FXR1真核表达载体的构建及鉴定

目的构建携带人脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体pCMV-HA,为研究FXR1P互作蛋白奠定基础。方法以pYESTrp3-FXR1为模板进行聚合酶链反应(PCR)特异扩增FXR1基因片断,将扩增片段经EcoR I和XhoI双酶切后克隆到pCMV-HA载体,酶切鉴定阳性克隆并测序鉴定。结果成功构建了pC-MV-HA/FXR1真核表达载体。结论pCMV-HA/FXR1真核表达载体的构建为进一步在细胞内鉴定FXR1互作蛋白奠定了基础,从而对研究FXR1在脆性X综合征中的作用机理具有深远意义。

FXR基因家族

FXR基因家族是与脆性X综合征发病相关的一个基因家族。有3个家族成员。在进化上高度保守，氨基酸序列高度相似，有共同的功能结构域：两个KH结构域、RGG盒、NES和NLS。能够与RNA和多聚核糖体结合。通过NES和NLS携带其mRNA在细胞核和细胞质之间穿梭。不同的蛋白亚型其组织分布各异。该家族成员在大脑和神经发育过程中发挥重要作用，影响认知过程和智力发育。

PVT1促进PAH大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制研究

目的:研究浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在肺动脉高压(PAH)大鼠中对于肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的作用及其可能的机制.方法:将16只成年雄性SD大鼠随机分为肺动脉高压组(PAH组)和对照组,每组8只大鼠.PAH组大鼠通过单次项背部皮下注射MCT溶液造模,对照组大鼠给予单次项背部皮下注射等量生理盐水.通过胸右心室穿刺法测量右心室压力.取各组大鼠肺组织,并进行原代肺动脉平滑肌细胞分离培养.通过RT-qPCR和Western blot检测PVT1及Fxr1在PAH组织及PASMCs中的表达水平;通过HE染色评估PAH组织的血管壁形态;免疫荧光法检测HPASMC的纯度;CCK-8法和伤口愈合迁移实验检测PASMCs增殖和迁移情况.结果:与对照组相比,PAH组大鼠肺组织血管壁厚度偏厚、肺动脉压显著升高(P<0.05).PVT1在PAH组大鼠的PAH组织和PASMCs中的表达水平显著上调(P<0.05),且其表达与肺动脉压呈正相关.与对照组相比,转染sh-PVT1的PASMCs显示出较低的细胞活力,同时转染sh-PVT1有效敲低了PASMCs中PVT1的表达水平(P<0.01).与对照组相比,PVT1的敲低抑制了PASMCs迁移能力(P<0.01).在转染pcDNA-PVT1的PASMCs中发现较高的增殖能力,PVT1的过表达促进了PASMCs迁移能力(P<0.01).与对照组相比,Fxr1在PAH模型组的PAH组织和PASMCs中的表达水平显著上调(P<0.01).结论:PVT1通过调节Fxr1的表达促进PASMCs的增殖和迁移,PVT1可能是PAH诊断和预测指标.