法测定大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERα的基因表达情况。结果外观表现结果示:与正常组比较,模型组大鼠乳房直径、乳头高度显著增加(P<0.01);与模型组比较,乳香-没药组、乳癖散结颗粒组及他莫昔芬组大鼠乳房直径、乳头高度明显减小(P<0.01),乳香组乳房直径明显减小(P<0.01)。HE染色显示:与模型组比较,各药物组大鼠乳腺增生病症均有不同程度减轻。qPCR结果示:与正常组比较,模型组大鼠乳腺组织Cyclin D1、Cyclin D2、ERαmRNA表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,各药物组Cyclin D1 mRNA表达均显著降低(P<0.01),乳香-没药组、乳香组、乳癖散结颗粒组及他莫昔芬组Cyclin D2 mRNA表达显著降低(P<0.01),乳香-没药组、乳香组、他莫昔芬组ERαmRNA表达显著降低(P<0.01)。结论乳香-没药药对治疗乳腺增生症的作用机制可能与下调乳腺增生大鼠乳腺组织Cydin D1、Cyclin D2及ERα的基因表达水平有关。

甲状腺滤泡性病变中Cyclin D1的表达及其诊断意义

目的探讨Cyclin D1在甲状腺滤泡性癌、滤泡性腺瘤和滤泡结节性病变中的表达及诊断和鉴别诊断意义。方法收集24例滤泡性癌、41例滤泡性腺瘤和40例滤泡结节性病变的临床资料,采用HE染色和免疫组化法检测Cyclin D1的表达,并依据Cyclin D1染色强度、阳性细胞百分比进行结果判定,分为+、和三个等级;分析Cyclin D1表达与甲状腺滤泡性病变诊断的相关性。结果甲状腺滤泡性病变组织中Cyclin D1阳性率100%。Cyclin D1(+、++)在3种甲状腺滤泡性病变中均有表达,而Cyclin D1(+++)仅在滤泡性腺瘤和滤泡性癌中表达;Cyclin D1(+)在92.5%(37/40)的滤泡结节性病变中表达,Cyclin D1(++)在56.1%(23/41)的滤泡性腺瘤中表达,Cyclin D1(+++)在75.0%(18/24)的滤泡性癌中表达,差异有统计学意义(χ^(2)=85.23,P<0.001)。Cyclin D1(+)在滤泡结节性病变中的表达比例明显高于滤泡性肿瘤,Cyclin D1(++)在滤泡性癌中的表达比例高于滤泡性腺瘤,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论Cyclin D1在甲状腺滤泡性癌、滤泡性腺瘤和滤泡结节性病变组织中的表达有差异,对三者的诊断和鉴别诊断有应用价值。

腹腔镜胃癌根治性切除标本cyclin D1和SLeX表达的临床病理研究

目的探讨腹腔镜胃癌根治性切除标本cyclin D1和SLeX表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法85例腹腔镜胃癌根治性手术切除标本及30例癌旁胃组织,应用免疫组织化学染色EliVision^(TM)plus二步法检测cyclin D1和SLeX在胃癌及癌旁胃组织中的表达,分析cyclin D1和SLeX与患者性别、癌灶大小、分化程度、临床分期、转移浸润及5年生存期6项临床病理特征的相关性。结果癌组织cyclin D1和SLeX阳性率分别为61.2%(52/85)和85.9%(73/85),癌旁胃组织cyclin D1和SLeX阳性率分别为0和6.7%(2/30),差异均有统计学意义(P<0.05)。Cyclin D1和SLeX表达与性别及癌灶大小无关(P>0.05),在低分化、进展期、有转移浸润和5年内死亡患者中,Cyclin D1和SLeX阳性率均显著高于(高+中)分化、早期、无转移浸润和5年内生存患者(P<0.05)。Cyclin D1和SLeX表达呈正相关(r=0.40)。结论Cyclin D1和SLeX与胃癌发生发展显著相关,两者共阳性表达预示胃癌分化程度低、进展快、易浸润转移、生存期短。

IL-6、STAT3和Cyclin D1在结直肠腺癌组织中表达及临床意义

目的 研究白细胞介素6(IL-6)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在结直肠腺癌及癌旁组织中表达及其相关性,并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性。方法 通过免疫组织化学法检测IL-6、STAT3和Cyclin D1在80例结直肠腺癌和癌旁组织中的表达水平,分析三者表达相关性及其与临床病理特征和预后的关系,并通过生物学数据库验证结果。结果 癌组织中IL-6、STAT3和Cyclin D1表达的阳性率分别为53.8%、63.8%、62.5%,癌旁组织中IL-6、STAT3和Cyclin D1的表达阳性率分别为32.5%、25.0%、15.0%(P<0.05)。癌组织中IL-6与STAT3的表达呈正相关(P<0.05);STAT3与Cyclin D1的表达呈正相关(P<0.05)。IL-6与CyclinD1的表达呈正相关(P<0.05)。STAT3与肿瘤的淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05);Cyclin D1与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期相关(P<0.05)。单因素分析显示,肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期、Cyclin D1是影响结直肠腺癌患者术后预后的危险因素;多因素分析表明,肿瘤分化程度、Cyclin D1是影响结直肠腺癌患者术后预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 IL-6、STAT3和Cyclin D1在结直肠腺癌组织中过表达。Cyclin D1是结直肠腺癌术后预后的独立危险因素,可作为评估结直肠腺癌患者临床进展及预后的指标。

朗格汉斯细胞组织细胞增生症BRAF-V600E基因突变和Cyclin D1表达及临床意义

目的探讨朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)中BRAF-V600E基因突变状态、Cyclin D1蛋白表达,及其临床意义。方法收集2017年10月至2023年7月荆门市中心医院诊断的5例LCH,进行组织病理学观察、免疫组织化学染色及BRAF-V600E基因突变检测,并随访及复习文献。结果男性3例,女性2例,发病年龄6~59岁(中位年龄20岁)。组织病理学:肿瘤细胞呈片、巢状分布,胞质丰富、淡染,细胞核呈肾形、咖啡豆样、有核沟,背景伴有较多嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及组织细胞浸润。免疫表型:肿瘤细胞呈CD1α、Langerin、S-100、Cyclin D1阳性。BRAF-V600E基因突变率:1例病例检测到BRAF-V600E基因突变。结论LCH是一种具有复杂的临床病理学特征、少见的未成熟树突状细胞异常增生导致的肿瘤性疾病,容易误诊、漏诊,Cyclin D1蛋白及BRAF-V600E基因突变检测可作为LCH辅助诊断指标,并为靶向治疗提供依据。

NEIL3调控AKT/GSK3β/Cyclin D1信号通路诱导肺腺癌细胞增殖

目的探讨NEIL3(Nei核酸内切酶VIII样蛋白3)在肺腺癌组织中的表达,明确其对肺腺癌细胞增殖的影响和分子机制。方法免疫组化检测肺腺癌组织NEIL3的表达,分析NEIL3表达与患者临床病理参数和生存预后的关系。采用short hairpin RNA(shRNA)慢病毒载体转染技术干扰肺腺癌细胞A549中NEIL3的表达后,平板克隆实验、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验和流式周期实验检测细胞增殖的改变;Western blot检测增殖相关分子Cyclin D1和信号通路AKT/GSK3β/β-catenin的改变。结果NEIL3表达与肺腺癌患者的临床分期、T分期及生存时间有关(P<0.05)。干扰NEIL3表达诱导A549细胞出现G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖(P<0.05)。机制上,抑制NEIL3可促进Cyclin D1蛋白酶体降解从而下调其蛋白水平;干扰NEIL3可抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的激活(P<0.05)。结论NEIL3诱导肺腺癌细胞的增殖,机制可能与其调控AKT/GSK3β信号通路抑制Cyclin D1蛋白酶体降解有关。

Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在乳腺导管内增生性病变的表达及其意义

目的探讨B细胞淋巴瘤因子3(Bcl-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P53基因编码蛋白和增殖细胞核蛋白(Ki-67)在乳腺导管内增生性病变中的表达及应用价值。方法采用免疫组化检测乳腺普通型导管增生(UDH)、柱状上皮病变(CCL)、非典型导管增生(ADH)和导管原位癌(DCIS)组织中Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达。结果Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在UDH中均少量表达;在CCL、ADH和DCIS中均明显表达,且随着病变的级别升高,阳性率逐渐增高(P<0.05);Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白在CCL、ADH和DCIS中着色强阳性(++~+++)的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达在乳腺导管内增生性病变的病理诊断、鉴别诊断及指导临床治疗方面有较高应用价值,可显著提高乳腺导管内增生性病变的诊断准确率。

Cyclin D1通过促进糖酵解改善肾脏缺血再灌注诱导的急性肾损伤的机制

目的探索CCND1通过促进糖酵解改善肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤(AKI)的作用及其分子机制,为AKI提供新的治疗靶点。方法采用8周龄的C57/BL6雄性小鼠构建肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)模型。使用CCND1过表达质粒及CCND1干扰质粒,在体内及体外验证CCND1在AKI中的作用。用肌酐检测试剂盒、尿素氮检测试剂盒检测肾脏功能,通过免疫组化、免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测肾小管上皮细胞糖酵解、肾脏损伤等指标。结果在肾缺血再灌注诱导的AKI模型中,肾小管上皮细胞CCND1表达下调,细胞及组织出现损伤。在体内使用CCND1过表达质粒过表达CCND1,IRI小鼠的肾脏功能较前明显改善,肾脏损伤较前减轻,过表达CCND1可促进糖酵解,促进丙酮酸的生成,使能量生成增加。在肾小管上皮细胞中,过表达CCND1后可促进糖酵解,能量生成增加,减轻AKI;相反,敲低CCND1会抑制糖酵解,细胞能量生成严重受阻,损伤进一步加重。结论在AKI中,肾小管上皮细胞中CCND1表达下调,过表达CCND1可以减轻肾缺血再灌注诱导的AKI,这可能与过表达CCND1可促进糖酵解、及时恢复细胞和组织的能量供给等机制相关。

子宫内膜间质肉瘤中BCOR、CD10和Cyclin D1的诊断意义

目的探讨子宫内膜间质肉瘤(endometrial stromal sarcoma,ESS)中BCOR、CD10和Cyclin D1的表达及其诊断意义。方法收集38例ESS,其中低级别子宫内膜间质肉瘤(low-grade endometrial stromal sarcoma,LG-ESS)23例、高级别子宫内膜间质肉瘤(high-grade endometrial stromal sarcoma,HG-ESS)12例和未分化子宫肉瘤(undifferentiated uterine sarcoma,UUS)3例,另收集6例子宫平滑肌肉瘤(包括2例黏液性平滑肌肉瘤)和20例子宫富于细胞性平滑肌瘤作为对照组,采用免疫组化EnVision法检测BCOR、CD10和Cyclin D1在不同子宫组织中的表达,分析三者的差异表达并复习相关文献。结果BCOR在HG-ESS、LG-ESS、UUS、平滑肌肉瘤和富于细胞性平滑肌瘤中的表达分别为7、1、0、0和0例,CD10在HG-ESS、LG-ESS、UUS、平滑肌肉瘤和富于细胞性平滑肌瘤中的表达分别为8、21、1、2和4例,Cyclin D1在HG-ESS、LG-ESS、UUS、平滑肌肉瘤和富于细胞性平滑肌瘤中的表达分别为5、4、1、1和0例。结论BCOR在HG-ESS中具有较高的敏感性与特异性,特别是在Cyclin D1阴性和伴黏液样背景的HG-ESS中,可联合CD10和Cyclin D1用于HG-ESS的诊断及鉴别诊断。

热敏灸对慢性萎缩性胃炎模型大鼠c-myc、survivin、Cyclin D1的影响

目的观察热敏灸"中脘"穴对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜原癌基因(c-myc)、存活素(survivin)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。方法 66只SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、造模组。空白组正常饲养,造模组采用复合病因造模法连续造模12周后,随机分为模型组、维酶素组、艾灸组。艾灸组艾灸"中脘"穴40min,艾灸后按2ml/(kg·d)灌服0.9%NaCl,根据艾灸过程中大鼠尾温变化分为热敏灸组和非热敏灸组,维酶素组灌服等量维酶素,1次/d,共28d。实验结束后光镜观察胃黏膜组织学变化,Real time-PCR法检测胃黏膜c-myc、survivin mRNA表达;免疫组化法检测Cyclin D1蛋白的表达,IPP6.0软件对免疫组化照片进行平均光密度分析。结果①与空白组相比,模型组胃黏膜c-myc、survivin mRNA表达均明显升高(均P<0.01);与模型组相比,非热敏灸组、热敏灸组、维酶素组均能降低c-myc、survivin mRNA表达(均P<0.01),且热敏灸组及维酶素组均优于非热敏灸组(P<0.05,P<0.01);在降低c-myc mRNA方面维酶素组优于热敏灸组(P<0.05),在降低survivin mRNA方面热敏灸组与维酶素组疗效相当。②空白组cyclin D1呈阴性表达,模型组呈强阳性表达,维酶素组、热敏灸组和非热敏灸组较模型组表达均下降,维酶素与热敏灸组阳性表达近似,但均明显低于非热敏灸组。与空白组相比,模型组、非热敏灸组Cyclin D1平均光密度表达升高(均P﹤0.01);与模型组相比,非热敏灸组、热敏灸组及维酶素组Cyclin D1表达均下降(P﹤0.05,P﹤0.01);与非热敏灸组相比,热敏灸组、维酶素组Cyclin D1表达降低(均P﹤0.05),但热敏灸组与维酶素组间无差异。结论①热敏灸能明显改善CAG大鼠体质量及胃黏膜组织病理形态。②热敏灸可能通过调控胃黏膜c-myc、survivin mRNA、Cyclin D1表达,恢复胃黏膜细胞增殖与凋亡平衡而达到治疗CAG的目的。

涎腺腺样囊性癌中Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130表达及意义

目的探讨Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及与涎腺腺样囊性癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化SP法检测46例涎腺腺样囊性癌和30例正常涎腺组织中Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白的表达。结果 Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130在涎腺腺样囊性癌中的阳性率分别为71.74%、67.39%、63.04%;Cyclin D1和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达与病理类型有关(P<0.05),MMP-7在涎腺腺样囊性癌中的表达与病理类型无关(P>0.05);Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白在涎腺腺样囊性癌复发组中的阳性率与无复发组相比,差异有显著性(P<0.05);Cyclin D1与PRB2/p130在涎腺腺样囊性癌中的表达呈负相关,与MMP-7表达呈正相关。结论 Cyclin D1、MMP-7和PRB2/p130蛋白的异常表达在涎腺腺样囊性癌发生、发展和复发中起重要作用,联合检测多个指标可能对患者预后的判断有指导意义。

表皮生长因子对卵巢黄素化颗粒细胞cyclin D1和P21表达的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)对颗粒细胞细胞周期的影响及其在颗粒细胞增殖、分化机制中的作用。方法选取IVF-ET助孕方式治疗患者的卵巢黄素化颗粒细胞为研究对象,分离纯化后分为对照组和实验组,对照组为正常培养的颗粒细胞,不添加EGF;实验组为添加10 ng·mL^-1EGF培养24 h的颗粒细胞。利用CCK-8试剂盒在450 nm波长条件下用酶标仪检测细胞增殖状况以观察EGF作用的最佳浓度;利用流式细胞仪检测EGF对颗粒细胞周期的影响;利用RT PCR技术检测EGF对颗粒细胞cyclin D1和P21 mRNA相对表达的影响;利用Western blot技术检测EGF对颗粒细胞cyclin D1和P21相对蛋白表达水平的影响。结果采用本研究所建立的方法可以获得生长活力好、细胞纯度高以及较稳定的人卵巢黄素化颗粒细胞;CCK-8结果显示EGF最佳作用浓度为10 ng·mL^-1;细胞周期结果显示,EGF使人卵巢黄素化颗粒细胞周期表现为G0/G1期的比例减少,S+G2/M期的比例增高(P均<0.05);RT PCR结果显示,与对照组相比EGF作用后cyclin D1基因相对表达量升高,P21基因相对表达量下降(P均<0.01);Western blot结果显示,与对照组相比EGF作用后,颗粒细胞cyclin D1蛋白相对表达量升高,P21蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论添加10 ng·mL^-1浓度的EGF培养人卵巢颗粒细胞可通过对细胞周期调控因子cyclin D1和P21mRNA及蛋白表达水平的影响,促进颗粒细胞增殖。

胃癌中Cyclin D1和p53蛋白的表达及意义

目的 检测 72例胃癌和癌旁组织及 2 0例正常胃粘膜中的CyclinD1和p5 3蛋白 ,探讨它们在胃癌发生、发展中的作用及意义。方法 采用链菌素亲生物素———过氧化物酶法 (SP法 )。结果 胃癌组织中CyclinD1和p5 3蛋白总阳性表达率分别为 47.2 2 %和 5 2 .78% ,与癌旁组织或正常对照胃粘膜组织比较均有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;二者均与胃癌分化程度有关 ,其中p5 3蛋白表达与肿瘤深度 ,淋巴结转移 ,远处转移等因素有明显相关 (P <0 .0 1) ,但CyclinD1表达与之无关 (P >0 .0 5 )。胃癌中CyclinD1与p5 3蛋白表达呈正相关 (r =+0 .45 )。结论 CyclinD1与p5 3蛋白过表达与胃癌的发生 ,分化有关 ,其中CyclinD1过表达是胃癌发生过程中一个较早的分子事件 ,而p5 3蛋白过表达是相对较晚的分子事件 ,可做为早期诊断 ,判断预后和胃癌分化程度的一个参考指标。

高糖对人角膜上皮细胞创伤修复中Cyclin D1蛋白表达的影响

目的:研究高糖环境对人角膜上皮细胞损伤修复的影响,初步探讨Cyclin D1蛋白在高糖培养的角膜上皮细胞创伤愈合中表达的意义。方法:模拟糖尿病角膜病变的高糖微环境,人角膜上皮细胞经复苏、培养传代后,分别设置等体积蒸馏水的DMEM完全培养基的正常对照组和含25mmol/L葡萄糖的DMEM完全培养基高糖处理组的两组细胞,细胞长满后进行划伤刺激,倒置相差显微镜下观察比较各组细胞生长状况及其变化,于不同时间点(0、12、24、48和72h)利用Western blot检测分析高糖培养的角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达,qRT-PCR检测Cyclin D1 mRNA水平相对表达情况。结果:体外高糖处理条件下,人角膜上皮细胞划伤后修复速度减慢,漂浮细胞增多,细胞重新贴壁少,细胞间距增加,随着高糖处理时间的延长,细胞状态变差,生长速度慢;正常组细胞损伤修复较快,细胞密度增大,且形态规则,细胞膜光滑。Western blot检测划伤刺激上调Cyclin D1的表达,但随着时间延长上调作用呈逐渐减弱,两组Cyclin D1最高表达量均出现在12h。高糖处理组Cyclin D1表达量低于正常对照组。qRT-PCR结果显示:高糖处理后,Cyclin D1 mRNA表达呈上调趋势,但随着高糖处理时间延长,上调作用减弱,且在48h处mRNA水平恢复至与对照组同一水平。结论:在角膜上皮细胞创伤愈合过程中,高糖呈负性调节,抑制Cyclin D1蛋白的表达,且与角膜上皮细胞增殖能力下降及凋亡相关。

模型化研究Cyclin D1介导的胰岛素对糖代谢的调节

胰岛素(Insulin)通过细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)调节糖代谢的物理机制,一直缺乏系统完整的理解.基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究Cyclin D1介导的Insulin对糖代谢的调节作用,研究发现,Insulin通过刺激AKT抑制GSK3,促进Cyclin D1表达提升.形成的Cyclin D1-CDK4复合物,改变组蛋白乙酰转移酶(GCN 5)的活性及磷酸化水平,实现对糖代谢重要参与酶PCK1的抑制调节,进而调控糖转化代谢.理论结果符合实验,进一步系统完整地揭示了Cyclin D1介导的Insulin对糖代谢调节的调控机理,确认了Cyclin D1对糖代谢的调控作用,可为设计阻断Cyclin D1异常导致的病变治疗方案提供理论依据.

miR-16通过调控Cyclin D1蛋白逆转乳腺癌他莫昔芬耐药的作用机制研究

目的 研究miR-16在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及机制,探索逆转他莫昔芬耐药的潜在靶点。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MCF-7细胞与他莫昔芬耐药株MCF-7/TAM细胞中miR-16的表达;转染miR-16 NC和miR-16 mimics至MCF-7/TAM细胞中,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;Target Scan数据库检测miR-16的靶目标,双荧光素酶报告实验检测Cyclin D1-WT+miR-16 NC组、Cyclin D1-WT+miR-16 mimics组、Cyclin D1-MUT+miR-16 NC组、Cyclin D1-MUT+miR-16 mimics组MCF-7细胞的荧光活性;WB检测miR-16 NC组和miR-16 mimics组MCF-7细胞中Cyclin D1的表达;转染Cyclin D1 NC和Cyclin D1至MCF-7/TAM+miR-16 mimics细胞中,MTT检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 miR-16在他莫昔芬耐药株MCF-7/TAM细胞中低表达(P<0.05)。MCF-7/TAM+miR-16 mimics细胞活性降低,凋亡增加,细胞周期受阻(P<0.05)。miR-16和Cyclin D1存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示Cyclin D1-WT+miR-16 mimics组细胞荧光素酶的活性降低(P<0.05),且MCF-7/TAM+miR-16 mimics细胞Cyclin D1水平较MCF-7/TAM细胞降低(P<0.05)。转染Cyclin D1质粒后的MCF-7/TAM+miR-16 mimics细胞其增殖水平增加,凋亡减少,细胞周期加速(P<0.05)。结论 miR-16通过调控Cyclin D1的表达逆转乳腺癌细胞TAM耐药。

高糖培养人晶状体上皮细胞创伤后Cyclin D1的表达

目的:观察高糖培养的人晶状体上皮细胞在创伤刺激后Cyclin D1的表达情况。方法:采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEB3)作用24h后细胞增殖活性的影响,确定最适葡萄糖作用浓度。将HLEB3细胞分为高糖预处理组(高糖培养基预处理24h后再更换高糖培养基培养)和非高糖预处理组(正常培养基培养24h后再更换高糖培养基培养),根据更换高糖培养基时是否进行划伤处理将细胞分为对照组和划伤组,分别采用qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞创伤后不同时间点Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:一定浓度范围的葡萄糖能够增强细胞增殖活性,25.5mmol/L葡萄糖处理时细胞活性最强。高糖预处理细胞Cyclin D1表达在一定时间范围内呈时间依赖性表达下调;非高糖预处理细胞Cyclin D1表达呈不规律性,在12h和48h处表达上调;划伤处理可在一定程度上刺激细胞Cyclin D1表达上调。结论:葡萄糖对人晶状体上皮细胞活性及Cyclin D1表达的影响呈现不规律性,创伤处理可在一定程度上上调细胞Cyclin D1的表达。