姜黄素通过降低miR-135b-5p和FEN1表达增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性

目的:探究姜黄素对卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性的影响及其潜在机制。方法:(1)体外常规培养卵巢癌亲本细胞OVCAR-3并构建顺铂耐药OVCAR-3/DDP细胞,将OVCAR-3细胞分为Control(常规培养)、DDP-1(1μmol/L顺铂)、DDP-5(5μmol/L顺铂)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-15(15μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-1(20μmol/L姜黄素+1μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-5(20μmol/L姜黄素+5μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-15(20μmol/L姜黄素+15μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30组(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为Control(常规处理)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、DDP-40(40μmol/L顺铂)、DDP-50(50μmol/L顺铂)、DDP-60(60μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-40(20μmol/L姜黄素+40μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-50(20μmol/L姜黄素+50μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-60组(20μmol/L姜黄素+60μmol/L顺铂),CCK-8法检测细胞活性,计算顺铂半数抑制浓度(IC 50),筛选顺铂和姜黄素的合适作用浓度。(2)将OVCAR-3细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(20.5μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+20.5μg/mL顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(42.1μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+42.1μg/mL顺铂),采用流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量(qRT)-PCR检测miR-135b-5p表达,qRT-PCR和免疫印迹法分别检测瓣状核酸内切酶-1(flap endonuclease 1,FEN1)mRNA和蛋白表达。结果:相同顺铂浓度时,与DDP组比较,姜黄素+DDP联合组OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞活性明显降低(P均<0.001)。DDP作用于OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞的IC 50分别为20.5μg/mL和42.1μg/mL。与OVCAR组或OVCAR/DDP组相较,姜黄素或顺铂致OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞凋亡率明显增加(P均<0.001),两者联合作用时效果更显著。此外,姜黄素或顺铂处理可明显降低OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞中miR-135b-5p表达及FEN1表达(P<0.01或<0.001),两者联合时效果更显著。结论:姜黄素可增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性,其可能与降低miR-135b-5p和FEN1表达相关。

FEN1/PCNA免疫组化双染在老年结直肠癌患者中的表达及其与临床病理特征的相关性

目的分析人皮瓣内功酶(FEN)1/增殖细胞核抗原(PCNA)在老年人结直肠癌细胞中的定位、表达及邻近正常组织中表达并探讨其与临床病理参数的关系。方法利用组织芯片通过免疫组织化学双染方法检测68例结直肠癌细胞中FEN1、PCNA蛋白的准确定位及双表达;11例邻近正常组织中FEN1、PCNA蛋白的双表达,同时分析二者及FEN1、PCNA表达与其病理参数的关系。结果结直肠癌组织中FEN1、PCNA蛋白表达定位明确、直观,只要有PCNA细胞核阳性表达的均有FEN1的阳性表达;只存在FEN1蛋白单独表达而没有PCNA蛋白单独表达。结直肠癌组织中FEN1、PCNA蛋白表达显著高于正常组织(P<0.05)。FEN1、PCNA表达与患者性别、肿瘤直径、肿瘤大体分型、浸润深度、分化程度、临床分期、手术方式等均无关(P>0.05),而与肿瘤淋巴结转移、肿瘤组织学分级(仅FEN1)显著相关(P<0.05);Spearman分析显示:FEN1与PCNA蛋白表达呈正相关(r=0.356,P=0.003)。FEN1/PCNA蛋白表达K-M分析显示与患者预后无关。结论FEN1/PCNA在老年人结直肠癌同一细胞中表达定位明确并高表达。

分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)突变体N266D表达纯化及功能分析

人源分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)作为DNA复制及DNA修复过程中重要的参与者,在维护基因组稳定和完整性方面具有不可替代的作用。尽管FEN1在很多肿瘤细胞中的表达都发生异常,但FEN1基因体细胞突变或遗传突变事件在人体细胞中却很少发生,发表的文献报道较少。前期在白血病患者骨髓细胞中发现了FEN1基因的一种N266D杂合突变体,基于此,成功构建了FEN1-N266D在原核及真核中的表达重组质粒,纯化了原核FEN1-WT、FEN1-N266D蛋白;通过TAMRA标记的DNA底物,检测了FEN、GEN和EXO的3种酶活性,结果发现N266D突变体的FEN、GEN及EXO活性基本不变;RTCA方法检测发现N266D蛋白过表达使细胞增殖能力受到抑制。通过以上对FEN1突变体N266D蛋白的核酸酶活性及对细胞增殖能力影响的分析,为进一步探讨FEN1突变体N266D在肿瘤发生进展中的潜在功能奠定了基础。

结构特异性核酸内切酶FEN1及其与肿瘤的关系

FEN1是一种结构特异性的多功能核酸酶,具有5'->3'flap核酸内切酶(FEN)、缺口核酸内切酶(GEN)和核酸外切酶(EXO)三大酶切活力.在细胞内,FEN1在多条DNA代谢途径中起着重要作用,包括冈崎片段成熟、长片段碱基切除修复和端粒维持等.鉴于FEN1的复杂功能,细胞内必定存在着一套精确调控机制,以确保FEN1在合适的时间与地点发挥作用.FEN1功能失调将导致基因组的稳定性和完整性下降,最终诱发包括肿瘤在内的多种染色体相关的疾病.本文主要针对FEN1的功能调控、功能失调与肿瘤的关系做一个综述.

FEN1在口腔癌相关成纤维细胞中的表达及其与PCNA的关系

目的检测瓣状核酸内切酶1(flap endonuclease-1,FEN1)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)中的表达水平,并分析两者表达水平的相关性。方法选取新鲜的口腔鳞状细胞癌组织块和因口腔颌面部整形手术切除的正常口腔黏膜组织块,采用组织块贴壁法培养原代口腔CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)并行免疫细胞化学染色鉴定;并分成CAFs组和NFs组,分别采用Western blot和PCR检测口腔CAFs和NFs中FEN1、PCNA蛋白表达水平及m RNA水平,并对FEN1、PCNA的表达水平做相关性分析。结果成功培养并鉴定口腔CAFs和NFs各12株,FEN1、PCNA的m RNA和蛋白表达水平在口腔CAFs组均高于NFs组,但差异均无统计学意义(P>0.05);在口腔CAFs中,FEN1与PCNA在m RNA水平呈正向的强相关性(r=0.677,P=0.016),而两者的蛋白表达水平无相关性(P>0.05)。结论在口腔CAFs中FEN1和PCNA的m RNA和蛋白表达水平与NFs组相比均无统计学差异,但CAFs中的FEN1与PCNA二者在m RNA水平呈正向强相关,两种基因在口腔CAFs中的相互关系及调节机制尚需进一步研究。

程序性翻译后修饰对FEN1功能调控的研究进展

瓣状核酸内切酶(FEN1)是结构特异性5′核酸酶超家族成员,以参与冈崎片段成熟、DNA重组、细胞凋亡DNA片段化和长片段碱基切除修复(LP-BER)而闻名,在生物体的多种代谢途径中发挥作用,对维持不同物种基因组的稳定性发挥着十分重要的作用。FEN1的功能或表达异常会导致生物体内的多个生命过程发生紊乱,如突变率增加、微卫星序列不稳定、DNA降解等,对生物体造成严重危害。因此,FEN1在生物体内的表达必须受到严格、精确、及时的调控。研究表明,翻译后修饰对FEN1蛋白的活性强弱、细胞定位及功能稳定性发挥着重要的调控作用。本文对关于FEN1翻译后修饰调控的相关研究进展进行总结,系统归纳翻译后修饰对FEN1功能的调控和影响,为后续开展FEN1程序性调控研究提供了参考。

FEN1酶介导的功能核酸生物传感器的研究进展

瓣状核酸内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)是一种可以识别三碱基重叠结构(三核酸)并对其进行切割,释放出5’-flap片段的结构特异性酶,并且有着高效稳定的切割效率。基于此种特性,通过不同的信号输出方式,FEN1酶现被用于DNA、RNA、病毒等放大检测中。首先对FEN1酶的发现、性质以及作用方面做了相应介绍,然后根据所检测的靶物质不同,对FEN1酶所介导的生物传感器进行分类,主要包括对单核苷酸多态性的检测、甲基化检测、基因型检测、RNA检测、病毒检测、肿瘤检测和微生物检测等。此外,对FEN1酶与纳米材料的结合以及体内表征及治疗也进行了较为详细的介绍。同时,还对传感器之间的原理、灵敏度、特异性及适用领域等方面进行比较和优缺点的简单评价。最后,对FEN1酶所介导的生物传感器的中存在的不足,以及未来的发展方向进行了展望,旨在为今后研发更便携、更灵敏、更准确的FEN1功能核酸生物传感器提供理论参考。

FEN1在食管癌中表达研究

目的:研究FEN1基因在人食管癌中的mRNA和蛋白表达及其与肿瘤发生的关系。方法:采用SYBRGreen实时定量PCR技术检测32例食管癌组织及癌旁组织中的FEN1基因的mRNA水平;同时采用免疫组化技术检测上述32例组织中FEN1的蛋白水平及分布。结果:与癌旁组织相比,FEN1基因在食管癌组织中mRNA水平较癌旁组织显著上调,约为癌旁组织的3.46倍。免疫组化的结果也表明FEN1基因在食管癌组织中表达要高于癌旁组织。结论:FEN1基因在人食管癌中较癌旁组织表达显著上调。FEN1基因的表达与食管癌的发生密切相关。

茗科1号清香型武夷岩茶工艺试验及品质分析

参照传统的武夷岩茶和清香型乌龙茶的加工工艺,设置做青叶的不同晾青环境和造型工艺2个因素,对不同处理的茗科1号清香型武夷岩茶毛茶品质进行分析.结果表明:晾青环境不同对条形和卷曲形毛茶的感官品质影响不显著;造型工艺不同对空调环境晾青的毛茶感官品质影响显著,对自然环境晾青的毛茶感官品质影响极显著;揉捻造型有利于提高毛茶品质,其中以自然环境薄摊晾青后进行揉捻造型的毛茶品质最佳.

山西中西部汾豌豆1号复播玉米栽培模式及操作规程

以解决山西省对酿造原料需求兼顾种植户收益为目的,利用豌豆耐寒性好的特点,在山西省中西部无霜期150 d以上的地区进行豌豆复播玉米的栽培模式试验,总结了豌豆复播玉米的栽培技术规程,供种植户参考。结果显示,该模式在酿造业发达地区有比较好的优势,可以推广应用。

FEN-1和AXL表达与上皮性卵巢癌化疗耐药相关分析

目的:探讨FEN-1和AXL在上皮性卵巢癌组织表达情况及其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法:采用免疫组化法检测卵巢癌/正常卵巢组织中FEN-1及AXL表达,分析蛋白表达与卵巢癌化疗疗效相关性。结果:卵巢癌组织中FEN-1及AXL阳性率分别为58.20%及72.13%,均显著高于正常卵巢组织(10%)(P<0.05)。相对早期患者,FEN-1高表达于晚期卵巢癌组织(37.50%&63.27%)(P<0.05),与分化程度及化疗敏感性关系不大(P>0.05)。AXL高表达于晚期卵巢癌(77.55%&50%)及低分化组织中(79.71%&62.26%)(P<0.05)。癌组织AXL阳性者化疗有效率(51.14%)明显低于阴性者(85.29%)(P<0.05);化疗耐药组AXL阳性率(89.58%)明显高于敏感组(60.81%)(P<0.05)。结论:FEN-1及AXL均与卵巢癌发生发展相关,AXL的表达可作为预测卵巢癌化疗耐药的指标。

荧光定量PCR对FEN1敲低细胞株转录组测序结果的验证

目的探讨DNA分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)基因敲低细胞株及对照细胞株的差异表达基因,用实时荧光定量PCR方法进行结果验证。方法从293T野生型及293T FEN1敲低细胞株中提取RNAs,并反转录成cDNA;挑选10个转录组测序中差异表达的基因,设计引物,利用SYBR Green染料法,定量检测挑选基因的表达情况。结果挑选的10个差异表达基因中,成功扩增了其中7个基因;通过实时荧光定量PCR方法对两组细胞的7个基因进行定量检测发现,与转录组测序结果相比较,其中有2个没有明显差异,另外5个基因荧光定量方法的检测结果与转录组测序结果一致。结论在细胞内基因表达水平检测中,为提高转录组测序结果的可靠性,还需通过实时荧光定量PCR方法对其结果进一步验证。

靶向碱基切除修复途径以克服结直肠癌细胞中的阿霉素耐药性

结直肠癌(CRC)具有非常高的发病率和死亡率,成为全球第三大最常见的恶性肿瘤和第二大最致命的癌症.阿霉素作为化学治疗药物,多年来一直广泛应用于癌症临床治疗,但由于其耐药性和副作用,治疗效果较为有限.已有研究证明,在癌细胞中DNA修复能力会大大增强,这在很大程度上会使得癌细胞在化学治疗药物引起的DNA损伤中存活下来.Flap核酸内切酶1(FEN1)在各种类型的癌细胞中表达较高,并在DNA损伤修复中起着关键作用.研究表明,FEN1抑制剂SC13显著增强了阿霉素的治疗效果,这种联合治疗可以通过激活cyclinD-CDK4-6/INK4/Rb通路进而抑制结直肠癌的细胞增殖,故靶向FEN1可为阿霉素在临床使用中提供一种新的策略.

姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20μg/m L)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响。结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30μmol/L;与单独2μg/m L CDDP处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素、30μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)%、(51.1±0.5)%、(29.4±0.3)%,P<0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20μmol/L姜黄素联合2μg/m L CDDP、5μg/m L CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)%、(42.4±0.3)%、(31.6±0.4)%,P<0.05];2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P<0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)%vs(18.7±0.2)%,P<0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P<0.05)。结论姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关。

4-异丁基苯乙酮加氢-羰基化合成布洛芬

采用CuO-ZnO/Al2O3纳米铜基催化剂催化4-异丁基苯乙酮(IBAP)加氢制备1-(4-异丁基苯基)乙醇(IBPE);然后以PdCl2/PPh3/CuCl2为催化体系,将IBPE经羰基化反应合成2-(4-异丁基苯基)丙酸(布洛芬)。研究结果表明:在反应温度80℃,氢气压力1.5MPa,n(H2)∶n(IBAP)=40∶1,液空速0.30h-1的条件下,IBAP的加氢转化率为100%,IBPE收率达到93.6%。以盐酸为酸性介质、丁酮为溶剂,在温度100℃,CO压力5.5 MPa,反应时间24h的条件下,IBPE羰基化合成布洛芬,IBPE的转化率为100%,布洛芬收率达到72.9%。

汾河中下游复流前后水环境容量及排污控制量研究

【目的】明确汾河中下游水环境容量,改善水质不断恶化的状况,促进地区经济与水环境容量的协调发展。【方法】在一维稳态水质模型的基础上对排污口进行概化,推导出河段水环境容量计算公式。根据已有水质、水文监测资料和沿岸排污情况,选取污染物中所占比例最大的化学需氧量（COD）和氨氮作为河段的主要污染控制因子,计算出复流前枯、平、丰各频率年和复流后COD、氨氮的水环境容量。【结果】汾河中下游复流前枯、平、丰各频率年COD、氨氮的全年水环境容量分别为27 454.63 t,1 107.40 t;40 910.53 t,1 621.34 t;55 832.85 t,2 202.48 t。复流后COD和氨氮的全年水环境容量分别为26 512.22 t,1 031.60 t。【结论】汾河中下游污染严重,结合现状排污量计算得COD和氨氮在各设计条件下全年削减量分别为0～20 949.08 t和6 443.72～7 614.61 t。

RP-HPLC法测定保健品葛根粉中葛根素的含量

目的以RP-HPLC法测定保健品葛根粉中葛根素的含量。方法以甲醇-乙腈-水(10∶10∶80)为流动相,在依利特Hypersil ODS柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流速为1.0 ml/min,250 nm波长下进行测定,进样量10μl。结果葛根素在20μg/ml^200μg/ml时,浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),加标回收率为99.37%~99.82%,最低检出限为2μg/ml,相对标准偏差RSD为0.03%~0.15%。结论本方法操作简单准确,可用于保健品葛根粉中葛根素的含量测定。

姜黄素对INS-1细胞氧化应激和胰岛素分泌的影响及新机制的初步研究

目的采用H2O2制备INS-1氧化应激模型,观察姜黄素对INS-1细胞氧化应激水平及胰岛素分泌的影响及瓣状核酸内切酶(FEN1)和ERK1/2磷酸化的改变在其中的作用。方法将INS-1细胞分为阴性对照组、模型组(H2O2处理)、干预组(5、7、10μM姜黄素+H2O2处理)。采用CCK-8检测细胞增殖,分光光度计法检测细胞丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平的变化,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素分泌量,Western blot检测FEN1,p-ERK1/2蛋白表达的改变。结果 (1)模型组MDA、ROS值较对照组明显升高(P<0.05);干预组MDA、ROS较模型组明显降低(P<0.05);模型组GSH较对照组明显降低(P<0.05);干预组GSH较模型组显著升高(P<0.05)。(2)模型组胰岛素分泌水平较对照组明显降低(P<0.05),10μM姜黄素干预组胰岛素分泌水平较模型组明显升高(P<0.05)。(3)与模型组比较,10μM姜黄素干预显著提高INS-1细胞FEN1蛋白的表达和ERK1/2的磷酸化,ERK1/2特异性抑制剂U0126可抑制姜黄素引起INS-1细胞FEN1蛋白表达的改变。结论姜黄素可以通过pERK1/2-FEN1通路改善INS-1细胞的氧化应激状态,以及胰岛素分泌,为姜黄素治疗糖尿病提供新的作用机制。

绿色高效第四代农耕模式“粉垄”及“粉垄大科学”的研究

首次对中国自主发明的绿色高效第四代农耕模式“粉垄”及“粉垄大科学”进行全面阐释,指出被誉为继指南针、火药之后“中国第五大发明”的粉垄耕具“螺旋钻头”引发了“粉垄”及“粉垄大科学”问世,是具划时代意义的重大科学事件;粉垄,具农耕里程碑意义,作为继人力、畜力、拖拉机之后第四代农耕模式,粉垄比传统耕作加深耕作层2-3倍,充分活化土壤资源,促进雨(雪)水、光能等“天地资源”增量利用,具有增产、提质、保水、生态等“五大平台”功能(零施肥增产10%、零增施肥增产10%~50%、品质提升3%~5%以上、增贮天然降水100%、多因素生态改善等),且可改造尚未利用的盐碱地、退化草原等,可发展雨养高效农业;粉垄大科学,具“人与天地和谐合一”的多学科交错融合的庞大科学体系、“1 + n”绿色发展体系和“n-n”内生与外延功能体系,其“纲举目张”巨大科学驱动源,可为人与自然和谐及经济社会协调发展提供平台。

深度学习在高分辨率遥感影像冬油菜提取中的应用

近年来,深度学习在基于高分辨率遥感影像的农作物种植信息提取领域应用广泛。本文充分利用油菜在盛花期的光谱特征,提出了基于深度学习理论的单时相高分辨率遥感影像油菜分布提取方法。以2016年湖北省沙洋县作为研究区域,获取油菜盛花时期高分一号(GF-1)影像,并以沙洋县为基础影像,通过手工标记制作油菜训练样本。设计两种深度学习框架模型,一种以卷积神经网络(CNN)为框架,构建一维卷积神经网络(1D-CNN)模型,第二种以循环神经网络(RNN)为框架,组合门控循环单元(GRU)模型,训练标准样本模型,完成油菜分类提取。最后,与传统支持向量机(SVM)、随机森林(RF)方法进行了结果对比。试验结果表明,本文设计的基于深度学习CNN和RNN模型提取的冬油菜空间分布精度和面积精度皆优于其他两种方法,为进一步实现冬油菜提取自动化提供试验基础。